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Qumicas
BIOLOGIA MOLECULAR
TEMA:
MULTIPLEX PCR
INTEGRANTES
DOCENTE:
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NDICE
Introduccin ........................................................................................................ 3
Multiplex PCR..................................................................................................... 4
Fundamento .................................................................................................... 5
Aplicaciones .................................................................................................... 7
Glosario ............................................................................................................ 10
Resumen .......................................................................................................... 11
Preguntas ......................................................................................................... 13
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Introduccin
La Multiplex PCR es una tcnica de biologa molecular generalizada para la
amplificacin de mltiples objetivos en un nico experimento de PCR (Shipley,
s.f.).
La Multiplex PCR tiene aplicacin en todas las reas donde se haga uso de la
biologa molecular.
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Multiplex PCR
Objetivos
Objetivo general
Objetivos especficos
Desarrollo
Tcnica de PCR permite la deteccin
simultnea de ms de una secuencia de
genomas diferentes en una sola reaccin
mediante el empleo de dos o ms parejas
de cebadores. Todos los cebadores
debern reaccionar a una Temperatura de
fusin (Tm) similar, dentro de un rango de
+/-5C. Los tamaos de los productos
amplificados de la PCR debern ser
tambin semejantes pero distinguibles,
entre unos valores de 200 a 500 pares de
bases (pb). Imagen 1 Mltiplex PCR.
En la PCR mltiple, lo que se persigue es amplificar simultneamente en un
nico tubo distintas secuencias especficas o secuencias blanco o dianas, lo cual
necesariamente implica que los reactivos mezclados y el programa utilizado
sean suficientes y adecuados para permitir la deteccin de cada diana y no inhibir
la de las dems. Con este fin, algunos parmetros, como la concentracin de
magnesio y de primers, y el tipo y la cantidad de ADN polimerasa, pueden
ajustarse experimentalmente. Para otros, en cambio, debe realizarse un diseo
exhaustivo previo (Annimo, 2013).
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En el caso de los cebadores y el programa de temperaturas utilizado, es
necesario tener en cuenta varias premisas:
Fundamento
Segn Markoulatos, Siafakas, Moncany (2001) indican que:
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Ashshi, Cooper, Klapper, 2000, p.561). Alternativamente, si los tamaos de los
amplicones se superponen, los diferentes amplicones pueden diferenciarse y
visualizarse usando cebadores que se han teido con diferentes colores de
marcas fluorescentes (Hayden, Nguyen, Waterman, Chalmers, 2008,p. 9).
1. Controles internos
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Los problemas potenciales en un simple PCR incluyen falsos negativos
debido a la falta de reaccin o falsos positivos debido a alguna
contaminacin. Los falsos negativos a menudo se revelan en ensayos
multiplex, porque cada amplificacin proporciona un control interno para
los otros fragmentos amplificados.
2. Eficiencia
El gasto de los reactivos y el tiempo de preparacin es menor en una PCR
multiplex que en los sistemas donde se utilizan varios tubos de PCR. Una
reaccin mltiple es ideal para la conservacin de la polimerasa que es
costosa y de plantillas con escasa cantidad.
3. Calidad del Template
La calidad del template se puede determinar de manera ms eficaz en
una PCR multiplex que en una reaccin simple de PCR.
4. Cantidad del Template
La amplificacin exponencial y los estndares internos de PCR multiplex
se puede utilizar para evaluar la cantidad de una plantilla determinada en
una muestra. Para cuantificar las plantillas con precisin por PCR
multiplex, la cantidad de plantilla de referencia, el nmero de ciclos de
reaccin, y la inhibicin mnima de la duplicacin terica de producto para
cada ciclo deben tenerse en cuenta.
Cultek (2006) menciona que la tcnica PCR Multiple tiene las siguientes
ventajas:
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objetivos ayuda a ahorrar tiempo y dinero y hace que los sistemas mltiple sean
tiles especialmente cuando un gran nmero de muestras tienen que ser filtrada.
Por lo tanto, la PCR mltiple se utiliza regularmente para examinar la gentica
de poblaciones y la determinacin de origen, para investigar las interacciones
trficas, para la identificacin de especies moleculares y evaluacin de la
comunidad, as como en los estudios forenses y de seguridad alimentaria. El
gran potencial de este mtodo tambin se refleja en los nmeros rpido aumento
de las publicaciones que han adoptado este enfoque. El procedimiento
multifactico de la PCR Mltiple tiene que ser planificado y optimizado
completamente para lograr resultados slidos y significativos (Sint, Raso,
Traugott, 2012).
Conclusin
Se logr conocer el fundamento de la tcnica de Multiplex PCR y la capacidad
que posee para reducir el nmero de reacciones necesarias para poner a prueba
una muestra para diferentes objetivos, esta tcnica ayuda a ahorrar tiempo y
dinero.
Bibliografa
Elnifro, E. M., Ashshi, A. M., Cooper, R. J., & Klapper, P. E. (Octubre de 2000).
Multiplex PCR: Optimization and Application. CLINICAL MICROBIOLOGY
REVIEWS, 13(4), 559570Elfath M. Elnifro,1 Ahmed M. Ashshi,1 Robert
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J. Cooper,. Recuperado el 17 de 06 de 2016, de
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC88949/pdf/cm000559.pdf
Hayden, M. J., Nguyen, T. M., Waterman, A., & Chalmers, K. J. (28 de Febrero
de 2008). Multiplex-Ready PCR: A new method for multiplexed SSR and
SNP. BMC Genomics, 9(80), 1-12. doi:10.1186/1471-2164-9-80
Markoulatos, P., Siafakas, N., & Moncany, M. (16 de Octubre de 2001). Multiplex
Polymerase Chain Reaction: A Practical Approach. Journal of Clinical
Laboratory Analysis, 16, 47 - 51. doi:10.1002/jcla.2058
Sint, D., Raso, L., & Traugott, M. (28 de Junio de 2012). Los avances en la PCR
mltiple: Equilibrio de las eficiencias de imprimacin y la mejora de la
deteccin xito. Methods in Ecology and Evolution, 3(5), 898-905.
doi:10.1111 / j.2041-210X.2012.00215.x
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Glosario
Primers (Cebador): iniciadores de la PCR tambin denominados cebadores son
oligonucletidos sintticos que hibridan con la regin, complementaria al ADN
molde, que se desea amplificar y propician el inicio de la reaccin de elongacin
por la Taq ADN polimerasa.
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Resumen
Multiplex PCR se basa en amplificar en un nico tubo distintas secuencias
especficas o secuencias blanco o dianas, lo cual necesariamente implica que
los reactivos mezclados y el programa utilizado sean suficientes y adecuados
para permitir la deteccin de cada diana y no inhibir la de las dems.
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Cantidad del Template La amplificacin exponencial y los estndares internos
de PCR multiplex se puede utilizar para evaluar la cantidad de una plantilla
determinada en una muestra.
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Preguntas
1. Cul es la utilidad de la PCR Multiplex?
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Tm ms alta (preferiblemente 75C - 80C). Una variacin Tm de entre 3C-5 C
es aceptable para los cebadores usados en una piscina.
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