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Universidad Cientfica del Per

Ciencia amaznica (Iquitos) 2013, Vol. 3, No. 2, 60-66


ISSN 2222-7431 (En lnea)
http://revistas.ojs.es/index.php/cienciaamazonica

Artculo Original

Fluctuacin diurna del contenido de vitamina C en hojas de


Myrciaria dubia camu camu
[Diurnal fluctuation of vitamin C in leaves of Myrciaria dubia camu camu]
Franz M. Correa-Melndez1*, Marianela Cobos-Ruiz1, Roberson Ramirez-Saavedra2,
Sixto A. Imn-Correa3 & Juan C. Castro-Gmez2
1
Facultad de Ciencias e Ingeniera, Universidad Cientfica del Per, Av. Abelardo Quiones Km 2.5, Iquitos, Per.
2
Centro de Investigacin de Recursos Naturales (CIRNA). Universidad Nacional de la Amazona Peruana (UNAP).
Pasaje Los Paujiles S/N, AAHH Nuevo San Lorenzo. Iquitos-Per.
3
Instituto Nacional de Innovacin Agraria-Estacin Experimental San Roque.
*
e-mail: franzmich07@hotmail.com

Resumen
Myrciaria dubia camu camu es un frutal del trpico amaznico caracterizado por sus frutos con gran
contenido de vitamina C, siendo considerado un producto importante del pas. Sin embargo, hay pocos
reportes sobre el metabolismo y transporte de vitamina C en esta especie. El objetivo de la investigacin fue
determinar la fluctuacin diurna del contenido de vitamina C en hojas de M. dubia camu camu. Las hojas
se colectaron de la coleccin de germoplasma de camu camu del INIA a las 2, 6, 10, 14, 18 y 22 horas; de
cuatro plantas y en tres fechas diferentes. La vitamina C fue extrada de las hojas con un mtodo
estandarizado en el laboratorio y se cuantific mediante espectrofotometra a 530nm, previa reaccin con
2,6-diclorofenolindofenol. Los resultados muestran que el contenido de vitamina C de las hojas de camu
camu fue en promedio 23135 mg vitamina C/100g de hoja. Adems, el contenido de vitamina C en las
hojas del camu camu mostr fluctuacin diurna, siendo menor a las 6 horas y mayor a las 2 y 14 horas del
da. Tambin, se registraron concentraciones intermedias en horas de menor o ausencia de radiacin solar
(23517 y 23735 mg vitamina C/100g de hoja a las 18 y 22 horas respectivamente). Se concluye que
existe alto contenido de vitamina C en las hojas del camu camu y que este contenido presenta fluctuacin
diurna.

Palabras clave: Myrciaria dubia, camu camu, vitamina C, fluctuacin diurna, hojas.

Abstract
Myrciaria dubia "camu camu" is a fruit of Amazonian tropics characterized by high content of vitamin C,
being considered a important product of the country. However, there are few reports on the metabolism and
transport of vitamin C in this species. The research objective was to determine the diurnal fluctuation of
vitamin C in leaves of M. dubia "camu camu". Leaves were collected from the germplasm collection of "camu
camu" from INIA at 2, 6, 10, 14, 18 and 22 hours, from four plants and three different dates. Vitamin C was
extracted from leaves with a standardized method in the laboratory and quantified by spectrophotometry at
530nm, after reaction with 2,6-dichlorophenolindophenol. Results show that vitamin C content of leaves of
"camu camu" averaged 23135 mg vitamin C/100g of leaves. In addition, vitamin C content in the leaves of
"camu camu" showed diurnal fluctuation, being lower at 6 h and increased at 2 and 14 hours of day. Also,
were recorded intermediate concentrations in hours with lower or absence of solar radiation (23517 and
23735 mg vitamin C/100g of leaves at 18 and 22 hours respectively). In conclusion, there is a high vitamin
C content in leaves of "camu camu" and this content has diurnal fluctuation.

Keywords: Myrciaria dubia, camu camu, vitamin C, diurnal fluctuation, leaves.

Recibido: 20 Julio 2012


Aceptado: 05 Mayo 2013
Este artculo puede ser citado como: FM Correa-Melndez, M Cobos-Ruiz, R Ramrez-Saavedra, SA Imn-Correa & JC Castro-
Gmez. 2013. Fluctuacin diurna del contenido de vitamina C en hojas de Myrciaria dubia camu camu. Cienc amaz (Iquitos) 3(2),
60-66.
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Correa-Melndez et al. Fluctuacin diurna de vitamina C en Myrciaria dubia

INTRODUCCIN metabolito es canalizado a la ruta de


La Amazona es el mayor bosque tropical que Smirnoff-Wheeler, en la que la GDP-manosa-
existe en el mundo, abarca aproximadamente 1-fosfato es convertida a cido ascrbico. En
6 059000 km2 y contiene ms del 50% de las este proceso enzimtico se forman
especies registradas hasta el momento (Uhl y intermediarios metablicos como GDP-
Dransfield, 1997). Con el actual desarrollo de Manosa, GDP-L-Galactosa, L-Galactosa-1-
fuentes econmicas a travs de la explotacin fosfato, L-Galactosa y L-galactona-1,4-lactona.
de nuestros recursos naturales, es necesario Varios estudios han determinado el contenido
el estudio en todas las formas de aquellos que de vitamina C en los frutos del camu camu
representen una mayor importancia para el (Peters y Vasques, 1988; Vizcarra, 2005). Sin
desarrollo social y econmico de la poblacin, embargo, no existen reportes de la
y uno de ellos es Myrciaria dubia tambin determinacin del contenido de esta vitamina
conocido como camu camu. Este producto, en las hojas, uno de los principales rganos
es valorado a nivel mundial debido de fotosntesis y por ende de biosntesis de
principalmente a las altas concentraciones de vitamina C. Adems, se desconoce su relacin
cido ascrbico (vitamina C), siendo con los factores fsicoqumicos (temperatura,
denominado por el Per como producto horas del da e intensidad de luz, factores
bandera a nivel Nacional para que sea nutricionales entre otros). Por tanto, el
impulsor del crecimiento econmico del pas. objetivo de esta investigacin fue determinar
la fluctuacin diurna del contenido de vitamina
Myrciaria dubia (Kunth) Mc Vaugh, de la C en hojas de M. dubia camu camu.
familia Myrtacea es un arbusto que crece
comnmente en la orilla de las quebradas y MATERIALES Y MTODOS
cochas de la cuenca amaznica. La especie Colecta de material botnico
forma una parte importante de la vegetacin Las muestras biolgicas fueron obtenidas de
riparia en Per, Brasil, Venezuela y Colombia, la coleccin de germoplasma de camu camu,
pero se presenta en mayor abundancia en la de la estacin experimental El Dorado del
Amazona Peruana, donde se encuentran Instituto Nacional de Innovacin Agraria
poblaciones naturales extensas (Peters y (INIA), ubicado a la altura del km 25 de la
Vsquez, 1988). carretera Iquitos-Nauta (357'22.95''LS,
El cido ascrbico, tambin conocido como 7324'46.91''LO).
vitamina C, es producido sintticamente y Se eligieron al azar cuatro plantas de la
extensivamente usado en la industria de coleccin de germoplasma de camu camu
alimentos por su accin antioxidante (cdigos de accesin: 7,2, 52,9, 53,3 y 56,2).
(Chambers et al., 1996). En muchos alimentos Las hojas adultas en buen estado, fueron
es adicionado como suplemento (jugos de colectadas cada cuatro horas (2, 6, 10, 14, 18
fruta, por ejemplo), siendo usado en la y 22 horas del da) por triplicado y en tres
medicina como pastillas multivitamnicas. El fechas diferentes (31/08/11, 05/10/11 y
cido ascrbico es un agente reductor en 05/11/11). Las muestras obtenidas fueron
solucin acuosa. El carcter cido y la accin transportadas en condiciones de refrigeracin
reductora son atribuidos al grupo enediol al Laboratorio de Biotecnologa del Centro de
(David et al., 1994). Investigacin de Recursos Naturales (CIRNA)
La principal ruta biosntetica de vitamina C en de la Universidad Nacional de la Amazona
plantas ha sido recientemente estudiada por Peruana, donde se procesaron
Wheeleret al. (1998) y han sido descritas vas inmediatamente para extraer y cuantificar la
alternativas (Hancock y Viola, 2005). Castro et vitamina C.
al. (2011), ha demostrado la expresin
gentica y actividad de enzimas de la va
Smirnoff-Wheeler en las hojas y frutos (pulpa
y cscara) del camu camu. Este proceso
metablico se inicia con la fotosntesis, donde
la planta toma la luz solar y la transforma en
energa qumica (ATP), para la sntesis de
glucosa. Una parte de la glucosa sintetizada
es convertida a glucosa-6-fosfato y este
Ciencia amaznica (Iquitos) 61
Correa-Melndez et al. Fluctuacin diurna de vitamina C en Myrciaria dubia

8% y EDTA 0,36%). El proceso de extraccin


se realiz en un ambiente con luz tenue y
atemperada a 18 C. El triturado se transfiri
357'22.95''LS,
7324'46.91''LO a microtubos de 1,5 ml, se homogeniz en
vortex por 30 seg, y centrifug a 15000 rpm
por 10 min a 4C, el sobrenadante obtenido
se transfiri a otro microtubo y almacen a -
Km 25 20C protegido de la luz (figura 2).

Cuantificacin de vitamina C
Carretera Iquitos-Nauta
Se efectu en base a Loeffler y Pointing
(1942) modificado, que consisti en mezclar
100 l del sobrenadante obtenido con 900 l
Figura 1. Ubicacin de la Coleccin de
de 2,6-Diclorofenolindofenol 0.5mM, se
Germoplasma de camu camu del INIA. Lugar
homogeniz por 30 seg en el vortex y
donde se colectaron las hojas del camu camu
para extraer y cuantificar la vitamina C. Imagen procedi a leer la absorbancia a 530 nm en un
tomada y modificada de Google Earth. espectrofotmetro UV/Vis Genesys 6.0. El
blanco de lectura empleado fue cido oxlico
Extraccin de vitamina C al 0,4%. La cuantificacin de la vitamina C se
Se realiz de acuerdo a Ledezma-Gairaud realiz en base a las ecuaciones de dos curvas
(1993) modificado. Para ello, 250mg de hoja estndares, una preparada en el rango de 100
se tritur por tres minutos con un mortero, a 200mg/L y la otra en el rango de 200 a
aadiendo gradualmente hasta 950 l de 800mg/L (figura 3).
solucin extractora (HPO3 3%, cido actico

Pesado de hojas Trituracin Homogenizacin Centrifugacin Almacenamiento

Figura 2. Proceso de extraccin de vitamina C a partir de hojas de Myrciaria dubia camu camu

2.5
y = -0.004x + 3.536
R = 0.992
Absorbancia a 530nm

1.5

0.5

0
200 300 400 500 600 700 800
Vitamina C (mg/L)

Figura 3. Curva estndar obtenida al hacer reaccionar 100l de diferentes concentraciones de vitamina C
comercial (200 a 800mg/L) con 900l de 2,6-diclorofenolindofenol 0,5mM. La absorbancia de cada estndar
se ley a 530nm.

Ciencia amaznica (Iquitos) 62


Correa-Melndez et al. Fluctuacin diurna de vitamina C en Myrciaria dubia

Anlisis de datos El contenido de vitamina C en las hojas del


Los datos de absorbancia y concentracin de camu camu mostr fluctuacin diurna
vitamina C fueron almacenados en una hoja (figura 4). Se observa que el contenido ms
Excel de Microsoft 2007. Se determin el bajo de vitamina C se registr a las 6 horas
promedio, desviacin estndar la prueba de (19731 mg vitamina C/100g de hoja),
ANOVA de un factor y la prueba HSD de momento en que la radiacin solar es tenue.
Tukey para determinar si los promedios de En contraste, los contenidos ms altos de
concentracin de vitamina C entre hojas vitamina C se registraron a las 2 (24056 mg
colectadas en las diferentes horas del da Vitamina C/100g de hoja) y 14 horas (24424
mostraron diferencias estadsticas mg Vitamina C/100g de hoja) del da. Por otra
significativas. Los anlisis estadsticos se parte, concentraciones intermedias de
hicieron con el programa PASW Statistics v vitamina C (con respecto a las indicadas) se
18.0 registraron en horas de menor radiacin solar
(23517 mg vitamina C/100g de hoja a las 18
RESULTADOS horas) o ausencia de radiacin solar (23735
El contenido de vitamina C en las hojas del mg vitamina C/100g de hojas a las 22 horas).
camu camu es elevado. Los valores El ANOVA muestra que las fluctuaciones en el
fluctuaron de 158 a 298 mg vitamina C/100g contenido de vitamina C en funcin a las
de hoja, con un valor promedio de 23135 horas del da no mostr diferencias
mg vitamina C/100g de hoja. estadsticas significativas (F=0,97, P=0,47).
mg Vitamina C/100g hojas

Horas del da

Figura 04. Fluctuacin diurna del contenido de Vitamina C en hojas de Myrciaria dubia camu camu.

Ciencia amaznica (Iquitos) 63


Correa-Melndez et al. Fluctuacin diurna de vitamina C en Myrciaria dubia

DISCUSIN la plastoquinona, y que los cambios en los


El camu camu es una planta muy importante niveles de vitamina C debidos a la luz podra
en la regin Loreto, debido a que produce estar controlado predominantemente por la
frutos con alta concentracin de vitamina C misma fotosntesis, pero no por el aumento de
(ms de 2000mg de vitamina C/100g de la expresin de genes responsables de la
pulpa) y diversos metabolitos secundarios con biosntesis de vitamina C.
potencial uso farmacolgico, como El aumento en los niveles de vitamina C en las
antocianinas, flavonoides y compuestos horas de mayor intensidad lumnica (14
fenlicos (Sotero et al., 2009). Los frutos son horas), puede deberse a que tiene un rol
empleados para la preparacin de refrescos, protector durante la fotosntesis, al evitar los
helados y otros productos para el consumo efectos deletreos de los radicales libres de
local, regional y nacional. Adems, la pulpa es oxgeno (ROS), que son generados como
exportada a diversos pases como el Japn subproductos durante la fotosntesis y como
para su procesamiento y consumo. Tambin, un componente clave en los mecanismos de
las hojas son empleadas en la medicina disipacin de exceso de energa fotnica, tales
tradicional para prevenir el escorbuto, aliviar como los ciclos agua-agua (Asada, 1999) y el
problemas inflamatorios, prevenir el resfriado ciclo de xantofilas Muller-Moule et al., 2002).
comn, entre otros usos. Los ROS pueden oxidar diversos componentes
Los resultados muestran que tambin las celulares (protenas, ADN, ARN, membranas
hojas del camu camu tienen alto contenido etc.). Para evitar el dao a estas
de vitamina C. De tal modo, que presenta de macromolculas, la planta debe genera ms
1,8 a 466 veces ms vitamina C que frutos vitamina C y en menor cantidad otras
amaznicos como Anacardium occidentale molculas antioxidantes (-tocoferol,
(12760 mg vitamina C/100g de pulpa) y carotenoides, flavonoides, etc), para
Solanum sessiliflorum (0.500.08 mg vitamina neutralizar la accin bioqumica de los ROS
C/100g de pulpa) respectivamente (Siguas et (Davey et al., 2000).
al., 2010). La oxidacin del ascorbato y su regeneracin
Tambin nuestros hallazgos indican una a partir de monodehidroascorbato (MDHA) y
fluctuacin diurna en el contenido de vitamina dehidroascorbato (DHA) son mediadas por
C en las hojas del camu camu. Est bien varios sistemas enzimticos y no enzimticos
establecido que los niveles de vitamina C en localizados en diferentes estructuras de las
las hojas dependen de las condiciones de luz y clulas vegetales. El ascorbato neutraliza el
oscuridad, de tal modo que las hojas efecto oxidante del perxido de hidrgeno en
expuestas a la luz contienen ms vitamina C una reaccin catalizada por la ascorbato
que las hojas mantenidas en oscuridad (Grace peroxidasa. Las isoformas de esta enzima se
y Logan, 1996; Smirnoff y Palanca, 1996; localizan en el citosol, cloroplastos,
Tabata et al., 2002; Yabuta et al., 2007). mitocondrias, peroxisomas/glioxisomas y
Asimismo, los niveles de vitamina C en las estn unidos a las membranas de estos
hojas muestran un ritmo diurno (Dutilleul et ltimos organelos y de los tilacoides. La
al., 2003; Tamaoki et al., 2003). Segn vitamina E (-tocoferol) es un antioxidante
Yabuta et al. (2007), esto es atribuible a que unido a las membranas celulares que se
la regulacin de la biosntesis de vitamina C encarga de neutralizar radicales lipdicos. El
por la luz en hojas de Arabidopsis thaliana, es producto radical -cromanoxilo, es reducido a
dependiente de la cadena transportadora de -tocoferol por el ascorbato. El ascorbato
electrones fotosinttica y paralelamente existe tambin es oxidado cuando acta como
un incremento en la expresin de genes cofactor de varias enzimas (prolil hidroxilasas,
codantes de enzimas implicadas en la antocianidina sintasa, flavona-3-hidroxilasa,
biosntesis de vitamina C, tales como GDP- alcaloide oxigenasa, giberelina-20-oxidasa,
manosa pirofosforilasa, GDP-L-galactosa entre otras). Dos molculas de MDHA, el
guaniltransferasa, L-galactosa-1-fosfato producto de oxidacin primario del ascorbato,
fosfatasa y Galatono-1,4-lactono pueden generar una de DHA y otra de
deshidrogenasa. El incremento en los niveles ascorbato. El MDHA es reducido a ascorbato
de expresin de estos genes son afectados por la MDHA reductasa dependiente de
principalmente por el estado redox del pool de NAD(P)H o por ferrodoxina reducida en el

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Correa-Melndez et al. Fluctuacin diurna de vitamina C en Myrciaria dubia

fotosistema I. Finalmente, DHA es reducido a presentado en la Semana de la Ciencia y


ascorbato por DHA reductasa dependiente de Tecnologa 18-22 Nov. CONCYTEC.
glutatin (GSH). El GSH oxidado (GSSG) es Chambers S, Lambert N, Plumb G, Willianson
reducido a GSH por glutatin reductasa G. 1996. Evaluation of the antioxidant
dependiente de NADPH. Las dos reacciones properties of a methanolic extract from
enzimticas son componentes del ciclo juice plus fruit and juice plus vegetable
ascorbato-glutatin. Las enzimas estn (dietary supplements). Food Chem 57,
ubicadas en el citosol, cloroplasto, estroma, 271-274.
matriz mitocondrial y en los
Davey M, Van Montagu M, Inze D, San Martin
peroxisomas/glioxisomas (Smirnoff, 2000;
M, Kanellis A, Smirnoff N et al. 2000.
Smirnoff y Wheeler, 2000).
Plant L-ascorbic acid: chemistry, function,
metabolism, bioavailability and effects of
processing. Journal of the Science of Food
CONCLUSIONES
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El contenido de vitamina C en las hojas de
Myrciaria dubia camu camu es relativamente Davis M, Austin J, Partridge D. 1994. Vitamin
alto, superando incluso al contenido de esta C: its chemistry and biochemistry.
vitamina en la pulpa de varios frutos nativos Cambridge: Royal Society of Chemistry
amaznicos. 47, 154-168.
El contenido de vitamina C en las hojas de Dutilleul C, Garmier M, Noctor G, Mathieu C,
Myrciaria dubia camu camu muestra Chetrit P, Foyer CH, De Paepe R. 2003.
fluctuacin diurna, siendo mayor en horas de Leaf mitochondria modlate whole cell
mayor intensidad luminosa y menor en las redox homeostasis, set antioxidant
horas de baja intensidad luminosa. Aunque capacity, and determine stress resistance
estas tendencias no fueron estadsticamente through altered signaling and diurnal
significativas. regulation. The Plant Cell 15, 12121226.
Grace SC, Logan BA. 1996. Acclimation of
AGRADECIMIENTO foliar antioxidant systems to growth
Al Consejo Nacional de Ciencia y Tecnologa irradiance in three broad-leaved
(CONCYTEC) por el apoyo financiero para la evergreen species. Plant Physiology 112,
ejecucin de esta investigacin. Al Centro de 16311640.
Investigacin de Recursos Naturales de la Hancock R y Viola R. 2005. Biosynthesis and
Universidad Nacional de la Amazona Peruana catabolism of L-ascorbic acid in plants.
(CIRNA-UNAP) por el soporte con sus Crit Rev Plant Sci 24, 167188.
instalaciones y equipos. Un agradecimiento
especial a cada uno de los integrantes del Ledezma-Gairaud M. 2004. Validacin del
equipo de trabajo del la Unidad Especializada mtodo: determinacin de vitamina C
total por cromatografa lquida de alta
de Biotecnologa del CIRNA, por el apoyo
constante en las diversas actividades resolucin HPLC. Tecnologa en Marcha.
realizadas. 17 (4), 15-23.
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