EFECTO DE LA PREPARACIN DEL INOCULO EN EL CULTIVO POR LOTE DE Bacillus

thuringiensis HD-73
Vernica Vzquez Cervantes, Lucila Valdez Castro, Ma. Teresa Rodrguez Casasola y Josefina Barrera Corts.
Departamento de Biotecnologa y Bioingeniera CINVESTAV.
Av. Politcnico Nacional 2508, C.P. 07000 Mxico, D.F. Fax: 57 47 38 00 ext. 4305
e-mail: jbarrera@mail.cinvestav.mx
Palabras clave: Bacillus thuringiensis, Fermentacin

Introduccin: Bacillus thuringiensis (B.t), es uno de los

microorganismos comnmente empleados para el control De acuerdo a la tendencia de cada curva, la propagacin de
biolgico de plagas agrcolas. Debido a su gran B.t ., en uno y dos pases, no presenta cambios
aceptacin, el proceso de produccin de B.t . es estudiado significativos en su proceso de reproduccin. Con relacin
con el fin de incrementar rendimientos y eficiencia de a la morfologa, la propagacin de B.t . en medio GR mostr
productos de la fermentacin, as como reducir sus costos un desarrollo normal durante todo su ciclo. Al pasar B.t . del
[3]. medio GR al de HS, se observ un alargamiento del bacilo
Para producir B.t . en un medio de cultivo a base de harina durante las tres primeras horas. Posteriormente, B.t . se
de soya, se determin preparar el inculo en dos pases a recuper totalmente. Esta recuperacin se vi reflejada en
fin de asegurar su desarrollo normal. Este trabajo tiene por el nivel de reproduccin de B.t . que fue de la misma
objetivo estudiar el efecto de propagar B.t . en un solo pase, magnitud que la obtenida en medio GR.
sobre la produccin de biomasa, esporas y protena Cry. Los resultados de las 4 fermentaciones de B.t . en el
Metodologa: Se determinaron cinticas de inculos de B.t. Chemap se reportan en la Tabla 1. Aqu se observa que el
propagados en uno y dos pases. Primer pase, 0.5 mL de un nmero de pases en la preparacin del inculo no afecta la
stock de esporas (8.42x107 esporas/mL) se inocul en un fermentacin de B.t . Al cambiar el tipo de inculo y
matraz de 500 mL con medio Gerry Rowe (GR). El matraz se mantener constante la Concentracin Inicial de Slidos
incub a 30C y 200 r.p.m durante 12 horas. Segundo pase, Totales (CIST), la produccin de bacterias, esporas y de
5% del cultivo contenido en el matraz 1 se inocula en un protena Cry1A(c) se mantienen prcticamente constantes.
segundo matraz con 200 mL de medio basado en harina de CIST(g) Inc. Bac x Esp x Cry1A(c)
soya (HS). La propagacin se realiz bajo las mismas 108/ml 108/ml (g/l)
condiciones. De los dos matraces, cada hora se tomaron 40 GR 23.60 21.50 1.523
muestras de 10 mL, para determinar la cintica de bacilos 40 HS 25.07 23.00 1.463
(cuenta directa y peso seco), as como la morfologa celular 60 GR 40.38 34.50 2.094
de B.t . (tincin de Smirnoff) [2]. 60 HS 35.76 30.75 2.026
Se realizaron 2 fermentaciones en lote de B.t . con inculo
Tabla 1.Efecto de la CIST y del tipo de inculo en la
obtenido de un solo pase y 2 fermentacin con inculo
fermentacin en lote de B.t.
obtenido de dos pases. 200 mL de inculo fueron
Conclusiones: El mtodo de propagacin de B.t . no afecta
depositados en un fermentador Chemap de 5L (volumen de
el proceso de produccin de B.t. HD-73, en cultivo por lote.
operacin. La fermentacin se llev a cabo a 30C, pH de
La ventaja observada es la reduccin del tiempo total de
7.2, oxgeno disuelto > al 40% y 600 r.p.m. Cada hora se
procesamiento al eliminar las 12 horas del segundo pase y 6
tom muestra para determinar cinticas de bacilos y
del primero. La posible desventaja es la prolongacin, en
esporas (cuenta directa), glucosa (analizador enzimtico),
dos horas, de la fase lag.
nitrgeno (tcnica de Ninhidrina) y protena Cry
Agradecimiento:
(electrofresis en gel de poliacrilamida) [1].
CONACyT, proyecto 31511-B. PIFI, proyecto 200499.
Resultados y Discusin: Las cinticas de los inoculos de
Dr. Fernando Esparza Garca, por su apoyo y asesora.
B.t . propagados en uno y dos pases como se muestra en la
Figura 1.
Bibliografa:
12 1. Farrera Rebollo R.R. (1998). Efecto del Medio de
CDT/mL x 10

10
8

Cultivo sobre la Esporulacin y Sntesis Cry1A(c) en

8 B.t.var. kurstaki HD-73. Tesis de doctorado. Mxico,
6 D.F.
4 2. De Urquijo Niembro E. (1987 ) ). Produccin de B.t.para
2 el control de ciertas plagas de importancia agricola.
0 Tesis de Maestria. Mxico, D.F.
0 2 4 6 8 10 12 3. Xiao-Ming Yang* and Shaw S. Wang Development
Edad [h]
of Bacillus thuringiensis Fermentation and Process
G.R. H.S. Control From A Practical Perpective Biotechnol.
Figura 1 Cinticas del inculo de B.t propagado en medio Appl. Biochem. (1998) p. 95-98
GR y HS.