Magnitudes, unidades de medida 3 y preparacion de disoluciones INTRODUCCION Las magnitudes son propiedades medibles de un sistema. En los laboratorias clinicos se determinan un numero elevado de magnitudes bioquimicas, hema tolégicas, inmunoldgicas y microbiolgicas. Las magnitudes se expresan en unidades de medida. Asimismo, los laboratories clinices preparan disolucio- nes para las determinaciones que realizan. En este capitulo se presentan los conceptos referentes a las magnitudes que miden los laboratorios clinicos, se relacionan las principales unidades de medida que utilizan y se describe la preparacién de disoluciones. ‘Las magnitudes son propiedades medibles en un sistema. Se caracterizan por el sistema, el componente y el tipo: 1, El sistenta es el medio en que se encuentra el componente. Los principales sistemas que emplean los laboratorios clinicos son la sangre, el suero, el plasma, la orina y otros liquidos biolégicos. 2. El componente es lo que se mide. 3. El tipo de magnitud es la propiedad que se mide. La descripeién sistemstica de las magnitudes debe seguir el modelo: Sistema-componente; tipo de magnitud Las magnitudes mis empleadas en los laboratorios clinicos son: concentra+ cién de sustancia, concentracién de sustancia arbitraria, concentracién de ‘masa, concentraciGn catalitica y concentracién de ndmero. En la tabla 3-1 se ‘enumeran las principales magnitudes bioquimico-clinicas. A continuacién se describen los principales términos relacionadas con el pro= eso de medida de una magnitud: 1. Unanilisis es un proceso que proporciona informacién fisica 0 quimica sobre los constituyentes de un espécimen. Los andlisis pueden ser cualitativos o cuantitatives. En los primeros se identifica la presencia de una sustancia en un espécimen. Los cuantitativos son aquellos en los que se determina la cantidad de una sustancia dada en un espécimen. 2. Una medida es la determinacién experimental de las propiedades fisicas © quimicas de una sustancia. (02m Sante spats, St etre ae erectFFostatasa alcalina: concentraciie catolitica -Fructoaamina, concentyacidn de sustancia: ‘Glucosa: concentracin de sustanchet ‘Gammaglueamil transferasa. concentrocién cataltica ‘Gonadotrepina eoriénica: concentracién de wsstancie ‘Haptoslobina: concentracitn de sustancia ‘Hierro (it + til): concentracién de sustance Inmuncgiobulina &; canzentracidn de masa Inmunoglobulina G. concentracién de mane Inmunogiobulina M; cancentrecién de mesa ‘Insulina; concentrocién de sustancia llon potasio: concentrocidn de sustancia lon sodio; concentracién de sustancte “Lactate deshidrogenasa, concen recién cataliocs ‘Luteotropina: concentrociéa de sustancia (Magnesio: concentracién de sustancia Unidad kal a west amo¥ net ™ a a pie pmol mmol = mmoyt mmol mmovt what amo¥t molt wheat waka molt mot at “we nen amo¥ uw nmol wait wha mmo mmol pale “ nmol nmol oo a a pmol mmol mmovt wit uw mmolBy-mlcroglobulina, concentracién de mess Micglobina; concentrocién de masa Paratirina: concentraciin de sustancie Peptide C: concentracidn de sustancia Prealbumina, concentacién de mes Progesterona; concentraciin de sustancis Prolactina: cancentrocivin de sustancie Protein; cancentraciia de mass Proteina C reactivas concentraciéa de mas “Testosterona: concentrocién de sstoncia Tiretropina, concentracién de sustoncia ‘Tiroxina: concentrackin de sustanca “Transfernina: cancentrociéa de masa “TWiglleéside, concentracisn de sustancie Thtyodotironina: cancentrocién de sustance Urato: concentrociée de sustancia Urea; concentracién de sustancis ‘Vitamins B,,;: coocentaciéa de sustancia ‘Magnieud en orina (dia) Acido (H*}; cantidad de sustancia Albimina, meso -ecamilasa; concentrecin eatabives CCreatinina: cantidad de sustancia Fosfatos: concentrocién de sustancia ‘Glucosa; concentracide de sustancis Gonadotropina coriénica; concentracién de sustanciet [7-hidroxicorticoide: cantided de sustancie S-hidrowlindolacétice; contided de sustancia Hidrexipratina; cantided de sustancia Jon potasio; cantidad de sustancia lon sedio: cantidad de sustoncie (7-oxoesteroide; cantided de austancia Proveina: cancentrociéa de masa “LERLELEQ ULE L/P/EELED US De" Sage ff HDL. tipoproceinas de alta derma. 3. Una técnica es cualquier principio fisico.o quimico-que puede utilizarse para estudiar una sustancia. Entre las que se usan en los laboratories clinicos y que se exponen en este texto estin las espectroscépicas, las electroquimicas, las cromatogrificas, las electrofortticas y las microscépicas. 4. Un método es ta aplicacién de una técnica para determinar una sustancia especifica en una determinada matriz. Por ejemplo, la medicion decolesterol en suero puede realizarse mediante un método espectroscépico de punto final, y las catecolaminas en la orina pueden determinarse por otro de cromatografia liquida de alta eficacia. 5. Un procedimiento es un conjunto escrito de instrucciones que detalla la aplicacién de un método. Este no conduce necesariamente a un tinico procedimiento, ya que puede realizarse de diversas maneras. 6. Finalmente, un protocolo es un conjunto de instrucctones escritas ‘estrictas que concretan el procedimiento que debe seguirse. UNIDADES DE MEDIDA. Los resultados de las mediciones se expresan con un ntimero y una unidad. La unidad identifica la dimension de la propiedad medida, mientras que el nime- ro indica las veces que contiene la propiedad. Las unidades del sistema métri« co son las mas utilizadas en los laboratories clinicos. Inicialmente, tenian como referencia la longitud, la masa y el tiempo. El primer sistema absoluto se deno= mind CGS y tenia como unidades bisicas el centimetro, el gramo y el segundo. Posteriormente, se empleé el sistema MKS, que se basaba en el metro, el kilo- gramo y el segundo. En 1960, el Comité Internacional de Pesas y Medidas acepts el Sistema Internacional de Unidades (SI). Este sistema tiene dos clases de unidades: basicas y derivadas. 'UNIDADES BASICAS Corresponden a ocho magnitudes fisicas fundamentales, de dimensiones independientes, que son la longitud, la masa, el tiempo, la temperatura, la cantidad de sustancia, la corriente eléctrica, la intensidad de luz y la actividad catalitica (tabla 2): 1. La unidad de longitud es el metro, que se define como la longitud igual a 1.650.763,73 veces la longitud de onda en el vacio de la radiacién correspondiente a la transicién entre los niveles 2p" y Sd del atomo de kripton 86. 2. Launidad de masa es el kilogramo, igual a la masa del prototipo internacional de la Oficina Intemacional de Pesas y Medidas. Magnitud (Nombre ‘Simbolo Lonaieud metro = Masa Jologeamo. ke Tempe semnde * Temperatura. Kalin is Cantidad de suestancia ‘mol ‘mol Corriente electrics amperio. A Intensidad de haz ‘candela ce) ‘Actividad catalicca eatal at(CELSENER.E1um p.tdorn MASSON Fasc navies 3. La unidad de tiempo es el segundo, que se define como la duracién de 3 9.192.631,70 veces el periodo de la radiacién correspondiente a la transicin entre los niveles hiperfinos del estado basal del dtomo de cesio 133. 4. La unidad de temperatura termodindmica es el Kelvin, que se define como la fraccién 1/273,16 del punto triple del agua. La unidad grado Celsius equivale exactamente al Kelvin. 5. La unidad de cantidad de sustancia es el mol, que se define como: la cantidad de sustancia de un sistema que contiene tantas entidades. elementales como dtomos hay en 0,012 kg de carbono 12. (Cuando se utiliza el mol deben especificarse las entidades elementales, que pueden ser Atomos, moléculas, iones, electrones otras particulas. 6. La unidad de intensidad de corriente eléctrica es el amperio, que se define como la corriente que, mantenida en dos conductores paralelos rectos, de longitud infinita y seceién circular insignificante, y colocados con un metro de separacién, producen entre ellos una fuerza igual a 2x 10-7 N/m. 7. La.unidad de intensidad de luz es la candela, que se define como la intensidad luminosa en direccién perpendicular de una superficie de 1/600,000 m? de un cuerpo negro, a la temperatura del platino helado, bajo una presién de 101.325 N/m?. 8. Como unidad de actividad catalitica se define el katal (mol/s), quees la cantidad catalitica de cualquier catalizador, incluidas las enzimas, que cataliza una velocidad de reaccién de un mol por segundo. Existe una relacidn constante entre la Unidad Internacional (i mol/min) y el katal (1 mol /s), de forma que, para transformar un valor de unidades internacionales a nmol /s, se multiplica por 16,67. La aplicacién de las unidades SI proporciona algunas veces valores muy grandes o muy pequefios cuyo uso es engorroso. Para evitarlo se utilizan mile tiplos o submaltiplos; los principales que acepta el SI se presentan en la tabla 3-3, Prefijo ‘Simbolo Prefijo: Yous * dest q 1 Zena, z cenei « ie Ba E nit m ict Peta Pp micro 7 1 Tera © ano 8 io Sie 6 pico e ad Meg ™ femte ‘ 108 Kilo K ano . 1 Hecto H peo x 102" Deca D orto y 10%Se forman con dos 0 mds unidades bésicas. La tabla 3-4 presenta ejemplos de unidades derivadas, algunas de las cuales reciben nombres. Hay también unidades no encuadradas en el $I que se utilizan con unidades de este sistema. La tabla 3-5 presenta las principales, que corresponden al tiem- po (minuto, hora y dia) y al volumen (lito y decilitro). Estas unidades se utili- zan con profusién en los laboratories clinicos. En Espafia, la mayoria de estos todavia utiliza las unidades convencionales para expresar los resultados. Para transformar estos valores en unidades SI, basta multiplicar por un factor de conversién. En la tabla 3-6 se ofrecen los factores de conversién correspondien- tes a las magnitudes mas habituales en los laboratorios clinicos. PREPARACION DE DISOLUCIONES. Una disolucién es una mezcla homogénea de una o varias sustancias que se denominan solutos, dispersadas de forma molecular en una cantidad suficien- te de un medio disolvente. Con frecuencia deben prepararse en el laboratorio Expresion Magnitud Nombre ‘Simbolo SI en unidades St aturven metro cubis - Co Densidad kdograme por metro cibico. gm? gmt Velocidad metre por sepunds avs wes Concentracion ‘mol por metro ciibico mov? moti! de sustancia Fuerea Newton N erkgi Presién Pascal Pa legen? ‘Energis, trabajo, calor = Julo J wig wane we ogi? Carga eldetrica culemble c AS Povencial eldctrico: wokto ¥ er gt A Resistencia, ohmie v enti Frecuencia hertio He we‘Acide Grice engl 0059 menoll Blerubina mg/dl 4 panei Calle mg/dl o2s mene pCO, mmHg, 0.133 kPa Cotesteret mal nase mrmoit Creatinina, mg/dl ea4 molt Gtucosa pial onsss memo Hierro mad ou79 matt pO, mnt 0.133 ia Féstore: mg 0323 mene Potasio mEgh ' menolt Proseinas wa 10 n Sodio mEgh 1 mmol ‘Tiglicénidos mpyat onus melt Urea gil oas7 revel clinico disoluciones y reactivos. Asimismo, en muchas ocasiones hay que diluir los especimenes o los reactivos. En los apartados siguientes se describe de forma practica céme se realizan las diluciones y eémo se preparan disolucio- nes, de concentracién expresada en diferentes unidades fisicas y quimicas. ‘También se describe la preparacién de disoluciones amortiguadoras. DILUCIONES La dilucién de especimenes y reactivos se realiza muy a menudo en los labo ratorios. Expresa la relacin de una disoluciéa en un volumen total. Asi, por ejemplo, una dilucién 1:5 contiene un volumen de una disolucién original en un volumen total de 5. La férmula: Ves Ke (donde V = volumen de la disolucién concentrada; ¢ = concentracién de la disolucién concentrada; V" = volumen de la disolucidn diluida; ¢’ = concentracién de la disolucién diluida) 5 la mas utilizada para preparar diluciones. Por ejemplo, para diluir un espé- cimen de suero 1:10, se toma un volumen del espécimen (0,1 ml, 1 ml, ete.) y se afiaden 9 vohimenes del diluyente (0,9 ml, 9 ml, ete.). DISOLUCIONES DE CONCENTRACION EXPRESADA EN UNIDADES. Las unidades fisicas que expresan la concentracién de las disoluciones se basan en magnitudes fisicas como la masa y el volumen. Son las unidades clasicaspara expresar la concentracion, que se recomienda sustituir por las unidades quimicas. A continuacién se relacionan las m4s utilizadas. PORCENTAJE EN PESO El porcentaje en peso expresa la cantidad de soluto presente en 100 g de diso- lucién. Para preparar las disoluciones cuya concentracién se exprese asi, se pesa el solute y el disalvente en un equivalente a 100. Par ejemplo, se mezclan 5 g de sulfato decobre y 95 g de agua y de este modo se abtiene una disolucién de sulfato de cabre del 5% (pese/ peso). PORCENTAJE EN VOLUMEN Indica la cantidad de soluto en 100 ml de una disolucién y se utiliza cuando-el solute y el disolvente sean liquides. Por ejemplo, una disolucién alcohstica del 40%. contiene 40 voliimenes de alcohol en 100 voliimenes de disoluci6n. Para preparar un litro de esta disolucién se toman 400 ml de etanol absoluto y se Ponen en un matraz aforado de 1 1, que se enrasa con agua destilada. PESO DE SOLUTO POR UNIDAD DE VOLUMEN DE DISOLUCION La expresién que se utiliza mas frecuentemente son los gramos por litro (g/1). En los laboratories clinicos se emplea con frecuencia la expresin miligramo por 100 ml o decilitro (mg/dl). Por ejemplo, una disolucién de cloruro sédico de 9 g/l contiene 9 g de cloruro sédico en 1 | de disolucién; para preparar 11 de esta disalucién se pesan 9 g de NaCl, se colocan en un matraz aforado de 1 Ly se afiade agua destilada hasta la marca de enrase. PARTES POR MILLON (PPM) Son cocientes de masa de gramos de soluto en un millén de gramos de espé- cimen. Por ejemplo, una disolucién que contenga 320 ppm de Cr tendré 320 ug/ml. DISOLUCIONES DE CONCENTRACION EXPRESADA EN UNIDADES QUIMICAS Las unidades quimicas que expresan la concentracién de las disoluciones se basan en las magnitudes quimicas cantidad de sustancia y equivalente-gramo. El uso de estas magnitudes se fundamenta en que las sustancias raccionan entre ellas mol a mol o-equivalente a equivalente. Una disolucién molar (M) es la que contiene un mol de soluto en un litre de disolucién. Un mol de una sustancia es su peso molecular en gramos. Asi, una disolucién 1 M de NaCl (peso molecular de 58,5) contiene 58,5 g de NaCl en 1 | de disolucisn. Si se desea obtener 250 ml de una disolucién 0,2 M de NaCl, deberan pesarse:(08 SEVER. Eun pian MASSON. Far autoM atonos te. S55 X02 7.975 g de NaCl, 1.000/250 deberén colocarse en un matraz aforado de 250 ml y afadir agua destilada hasta la marca de-enrase. Cuando se quiera preparar una disolucién de concentracién molar a partir de tun liquide, habra que tener en cuenta la densidad y la riquezaen peso del produc~ to de partida. Por ejemplo, se va.a preparar 500ml de Scido sulfiirico 2M a partir de dcido sulftirico concentrado comercial de una densidad de 1,80 g/ml y una riqueza en peso del 98%. En primer lugar, debe calcularse la concentracién molar del écide sulhirico concentrado. De acuerdo con la riqueza en peso, en cada 100 g de Acido sulfirico concentrado hay 98 g purus; por otro lado, y de acuerdo con la densidad, 1 | (1.000 ml) pesa 1.800 g. Se tiene entonces 100/98 = 1.800/1 y pn 28% 1800 100 = 1764 g/l, y la disolucién contiene 1.764 g/1. Como el peso molecular del écido sulfirico €5 98, la molaridad del dcida sulfidrico concentrado es 1.764/98 = 18 M. Para preparar los 500 ml de dcido sulfdrico 2 M a partir del concentrado (18 M), se aplica la formula de dilucion: x Vx 18=500x2, y ye Xt vam Se toman 27,8 mi del dcido sulfirico comercial concentrado (18 M) y se lle- van a un matraz aforado de 500 ml, que se enrasa con agua hasta la marca. jCuidado, al principio nunca debe atadirse agua sobre dcido sulfirico concen trado, sino siempre Acido sulfirico sobre agua! Asi, en este caso se pondria agua destilada en el matraz aforado, por ejemplo unos 400 ml, y luego se afia- dirla el deido sulfirico concentrado. Una vez aftadido todo el dcide, se enrasa- ria en 500 ml con agua destilada. NORMALIDAD Una disolucién normal (N) es la que contiene un equivalente-gramode un solu- to en 1 I de disolucion. El equivalente-gramo de una sustancia es igual a su peso molecular dividido por su valencia, expresado en gramos. Cuando la valencia de una sustancia sea 1, sus disoluciones poseerin la misma molaridad y norma- lidad. Per ejemplo, una disolucién de Scido clorhidrico 1 M es también 1 N. Sin en el dcido sulfiirico, que tiene valencia 2, una disolucién 1 Mes 2N. La molaridad y la normalidad estan relacionadas por esta formula: N=Mxw donde v = valencia de la sustancia.3 Una disolucién que contenga 55 g/1 de cloruro calcico de peso molecular 111 y valencia 2 sera I N. Si se quisiera preparar 500 ml de una disolucién 0,3N. de dicho cloruro, habria de pesarse: 03% 53 _ gos y 1.000/500 de cloruro célcico, llevarlos a un matraz aforado de 500 mil y aftadir agua des- tilada hasta la marca de enrase. Cuando se trata de liquidas, como ya se vio en el caso de la molaridad, debe considerarse la riqueza en peso y la densidad. Por ejemplo, para prepa- rar 500 ml de Acido sulfurico 0,25 N a partir de 4cido sulftirico comercial con- centrado de densidad 1,8 g/ml y riqueza en peso del 98% —que, como ya se ha dicho, es 18 M=, se debe calcular primero la concentracién: normal, que ser 18 x 2 = 36 N. Aplicando la formula de la dilucién: 500 « 0,25 = V x 36, V =500 x 0,25/36 = 3,47 ml. Se toman 3,47 ml de Acido sulfurico concentrado (36 N), se colocan en un matraz aforado de 500m! que contenga agua destila- da hasta aproximadamente la mitad —recuérdese que al principio no debe afadirse agua sobre cido sulfirico concentrado, sino siempre el scido sulfite Fico concentrado sobre el agua—y se lleva hasta el enrase con mas agua des+ tilada, DISOLUCIONES AMORTIGUADORAS Las disoluciones amortiguadoras son sistemas que admiten pequefias adicio- nes de dcidos o bases, sin que se altere el pH de la disolucién, Los amortigua- dores estin formados por una disolucién de un dcido ode una base débil y un exceso de su base o de su Acido conjugado, respectivamente. Consideremos una disolucién de un dcido débil con una constante de equilibrio Kz AH + At+H* {He} ees Despejando [H"] tenemos: pey=n, — ‘Tomando logaritmos decimales: log [H"] = log K, + log, =Y cambiando el signa: cj +} == log K, log AEL log [H'] == log K, =o ZO fA1 HH = pK, + aah Es la ecuacién de Henderson-Hasselbaich, que relaciona las concentraciones de las especies dcida y basica de un dicido o una base débil con el pH de la disolucién. Un amortiguador caracteristico es el dcido acético/acetato. A continuacién, se explica la forma de preparar I I de un amortiguador de acetato s6dico 0,1 M de pH 5. El pK, del dcido acético es 4,75, su peso molecular 60 y el del acetato sédico 82. De acuerdo con la ecuacién de Henderson-Hasselbalch: [acetato] =475 + log eel PTS AIS +108 aacol [acetato} e—5—57~nn. = 5-475 =025 facetato] = antilog 0.25 [acttico] [acetato] =178 [acético] 1,78 ¢s la relacidn entre las concentraciones de acetato sédico y de Scido actti- co, de forma que las concentraciones que den esta relacién producirén un amortiguador de pH 5. Como la concentracién del amortiguador solicitada es 0,1 M, tenemos un sistema de dos ecuaciones con dos incégnitas: [acetato] + [acético] = 0,1 facetatol 175 [acético] [acetato] = 1,78 [acético} 1,78 [acktico] + [acetato] = 0,12,78 [acttico] = 0,1 on 278 = 0,036 [acético] = 0,036 mol/1 x Pm = 0,036 mol /1 x 60 g/mol = 2,16 g/1 [acetato] = 1,78 x 0,036 mol /I = 0,0641 mol /1 x 82 g/mol = 5,26 g/! Se pesan 2.16 g de 4cido acttico y 5,26 g de acetato sédico, y se llevan a un matraz aforado de 1 1, al que se afiade agua destilada hasta enrasarlo. Los amortiguadores que mas se emplean en los laboratorios clinicos son los de acetato, carbonato/bicarbonato, fosfato, tris y veronal.