Arch Environ Contam Toxicol (2014) 67:203213
Evaluacin de induccin genotxica y deterioro de la calidad
del pescado en especies comerciales debido a la exposicin
de metales pesados en un estanque urbano
Mahino Fatima Nazura Usmani M. Mobarak Hossain
Mohammad Faisal Siddiqui Mohammad Faraz
Zafeer Fakiha Firdaus Shafeeque Ahmad
Resumen El objetivo del estudio fue evaluar el efecto
de la contaminacin de metales pesados en dos
especies (striatus de Channa y Heteropneustes
fossilis) que habitan en un pequeo cuerpo de agua
dulce del norte de la India. Despus de ser
capturados, cada muestra se pes, midi y analizada
para metales pesados (cromo [Cr], nquel [Ni] y plomo
[Pb]). Acumulacin de metales pesados se encontr
significativamente mayor (p < 0.05) en diferentes
tejidos (branquias, hgado, rin y msculo) de los Metales pesados, como cadmio (Cd), arsnico (As),
peces capturados de la reserva en sitio de referencia.
Los niveles de contaminacin por metales pesados en
las agua jamal de Shah fue Cr (1,51 mg/l) >Ni (1,22
mg/l) >Pb (0,38 mg/l), que es significativamente mayor
que lo permisible segn las normas de la Organizacin
Mundial de la salud. El factor de bioacumulacin fue
calculado, y se observ que el Pb era la mayor
concentracin de metales pesados perjudiciales. El
factor de condicin tambin influy. Prueba de micro (Sabhapandit et al., 2010; Bhat et al. 2012). Algunos
ncleo de eritrocitos en pescado y el ensayo de
cometa de las clulas del hgado confirman
genotoxicidad inducida por metales pesados.
Metales pesados (Cr, Ni y Pb) se incrementaron en
ambas especies de peces segn uso recomendado
valores de la Agencia de proteccin ambiental Federal
para peces comestibles. Esto plantea una gran
preocupacin porque estos peces son consumidos por
las poblaciones locales y por lo tanto, en ltima
instancia seran afectar la salud humana.
La fauna acutica contribuye a la mayor parte de
nuestras necesidades alimenticias. En los ltimos
aos, cantidades crecientes de contaminacin
acutica resultante de las descargas industriales,
agricultura y residuos urbanos en hbitats acuticos
posee una seria preocupacin para la salud pblica
debido al consumo de pescado de estos cuerpos de
agua (Bickham et al. 2000; Mayon et al. 2006).
mercurio (Hg), plomo (Pb), cobre (Cu), nquel (Ni),
cromo (Cr), zinc (Zn), etc., as como otras sustancias
txicas existentes, son la principal causa de la
contaminacin acutica (Gurcu et al. 2010). Embalses
y lagos se deterioraron ms con frecuencia por
contaminacin con metales pesados debido a la
interferencia humana en comparacin con ros
metales en concentraciones mnimas son esenciales
para los organismos vivos. Pero la excesiva
concentracin de metales pesados en tejidos debido a
la bioacumulacin, se da por su redox ciclismo y su
capacidad para deteriorar los grupos sulfihidrilos de
tejido, conduce a estrs oxidativo, que puede verse a
travs de exmenes genotxicos como texto (MNT) de
microncleos y el ensayo cometa (Ali et al. 2009). Es
evidente que los anteriores estudios de Cr, Ni y Pb en
estos cuerpos de agua se acumulan y biomagnifica en
tejidos de peces debido a la excesiva exposicin en su
hbitat de vida (Sen et al. 2011; Javed y Usmani
2012). Metales pesados similares fueron estudiados
por Ftima y Usmani (2013) en el ro Yamuna para
lase species Channa striatus y Heteropneustes fossilis
y se demostr que marcada toxicidad heptica y
nefrotoxicidad. Estos metales se han agrupado como
metales peligrosos y tienen nmeros en bancos de
datos de sustancias peligrosas (HSDB), viz, Cr (910),
Ni (1096) y Pb (231), debido a su toxicidad
generalizada (sustancias peligrosas datos Banco
2006).
Porque existe una creciente preocupacin por la
presencia de genotoxins en cuerpos de agua locales,
el desarrollo de biomarcadores sencibles ha ganado
importancia (Hayashi et al. 1998). MNT, que
parmetro es, se utiliza en bioindicacin para la
generacin de material gentico
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los fragmentos conocidos como microncleos (MN). MacCubbin 1994).

Estos fragmentos aparecen en el citoplasma cuando Aligarh es un rea urbana y es mejor conocido por su
algunas partes de los cromosomas o todos los industria de candados. El objetivo del presente estudio
cromosomas no se incorporan rpidamente en los fue evaluar los efectos en los afluentes de fbricas
ncleos de las clulas hijas en la mitosis porque estos cerca de la cerradura en el embalse de Shahjamal. Se
fragmentos carecen de centrmeros; Estos estimaron las concentraciones de Cr, Ni y Pb en las
fragmentos abandonados se incorporan en los muestras de agua y dos pescados importantes
ncleos secundarios llamados '' microncleos '' especies, a saber, C. striatus y H. fossilis.
(Schmid 1975; Lizo et al. 1983). As, esta prueba
Anterior, C. punctatus fue utilizado como un modelo
ayuda a evaluar los efectos genotxicos de los
genotxico por Ali et al., (2009) para evaluar el efecto
contaminantes que estn presentes en el medio
mutagnico de clorpirifos en agua dulce. Aunque H.
acutico (Tucker y Preston 1996). El recuento de MN
fossilis fue utilizado
ha servido como un ndice de roturas cromosmicas y
disfuncin del aparato del huso mittico (Hooftman y
De Raat 1982).
Pueden ocurrir muchos tipos de dao en las molculas
de ADN como resultado de la produccin endgena
de especies reactivas del oxgeno (ROS),
interacciones con xenobiticos, irradiacin, etcetera.
El agente causal ms frecuente de dao oxidativo en
el ADN es el ion OH, que puede ser producido como
resultado de una reaccin entre el O2 - y hierro (Pb;
Beckman y Ames, 1997). Productos de daos incluyen
roturas de doble cadena, ropturas simples, enlaces
cruzados interfilamentoso e intrafilamentoso y
aduccin y protena DNA aglutina por nombrar
algunos (Wood et al. 2001). Daos en el ADN por
xenobiticos se producen en tres pasos bsicos en
donde la primera es la formacin de aductos con
molculas txicas. La siguiente etapa, modificaciones
secundarias de ADN, incluye rotura de filamento solo
y doble, cambios en ADN reparacin base oxidacin y
enlaces cruzados. Xenobiticos pueden inducir estas
modificaciones secundarias a travs de la produccin
de ROS. En la tercera etapa, las clulas muestran
alteracin de la funcin, que puede conducir a
proliferacin y, en consecuencia, el cncer de clulas
(Monserrat et al. 2007). Las modificaciones de ADN
ms utilizadas como marcadores en estudios efectos
de exposicin al xenobitico en peces incluyen dao
por oxidacin en la base y la formacin de ADN
aductos. As, el desarrollo de otro sello genotxico de
roturas del filamento de ADN es el ensayo cometa
(electroforesis en gel de unicelulares), que tiene
sensibilidad para la deteccin de bajos niveles de
dao de la DNA (0.1 DNA rotura/10^9 Da) (Gedic et
al. 1992). Este ensayo sensible da una idea del
impacto de la llamada de los radicales libres inducida
por metales pesados en las molculas de ADN porque
hay rotura de los enlaces fosfodister dentro de las
molculas de ADN (Shugart 2000). Reparacin de la
DNA en organismos acuticos es ms lenta que en
clulas de mamfero, que confiere una ventaja para
medir roturas de DNA inducidas en los peces
expuestos sustancias txicas (Walton et al. 1984;
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por Ahmed et al (2013) para estudiar los efectos del laboratorio.
cromo hexavalente sobre genotoxicidad. C. striatus
(un pez demersal) y H. fossilis (el bagre) se Proceso para la estimacin del Metal pesado de
encuentran generalmente en los embalses y la muestra
acequias en la India nortea. Son especies de peces
comestibles y son una buena fuente de protena. H. Digestion of Water Samples
fossilis tambin tienen valor medicinal. Estos peces
fueron capturados para evaluar la bioacumulacin de Estimacin de metales pesados en agua se realiz
metales pesados en sus tejidos y su datos con mediante el mtodo de digestin cida como
respecto a la genotxico potencial genotxico y
descrito por Cabrera et al.
mutagnico naturaleza de compuestos metales
pesados en peces, que carecen del ecosistema
acutico natural. Adems, el experimento pretende
evaluar la sensibilidad y la capacidad de juego de
clulas de la sangre a travs de MNT y de clulas del
hgado a travs del ensayo cometa dos seleccionado
de especies de un ecosistema acutico
contaminados con metales pesados que mora en
nosotros.

Materials and Methods

Site of Collection

Shahjamal, Aligarh, India Norte (27 52'51 '' N

longitud y 78 3'14 '' latitud E) est dominada por
muchas fbricas de cerraduras de pequea escala,
que descargan sus residuos en cuerpos de agua
cercanos. Hemos seleccionado un cuerpo de agua
efluente dominado para el presente estudio, es
decir, embalse de Shahjamal. La calidad del agua
del cuerpo de agua utilizado para el estudio fue
seleccionada para ser cargado con la descarga de
una pequea industria de fabricacin de la
cerradura. Jawan canal se encuentra en las
coordenadas 28 02026 .100N lon-gitude y 78
0604900E latitud. Es baja en contaminacin y se
us para comparar el impacto de un cuerpo de agua
efluente dominado sobre genotoxicidad de pescado.
Un mapa que muestra la referencia y sitios
experimentales se muestra en la figura 1.

Sampling of Water

Agua se obtuvo de la referencia y sitios

experimentales. Se realiz muestreos sistemticos
para obtener perfiles imparcial del embalse. Se realiz
muestreo zonal de cuatro lados del embalse para
anlisis de metales pesados. Agua se almacen a 4
C en botellas de vidrio de muestreo limpia.

Fish Procurement

Peces especies C. striatus y H. fossilis fueron

recogidos de referencia y depsito de agua con la
ayuda de Pescadores locales y trajeron al
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Fig. 1 Map showing reference and experimental sites
(1992) con Deslice modificaciones. Muestra de agua
(100 ml) en un matraz aforado de 250 ml y se
acidifica con 5 ml de HNO3 (55%). Entonces el agua
acidificado se evapor en un plato caliente a
aproximadamente 20 ml. entonces
205
5 ml de HNO3 (55%) y 10 ml de cido perclrico (70%)
fueron agregados junto con algunas perlas de vidrio
(la muestra se evapor hasta marrn gases cambios
de densos humos blancos de cido perclrico). Se
enfri a sala de
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temperatura y diluido con agua destilada (DW) en
un matraz aforado de 100 ml.
Digestion of Tissue Sample
Peces fueron disecados y rganos (hgado, rin,
branquias, msculo) aislan y procesan segn Du
Preez y Steyn (1992). Muestra de tejido congelado
descongelado fue aclarado en DW y borrado con
papel secante. El conocido peso de tejido fue
cambiado de lugar a un matraz aforado de 250 ml.
cido ntrico (5 ml [55 %]) y cido perclrico (1 ml [70
%]) fueron tambin aadido y mantenidas durante la
noche. Luego HNO3 (5 ml [55 %]) y cido perclrico
(4 ml [70 %]) fueron agregados ms lejos en un matraz
aforado y mantenido sobre una placa caliente en 200-
250C. Una solucin clara y transparente se obtuvo
posteriormente como marrn humo convertido en
densos humos blancos, que indicaron la digestin
completa. La muestra fue enfriada y diluida en 10 ml
con DW en un enjuague adecuado del matraz
digerido. La muestra fue almacenada hasta detencin
de metales pesados en envases de vidrio lavado. Los
metales pesados fueron analizados utilizando un
espectrofotmetro de absorcin atmica (AAS; 2280,
Perkin Elmer, USA) segn la Asociacin Americana de
salud pblica (1989). Todos los productos qumicos
(sulphuric, nitric, and perchloric acid) utilizados fueron
de grado analtico.
Quality Control
Un material de referencia certificado (CRM) (Cr
[02733], Ni [42242] y Pb [16595]; TraceCERT CRM
para AAS; Sigma Aldrich, USA) y espacios en blanco
fueron utilizados para comprobar la precisin del
instrumento. Anlisis de espacios en blanco y ence
consulte material Replica demostr buena precisin y
material de ref ERENCIA concentraciones
encontradas fueron 98 102% de los valores
certificados para todos los metales pesados medidos.
Bioaccumulation Factor
El factor de bioacumulacin (BAF) se describe
como la relacin de concentracin de
contaminantes (metales pesados) en el
organismo a su concentracin en el cuerpo de
agua (Authman y Abbas 2007). El BAF se
calcul mediante la frmula: BAF = con
centration de metales pesados en tejido de
peces (g/g) / concentracin de metales
pesados en el agua corporal (mg/L).
206
Factor de condicin
Factor de condicin (CF) se calcul mediante la longitud
y el peso de los peces y expresados como media SD
La frmula utilizada fue CF = peso (g) / length^3 (cm)^3
X 100 segn lo descrito por Fulton (1904).
MNT
La frecuencia de MN en los eritrocitos se evalu
segn el mtodo descrito por Fenech (1993). La
sangre fue recolectada de peces a travs de puncin
cardaca y manchada en portaobjetos limpiamos,
secados a temperatura ambiente durante 24 h y luego
se fij con metanol al 100%. Las muestras se tieron
con solucin Giemsa al 10% durante 10 min, aire seco
y fijo permanentemente. Examinaron a un total 2.000
hemates para cada muestra bajo un microscopio
ptico (Nikon eclipse E200) con inmersin aceite
1,0009 aumento. Puntuacin ciego de MN fue
realizado en diapositivas aleatorios y codificados.
Criterios descritos por Fenech et al., (2003) se
tomaron en cuenta. Otras anomalas nucleares y
celulares, tales como cogollos nucleares, eritrocitos
teniendo ms que una sola micronu-cleus, ncleos
blebbed, ncleos lobulados, ncleos dentados,
citoplasma vacu-aislada y microcytes se registraron
por separado sobre la base de los criterios descritos
por Da Silva y Fontanetti (2006). Frecuencia de MN =
(no. de las clulas que contienen MN) 1.000/nmero
total de clulas contadas.
Preparacin de suspensin solo de clulas y
ensayo cometa
Dao del ADN se evalu mediante ensayo cometa
alcalino como descritas por Singh et al., (1988) con
ligeras modificaciones. Todo el experimento de
ensayo cometa fue realizada bajo condiciones de luz
tenue para evitar ms daos en el ADN. Muestras de
hgado recin colectadas se lavaron con tampn
fosfato fro salino-calcio magnesio libre (PBS - CMF).
Tejidos del hgado picados con CMF PBS 20 mM
cido etilendiaminotetraactico (EDTA) y 10% de
dimetil sulfxido (DMSO) a pH 7.4 y filtrados a travs
de un colador de malla 100 de lm. Los tejidos fueron
recogidos en un tubo, y se aadi 2 ml de PBS-CMF
seguido por centrifugacin a 2.000 rpm a 4 C durante
10 minutos celular fue recogido y resuspendi en
PBS-CMF. Prueba de viabilidad celular se realiz
mediante el mtodo de exclusin del azul tripn
(Anderson y salvaje 1994), y muestras que muestra
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viabilidad >80% se consideraron para el anlisis del
cometa. Suspensiones celulares fueron
suspendidos en 0,5% bajo punto de fusin-agarosa
(LMPA) superpuesto en diapositivas existentes con
una fina capa de agarosa de punto de fusin normal
de 1.25%. Una tercera capa de 0.75% LMPA fue
vertida, y toboganes fueron sumergidos en solucin
de lisis (2.5 M NaCl, 100 mM EDTA, 10 mM Trizma
base, 0,2 mM NaOH, 1% Tritn X-100 y DMSO [pH
10]) por 1 h a 4 C para lyse las clulas y facilitar el
despliegue de ADN. Esto fue seguido por el tampn
de electroforesis (300 mM NaOH, 1 mM EDTA [pH
>13]) por 20 min permitir desenrollar de la DNA y
electroforesis se realiz a 25 V y 300 mA de corriente
en el mismo buffer

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durante 30 minutos. Despus de la electroforesis, organizacin Mundial de la salud (1985) (tabla 1).
diapositivas se neutralizaron con neutralizantes buffer Metales pesados (Cr, Ni y Pb) fueron inferiores al lmite
(0,4 M Tris almacenador intermediario [pH 7.5]). de deteccin (BDL), es decir, ms bajos que en los sitios
Fueron secos y teidos con solucin de nitrato de experimentales. Por lo tanto, Jawan canal fue tomado
plata amoniacal. Fotografas fueron obtenidas en como el sitio de referencia para el estudio.
4009. Se analizaron diez peces por especie y 50
celdas fueron anotados (500 clulas/especies por
sitios) se marcaron al azar y analizados utilizando el
software de Cometscore (versin 1.5; TriTek,
Sumerduck). Grado de dao de la DNA fue
representado como % ADN en cola.

Statistical Analysis and Calculation of Induction Factor

Parmetros (media y SD) se calcularon para los datos

obtenidos para las propiedades fisicoqumicas del
agua y la presencia de metales pesados en muestras
de agua y peces. Se aplic anlisis unidireccional de
varianza para comparar el diferencia entre los medios;
p valores <0.05 fueron considerados significativa.
Para bioacumulacin de metales pesados, para la
nueva prueba de rango mltiple de Duncan fue
aplicado (Duncan 1955) como prueba post hoc de
comparaciones mltiples. Para parmetros de
genotxicos, la significacin estadstica de las
diferencias en medio valores entre experimental y
peces de la referencia se determin usando la prueba
t de Student. Factor de induccin para la frecuencia de
MN y parmetros del ensayo de cometa (clulas por
ciento con la cola, longitud de la cola y ADN por ciento
en cola) se calcul como la proporcin del parmetro
del anlisis de frecuencia o cometa de MN entre
experimental y de referencia de las muestras (Polard
et al. 2011). Supuestos de normalidad (Shapiro-Wilk
test) y homogeneidad (prueba de Levene) de los datos
se verificaron (Zar 1984).

RESULTADOS

Propiedades fisicoqumicas del agua del depsito y

referencia

Propiedades fisicoqumicas de referencia y sitios

experimentales se enumeran en la tabla 1. Sitio de
referencia, temperatura (22,64 C), pH (7,4) y el
oxgeno disuelto (DO) (5.80) fueron encontrados para
ser de nivel. Sin embargo, para la temperatura del
agua del sitio experimental y el pH variaron entre 23,8
y 24.9 C y 6,98 7.78, respectivamente. La
concentracin de (2.5 3.80 mg/l) fue
considerablemente baja. Las concentraciones de
metales pesados fue en orden Cr (1.51 0,14) [Ni
(1.22 0,09) [Pb (0,38 0.07) en muestras de agua
recolectadas desde el embalse de Shahjamal. Todos
los metales pesados estaban presentes en niveles
ms all de los valores recomendados por la
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Heavy-Metal Bioaccumulation in Fish correspondiente sitio de referencia.
Las dos especies, C. striatus y H. fossilis, recogidos
fueron disecados para retirar los tejidos (hgado,
rin, gill, mus-cle) para la determinacin de
bioacumulacin (peso mojado de g/g) de metales
pesados. El peso de la bioacumulacin de metales
pesados (Cr, Ni y Pb) en (g/g) mojado en diferentes
tejidos de C. striatus recogidos en el sitio
experimental se muestra en la tabla 2. Haba pesado
bioacumulacin de todos los metales pesados en
tejidos de peces (Cr acumulado mes el ms). El
patrn de bioacumulacin fue encontrado para ser
Cr (branquias [94.82 g/g] >rin [g38.51/g] >
hgado [g 12,33 / g] > msculo [3.04 g/g]) seguido
por el plomo (rin [38.45 g/g] >branquias [32.23
g/g] >hgado [g 8.76 / g] >msculo [2.7 g/g]) y Ni,
que acumul como mnimo (branquias [11.99 g/g] >
rin [9.67 g/g] >hgado [9.08 g/g] >msculo [0,65
g/g]). La bioacumulacin de metales pesados (Cr,
Ni y Pb) en (g/g) peso hmedo en diversos tejidos
de H. fossilis recogido del sitio experimental se
muestra en la tabla 3.

En H. fossilis, el patrn de acumulacin se

encontr comparable con C. striatus. CR acumulado
ms (branquias [97.75 g/g] >hgado [33.34 g/g]
>rin [27,57 g/g] >msculo [6.85 g/g]) seguido de
Pb [branquias [41,67 g / g] >rin [32.57 g/g]
>hgado [16.75 g/g] >msculo [1.67 g/g]),
mientras que el patrn de bioacumulacin de Ni
branquias (54.19 g/g) >rin (8.89 g/g) >hgado
(7,54 g/g) >msculo (2.9 g/g)]. En ambas especies
de peces, las branquias estaban ms altamente
afectadas y entre los metales pesados, Cr
biacumulado es el ms en todos los tejidos. Adems,
los valores para todos los metales pesados en el
msculo (parte comestible del pescado) eran mucho
mayores que los valores recomendados por la
Agencia de proteccin ambiental Federal (1999)
(notas al pie en las tablas 2 y 3).

BAF

Los metales pesados presentes en el agua y los

valores acumulados en varios tejidos se utilizaron
para calcular BAFs. Los valores BAF para C. striatus
se enumeran en la tabla 4. En C. striatus, el BAF ms
alto se observ en rin (101.18) para Pb. El BAF en
muestras de tejido de H. fossilis se enumera en la
tabla 5. El BAF ms alto se observ en hgado
(109.65) de H. fossilis de Pb.

CF
Longitud, peso (peso hmedo) y CF de C. striatus y
H. fossilis se enumeran en la tabla 6. Los resultados
muestran que el CF para ambas especies fue
significativamente diferente en el sitio bajo estudio
(experimental) en comparacin con su
13
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Table 1 Physicochemical properties and heavy-metal concentrations of the reference and experimental sites
Parameter Minimum Maximum Mean SD (n = 12) Recommended values
(World Health Organization
Ref Exp Ref Exp Ref Exp 1985)

Temperature (C) 21.45 23.8 22.94 24.9 22.64 0.49 24.14

pH 7.32 6.98 7.80 7.78 7.4 0.61 7.88 0.37
0.51
DO (mg/L) 4.94 2.5 6.26 3.80 5.80 0.98 3.40 1.07
Cr (mg/L) 0.29 0.34 BDL 1.51 0.14 0.05
Ni (mg/L) 0.97 1.45 BDL 1.22 0.09 0.07
Pb (mg/L) 0.20 0.28 BDL 0.38 0.07 0.01

Table 2 Bioaccumulation of heavy metals (Cr, Ni, and Pb) Table 4 BAF in C. Tissues Cr Ni Pb
in wet striatus
weight (lg/g) in different tissues of fish C. striatus collected tissue samples collected from
from the
experimental site*
the experimental site Gill 62.79 9.82 84.82
Organs Cr (lg/g) Ni (lg/g) Pb (lg/g)
Liver 8.10 7.44 23.05
Kidney 25.50 7.93 101.18
Gills a94.82 9.05a a1.99 0.58c a32.23 3.64b Muscle 2.01 0.53 7.11
c12.23 3.83 a9.08 2.62 b8.76 f3.26
a a a
Liver
b38.51 5.86 a9.67 3.60 a38.45 6.24
a b a
Kidney
Muscle c3.04 1.74a b0.65 0.21a b2.7 1.08a Table 5 BAF in H. fossilis tissue samples collected from the
Data are shown as yVx SD, and V = mean value of 12 experimental site
replicates. Different superscript alphabets indicate significant Tissues Cr Ni Pb
difference for the

accumulation of different heavy metals within a tissue; different

subscript alphabets indicate significant difference for the Gill 64.74 44.42 109.65
accumula- tion of different heavy metals within a tissue at the
Liver 22.08 6.18 44.08
p \ 0.05 level. Muscle (edible part) had greater accumulation
of heavy metals than the recommended EFPA values Kidney 18.26 7.29 85.71
(1999) for edible fishes, viz., Muscle 4.54 2.43 4.40
Cr = 0.15 lg/g, Ni = 0.5 to 0.6 lg/g, and Pb = 0.3 lg/g

Table 3 Bioaccumulation of heavy metals (Cr, Ni, and Pb) in wet

weight (lg/g) in different tissues of fish H. fossilis collected from Table 6 Length, weight (wet weight), and CF of C. striatus and H.
the experimental site fossilis collected from the reference and experimental sites

Organs Cr (lg/g) (Ni lg/g) (Pb Study sites Total Wet weight (g) CF
lg/g) length
(cm)

Gills a97.75 3.44a a54.19 9.10b a41.67 3.15c

C. striatus 17.27 3.33 79.93 16.33 1.32 0.20
Liver b33.34 3.44a b7.54 1.38c c 16.75 1.93b
(reference)
Kidney c27.57 2.18b b8.89 0.90c b32.57 0.80a 15.91 0.87 34.72 5.09* 0.86 0.07*
C. striatus
d6.85 1.14 b2.97 0.39 d1.67 0.85
a b b
Muscle (experimenta
l) 24.50 0.55 121.80 19.41 0.83
Data are shown as yVx SD; whereas V = mean value of 12
H. fossilis 0.12
rep- licates. Different superscript alphabets indicate significant
difference for the accumulation of different heavy metals (reference)
within a tissue; dif- ferent subscript alphabets indicate 21.77 1.82 58.57 12.40* 0.55
H. fossilis
significant difference for the accumulation of different heavy- 0.11*
(experimenta
metals within a tissue at the p <0.05 l)

level. Muscle (edible part) had greater accumulation of heavy Data are shown as the mean length, weight, and CF of 10 fishes
metals than the recommended EFPA values (1999) for edible for
fishes, viz., Cr = 0.15 lg/g, Ni = 0.5 to 0.6 lg/g, and Pb = 0.3 both fish specie, SD
lg/g * Significant difference from the corresponding reference for
13
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both fish species at the p \ 0.05 level

MNT en la frecuencia de MN (1.889) y anormalidades

nucleares (1.299) en C. striatus. Para H. fossilis,
frecuencia de MN (1.659) y otras anomalas (1.479) se
Frecuencia de MN y otras anormalidades nucleares en
incrementaron en el sitio de Shahjamal en comparacin
referencia y pescados obtenidos del sitio experimental
con el sitio de referencia.
se enumeran en la tabla 7 (Fig. 2). Hubo un aumento
significativo

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Table 7 Frequency of MN and other nuclear abnormalities in reference fish and fish collected from the experimental site
Reference sites MN frequency Induction factor Other abnormalities Induction
factor
C. striatus (reference) 0.25 0.056 4.34 0.135
C. striatus (experimental) 0.47 0.031* 1.88 5.59 0.280* 1.29
H. fossilis (reference) 0.20 0.021 3.71 0.201
H. fossilis (experimental) 0.33 0.025* 1.65 5.46 0.356* 1.47
Data are shown as the mean of MN frequency and other abnormalities of 10 fishes for both fish species SD
* Significant difference from the corresponding reference for both fish species at the p \ 0.05 level

Fig. 2 Representante
de MN y otras
anormalidades
nucleares en los
eritrocitos de un
pescado de referencia
C. striatus, b C.
striatus de sitio
experimental, c H.
fossilis referencia
peces (d) y H. fossilis
recogidos en el sitio
experimental.
Eritrocitos normales
NE, citoplasma
vacuolated VC, brote
nuclear NB, MC
microcyte, MMN
mltiples MN, ncleo
lobulado LN

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Comet Assay

Dao de la DNA en referencia y peces recolectados en

el sitio experimental de cotiza en la tabla 8 como
clulas por ciento con la cola, la cola longitud (pxeles)
y el por ciento de ADN en cola. ADN de longitud y por
ciento de cola en cola mostr un aumento significativo
en el dao del ADN (Fig. 3a, c). Factor de induccin (el
nmero de cuerpos de agua dominado por metales
pesados en dao de la DNA es visualizado por la cola
por ciento ADN) de 1.66 para C. striatus y 1.31 para H.
fossilis. As, C. striatus demostraron un mayor nivel de
dao genotxico (Fig. 3b) con mayor longitud de la
cola media (8,25 pxeles) que hizo H. fossilis (6,33
pxeles) (Fig. 3d). Sin embargo, un mayor nmero de
clulas con cola fue inducido en H. fossilis (1.59) que
en C. striatus (2.079) en comparacin con su pescado
de referencia correspondiente.

Discussion

En este estudio, se encontraron altos niveles de

contaminacin en el embalse de Shahjamal, que
puede ser atribuido al hecho de que fbricas de
cerradura descarga sus residuos directamente en este
cuerpo de agua sin tratamiento adecuado del agua.
Descargan de efluentes de industrias principalmente
metales pesados (Cr, Ni y Pb). Los metales pesados
son la causa principal de contaminacin en cuerpos de
agua debido a su distribucin ubicua y tremendo

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Table 8 DNA damage in Parameter C. striatus C. striatus H. fossilis H. fossilis

reference fish and fish (reference) (experimenta (referenc (experimental)
collected l) e)

from the experimental site

% Cells 60 90 46 95
with tail

Induction factor 1.50 2.07

Mean value and SD obtained
from scoring of 10 fish for both Tail length 5.43 0.75 8.25 0.96* 4.62 0.51 6.33 0.42*
the species (pixels)
* Significant difference from the Induction factor 1.51 1.37
corresponding reference for % Tail DNA 6.89 1.08 11.49 0.88* 5.67 0.63 7.48 0.79*
both fish species at the p \ 0.05 Induction factor 1.66 1.31
level

pero menos acumulados en tejidos como se ha

observado tambin por otros investigadores (Canli et al.
1998; VI-nodhini y Narayan 2008; Eneji et al. 2011;
Javed, 2005). Toxicidad ni es responsable de
reacciones alrgicas de la piel y tiene

Fig. 3 Representative of comet assay in liver cells of a C. striatus

reference fish, b C. striatus collected from the experimental site,
c H. fossilis reference fish, and d H. fossilis collected from the
experi- mental site

potencial de bioacumulacin en biota acutica

(Yohannes et al 2013; Szefer et al. 1990). CR es un
importante component de la industria de la cerradura.
Galjanoplastia de cromo lquido contiene
principalmente cromo hexavalente, que causa la
mayora de los efectos txicos. El cromo hexavalente
es una piel ms potente y penetrante que la forma
trivalente (Wahlberg y Skog 1965). Tal vez debido a
esto, Cr encontraron altas cantidades en el agua del
embalse y en los tejidos de ambas especies de peces.
CR acumulado en los tejidos, y esto se corrobora con
los hallazgos de otros investigadores donde Cr
accumu-calculado en mayores concentraciones
(Ftima y Usmani 2013; Eneji et al. 2011; Taweel et al.
2011). Ni es el segundo metal de heavy ms utilizado
en el bloqueo Polaco-ing por esta industria. Fue
encontrado en concentraciones moderadas en agua

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divulgado para ser una de las causas ms comunes
de toxicidades alrgicas segn lo reflejado por las
pruebas de parche cutneas positivo (Clarkson
1988; Kitaura et al., 2003; Cavani, 2005).
Concentracin de PB fue el ms bajo en el agua del
embalse, pero acumulado en cantidades moderadas,
como tambin ha sido reportado por otros
investigadores (Canli et al. 1998; VI-nodhini y
Narayan 2008; Abdel Baki et al. 2011; Javed, 2005).
Es txico an a bajas concentraciones porque imita
a los elementos esenciales (p. ej., calcio, magnesio,
Pb y Zn) con los consiguientes efectos sobre las
enzimas que contienen grupos SH (Jennette 1981),
mayor incorporacin errneas de nucletidos
(Johnson 1998) y la acumulacin de radicales libres
debido a la alteracin de los procesos oxidativos de
las clulas; efectos tambin mecanismos de
reparacin que Pb se ha implicado como un
cancergeno Co (Fracasso et al. 2002).
La mayora de los estudios realizados sobre la
induccin de metales pesados en peces se han
realizado en un laboratorio (Ferraro et al. 2004; Liney
et al., 2006; Ahmed et al. 2013). Cmo - siempre, hay
algunos estudios donde los peces eran de un
ecosistema natural (Canli et al. 1998; Javed 2005;
Javed y Usmani 2012).
Muchos investigadores han reportado tambin las
concentraciones de metales pesados en un cuerpo
de agua y su concentracin en los tejidos de peces,
pero no estiman la toxicidad de estos metales
pesados por su presencia en la proporcin de tejido
para agua. Peces en agua de reservorio urbano
cargado de metales pesados acumulan estos
metales txicos en diversos tejidos con
biomagnifications de factores ms. Generalmente
otros investigadores se centran en mojado-peso
concentracin de metales pesados-operaciones en
varios tejidos de peces, pero BAF es una forma ms
confiable para estimar la toxicidad causada por
metales pesados. C. striatus y H. fossilis es
disfrutado por la poblacin local. As, cuando se
realiz el BAF, se observ que en ambas especies
de peces, Pb, seguido por Cr y Ni, se acumula ms
en las branquias y rin. Las branquias fueron
afectadas ms; Esto podra ser debido a la
compartimentacin subcelular de txicos y otros
factores que influyen en la absorcin, retencin y
bioacumulacin de metales pesados en tejidos de
peces (lo et al. 2007; Zhao et al. 2012). Este hecho
se corrobora con el hallazgo por Wang y arco iris
(2006) que metal bio-acumulacin en los peces es
controlado por un equilibrio entre

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absorcin y eliminacin y diferencial de Dillon et al. 1998) cuando los peces fueron expuestos a
acumulacin de estos metales en diversos tejidos. metales pesados.
Acumulacin de estos metales pesados plomo a la Disturbios del ncleo que hemos encontrado a travs
fisiologa alterada y puede visualizarse mediante el de MNT, como crnica genotoxicidad, ms fue
uso de un biomarcador de crecimiento, es decir, CF. confirmada por anlisis del cometa, que es el
CF significa la salud general y el crecimiento de los biomarcador ms popular y sensible para la DNA
peces y forma el ndice de salud grave. CF es una strand breaks en fauna acutica (Frenzilli et al. 2009).
herramienta simple y de bajo costo para obtener Ensayo cometa mostr significativamente (p <0.05) un
informacin sobre la capacidad para tolerar por dao mayor en trminos de porciento de las clulas
animales acuticos. Ambas especies de peces en el con la longitud de la cola, cola, y % ADN en cola en
presente estudio demostraron una disminucin ambas especies de peces comparado con peces de
marcada en la FQ con sus referencias respectivas referencia. De ambas especies, C. striatus fue
debido al peaje de metales pesados. Observaciones
similares, es decir, una disminucin en la FQ debido a
la contaminacin del metal en los ecosistemas
naturales muy degradados, se han hecho por Hodson
et al., (1992) en pescado matalote blanco, Betancur et
al (2009) en ocho especies y Omar et al (2012) en
Oreochromis niloticus y Mugil cephalus, este
parmetro puede servir como un biomarcador de
cribado grueso para indicar la exposicin y los efectos
o para proporcionar informacin sobre la energa las
reservas (Mayer et al. 1992).
Channa striatus y H. fossilis es disfrutado por la
poblacin local. Por lo tanto, estas dos especies
fueron elegidas para el estudio de estudios
genotxicos de cuerpos de agua efluente dominado
de Shahjamal. La acumulacin de metales pesados
conduce al deterioro de material gentico y puede ser
visualizada a travs de biomarcadores, es decir, MNT
y ensayo del cometa. Aqu, la exposicin crnica a
metales pesados en cuerpos de agua conducen a
daos nucleares; as, para la confirmacin, fue
realizada el MNT. MNT en eritrocitos es una
herramienta ampliamente utilizada para peces
crnicamente expuestos al metal con diferentes tipos
de contaminantes con propiedades clastognica y
aneugnica (Udroiu 2006). En el presente estudio,
induccin de MN fue significativamente mayor (p <
0.05) en 1.889 y 1.659 en C. striatus y H. fossilis,
respectivamente, en comparacin con peces de ence
se refieren. Frecuencia de MN fue mayor en C. striatus
(0,47 / 1000 eritrocitos) que en H. fossilis
(0.33/1000erthro-cytes). Esto indica que C. striatus es
ms sensible a aguas contaminadas, y esto se
atribuye a los factores como sensibilidad
interespecies, capacidad metablica, la reparacin del
ADN y los mecanismos de defensa (Rodriguez-Cea et
al. 2003). Del mismo modo, altos valores de MN se
han reportado diferentes peces expuestos a aguas
contaminadas (Snchez Galn et al. 2001; Bagdonas
et al., 2003; Betancur et al., 2009; Omar et al. 2012).
Tales inducciones MN marcados tambin han sido
reportados por varios investigadores (Minissi et al.
1996; De Lemos et al. 2001; Betancur et al., 2009;
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encontrado para ser ms sensible a la contaminada filamento de la DNA. Por lo tanto, ambos exmenes
agua embalsada con mayor por ciento promedio del juntos son recomendados estudios genotxicos
ADN (11.49%) que ven en H. fossilis (7,48%). Del entender los mecanismos subyacentes de
mismo modo, otros investigadores han reportado alteraciones genticas. Los efluentes de fbricas de
tambin alta fragmentacin del ADN en las clulas bloqueo deben ser vigilados regularmente, y las
hepticas de natural agua estudios de (Rajaguru et medidas de mitigacin se deben poner para proteger
al. 2003; Liney et al. 2006) y de estudios inducidos el ecosistema y la salud.
(Ahmed et al 2013; Akter et al. 2009). Ensayo cometa
es un biomarcador sensible del dao oxidativo a las Acknowledgments The authors gratefully acknowledges the
chairman, Department of Zoology, AMU, Aligarh, for providing
clulas porque induce cambios en la estructura del facilities for undertaking the studies. The authors are also
tejido y funcin antes que los inducidos por MNT grateful to
(Deventer, 1996). Esta prueba es tambin un
instrumento indirecto para detectar el estrs
oxidativo en los tejidos porque reducibles metales
pesados conducen a la formacin de radicales
hidroxilo, que a su vez conduce a la base de la
alteracin y fractura de espalda y huesos
deoxyribosephosphate. A su vez, se incrementa la
actividad de la GSH, lo que conduce a aumentado
cola ADN porque GSH disminuye ms reducibles
metales pesados para formar radicales libres (Li et
al. 2010). Por lo tanto, el ADN aduccin formacin es
vis ible como formacin de la cometa en las clulas.

Conclusion

El efluente de la fbrica de cerraduras en el

reservorio de Shahjamal tiene el potencial de afectar
adversamente la salud humana mediante el
consumo de pescado contaminado. Los resultados
del presente estudio muestran que los metales
pesados afectan a salud de los peces y que niveles
de residuo de metal tejido exceden los valores
recomendados de agencia de proteccin ambiental
Federal (1999) para pescado comestible. El material
de desecho cargados de metales pesados
contamina primero el cuerpo de agua acutico. Esto
perturba los parmetros fisicoqumicos del agua, as
como la fauna. As, el presente estudio se centr en
diferentes parmetros que correlacionan
sistemticamente el impacto de metales pesados en
la salud de los peces porque peces responden a
agentes txicos presentes en cuerpos de agua
similares a vertebrados mayor y pueden permitir la
evaluacin de sustancias que son potencialmente
peligrosos para los seres humanos.
CF da idea de la condicin de salud grave de
habitante de peces, mientras que fue estudiado dao
genotxico ms confiable mediante el uso de MNT,
que detecta lesiones en clulas que han
experimentado al menos un ciclo mittico y prdida
del cromosoma de las medidas, mientras que el
ensayo cometa detecta lesiones reparables (sitios
lcali lbil) por medicin directa de la rotura del

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the Maulana Azad National Fellowship (GRANT No. F.40-3(M/S)/ 2009(SA-III/MANF), University Grant
Commission, New Delhi, for financial assistance (awarded Senior Research Fellowship).

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