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INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL

Centro Interdisciplinario de Investigacin


para el Desarrollo Integral Regional
Unidad Michoacn

APROVECHAMIENTO DEL BAGAZO DE AGAVE


TEQUILERO EN LA ELABORACIN DE
PRECURSORES DE LA VAINILLINA

TESIS
QUE PARA OBTENER EL GRADO DE MAESTRA EN
CIENCIAS EN PRODUCCIN AGRCOLA SUSTENTABLE

PRESENTA:

IBQ. ANA MARA ESCALERA MARTNEZ

DIRECTORES

DR. JOS LUIS MONTAEZ SOTO (CIIDIR-IPN-MICH)


DR. JOSE VENEGAS GONZLEZ (CIIDIR-IPN-MICH)

JIQUILPAN, MICH., SEPTIEMBRE DE 2015


Este trabajo fue realizado en los laboratorios del Centro Interdisciplinario
de Investigacin para el Desarrollo Integral Regional del Instituto
Politcnico Nacional, Unidad Michoacn, Ubicado en Justo Sierra #28
Colonia Centro. C.P. 59510. Jiquilpan, Mich., Mxico. El proyecto fue
apoyado por la Secretara de Investigacin y Posgrado del Instituto
Politcnico Nacional (SIP: 20141279), y la estudiante recibi apoyo
econmico por el Programa Nacional de Becas del CONACyT (Registro
CVU 503116).
Agradecimientos

Al Consejo Nacional de Ciencia y Tecnologa (CONACYT), por el apoyo econmico


que me brindo para realizar mis estudios de maestra.

Al centro interdisciplinario de investigacin para el desarrollo integral regional (CIIDIR


IPN Unidad Michoacn), por el apoyo brindado, tanto econmico como en la
formacin acadmica as como a todo el personal que de alguna manera me apoy.

Especialmente quiero agradecer a mis directores de tesis: al Dr. Jos Luis Montaez
Soto y al Dr. Jos Venegas Gonzlez, por su gran apoyo para conmigo y mi trabajo,
por sus consejos y su paciencia para la redaccin de esta tesis; los comentarios y
sugerencias que me dieron en el laboratorio y sobre todo por brindarme su amistad.

A los Doctores; Martha Alicia Velzquez machuca y Luis Fernando Ceja Torres por
ser parte de mi comit tutorial, y al Dr. Nahum castellanos por motivarme desde la
licenciatura a seguir estudiando y tambin por apoyar en la revisin de mi tesis.

A todas las personas que conoc en los laboratorios del CIIDIR y con quienes tuve la
oportunidad de convivir especialmente a los tcnicos de laboratorio: Jazmn, Norma y
Hctor que siempre estuvieron para resolver mis dudas.

A mis compaeros y amigos: Janette, Cintya, Emma, Omar, Abraham, Carlos y de


manera muy especial a mi prima Blanca por siempre estar ah para m.

A mis papas y mi familia quienes siempre creyeron en m y me apoyaron en todo


momento.
Dedicatoria

A Dios. Por darme la oportunidad de vivir y permitirme llegar hasta aqu y haberme
dado salud para lograr mis objetivos y por poner en mi camino a aquellas personas
que me han enseado tanto y me han acompaado durante este periodo.

A mis padres Yolanda y Rafael. Por darme la vida, por ser el pilar fundamental en
todo lo que soy, por creer en m y apoyarme en todo momento, por sus consejos, por
la motivacin constante que me ha permitido llegar a donde estoy, por su ejemplo de
vida y los valores inculcados que me han motivado a ser una persona de bien, pero
ms que nada, por su amor.

A mi hermano Jos y a su familia. Por siempre estar conmigo, apoyarme y


motivarme pero sobre todo por hacerme sonrer cuando ms lo necesite.

A mi familia. Tos y primos, por siempre estar al pendiente de m y apoyarme en las


decisiones que he tomado a lo largo de mi vida.

A mi novio Francisco. Quien me apoyo y alent para continuar, cuando pareca que
me iba a rendir.

A mis maestros y amigos. Mis sinodales por su apoyo y motivacin para la


culminacin de este proyecto. Mis compaeros que nos apoyamos mutuamente en
nuestra formacin profesional y que hasta ahora, seguimos siendo amigo.

Y a todos aquellos que participaron directa o indirectamente en la elaboracin de


esta tesis.
Gracias!
INDICE

CONTENIDO Pgina

RESUMEN 1
ABSTRACT 3

CAPITULO I. INTRODUCCIN 5

CAPITULO II. ANTECEDENTES 8


II.1 El agave tequilero 13
II.2 La industria tequilera 15
II.3 El bagazo del agave tequilero 17
II.3.1 Usos del bagazo de agave etquilero 19
II.3.2 La lignina 22
II.4 La vainilla 24
II.4.1 Especificaciones del producto y normas de calidad 30
II.4.2 Demanda de vainilla 32
II.5 Compuestos fenlicos 34
II.6 JUSTIFICACIN 37
II.7 PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA 37
II.8 HIPTESIS 37
II.9 OBJETIVOS 38
II.9.1 Objetivo general 38
II.9.2 Objetivos especficos 38

CAPITULO III. MATERIALES Y MTODOS 39


III.1 Estrategia experimental 40
III.2 Recoleccin y acondicionamiento de la materia prima 41
III.3 Anlisis qumico porcentual del bagazo de agave 42
III.4 Determinacin de pH 42
III.5 Determinacin de carbono orgnico total y relacin C/N 43
III.6 Determinacin de celulosa, hemicelulosa y lignina cido
detergente. 43
III.7 Determinacin de lignina 44
III.8 Hidrlisis cida del bagazo de agave tequilero 44
III.9 Caracterizacin de lignina por espectrofotometra de infrarrojo 45
III.10 Hidrlisis alcalina de la lignina 46
III.11 Cuantificacin de compuestos fenlicos 49
III.12 Evaluacin de la actividad antioxidante de los extractos 50
III.13 Identificacin y cuantificacin de compuestos fenlicos por ESI-
MS-TOF. 52
III.14 Anlisis estadstico. 58
CAPITULO IV. RESULTADOS Y DISCUSIN 58
IV.1 Anlisis qumico porcentual del bagazo de agave tequilero 60
IV.2 Hidrolisis cida del bagazo de agave 62
IV.3 Caracterizacin cualitativa de lignina por espectrofotometra de
infrarrojo 62
IV.4 Hidrlisis alcalina de la lignina 64
IV.5 Cuantificacin de compuestos fenlicos 64
IV.6 Evaluacin de la actividad antioxidante 67
IV.7 Identificacin y cuantificacin de compuestos fenlicos por ESI-
MS-TOF 75

CAPITULO V. CONCLUSIONES 81

CAPITULO VI. BIBLIOGRAFIA 83

CAPITULO VII. ANEXOS 93


NDICE DE TABLAS

Tabla N Ttulo de la tabla Pgina


1 Principales usos de importancia socioeconmica y 9
agroecolgica del agave
2 Usos del agave, productos y parte de la planta empleada 10
3 Caractersticas qumicas del bagazo de agave tequilero 18
4 Especificaciones organolpticas del fruto de vainilla de 31
Papantla beneficiada
5 Especificaciones fisicoqumicas del fruto de la vainilla de 31
Papantla beneficiada
6 Especificaciones microbiolgicas para la vainilla de 32
Papantla beneficiada.
7 Condiciones de hidrlisis de la lignina obtenida del bagazo 48
de agave
8 Anlisis qumico porcentual del bagazo de agave tequilero 60
9 Contenido de fenoles totales en los hidrolizados de lignina 66
10 Actividad antioxidante en los hidrolizados de lignina 71
11 Compuestos fenlicos encontrados en los hidrolizados de 77
lignina
NDICE DE FIGURAS

Figura Ttulo de la figura Pgina


N
1 Usos del agave en la alimentacin 11
2 Artculos obtenidos a partir de las fibras de agave 12
3 Productos obtenidos a partir de la cabeza o pia del agave 13
4 Planta completa de Agave tequilala Weber azul. (A): cabeza o 14
pia (B)l
5 Estados y municipios de la repblica mexicana que constituyen 16
la zona de denominacin de origen del tequila
6 Consumo de pias de agave tequilero de 2006 a 2011 17
7 Bagazo del agave tequilero 18
8 Produccin de bagazo de agave tequilero de 2006 al 2012 19
9 Elaboracin de compost y conglomerados a partir de bagazo 20
de agave tequilero
10 Estructura qumica de la lignina 22
11 Planta de vainilla (Vainilla planifolia) 25
12 Estructura qumica de la vainillina 26
13 Vainas de vainilla beneficiada 27
14 Produccin nacional de vainilla beneficiada de 1992 al 2011 28
15 Principales pases productores de vainilla de 1992 a 2011 29
16 Estructura qumica del eugenol y guayacol 33
17 Caa de azcar (A) y planta de guadua (B) 33
18 Estructura qumica del cido ferlico 34
19 cidos hidrixicinmicos de mayor recurrencia en la naturaleza. 35
20 Diagrama de flujo, metodologa. 40
21 Acondicionamiento del bagazo de agave tequilero 41
22 Diagrama de flujo del proceso de hidrlisis cida del bagazo 45
de agave
23 Hidrlisis alcalina de la lignina obtenida del bagazo de agave 47
24 Componentes bsicos de un espectrmetro de masas 53
25 Esquema de un sistema de ionizacin por electrospray (ESI) 55
26 Espectro de FT-IR de la lignina 63
27 Curva tipo de cido glico 65
28 Disminucin de la absorbancia del -caroteno con las 67
muestras de lignina hidrolizadas con NaOH 1N
29 Disminucin de la absorbancia del -caroteno con las 68
muestras de lignina hidrolizadas con NaOH 2N
30 Disminucin de la absorbancia del -caroteno con las 68

muestras de lignina hidrolizadas con NaOH 3N


31 Correlacin entre el contenido de fenoles totales y la actividad 74

antioxidante de los hidrolizados de lignina


32 Perfil de elusin de la muestra 1-80-30 94
33 Perfil de elusin de la muestra 1-80-60 94
34 Perfil de elusin de la muestra 1-80-90 95
35 Perfil de elusin de la muestra 1-100-30 95
36 Perfil de elusin de la muestra 1-100-60 95
37 Perfil de elusin de la muestra 1-100-90 96
38 Perfil de elusin de la muestra 1-120-30 97
39 Perfil de elusin de la muestra 1-120-60 97
40 Perfil de elusin de la muestra 1-120-90 98
41 Perfil de elusin de la muestra 2-80-30 98
42 Perfil de elusin de la muestra 2-80-60 99
43 Perfil de elusin de la muestra 2-80-90 99
44 Perfil de elusin de la muestra 2-100-30 100
45 Perfil de elusin de la muestra 2-100-60 100
46 Perfil de elusin de la muestra 2-100-90 101
47 Perfil de elusin de la muestra 2-120-30 101
48 Perfil de elusin de los estndares p-carboxifenol (m/z=137), 102

cido p-cumrico (m/z=163), cido cafeico (m/z=179) y cido


ferlico (m/z=193).
RESUMEN

La vainilla es considerada como el saborizante de mayor importancia a nivel mundial,


debido a que es ampliamente utilizada en diversas industrias que van desde la
alimentaria, pasando por la licorera, refresquera, farmacutica, cosmtica y
tabacalera. El extracto natural de vainilla contiene una gran cantidad de compuestos
que le confieren su aroma y sabor caractersticos. EL componente mayoritario y
principal responsable de las propiedades de la vainilla es la vainillina (4-hidrxi-3-
metoxibenzaldehdo).

El alto precio del extracto natural de vainilla hace prohibitivo su aplicacin en la


elaboracin de una gran variedad de productos; es por ello que, dado el gran
potencial de mercado, la escasez del extracto natural de vainilla, su alto costo y la
simplicidad qumica de su principal ingrediente activo, existe un creciente inters por
la preparacin sinttica de este compuesto. Una de estas alternativas consiste en la
obtencin industrial de vainillina a partir del cido ferlico, compuesto qumico que se
encuentra asociado a la lignina, un constituyente natural de la madera, as como de
muchos residuos agroindustriales, entre ellos, el bagazo de agave tequilero.

La cabeza o pia del agave tequilero (Agave tequilana Wever azul) constituye la
materia prima en el proceso de elaboracin de tequila. Su demanda actual oscila
alrededor de un milln doscientas mil toneladas anuales y en su procesamiento, se
genera un promedio de 200,000 toneladas anuales de bagazo, el cual no es
aprovechado actualmente y se est convirtiendo en un problema tanto para el medio
ambiente, como para los productores tequileros que an no han encontrado una
alternativa econmicamente viable para el aprovechamiento de este residuo
agroindustrial.

Este trabajo trata sobre la obtencin de compuestos fenlicos tales como el cido
ferlico, cafeico, p-cumrico, y p-carboxifenol, mediante la hidrlisis alcalina de la
lignina extrada a partir del bagazo de agave tequilero; compuestos que, dadas sus
propiedades funcionales, son ampliamente demandados por la industrias alimentaria,
farmacutica y de cosmticos.

1
Se aplic un diseo factorial completo 33 con tres repeticiones, para investigar
simultneamente los efectos de las variables: concentracin de NaOH (1,0, 2 y 3 N),
temperatura (80, 100 y 120 C), y tiempo de reaccin (30, 60 y 90 min), en la
hidrlisis alcalina de la lignina extrada a partir del bagazo de agave tequilero, a fin de
determinar las condiciones ptimas para la liberacin de compuestos fenlicos. Los
ensayos se realizaron utilizando una relacin slidos/ solucin alcalina de 1/20 (w /
w).

Las mejores condiciones de hidrlisis alcalinas de la lignina extrada del agave


tequilero se obtuvieron cuando la hidrlisis se llev a cabo con NaOH 1N, a una
temperatura de 120C y por un tiempo de 30 minutos. El contenido de compuestos
fenlicos en el licor obtenido bajo estas condiciones de hidrlisis fue de 4448 55
mg/100g de lignina de los cuales, 1527, 918, 1226, y 778 mg corresponden a los
cidos ferlico, cafeico, p-cumrico y p-carboxifenol, respectivamente. El rendimiento
del proceso expresado como los gramos del compuesto por cada 100 gramos de
bagazo de agave tequilero fueron: 0.0034, 0.0020, 0.0027 y 0.0017 % en base seca,
para cada uno de los compuestos fenlicos mencionados, respectivamente.
Tambin en este hidrolizado se obtuvo la mxima actividad antioxidante que fue de
84.09 2.5%. Se tuvo una alta correlacin (R 2 = 0.93) entre el contenido de
compuestos fenlicos y el porciento de actividad antioxidante.

En las muestras de lignina tratadas en condiciones de hidrlisis ms drsticas, es


decir, aquellas muestras hidrolizadas a concentraciones de NaOH mayores o iguales
de 2N, el contenido de compuestos fenlicos disminuy y desaparece a partir de la
muestra 2-120-30 en adelante; es decir, cuando la hidrlisis de la lignina se realiza
con NaOH 2N a una temperatura de 120C y durante un tiempo de reaccin de 30
minutos.

Debido a su constante y abundante disponibilidad, su relativo bajo precio y su alto


contenido de lignina, el bagazo de agave tequilero puede emplearse en la produccin
de diversos compuestos fenlicos como el cido ferlico, cuyas propiedades
qumicas y funcionales, lo convierten en un precursor para la bio-produccin de
vainillina, uno de los sabores y aromas ms gustados hoy en da, y considerado

2
como el saborizante de mayor importancia a nivel mundial, por lo que es
ampliamente utilizado en diversas y variadas industrias

ABSTRACT

The vanilla flavoring is considered the most important in the world, because it is
widely used in various industries ranging from food, to the liquor, soft drink,
pharmaceutical, cosmetics and tobacco. Natural vanilla extract contains a lot of
compounds that give it its characteristic aroma and flavor. The major component and
primarily responsible for the properties of the vanilla is "vanillin (4-hydroxy-3-
methoxybenzaldehyde).

The high price of natural vanilla extract prohibits their use in the manufacture of a
variety of products; that is why, given the huge market potential, scarcity of the
natural vanilla extract, its high cost and chemical simplicity of its main active
ingredient, there is growing interest in the synthetic preparation of this compound.
One such alternative is the industrial preparation of vanillin from ferulic acid, chemical
compound that is associated to lignin, a natural constituent of wood and many agro
industrial waste, including bagasse agave plant.

The agave head (Agave tequilana Wever blue) is the raw material in the process of
making tequila. Your current demand hovers around one million two hundred
thousand tons and in its processing, an average of 200,000 tons of bagasse are
generated annually, which is not currently exploited and is becoming a problem for
the environment and for the tequila producers, who have not yet found an
economically viable alternative to the use of this agro industrial residue.

This paper deals with the production of phenolic compounds such as ferulic acid,
caffeic, p-coumaric and p-carboxifenol, by alkaline hydrolysis of lignin extracted from
agave tequila bagasse; compounds that given their functional properties, are widely
demanded by the food, pharmaceutical and cosmetics industries.

A full factorial design 33 with three replicates was used to simultaneously investigate
the effects of the variables: NaOH concentration (1.0, 2 and 3 N), temperature (80,

3
100 and 120 C) and reaction time (30, 60 and 90 min), in the alkaline hydrolysis of
the lignin extracted from agave bagasse, with the object to determine the optimal
conditions for the release of phenolic. Assays were performed using a solids - alkaline
solution ratio of 1/20 (w / w).

The best conditions for the alkaline hydrolysis of the agave's lignin were when the
hydrolysis is carried out with 1N NaOH, at a temperature of 120 C and for a time of
30 minutes. The content of phenolic compounds in the liquor obtained under these
conditions hydrolysis was 4448 55 mg / 100 g of lignin, which correspond to 1527,
918, 1226 and 778 mg of ferulic acid, caffeic acid, p-coumaric acid and p -
carboxifenol acid, respectively. The process yields, expressed as grams of compound
per 100 grams of agave plant bagasse were: 0.0034, 0.0020, 0.0027 and 0.0017% on
a dry basis for each of the phenolic aforementioned, respectively. In this hydrolysate it
was registered the higher antioxidant activity (84.09 2.5%) too. A high correlation
(R2 = 0.93) between phenolic content and antioxidant activity percent was observed
too.

In the Lignin samples treated under more drastic hydrolysis conditions, that is, those
samples hydrolyzed at NaOH concentrations greater or equal than 2N, the phenolic
content decreased and disappeared from the sample 2-120-30 hereinafter; that is,
when the lignin hydrolysis was carried out with NaOH 2N and at temperature of
120C and for a reaction time of 30 minutes.

Due to its constant and abundant availability, its high lignin content and its relatively
low price, the agave tequilero bagasse can be used in the production of various
phenolic compounds such as ferulic acid, whose chemical and functional properties
make it in a precursor for the bio-production of vanillin, one of the flavors and aromas
most liked today, and considered the most important flavoring worldwide, so it is
widely used in many and varied industries

4
I

INTRODUCCIN

5
Los agaves son plantas suculentas que pertenecen a la familia Agavaceae. La
palabra agave proviene de un vocablo griego que significa noble, ilustre,
admirable. Se tiene la certeza de que el origen del agave es Mxico debido a que es
aqu donde se encuentra la mayor diversidad de agavceas; pues de las 273
especies que se distribuyen en el continente americano, 205 se encuentran
representadas en nuestro pas. Los agaves guardan una relacin milenaria con la
historia de Mxico, su domesticacin se llev a cabo hace 3,500 aos
aproximadamente, y su cultivo contribuy al desarrollo de la agricultura de los
amerindios.

Antes de que el maz se convirtiera en un cultivo bsico, los agaves fueron las
principales fuentes de carbohidratos para las poblaciones indgenas de lo que hoy es
el oeste de Mxico y el sureste de los Estados Unidos de Amrica (Zizumbo 2008).
Las plantas completas de agave eran empleadas para delimitar terrenos, como
barreras de proteccin y para evitar la erosin del suelo. Las espinas se usaban
como agujas, puntas de flechas, punzones y clavos. La cabeza o pia se utilizaba
como alimento y para la elaboracin de bebidas. El aguamiel era utilizado como
endulzante en la preparacin de alimentos y en la elaboracin de pulque. El quiote se
utilizaba como viga en la construccin de viviendas, las cuales cubran con pencas
verdes a manera de tejas. Las pencas se utilizaban para la obtencin de fibras con
las cuales elaboraban diversos artculos como hilos, cuerdas, morrales, hamacas,
redes para pescar, prendas de vestir y trampas para cazar. Las pencas asadas se
aplicaban en la piel para curar heridas y lavar mordeduras de vboras, puestas en el
vientre servan para purificar los riones y la vejiga; adems, las pencas secas se
usaban como combustible y sus cenizas como jabn o detergente.

Las bebidas que se extraen del agave desde la poca del pueblo mexica hasta hoy
en da son el aguamiel, el pulque, mezcales y tequila, este ltimo se obtiene del
Agave tequilana Weber, variedad azul, originario del estado de Jalisco. En Mxico, la
produccin de tequila ha aumentado y con ello la problemtica de los residuos que
se generan en el proceso de elaboracin de esta bebida (Ramrez et al, 2012). Se

6
estima que la industria tequilera genera 0.8 kg de bagazo de agave tequilero por
cada litro de tequila elaborado, por lo que en la ltima dcada, la generacin de estos
residuos slidos arroja cifras superiores a las 200,000 toneladas al ao (CRT, 2013).

En los ltimos aos, la acumulacin de bagazo de agave ha generado un problema


para la industria tequilera, que buscando deshacerse de l, tiende a regalarlo o
venderlo a bajo costo. Inicialmente el bagazo de agave tequilero era incinerado o
enterrado, y entre sus incipientes aplicaciones destacan su utilizacin en la
fabricacin de ladrillos para la construccin de viviendas y para la fabricacin de
colchones. Debido a que estas alternativas de aprovechamiento del bagazo de agave
tequilero resultan insuficientes para dar solucin a los problemas que causa la
generacin de las grandes cantidades de estos residuos slidos, en las nuevas
alternativas para el aprovechamiento del bagazo del agave tequilero se debe tomar
en cuenta que este residuo slido est compuesto de material lignocelulsico,
azcares y otros compuestos que, dadas sus caractersticas fisicoqumica, pueden
ser utilizados para la elaboracin de diversos productos de inters econmico
(Iiguez et al, 2007)

La lignina es uno de los principales constituyentes del bagazo de agave tequilero y,


es un compuesto que realiza mltiples funciones que son esenciales para la vida de
las plantas. Dadas sus caractersticas fsicas, qumicas y funcionales, la lignina
tambin presenta propiedades muy variadas que permiten un apreciable nmero de
transformaciones qumicas, como en el campo de la qumica los alimentos para la
obtencin de manera sinttica, de uno de los saborizantes y aromatizantes ms
demandados por la industria de alimentos, farmacutica y de cosmticos que es: la
vainillina (Martnez et al, 2011).

7
II
ANTECEDENTES

8
II. ANTECEDENTES
De la gran variedad de plantas de Mxico que benefician al ser humano, el agave o
maguey ha sido una de las ms aprovechadas, tanto en la antigua Mesoamrica
como en la actualidad. La palabra agave proviene de un vocablo griego que
significa noble, ilustre, admirable. Los agaves guardan una relacin milenaria con la
historia de Mxico, su domesticacin se llev a cabo hace 3,500 aos, y su cultivo
contribuy al desarrollo de la agricultura de los amerindios. Antes de que el maz se
convirtiera en un cultivo bsico, los agaves fueron las principales fuentes de
carbohidratos para las poblaciones indgenas de lo que hoy es el oeste de Mxico y
el sureste de los Estados Unidos de Amrica (Zizumbo 2008), debido a que esta
planta le proporciona al hombre casa, vestido, sustento y salud, (Tablas 1 y 2) por
esto el maguey ha sido calificado como excepcional (Oliver 1955).

Tabla 1. Principales usos de importancia socioeconmica y agroecolgica del agave

USOS PRODUCTO PARTE DE LA PLANTA


Azcar Tallo (pia)
Guisos Flores y frutos
Dulce Escapo floral
Envolver barbacoa Hojas
Alimentacin Mixiotes Holas
Gusanos blancos Cutcula del cogollo
Gusanos rojos Hojas
Pan de pulque Tallo (pia)
Tortillas Tallo (pia) como lea

Aguamiel, miel, atole de aguamiel,


Bebida pulque, mezcal, tequila, sotol, Tallo (pia)
bacanora vinagre, jarabe

Cerca viva Planta completa


Agrcola Evitar la erosin como formadora de Planta completa y
suelo, abono orgnico composta de hojas

Forraje Bovinos, caprinos, porcinos Tallo o pia, flores y parte


de la inflorescencia,
bagazo
Fuente: Centro de Propagacin de Agave del Estado de Guanajuato. Citado por:
Garcia- Herrera, et. al; 2010

9
Tabla 2. Usos del agave, productos y parte de la planta empleada.

USOS PRODUCTO PARTE DE LA PLANTA


Cercas, casas (jacales), corrales, Escalpo floral (quiote)
Construccin tejas, canales para colectar agua de hojas, residuos de fibra
lluvia, materiales compuestos: resinas,
termoplsticas o termfilas + fibra

Cordelera, jarcera, cestera (lazos,


Fibras ropa domestica), escobetillas y cepillos Fibras de hojas, races
para limpieza con jabn incluido,
estropajos, tejido y vestuario.

Cura golpes y lesiones internas, falta


Medicinal de movimiento en miembros, Mieles, pulque
prevencin del escorbuto, sana
heridas (antiinflamatorio), cura anemia

Ornamental Adornos corporales (aretes, collares), Semillas, planta completa,


arcos florales, en jardines. fibras de las hojas.

Jabones, shampoo, palillos para la Hijuelos, tallos, races,


Domstico extraccin de gusanos comestibles, espina terminal de las
agujas e hilo para coser. hojas y fibra de las hojas.

Industria qumica, farmacutica,


medicamentos y productos esteroides Hojas, races, tallos,
Otros usos (saponinas), productos de celulosa semillas, bagazo y jugo
para papel, produccin de etanol,
celulosa y glucsidos
Fuente: Centro de Propagacin de Agave del Estado de Guanajuato. Citado por:
Garcia et. al.; 2010

La palabra maguey tiene origen tano en nhuatl es metl, nombre vinculado con la
voz mayauetl o mayahuel, divinidad femenina asociada con la planta y con la
embriaguez (Montemayor; 2005), pertenece a la familia de las agavceas, que se
agrupan en el orden Asparagales. El gnero Agave lo constituyen 197 taxas: 136
especies, 26 subespecies, 29 variedades y 7 formas (Rulfo 2007), es una planta de
gran importancia desde el punto de vista agroecolgico y socio ecolgico, por los
tantos usos que tiene dependiendo de la regin donde se ubique, que van desde su
empleo como lea hasta ornamental (Garca-Herrera et al; 2010). Su origen se

10
remonta a la poca prehispnica, cuando los pueblos indgenas del centro y norte del
pas encontraron en esta planta una fuente de materia prima para elaborar una gran
cantidad de productos (Garca-Herrera et al; 2010), considerando a Mxico como
centro de origen y de diversidad de los agaves (Figuras 1-2).

Figura 1. Usos del agave en la alimentacin

El maguey sorprendi a los primeros espaoles que llegaron a los territorios de


Nueva Espaa. El jesuita Joseph de Acosta en 1590 public la Historia Moral y
Natural de las Indias: el maguey es un rbol que en la Nueva Espaa estiman
mucho los indios, y de ordinario tienen en su habitacin alguno o algunos de este
gnero para ayudar a su vida, y en los campos se da y lo cultivan. Tiene unas hojas
anchas y groseras, y el cabo de ellas es una punta aguda y recia, que sirve para
prender o asir como alfileres, o para coser, y sta es la aguja, sacan de la hoja cierta
hebra e hilo. El tronco, que es grueso, cuando est tierno le cortan y queda una
concavidad grande, donde sube la sustancia de la raz, y es un licor que se bebe

11
como agua, y es fresco y dulce; este mismo, cocido, se hace como vino, y dejndolo
acedar se vuelve vinagre; y apurndolo ms al fuego es como miel; y a medio cocer,
sirve de arrope, y es de buen sabor y sano; y a mi parecer es mejor que arrope de
uvas. As van cociendo estas otras diferencias de aquel jugo o licor, el cual se da en
mucha cuantidad, porque por algn tiempo cada da sacan algunas azumbres de
ello (Montemayor 2005).

Figura 2. Artculos obtenidos a partir de las fibras del agave

Las bebidas que se extraen del agave desde la poca del pueblo mexica hasta hoy
en da son el aguamiel y el pulque elaborado a partir de la fermentacin de este. El
pulque es una bebida alcohlica de importancia prehispnica que era utilizada como
bebida ritual y alimenticia, el consumo de ella estaba restringido para mujeres
embarazadas, ancianos y condenados a muerte, siendo que su consumo no estaba
permitido ni siquiera para el gobernante o los nobles que lo rodeaban (Saldvar-E. y
Vargas-Rodrguez; 2007). Con la conquista y la colonizacin europea los derivados
del maguey tuvieron un incremento (Olvera-Vega; 1995), el pulque dej de ser una
bebida ritual recibiendo un impulso para venderlo. Los europeos a su vez iniciaron la
destilacin de otros agaves con los que elaboraron aguardientes denominados

12
mezcales o tequilas, siendo estos los principales productos derivados de esta planta
que se producen en la actualidad (Figura 3).

Figura 3. Productos obtenidos a partir de la cabeza o pia del agave

II.1 Agave Tequilero

El agave tequilero forma parte de la familia Agavaceae, la cual es endmica de


Amrica y se distribuye desde el sur de Canad, Mxico, Centroamrica, norte de
Sudamrica e islas del Caribe. Se tiene la certeza de que el origen del agave es
Mxico debido a que es aqu donde se encuentra la mayor riqueza y diversidad de
agavceas; pues de las 273 especies que se distribuyen en el continente americano,
205 se encuentran representadas en nuestro pas (Gentry, 1982).
El agave tequilero pertenece al reino Plantae, divisin Antophyta, clase
Angiospermas, subclase Monocotiledoneas, orden Liliales, famlia Agavaceae,
genero Agave, subgenero Agave, grupo Rigidae, especie tequilana Weber, variedad

13
azul; de aqu que su nombre botnico sea Agave tequilana Weber azul (Nobel,
(1988). La planta del Agave tequilana Weber azul se extiende radialmente de 1.5 a
2.0 metros de altura, y de 1.7 a 2.5 m de dimetro. La parte area de la planta est
integrada por dos fracciones: hojas y tallo (Figura 4).

A B

Figura 4. Planta completa de Agave tequilana Weber azul (A), cabeza o pia (B)

El tallo y las bases de las hojas que lo conforman, constituyen la seccin conocida
con el nombre de cabeza o pia; es grueso, corto, alcanza de 50 a 80 cm de altura al
madurar, presenta un alto contenido de fructanos y constituye la materia prima para
la produccin de tequila. El tamao de sus hojas oscila entre los 90 y 120
centmetros, son de fibras firmes, casi siempre rgidamente estiradas, cncavas de
ascendentes a horizontales (Valenzuela, 1997; Iiguez, 2001).

La planta del Agave tequilana Weber azul requiere de 7 a 10 aos para su


crecimiento y desarrollo, sus ciclos de cultivo se ven afectados por las condiciones
ambientales, manejo y diferencias genticas de las plantaciones. Se desarrolla en

14
sitios sin cambios bruscos de temperatura, con una temperatura media de 20C. Las
lluvias deben ser de aproximadamente un metro anual, con nublados de 65 a 100
das por ao. La falta de agua provoca que la planta tarde ms tiempo en madurar y,
por el contrario, el exceso de lluvia reduce el contenido de azcares. La altitud media
es cercana a los 1500 msnm; con variaciones que van de los 700 hasta los 2900
msnm. Los mejores suelos son los arcillosos, permeables, abundantes en elementos
derivados del basalto, ricos en fierro (Valenzuela, 1997).

Dependiendo de las condiciones del terreno, el cultivo del agave se establece con
densidades de poblacin que van de las 3000 a las 4000 plantas por hectrea, lo
cual repercute en el desarrollo de la planta individual y en el rendimiento agrcola del
cultivo. El agave llega a su madurez en el mejor de los casos a los 7 aos despus
de su plantacin, aunque puede tardar hasta 10 aos. Durante la maduracin se
concentran en la cabeza de la planta reservas de humedad y azcares que estn
destinadas a la floracin. A la cosecha del agave se le conoce como jima, y consiste
en cortar la planta desde su base y eliminar sus hojas para dar forma a un cuerpo
ovoide conocido como cabeza o pia. El peso promedio de las cabezas del agave
oscila entre los 30 y los 70 kg., aunque se han obtenido cultivos de agave cuyas
cabezas han llegado a pesar entre los 80 y 120 kg., y dentro de estos, cabezas de
hasta 150 kg. Durante la dcada pasada, el rendimiento agrcola del cultivo del
agave oscil entre 103 y 153 ton/ha, con un rendimiento medio de 124 ton/ha
(Valenzuela, 1997).

II.2 La industria tequilera

Una de las industrias ms importantes de Mxico lo constituye la industria del tequila.


La produccin y comercializacin de este producto, tanto en el mercado nacional
como en el internacional, se ha expandido notablemente, sobre todo entre el periodo
de vigencia del Tratado de Libre Comercio de Amrica Del Norte (Macas-Macas
2013), y mientras el tequila permanezca en el gusto de los consumidores nacionales
y extranjeros, el cultivo del Agave tequilana Weber azul seguir expandindose en la

15
Zona comprendida dentro de la Denominacin de Origen del Tequila (Gerritsen et al;
2011). Dicha Zona est integrada por 181 municipios que comprenden
aproximadamente el 6% del territorio nacional, y que se encuentran distribuidos de la
siguiente forma: 124 municipios del Estado de Jalisco, 30 municipios del Estado de
Michoacn, 8 municipios del Estado de Nayarit, 7 municipios del Estado de
Guanajuato y 11 municipios del Estado de Tamaulipas (Figura 5).

Figura 5. Estados y municipios de la Repblica Mexicana que constituyen la Zona de


Denominacin de Origen del Tequila (http://www.ggintcom.be/).

De acuerdo a la informacin que maneja el Consejo Regulador del Tequila (CRT,


2013), el consumo promedio de pias de Agave tequilana Weber azul para la
produccin de tequila, en el periodo comprendido entre los aos 2006 al 2012, fue de

16
970,000 toneladas anuales, con un mximo de 1,120,000 toneladas de pias de
agave que se consumieron en el ao 2008 (Figura 6).

Figura 6. Consumo de pias de agave tequilero del 2006 al 2012.

II.3 Bagazo de Agave tequilero

El bagazo de agave tequilero (Figura 7), constituye el residuo fibroso que queda
despus de que las cabezas de agave han sido cocidas, destrozadas, enjuagadas y
exprimidas para extraerle los azucares fermentables para la produccin del tequila.
En peso hmedo el bagazo representa cerca del 40% del peso total de la cabeza de
agave procesada (Cedeo, 1995). El bagazo est compuesto principalmente de
fibras heterogneas de 10 a 12 cm de largo y material orgnico no fibroso en forma
de partculas finas (mdulas) que corresponden a la corteza y envoltura fibrovascular
dispersa en el interior de la cabeza de la planta de agave (Iiguez et al, 2007). Se
estima que la industria tequilera genera 0.8 kg de bagazo de agave tequilero por
cada litro de tequila elaborado, por lo que en la ltima dcada, se ha generado un

17
promedio de 200,000 toneladas anuales de este residuo agroindustrial. Entre las
caractersticas qumicas ms sobresalientes del bagazo del agave tequilero se
encuentra su alto contenido de material celulsico y hemicelulsico, cuyo promedio
es del 45.6%, as como su alto contenido de lignina, cuyo contenido promedio es de
18.1%, aproximadamente (Tabla 3) (Flores, 2009; Ramrez, 2012).

Figura 7. Bagazo de agave tequilero

Tabla 3. Caractersticas qumicas del bagazo de agave tequilero.

Parmetro Iiguez (2006) Flores (2009) Ramrez (2012)


Celulosa (%) 41.9 14.26 42
Lignina (%) 7.20 33.13 14
Hemicelulosa (%) 12.10 7.94 18.5
Nitrgeno total (5) 0.53 0.27 2.6
Pectinas (%) - - 0.8
Grasas (%) - - 0.8
Azcares reductores (%) - - 5
Cenizas (%) 8.80 3.10 6.2

18
II.3.1 Usos del bagazo del agave tequilero

Pese a la gran cantidad de bagazo que anualmente se produce (Figura 8) (CRT,


2013), aun no se han desarrollado estrategias suficientes para llevar a cabo el buen
aprovechamiento este residuo. Se considera que el bagazo de agave debera tener
un uso y aplicacin en base a estudios alternativos, ya que su disposicin se est
volviendo un problema ambiental y econmico.

Figura 8. Produccin de bagazo de agave tequilero del 2006 al 2012.

En los ltimos aos se han presentado algunas estrategias para el aprovechamiento


del bagazo del agave, entre ellas destaca la elaboracin de papel hecho a mano
(Parra et al., 2010), en el que se aplic un tratamiento fermentativo-qumico-
mecnico para aumentar la flexibilidad de las fibras del bagazo, ablandar la lignina y
promover su separacin, con lo cual se pudo realizar un entrelazamiento de los micro

19
enlaces fibrilares de la pulpa del bagazo, con los de la pulpa del papel bond reciclado
y obteniendo as un papel de buena textura y apariencia.
En la implementacin del bagazo composteado como sustrato agrcola (Figura 8), se
demostr que este tiene un gran potencial para ser utilizado como sustrato
alternativo (Rodrguez, et. al; 2010), as como tambin su uso en mezclas bioslidos-
bagazo de agave durante el compostaje se obtuvo un producto con caractersticas
similares a una composta de follaje de pinos y encinos (iguez et. al; 2006).

Figura 9. Elaboracin de compost y conglomerados a partir del bagazo de agave

Otra alternativa para el aprovechamiento de este residuo consiste en emplearlo como


reforzamiento de polipropileno virgen o reciclado. En esta investigacin se determin
que el uso de fibra de agave como agente reforzante de polipropileno virgen y
reciclado permiti una recuperacin significativa de resistencia al impacto una vez
reforzado el material (Sanjuan-Raygoza y Jasso-Gastinel; 2009).

Ramrez Cortina et al (2012), propusieron el uso de bagazo de agave como


complemento de alimento para rumiantes, previo a un tratamiento alcalino con
hidrxido de calcio, lo cual di un aumento en la digestibilidad del bagazo de agave
muy cercana a la de la alfalfa (60%), alimento muy utilizado en la alimentacin de los

20
animales rumiantes, lo cual nos indica que este residuo agroindustrial tratado con
hidrxido de calcio pude ser utilizado en la fabricacin de raciones alimenticias para
los animales rumiantes.

A pesar de que han surgido algunas alternativas para el aprovechamiento de este


material, el bagazo de agave ha sido usado generalmente como combustible para
calderas y relleno de muebles y colchones (Escoto et al; 2006), o es depositado en
lugares especficos sin ningn tratamiento ni valorizacin (Rodrguez, et al; 2010).

Sin embargo, como se puede observar en la tabla 3, el bagazo est compuesto de


material lignocelulsico, azcares y otros compuestos, algunos de los cuales, y
dadas sus caractersticas fisicoqumica, pueden ser utilizados para la elaboracin de
diversos productos de inters econmico (Ramrez, 2012). Entre los principales
constituyentes del bagazo del agave se encuentra la lignina, la cual, dada su
multifuncionalidad qumica, presenta propiedades muy variadas que permiten un
apreciable nmero de transformaciones qumicas, como en el campo de la qumica
de los polmeros para obtener resinas fenol-formaldehido-lignina, o en el campo de la
qumica de los alimentos, para la obtencin de manera sinttica, de uno de los
saborizantes y aromatizantes ms demandados por la industria de alimentos,
farmacutica y de cosmticos que es: la vainillina (Martnez, et al., 2011).

El uso de materiales lignocelulsicos como materia prima para la obtencin de


vainillina y sus precursores es un proceso que a la industria del papel le ha dado muy
buenos resultados debido a sus bajos costo y gran rendimiento con respecto a la que
se obtiene de forma natural a partir de las vainas de la orqudea de vainillina que no
tiene gran rendimiento y es ms costoso. Tambin se han hecho investigaciones
para obtener vainillina de otras fuentes de materiales lignocelulsicos, tal es el caso
del uso de la guadua Angustifolia Kunt, donde los anlisis fisicoqumicos mostraron
que la vainillina obtenida por hidrlisis alcalina, es altamente pura, as como tambin
se obtuvo un rendimiento aceptable de la produccin que fue por mtodos bsicos de
degradacin y recuperacin (Martnez et al., 2011).

21
II.3.2 La lignina
La lignina es un polmero presente en las paredes celulares de organismos del reino
Plantae y tambin en las Dinophytas del reino Chromalveolata. La palabra lignina
proviene del trmino latino lignum, que significa madera. La lignina est formada por
la extraccin irreversible del agua de los azcares, creando compuestos aromticos.
Los polmeros de lignina son estructuras transconectadas con un peso molecular de
10,000 uma. Se caracteriza por ser un complejo aromtico (no carbohidrato) del que
existen muchos polmeros estructurales (ligninas) (Figura 10).

Figura 10. Estructura qumica de la lignina

22
Despus de los polisacridos, la lignina es el polmero orgnico ms abundante en el
mundo vegetal. Es importante destacar que la lignina es la nica fibra no polisacrido
que se conoce. Este componente de la madera realiza mltiples funciones que son
esenciales para la vida de las plantas. Por ejemplo, proporciona rigidez y da
resistencia a la pared celular contra el ataque de microorganismos, impidiendo la
penetracin de las enzimas destructivas en la pared celular, la molcula de lignina
presenta un elevado peso molecular, que resulta de la unin de varios cidos y
alcoholes fenilproplicos (cumarlico, coniferlico y sinaplico) (Tainz et al., 2006). El
acoplamiento aleatorio de estos radicales da origen a una estructura tridimensional,
polmero amorfo, caracterstico de la lignina. La lignina es el polmero natural ms
complejo en relacin a su estructura y heterogeneidad. Por esta razn no es posible
describir una estructura definida de la lignina; sin embargo, se han propuesto
numerosos modelos que representan su estructura (Tainz et al., 2006).

La lignina es un componente que integra las paredes celulares secundarias de las


plantas, donde esta reemplaza el agua y evita completamente un mayor crecimiento.
Se compone principalmente de cidos fenlicos unidos a otros componentes de la
pared celular vegetal, a travs de enlaces tipo ster, ter, o acetal (Robbins, 2003).
Los principales compuestos fenlicos identificados en ambas paredes celulares
primarias y secundarias de las plantas son los cidos cinmicos tales como el cido
ferlico (cido 4-hidroxi-3-metoxicinmico) y cido p-cumrico (4- hidroxicinmico
cido) (Pan et al., 1998). Estos cidos cinmicos actan en el entrecruzamiento de
las paredes celulares de las plantas y son precursores de una variedad de
compuestos que juegan un papel importante en las respuestas de defensa de las
plantas (Bunzel et al., (2001).

El cido ferlico y el cido p-cumrico son muy abundantes, en conjunto representan


hasta el 1.5% en peso de las paredes celulares de los cereales (Gasson et al., 1998).
Se considera que los cidos p-cumrico y ferlico son bifuncionales, debido a que
son capaces de formar enlaces ster o ter mediante la reaccin de sus grupos

23
carboxilo o fenlicos, respectivamente. El primero se asocia principalmente con
lignina y el segundo se esterifica con la hemicelulosa principalmente. La unin entre
el cido ferlico y la lignina an no es bien entendida, depende en gran medida de la
materia prima y los resultados se ven influenciados por los mtodos de
fraccionamiento empleados (Jefries, 1994).

II.4 La vainilla

La vainilla es uno de los sabores y aromas ms reconocidos por muchos y hoy en da


es considerada como el saborizante de mayor importancia en el mbito mundial,
debido a que es ampliamente utilizada en diversas y variadas industrias, que van
desde la alimentaria (helados, chocolates, caramelos dulces, productos de
panadera), pasando por la licorera, refresquera, farmacutica, cosmtica,
tabacalera, hasta llegar incluso, a la industria artesanal (Ordoez, et. al., 2012). El
extracto natural de vainilla se obtiene a partir del fruto con forma de vaina de tres
especies de orqudea, V. pompona, V. tahitensi y Vanilla planifolia; siendo esta ultima
la principal (Figura 11) (Maguelonne, 2002).

24
Figura 11. Planta de vainilla (Vanilla planifolia).

La vainilla planifolia es originaria de Mxico y era usada en ceremonias religiosas


por el pueblo Totonaca, quienes la consideraban sagrada. Aos ms tarde (1427-
1440) fue conocida tambin por los aztecas, quienes le dieron el nombre de tlil-
xochitl, que en nhuatl significa flor negra, y la usaban como saborizante para la
elaboracin de un brebaje conocido como chocolate. Luego de la conquista, ambos
productos seran llevados a Europa por los espaoles, extendindose su uso por
todo el mundo. Mxico continu siendo el principal productor de vainilla de la mejor
calidad hasta mediados del siglo XIX, tiempo en el cual su cultivo se extendi a los
trpicos de otros pases y en la actualidad Madagascar es el productor ms
importante (Damiron, 2004; Asaff, 2012).

25
El extracto natural de vainilla contiene una gran cantidad de compuestos que le
confieren su aroma y sabor caractersticos. En 1858, se aisl por primera vez el
componente mayoritario (>98%) y principal responsable de sus propiedades, el cual
fue denominado como vainillina (4-hidrxi-3-metoxibenzaldehdo) (Figura 12) (Asaff,
2012). La vainillina (4-hidroxi-3-metoxibenzaldehdo) es el componente principal de la
vainilla natural, es uno de los aromatizantes ms ampliamente utilizados en todo el
mundo. Al igual que muchos otros compuestos fenlicos de bajo peso molecular, la
vainillina muestra propiedades antioxidantes (Salazar, et.al., 2008).

Figura 12. Estructura qumica de la Vainillina (4-hidrxi-3-metoxibenzaldehdo).

Un kilogramo de vainilla est integrado por aproximadamente 50 frutos de vainilla


verde recin cortada y, para obtener un kilogramo de vainilla seca beneficiada, se
requieren 5 kilogramos de vainilla verde (Snchez, 1993). La vainilla beneficiada se
presenta en forma de palos brillantes de color caf obscuro, comnmente llamados
"vainas" de vainilla (Figura 13).

26
Figura 13. Vainas de vainilla beneficiada

Se tienen antecedentes de que en nuestro pas (principalmente en los estados de


Veracruz, Puebla y Oaxaca) se han registrado grandes producciones de vainilla. En
1807 se cosecharon 1,500 millares de frutos equivalentes a una produccin de
30,000 kg de vainilla verde aproximadamente, o a 6000 kg de vainilla beneficiada
(Chvez y Florescano 1988).

La produccin de vainilla beneficiada en el periodo comprendido entre 1936 a 1941


fue de 176 toneladas anuales en promedio, cuyo destino principal era el mercado
americano. Pea (1981) menciona que en 1941, la produccin nacional de vainilla
beneficiada fue de 282 toneladas, y de 227 toneladas en 1944. Para finales de la
dcada de los 50, el precio de la vainilla comenz a bajar de manera importante, lo
que propici el abandono y la cada en su produccin. En 1945 la produccin de
vainilla cayo drsticamente a 83 toneladas, alcanzando su punto ms bajo en 1962
con tan solo 39 toneladas (Hernndez 1997). De 1992 a la fecha, se presenta una
tendencia errtica en la produccin de vainilla en nuestro pas (Figura 14), con una
produccin media anual de 341.85 toneladas/ao (Maguelonne, 2002).

27
Figura 14.- Produccin nacional de vainilla beneficiada de 1992 al 2011

Por ms de dos siglos, Mxico, Costa Rica y Honduras (pases de donde es


originaria la vainilla), fueron los nicos proveedores de esta orqudea para el resto
del mundo; pero, como ha sucedi con otros productos, el gran productor de vainilla
no es aqul de donde es originario el saborizante; sino que la mayor parte de la
produccin proviene de otros pases, los cuales recibieron el producto aos despus
de que fue descubierto. Se estima que la produccin mundial anual de vainilla pas
de 3,984 a 7,500 toneladas en el periodo comprendido del ao 2000 al 2011.
Actualmente los principales pases productores de vainilla son por orden de
importancia: Indonesia, Madagascar, China, Mxico y Comoras los cuales producen
cerca del 94% de la vainilla del mundo (Figura 15). La vainilla mexicana en las
condiciones actuales no puede competir en volumen y costos de produccin con los
cultivos de otros pases como Madagascar, Indonesia, China. Mxico solo coopera
con cerca del 6% de la produccin Mundial y solo se comercializan pequeas
cantidades de esta produccin (FAOSTAT 2012)

28
Figura 15. Principales pases productores de vainilla de 1992 al 2011.

A pesar de que la vainilla es un producto que tiene una gran importancia dentro de
algunas industrias, an no tiene el peso especfico para que pueda existir un
seguimiento de las cotizaciones de esta especie en los mercados en el mbito
mundial. As, dado que Estados Unidos es el principal importador mundial de
vainillina, con el fin de observar cul ha sido el comportamiento de los precios de la
vainilla en el mercado estadounidense, se analiza el precio que este pas ha pagado
por la compra del producto en el pas productor. Este precio refleja el costo del
producto puesto en la frontera del pas exportador. No incluye los costos de traslado
al pas comprador, ni los costos de internacin a la zona de consumo. As, en el caso
de la vainilla procedente de Madagascar, el precio promedio pagado fue de 37.28
dlares por kilogramo. Es importante sealar que se trata de vainilla en bruto, sin
ningn tipo de industrializacin posterior. En el caso de Indonesia el precio pagado
fue 26.47 dlares por kilogramo, la vainilla de Comoras fue pagada a razn de 51.5

29
dlares por kilogramo, y la vainilla mexicana fue pagada a razn de 56.73 dlares por
kilogramo.
El comercio de la vainilla se compone de una serie de precios que representa a los
diversos agentes que participan en ella y as como los mrgenes de ganancia que se
pueden obtener durante todo el proceso de produccin y transformacin de la
vainilla. La vainilla mexicana durante el periodo de 1993-2000, registr en trminos
nominales una tendencia al crecimiento; ya que pas de una cotizacin de
$24,844/ton a $56,734/ton, esto significa que un lapso de 7 aos el precio se duplic.
Se observ a la vez una tasa de crecimiento del orden de 10.87%.

El ao que mostr una cada en el precio fue 1996, donde el precio alcanz un total
de $ 18,438/ton, lo que represent una disminucin de 17% con respecto al precio
del ao anterior (SAGARPA.2007). Este alto precio se debe a que el cultivo de
vainilla, es un cultivo muy delicado que requiere condiciones climticas especiales
para su desarrollo, tambin cuando ocurre la floracin, la polinizacin debe ser hecha
a mano ya que no hay suficientes insectos polinizadores; adems, las vainas
recolectadas de la vainilla se someten a un largo proceso de tratamiento con agua
caliente, fermentacin, secado y maduracin. Finalmente se extrae la vainillina
(principal sustancia responsable del aroma), que se encuentra en una proporcin de
12% del peso de las vainas. El resultado final es un producto que puede variar en
calidad y caractersticas aromticas, segn la variedad de planta utilizada y segn las
condiciones del proceso de extraccin (Duran, 2002).

II.4.1 Especificacin del producto y normas de calidad

La clasificacin de la vainilla se efecta de acuerdo a dos criterios: largo de la vaina y


contenido de vainillina, en otros casos, como en Mxico, hay otras formas de
clasificacin donde se considera la flexibilidad, brillo, aroma y color de la vaina
(Augstburger, et.al. 2000).

30
De acuerdo a la Norma Oficial Mexicana PROY-NOM-182-SCFI-2010, estos son
algunos de los parmetros de calidad que debe cumplir la vainilla mexicana (Tablas
4-6).

Tabla 4.- Especificaciones organolpticas del fruto de vainilla de Papantla


beneficiada.
Parmetro Especificacin
Vaina entera, sin cortes ni rajadas, libre de dao por plagas,
Apariencia exenta de pudricin, se permite hasta cuatro callos superficiales
de hasta 3 mm cada uno, o rea equivalente
Caf oscuro. Se permiten filamentos rojizos a caf oscuro (esta
Color especificacin se mide conforme a lo establecido en el Apndice
Informativo C de la NMX-FF-074-2009)
Caracterstico de la vainilla de Papantla, exento de olores
Aroma extraos (Esta especificacin se mide conforme a lo establecido
en laNMX-F-473-SCFI-2006)
Flexibilidad Sin quiebre al enrollar la vaina

Tabla 5.- Especificaciones fisicoqumicas del fruto de la vainilla de Papantla


beneficiada.

Parmetros Especificaciones Mtodos de ensayo


Longitud > 15 cm NMX-FF-067-1988
Fsicas Humedad 25-38 % NMX-FF-074-SCFI-2009
Vainillina 2,0 %bs NMX-FF-074-SCFI-2009
Qumicas cido hidroxibenzoico 58-100 ppm NMX-FF-074-SCFI-2009
cido vainillnico 411-861 ppm NMX-FF-074-SCFI-2009
Hidroxibenzaldehdo 219-498 ppm NMX-FF-074-SCFI-2009

31
Tabla 6.- Especificaciones microbiolgicas para la vainilla de Papantla beneficiada

Parmetro Especificaciones Mtodo de ensayo


Bacterias mesfilas aerobias 100 UFC/g mximo NOM-092-SSA1-1994
Mohos y levaduras 10 UFC/g mximo NOM-111-SSA1-1994
Coliformes totales Negativo NOM-113 SSA1-1994
Salmonella Negativo en 25 g NOM-115-SSA1-1994

II.4.2 Demanda de vainilla

Se debe considerar que la produccin de vainilla es insuficiente para cubrir la gran


demanda mundial de este ingrediente. La cada vez mayor utilizacin de la vainilla
como aromatizante y saborizante en la elaboracin de una gran variedad de
alimentos, bebidas, productos farmacuticos y cosmticos, ha ocasionado un
constante incremento en la demanda de este producto. La demanda mundial de
vainilla pas de las 9,562 toneladas en el ao 2000, a las 20,714 toneladas para el
ao 2011, lo que implica una tasa media de crecimiento anual en la demanda del
7.28%. Se estima que aproximadamente el 90% del consumo mundial de este
saborizante y aromatizante es cubierto con vainillina sinttica (Prez; 2009).

El alto precio del extracto natural de vainilla encarece su aplicacin en la elaboracin


de una gran variedad de productos; es por ello que, dado el gran potencial de
mercado, a la escasez del extracto natural de vainilla, as como a su alto costo y a la
simplicidad qumica del principal ingrediente activo (4-hidrxi-3-metoxibenzaldehdo)
del extracto de vainilla, existe un creciente inters por la preparacin sinttica de este
compuesto. Su preparacin comercial empez a realizarse a finales del siglo XIX a
partir de un compuesto natural conocido como eugenol (Figura 16), el cual era
extrado a partir del clavo de olor. Ms recientemente, la vainillina sinttica fue
producida a partir de guayacol (Figura 16), proveniente de la industria petroqumica o

32
a partir de la lignina, un constituyente natural de la madera, la cual es un subproducto
de la industria del papel (Prez, 2009).

Figura 16. Estructura qumica del eugenol y del guayacol.

Tambin se han investigado otras fuentes de lignina para la sntesis de la vainillina,


como el uso de bagazo de caa de azcar en 1990 y ms recientemente en 2011
donde se obtuvo vainillina a partir de la lignina de la guadua (Figura 17), en ambos
casos se llev a cabo la hidrolisis alcalina de la lignina para la obtencin de los
precursores de vainillina (Deseano, et.al; 1990, Martnez, et. al; 2011).

A B
Figura 17. Caa de azcar (A) y plantas de guadua (B)

33
Desde la dcada de los noventa, se han venido estudiando alternativas menos
riesgosas y econmicamente competitivas para la produccin de vainillina. A partir
del ao 2000, la empresa Rhodia inici la venta de vainillina producida por la accin
de microorganismos capaces de transformar el cido ferlico extrado (Figura 18) de
la cascarilla de arroz en vainillina (Prez, 2009).

Figura 18. Estructura qumica del cido ferlico

II.5 Compuestos fenlicos

Los compuestos fenlicos son sustancias que poseen un anillo aromtico unido a
uno o ms grupos hidroxilo, incluyendo derivados funcionales (steres, glucsidos.).
Los fenoles son metabolitos secundarios de las plantas que les confieren cualidades
deseables como indeseables, tienen un papel importante en el color, en las
cualidades sensoriales y nutricias as como en las propiedades antioxidantes de los
alimentos, y no estn presentes en alimentos provenientes de animales (Escobar,
2012). Los cidos hidroxicinmicos son componentes importantes de paredes
celulares de las plantas en determinados alimentos vegetales cuyos principales
representantes son el cido ferlico, p-cumrico, cafico y sinpico, (Ferguson, et.al.,
2005) (Figura 19).

El cido ferlico es un compuesto ampliamente distribuido en la naturaleza,


constituye la pared celular de varias especies de plantas como el arroz, el maz, la
remolacha azucarera, la caa de azcar, entre muchas otras. Para obtener esta
sustancia en forma pura, los residuos agrcolas o subproductos de estos cultivos,
como sus salvados (cascarillas) o bagazos, deben ser tratados qumica o

34
enzimticamente para luego recuperar y purificar el cido ferlico liberado (Mussatto,
et al.; 2007). Algunos de estos desechos agroindustriales de los que se ha realizado
la liberacin de cido ferlico son: el bagazo cervecero, desechos de la industria
vincola y mazorcas de maz, los cuales fueron tratados mediante hidrlisis acida
seguida de una hidrlisis alcalina con el fin de que la extraccin de cido ferlico
fuera optima, y otra ventaja del uso de estos desechos es que son relativamente
baratos (Mussatto, et al.; 2007, Torre, et. al; 2008 y Max, et. al; 2009).

Figura 19.- cidos hidroxicinmicos de mayor recurrencia en la naturaleza

El cido ferlico es considerado uno de los cidos fenlicos ms importantes, ha sido


propuesto para el tratamiento potencial de muchos trastornos: Alzheimer, cncer,
enfermedades cardiovasculares y la diabetes mellitus (Mancuso, 2014). Tambin
presenta muchas funciones fisiolgicas, incluyendo anti-oxidante, anti-microbianas,
anti-inflamatorios y anti trombosis, as como protege contra la enfermedad coronaria,
disminuye el colesterol en el suero y el hgado, y aumenta la viabilidad de los
espermatozoides (Ou y Kwok, 2004). Este acido junto con el cido p-cumrico son de
gran inters debido a su actividad quimioprotectora y sus propiedades antioxidantes.
Adems, ambos cidos son precursores potenciales en la produccin biocataltica de
productos naturales aromticos de valor aadido (Mussatto, 2006).

35
Debido al bajo coste y gran disponibilidad, algunos materiales lignocelulsicos tales
como madera de eucalipto, salvado de cebada, olotes, hojas de maz y fibra de
avena han sido evaluadas como fuentes alternativas para la obtencin de cidos
fenlicos (Mussatto; et.al., 2006)

Cierto tipo de hongos y bacterias, miembros de la familia de los actinomicetos,


convierten el cido ferlico en vainillina y otros productos, como parte de un
mecanismo de destoxificacin. Gracias a esta cualidad, dichos microorganismos son
utilizados en diferentes procesos biotecnolgicos para la produccin del saborizante
vainillina (Civolani, et. al., 2000; Labuda, 2010).

36
II.6 JUSTIFICACIN

Es necesario desarrollar alternativas para el aprovechamiento de los grandes


volmenes de bagazo de Agave tequilana Weber azul que genera la industria
tequilera nacional, a fin de dar un valor agregado a los mismos, disminuir su impacto
sobre el medio ambiente, y obtener un insumo ampliamente demandado por la
industria alimentaria.

II.7 PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

La gran cantidad de bagazo que produce la industria tequilera se est volviendo un


problema tanto para el medio ambiente como para los productores tequileros que
an no han encontrado una alternativa econmicamente viable para aprovechar este
desecho, ya que generalmente este es depositado en lugares especficos sin ningn
tratamiento ni valorizacin (Rodrguez, et al; 2010) o es utilizado como combustible
para calderas y relleno de muebles y colchones (Escoto et al; 2006).

El bagazo est compuesto de material lignocelulsico, azcares y otros compuestos


que por sus caractersticas fsico-qumicas puede ser utilizado para la elaboracin de
diversos productos de inters econmico, en este proyecto se propone el
aprovechamiento del bagazo del Agave tequilana Weber azul, en la produccin del
cido ferlico, un precursor clave en la sntesis de la vainillina, saborizante y
aromatizante ms ampliamente demandado a nivel mundial, tanto por la industria
alimentaria, farmacutica, cosmtica y tabacalera; entre otras.

II.8 HIPTESIS

Es posible obtener cido ferlico, compuesto fenlico precursor en la sntesis de


vainillina, mediante el proceso de hidrlisis alcalina de la lignina contenida en el
bagazo de agave tequilero.

37
II.9 OBJETIVOS

II.9.1 OBJETIVO GENERAL

Obtener cido ferlico por va qumica, a partir de la lignina presente en el bagazo del
Agave tequilana Weber azul, que genera la industria tequilera nacional durante el
proceso de elaboracin de tequila.

II.9.2 OBJETIVOS ESPECFICOS

Determinar la composicin qumica del bagazo de agave tequilero.


Extraer la lignina presente en el bagazo del agave tequilero.
Determinar las condiciones ptimas de hidrlisis alcalina de la lignina
(concentracin de NaOH, temperatura, tiempo de reaccin).
Identificar y cuantificar por HPLC, los cidos fenlicos generados durante el
proceso de hidrlisis alcalina del bagazo del agave tequilero.
Determinar el rendimiento del proceso.

38
III
MATERIALES
Y
MTODOS

39
III.1 Estrategia experimental
En el desarrollo del presente trabajo de investigacin se aplic la siguiente estrategia
experimental (Figura 20).

Figura 20. Diagrama de flujo, metodologa.

40
III.2 Recoleccin y acondicionamiento de la materia prima

El bagazo de agave fue proporcionado por la Compaa Destiladora de Jamay S.A.


de C.V., ubicada en la carretera Jamay - La Barca, km 3.2, Jamay, Jalisco Mxico. El
acondicionamiento del bagazo de agave tequilero se llev a cabo de acuerdo a la
metodologa propuesta por Mussatto et al., (2007) (Figura 21), y consisti en lo
siguiente. Inicialmente el bagazo fue lavado con agua hasta adquirir un pH neutro,
con objeto de eliminar algunos residuos del proceso como son azcares remanentes.
Una vez lavado el bagazo fue esparcido uniformemente en charolas que se
introdujeron en un secador mltiple de tiro forzado (Mapisa Internacional S.A. de
C.V., Mxico) y el proceso de secado se llev a cabo a una temperatura de 50 1
C, hasta un contenido mximo de humedad de 10%. Una vez seco, el bagazo fue
molido y tamizado a travs de una malla N 200 para tener un tamao de partcula
uniforme. Finalmente el polvo obtenido fue envasado en un recipiente hermtico,
debidamente identificado y almacenado en un lugar fresco y seco, hasta su posterior
procesamiento.

Figura 21. Acondicionamiento del bagazo de agave tequilero

41
III.3 Anlisis qumico porcentual del bagazo de agave

La composicin qumica porcentual del bagazo de agave se llev a cabo mediante la


aplicacin de los respectivos Mtodos Oficiales de Anlisis (AOAC, 1997); para
humedad (925,10), cenizas (923,03), protenas (920,87) y grasas (920,39). El
contenido de fibra cruda se determin por digestin cida-alcalina (Tejeda, 1992) y el
de carbohidratos totales se obtuvo por complemento a 100%.

El contenido de humedad en el bagazo de agave tequilero fue determinado


gravimtricamente, comprende la prdida de peso que se presenta al someter 1 g de
muestra a un proceso de secado en estufa a una temperatura de 105C y durante 24
horas. El peso de la muestra seca comprenden los slidos totales, mientras que la
prdida de peso corresponde al contenido de humedad en la muestra. Para
determinar el contenido de cenizas, la misma muestra ya seca fue colocada en
crisoles que se sometieron directamente a la flama del mechero hasta la completa
combustin de la muestra, posteriormente los crisoles fueron colocados en una mufla
a una temperatura de 550C durante 4 horas. La prdida de peso fue considerada
como el contenido de materia orgnica en la muestra y el peso residual correspondi
a su contenido de cenizas; ambos se expresan en %.

El contenido de nitrgeno total fue determinado por el mtodo de micro Kjeldahl


(AOAC, 1997), y un factor de conversin de 5.75 fue utilizado para estimar el
contenido proteico en el bagazo del agave tequilero. El contenido de grasas en las
muestras de bagazo de agave tequilero previamente secas, fue determinado por el
mtodo de Soxhlet (AOAC, 1997), empleando ter de petrleo como solvente.

III.4 Determinacin de pH

El pH del bagazo de agave tequilero fue determinado de acuerdo al mtodo de


CWMI (1976). Para ello, inicialmente se licuaron durante 3 minutos, 10g de bagazo
en 50 mL de agua destilada (relacin 1:5 peso/ volumen). La mezcla licuada fue

42
filtrada a travs de manta de algodn, y el pH del extracto fue determinado con un
potencimetro HANNA modelo HI-2211.

III.5 Determinacin de Carbono Orgnico Total (COT) y relacin C:N

El carbono orgnico total (COT) se obtuvo aplicando la siguiente ecuacin (Ec. 1)


(Golueke, 1977):
%COT = (100 - cenizas)/1.8 (1)

La relacin C:N fue calculada en base al carbono orgnico total, y el anlisis del
contenido de nitrgeno total determinado por el mtodo de Kjeldahl (AOAC, 1997).

III.6 Determinacin de celulosa, hemicelulosa y lignina cido


detergente.

Las determinaciones de celulosa (Cel) y hemicelulosa (Hcel) se llevaron a cabo a


travs de los anlisis de fibra detergente neutra (FDN), fibra detergente cida (FDA)
y lignina cido detergente (LAD), de acuerdo a la metodologa propuesta por Goering
y Van Soest (1970).

El contenido de hemicelulosa se obtuvo como la diferencia entre el contenido de fibra


detergente neutra y la fibra detergente cida (Ec. 2).
(Hcel = FDN FDA) (2)

El contenido de celulosa se obtuvo como la diferencia entre el contenido de lignina


cido detergente y el contenido de fibra detergente cida (Ec. 3).
Cel = FDA LAD (3)

43
III.7 Determinacin de lignina

El contenido de lignina en el bagazo del agave tequilero se determin por el mtodo


de Max (2009); el cual consiste en lo siguiente: En un tubo de ensaye se coloca 1 g
de bagazo de agave seco y se adicionan 5 mL de solucin de cido sulfrico al 72%.
Los tubos se colocan en bao mara a 30C y se mantienen en agitacin constante
durante una hora. Pasado ese tiempo, las muestras se diluyen con agua destilada,
hasta una concentracin del cido del 3%. Las muestras se vierten en frascos de
vidrio con tapa y se colocan en autoclave a 120 C durante una hora. Pasado ese
tiempo los frascos se dejan en reposo durante la noche, a fin de enfriar las muestras.
Finalmente las muestras son filtradas al vaco y el residuo obtenido es secado en una
estufa a 60C hasta peso constante. El contenido de lignina presente en la muestra
corresponde al peso final del residuo slido. Cada una de las determinaciones
mencionadas anteriormente se hicieron por triplicado y el valor reportado
corresponde al promedio de las tres determinaciones la desviacin estndar de la
serie.

III.8 Hidrlisis cida del bagazo de agave tequilero.

Con objeto de solubilizar y eliminar la fraccin de hemicelulosa presente en los


residuos del bagazo de agave, y de esta forma, incrementar la porosidad del material
y facilitar as la difusin y el contacto del hidrxido de potasio durante la hidrlisis
alcalina de la lignina, la cual se realiz en la siguiente etapa del proceso, se llev a
cabo la hidrlisis previa del bagazo de agave con H2SO4 concentrado, de acuerdo a
la metodologa implementada por Mussato y Roberto (2005) y que consiste en lo
siguiente (Figura 22).

44
Figura 22. Diagrama de flujo del proceso de hidrlisis cida del bagazo de agave

La pre- hidrlisis de las muestras se llev a cabo mediante el empleo de una solucin
de H2SO4 al 73%, a una relacin de 5 mL de sta solucin por gramo de muestra
seca. La hidrlisis de las muestras se llev a cabo a una temperatura de 120C
durante 17 min. Al trmino de la reaccin, el lquido sobrenadante fue decantado y
los residuos slidos fueron separados por filtracin al vaco. La pasta obtenida fue
posteriormente lavada con agua destilada hasta obtener un pH neutro. Las pastas
obtenidas de color caf obscuro fueron colocadas en un horno y secadas a 50 1C,
hasta llegar a un contenido mximo de humedad del 50%.

III.9 Caracterizacin de lignina por espectrofotometra de infrarrojo

La espectrofotometra de infrarrojo es una de las tcnicas pticas ms utilizadas en


el anlisis de estructuras moleculares, as como en la identificacin qumica de
compuestos desconocidos, debido principalmente a que el anlisis no altera o
destruye la muestra y por otro lado, es un mtodo simple, sencillo y muy rpido de
llevarse a cabo (consume de 2 a 3 minutos). El anlisis FT-IR encuentra aplicaciones

45
en investigacin, la industria, el control de calidad, el medio ambiente, el rea de
alimentos, el rea de materiales y en anlisis forenses (Olsen, 1990).

El anlisis por espectrofotometra de infrarrojo se fundamenta en las vibraciones


moleculares y rotatorias que son generadas como consecuencia de la absorcin de
radiacin electromagntica en el espectro infrarrojo, en el que las molculas
experimentan un cambio en su momento dipolar, originndose vibraciones de
tensin, flexin y rotacin de los grupos funcionales que integran la molcula (Olsen,
1990).

La caracterizacin cualitativa de la lignina obtenida a partir del bagazo de agave


tequilero se llev a cabo por espectrofotometra de infrarrojo, empleando para ello un
espectrofotmetro de infrarrojo FT-IR Perkin Elmer Spectrum Modelo RX-1, equipado
con una celda de Selenuro de Zinc. Los espectros FT-IR fueron tomados dentro de
un intervalo de longitudes de onda de 4000 a 400 cm-1, ajustando a 100% de
transmitancia al inicio del anlisis. El espectro FT-IR de la lignina obtenida a partir del
bagazo de agave tequilero se compar con el espectro de FT-IR que aparece en la
biblioteca FT-IR Perkin Elmer Spectrum (Moffat, 2011), a fin de corroborar que lo que
se obtiene despus la hidrlisis cida del bagazo del agave tequilero, es la esperada
lignina, material de partida para la obtencin de los precursores de vainillina.

III.10 Hidrlisis alcalina de la lignina

La hidrlisis alcalina de la lignina contenida en el bagazo de agave previamente


hidrolizado con cido sulfrico concentrado, se llev a cabo de acuerdo al mtodo de
Mussatto (2007). La concentracin de hidrxido de sodio, la temperatura y el tiempo
de reaccin, fueron las variables independientes que se adaptaran a un diseo
factorial completo 33. Las concentraciones de NaOH fueron: 1.0, 2.0 y 3.0 Normal, las
temperaturas variaron de 80, 100 y 120 C, y la hidrlisis se llev a cabo a tiempos
de reaccin de 30, 60, y 90 minutos. De esta forma se obtuvo un total de 27

46
diferentes condiciones de hidrlisis de las muestras (Tabla 7). La relacin utilizada
de hidrxido de sodio-lignina de agave fue de 1:20 (p/p). Para el calentamiento de las
muestras a 80 y 100C se utiliz una plancha de calentamiento y agitacin LabTech
modelo 1003 (Proveedor de laboratorio S.A. de C.V., Mxico), y para alcanzar
temperaturas de 120 C se utiliz una autoclave convencional de laboratorio marca
All American, modelo 1925-X de 25 L de capacidad (Proveedor de laboratorio S.A. de
C.V., Mxico). Transcurrido el tiempo de hidrlisis, los diferentes tratamientos fueron
enfriados inmediatamente en un bao de hielo y la mezcla fue filtrada mediante el
uso de una bomba de vaco y papel filtro Whatman N41. Los licores resultantes
fueron colocados en frascos de vidrio mbar (Figura 23) y analizados por HPLC para
determinar las concentraciones de compuestos fenlicos presentes en cada muestra.

Figura 23. Hidrlisis alcalina de la lignina obtenida del bagazo de agave

47
Tabla 7. Condiciones de hidrlisis de la lignina obtenida del bagazo de agave

Nmero Condiciones de Hidrlisis


de Muestra NaOH (N) Temperatura (C) Tiempo (min)
1 1.0 80 30
2 1.0 80 60
3 1.0 80 90
4 1.0 100 30
5 1.0 100 60
6 1.0 100 90
7 1.0 120 30
8 1.0 120 60
9 1.0 120 90
10 2.0 80 30
11 2.0 80 60
12 2.0 80 90
13 2.0 100 30
14 2.0 100 60
15 2.0 100 90
16 2.0 120 30
17 2.0 120 60
18 2.0 120 90
19 3.0 80 30
20 3.0 80 60
21 3.0 80 90
22 3.0 100 30
23 3.0 100 60
24 3.0 100 90
25 3.0 120 30
26 3.0 120 60
27 3.0 120 90

48
III.11 Cuantificacin de compuestos fenlicos

La cuantificacin de los compuestos fenlicos presentes en cada una de las


muestras integradas por residuos de bagazo de agave, y sometidas a hidrlisis
alcalina con NaOH, se llev a cabo por el mtodo de Folin-Ciocalteu. El reactivo
Folin-Ciocalteu es una mezcla de fosfomolibdato y fosfotungstato, usado para la
determinacin de antioxidantes fenlicos y polifenlicos. Funciona midiendo la
cantidad de sustancia analizada que se necesita para inhibir la oxidacin del reactivo.
Es una estimacin colorimtrica basada en la medicin del color azul formado por la
reduccin del cido fosfotungstomolibdico por los compuestos fenlicos en solucin
alcalina (Li et al, 2006 y Escobar Blanco., 2012).

Para llevar a cabo esta determinacin, fue necesario realizar un acondicionamiento


previo de las muestras. Para esto se tomaron 5 ml de cada una, se neutralizaron con
cido clorhdrico, una vez neutralizadas se le adiciono a cada una 5 ml de ter
anhidro, se agito por un minuto y se extrajo el solvente y se deposit en tubos de
ensaye rotulados, esto se realiz por triplicado, se dejaron secar a temperatura
ambiente bajo una cmara de extraccin de gases hasta que los tubos estuvieran
secos. Ya secos se le adiciono a cada tubo 5 ml de una solucin de etanol al 80 % y
se agito por 1 minuto cada muestra.

La determinacin de compuestos fenlicos consisti en lo siguiente: 1 mL de cada


extracto se llev a 10 ml con etanol. Se tomaron alcuotas de 0.3 mL, a las cuales se
agregaron 2.25 mL de reactivo Folin Ciocalteu 1N. La mezcla se homogenizo y se
mantuvo en reposo por 5 min a temperatura ambiente. Despus se agregaron 2.25
mL de carbonato de sodio al 20% y nuevamente las mezclas fueron homogenizadas
y mantenidas en reposo durante 90 minutos, al cabo de los, cuales las absorbancias
respectivas de las muestras fueron ledas a 760 nm en un espectrofotmetro. Se
realiz una curva tipo de cido glico tomando alcuotas de 0,0.1, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8 y
1.0 mL de una solucin de cido glico (100 g/mL) y se les aplico el mismo

49
procedimiento que a los extractos. Los resultados obtenidos se reportaron como
gramos de cido glico equivalentes (GAE) por 100 g de materia seca.

III.12 Evaluacin de la actividad antioxidante de los extractos

Para la evaluacin de la actividad antioxidante en los extractos alcohlicos de las


muestras, se utiliz el mtodo de decoloracin del -caroteno. El -caroteno se
decolora rpidamente sin la presencia de un antioxidante, lo que con el tiempo
resulta en una disminucin de la absorbancia. La actividad antioxidante fue calculada
en cuatro formas diferentes. La primera consiste en realizar la representacin grfica
del cambio de absorbancia con respecto al tiempo, obtenindose una curva cintica
cuyo valor absoluto de la pendiente nos representa el valor antioxidante de la
muestra (AOX). La actividad antioxidante (%AA), es un parmetro que determina qu
tanto el compuesto antioxidante evita que su sustrato se oxide, si el valor es cercano
a cien, la actividad antioxidante del compuesto en cuestin es alta (Velioglu y Mazza,
1998). El valor de la actividad antioxidante se calcul tambin como un porcentaje de
inhibicin relativa para el control, y se determin con la siguiente ecuacin (Al
Saikhan et al., 1995):


= ( ) 100 (4)

Ao
ln( )
At
= (5)
t

Rcontrol y Rmuestra representan la Velocidad de decoloracin del -caroteno en la


mezcla de reaccin, sin antioxidante y con hidrolizado de lignina, respectivamente.
Ao = Absorbancia de la muestra o control en el tiempo cero.
At = Absorbancia de la muestra o control en el tiempo t.

50
Un tercer mtodo de expresin de la actividad antioxidante basado en la velocidad de
oxidacin (ORR), se calculara mediante la siguiente ecuacin (Ec. 6).

ORR = Rmedicin / Rcontrol (6)

donde Rmedicin y Rcontrol son las mismas que en la ecuacin anterior.

El cuarto mtodo utiliza el Coeficiente de Actividad antioxidante (AAC), el cual fue


obtenido como lo describe Mallet et al, (1994), con la siguiente ecuacin Ec. 7).
As120 Ac120
ACC= ------------------------- x 1000 (7)
Ac 0 Ac120

Donde As120 corresponde la absorbancia de la muestra antioxidante a un tiempo de


120 minutos, mientras que Ac0 y Ac120 corresponde a la absorbancia del control a
tiempo 0 y a 120 minutos, respectivamente.

El procedimiento para la evaluacin de la actividad antioxidante de los extractos


alcohlicos de las muestras consisti en lo siguiente. De una solucin de -caroteno
(0.2 mg/mL de cloroformo) se tomaron alcuotas de 1 mL, las cuales fueron
colocadas en matraces de fondo redondo de 50 ml que contenan 0.02 mL de cido
linoleico y 0.2 mL de tween 20. A cada mezcla se le adicionan 0.2 ml de etanol al
80% (como control) o, 0.2 mL de cada uno de los extractos etanlicos de los
hidrolizados alcalinos correspondientes. Las mezclas se homogenizaron y se dejaron
en reposo a temperatura ambiente, hasta sequedad. Una vez secas, a cada una de
las muestras se le adicionaron 50 mL de agua oxigenada y se agitaron
vigorosamente para crear una solucin de liposomas.

Posteriormente las muestras se sometieron a una auto-oxidacin trmica a 50C


durante un tiempo de 2 horas al cabo del cual, se obtuvieron las absorbancia de las
muestras en un espectrofotmetro a 470 nm, y en intervalos de 10 minutos. La taza

51
de blanqueo de -caroteno se calcul mediante el ajuste de regresin lineal a los
datos con el tiempo. Todas las muestras se ensayaron por triplicado. Se utiliz Butil
Hidrxi Tolueno (BHT) como estndar y etanol al 80% como control. Se realiz un
anlisis de correlacin para determinar si hay relacin entre la actividad antioxidante
y la cuantificacin de compuestos fenlicos.

III.13 Identificacin y cuantificacin de cidos fenlicos por ESI-MS-


TOF

La espectrometra de masas (MS) es una tcnica analtica en la que los tomos o


molculas de una muestra son ionizados, con mayor frecuencia positivamente,
separados por su relacin masa/carga (m/z) y posteriormente detectados y
registrados. La importancia y proyeccin de la MS es debida a su potencial analtico.
Las ventajas de esta tcnica se pueden resumir en los siguientes aspectos:
proporciona una insuperable especificidad en la determinacin del peso molecular
debido a la posibilidad de medir exactamente su masa molecular as como obtener
informacin a partir de los fragmentos inicos de un analito. Su sensibilidad es muy
elevada y en teora, la MS permite detectar una nica molcula. Se ha demostrado la
deteccin de molculas en cantidades de attomoles (1018 moles) y femtomoles
(1015 moles). Es muy verstil, ya que permite determinar la estructura de tipos de
compuestos muy diversos. Es aplicable a los elementos y a todo tipo de muestras,
voltiles, no voltiles, polares y apolares, slidos, lquidos y gases. En combinacin
con tcnicas de separacin de alta resolucin, es la ms cualificada para analizar
muestras complejas reales.

El anlisis por espectrometra de masas se realiza en cuatro etapas bsicas:


1. Introduccin de la muestra.
2. Ionizacin de la muestra, en la que se transforman los tomos o molculas en
especies inicas en fase gaseosa, con la consiguiente prdida de electrones o
protones.

52
3. Separacin y el anlisis de los iones moleculares y de los fragmentos cargados
producidos segn su relacin m/z.
4. Finalmente, se obtiene el espectro de masas, en el que se presenta la abundancia
relativa de los iones y fragmentos separados respecto a la relacin masa/carga.

Un Espectrmetro de Masas es un instrumento que mide las masas de molculas


individuales que han sido convertidas en iones. Un espectrmetro de masas no mide
la masa molecular directamente, pero mide la relacin masa/carga de los iones
formados de las molculas. Los espectrmetros de masas se componen de unos
elementos bsicos como son: un sistema de introduccin de la muestra, un sistema
de ionizacin de la muestra, un analizador de masas, un detector, un sistema de
vaco, un sistema de adquisicin y tratamiento de los datos (Figura 24).

Figura 24.- Componentes bsicos de un espectrmetro de masas

El sistema de entrada, junto con la fuente de iones y el tipo de analizador de masas


definen el tipo de espectrmetro y las capacidades del sistema. Los instrumentos
usados estn compuestos de una combinacin de sistemas de entrada, fuentes de

53
ionizacin, y analizadores de masas (Plasencia, 2003). El espectro resultante es un
grfico que representa la abundancia relativa de los iones producidos (% de
abundancia relativa de los iones producidos) respecto de su relacin masa/carga
(m/z). La seal correspondiente a un in aparece en forma de varios picos que
corresponden a la distribucin estadstica de los distintos istopos del in. La
informacin obtenida por espectrometra de masas es esencialmente cualitativa,
como es la determinacin de masa molecular o la informacin sobre la estructura a
partir de los fragmentos obtenidos, pero tambin se pueden realizar anlisis
cuantitativos utilizando patrones internos o externos con lmites de deteccin desde
picomoles a femtomoles (Plasencia, 2003) .

La ionizacin de un analito es una etapa crucial en el anlisis de cualquier


compuesto por MS. La Ionizacin por Electrospray (ESI) es uno de los mtodos de
ionizacin ms recientemente desarrollados en espectrometra de masas. Es una
ionizacin a presin atmosfrica que se aplica a un amplio grupo de muestras y
especialmente se utiliza para la caracterizacin de biomolculas. En la ionizacin por
electrospray, la muestra disuelta en un disolvente adecuado pasa a travs de un
capilar metlico, en cuya punta se aplica un potencial de 3 a 4 KV y una presin de 1
atmsfera. Se produce una fina niebla de gotas de elevada carga y la evaporacin
del solvente hace que aumente la densidad de carga, producindose la desorcin en
fase gaseosa (Figura 25).

54
Figura 25. Esquema de un sistema de ionizacin por electrospray (ESI)

El anlisis por ESI, se puede hacer provocando una ionizacin positiva o negativa.
Se selecciona la polaridad de los iones que se desea analizar mediante el voltaje del
capilar. Permite la obtencin del in molecular, y si se desea obtener una
fragmentacin, se puede inducir aumentando el voltaje en la punta del cono del
capilar. Este proceso produce un ion con carga positiva y un electrn suelto. La
molcula ionizada puede tener energa excesiva que puede ser disipada a travs de
la fragmentacin de ciertos enlaces qumicos. El rompimiento de varios enlaces
qumicos permite la produccin de fragmentos de ion cuya masa es igual a la suma
de las masas atmicas de un grupo de tomos que retienen la carga positiva durante
el proceso de fragmentacin (Martn y Ballesteros, 2010).

El analizador de masas constituye el corazn de un espectrmetro de masas, su


funcionamiento y prestaciones dependen en gran medida de su diseo. El analizador
tiene dos misiones fundamentales: separar los iones en funcin de su relacin
masa/carga (m/z), y enfocar los iones separados hacia un determinado punto. El

55
movimiento de las partculas cargadas permite distinguir unas de otras en funcin de
la energa cintica de cada in, de la velocidad o del momento de fuerzas. Los
distintos analizadores aprovechan alguna o varias de estas propiedades para separar
los iones de distintas masas (Martn y Ballesteros, 2010).

Existen diferentes tipos de analizadores, los ms utilizados son los de sector


magntico, de cuadrupolo, de trampa de iones, trampa de iones lineales, de tiempo
de vuelo (TOF), de resonancia inica en ciclotrn o analizadores Orbitrap. Su
eleccin se realiza en funcin de su resolucin, del intervalo de masas que permite
separar, de la exactitud de las masas que es capaz de separar, del intervalo
dinmico lineal, de la velocidad de barrido, de la sensibilidad, de la eficacia y de su
adaptabilidad, entendindola como la posibilidad de poder utilizar distintos modos de
ionizacin (Martn y Ballesteros, 2010).

La introduccin de la Ionizacin por Electrospray (ESI) acoplado a la espectrometra


de masas con detector de tiempo de vuelo (ESI-MS-TOF), le da a esta tcnica la
capacidad para la separacin de iones, antes del anlisis por espectrometra de
masas, reduciendo significativamente el fondo de interferencias en la matriz de la
muestra lquida, as como la deteccin selectiva de iones positivos y negativos de los
analitos traza, sin necesidad de preconcentracin, derivatizacin y separacin de
lquidos (Jassim y Wojciech, 2006). Por otra parte, el detector de tiempo de vuelo
(TOF-MS) proporciona una excelente precisin de la masa en un amplio rango
dinmico, y permite mediciones del patrn isotpico, proporcionando informacin
adicional importante para la determinacin de la composicin elemental (Iswaldi et
al., 2011).

El principio de operacin del analizador de tiempo de vuelo (time-of-flight TOF)


involucra la medicin del tiempo requerido por un ion para viajar desde la fuente de
ionizacin hasta el detector que se localiza a una distancia de 1 2 m de la fuente.
Todos los iones reciben la misma energa cintica durante la aceleracin instantnea
(3000 eV), pero debido a que tienen diferentes valores de m/z, se separan en grupos

56
de acuerdo a su velocidad (por lo tanto m/z) como van recorriendo la regin libre de
campo entre la fuente de ionizacin y el detector. Los iones chocan secuencialmente
en el detector en forma de un incremento de m/z. Los iones de baja m/z llegan al
detector antes que aquellos con m/z alta debido a que entre ms m/z tengan los
iones tendrn una velocidad menor (Plasencia, 2003).

El espectrmetro de masas utilizado en este trabajo de investigacin fue de un


tiempo de vuelo MicrOTOF-QII Bruker Daltonics, el cual viene equipado con una
fuente de ionizacin por electrospray (ESI). El procedimiento de medicin consisti
en lo siguiente. 2 microlitros de las muestras fueron disueltos en 1 mL de metanol y
de esta solucin se tomaron 20 microlitros que fueron nuevamente diluidos en 1 mL
de metanol. Esta solucin fue inyectada directamente al espectrmetro para la
determinacin de peso molecular (PM) y de esta forma, para la identificacin de los
compuestos fenlicos presentes en la muestra.

La determinacin se hizo utilizando la tcnica de ionizacin por electro spray en


modo negativo (ESI-), en un rango de relacin masa carga (m/z) de 50 y hasta una
relacin masa carga de 3000. El voltaje de capilar se fij en 2700 V, la fuente de
ionizacin se llev hasta 180C; como nebulizador y gas de colisin se utiliz
nitrgeno una velocidad de flujo de 4 L/min y una presin de 40 libras/pulgada 2
(Gmez et al., 2011). En los espectros obtenidos se observan las distribuciones de
PM correspondientes a los compuestos presentes en las muestras. Como principales
productos derivados de la hidrlisis alcalina de la lignina presente en el bagazo del
agave tequilero, se esperan algunos de los siguientes cidos fenlicos: ferlico, p-
camarico, cafeico, sirngico, y p-hidrxi-benzoico; cuyas concentraciones en los
hidrolizados fueron determinadas mediante el rea bajo la curva y utilizando los
patrones correspondientes.

57
III.14 ANLISIS ESTADSTICO

Todas las determinaciones se hicieron por triplicado, los resultados presentados


corresponden al valor medio la desviacin estndar de la serie. Se realiz un
anlisis de varianza (ANOVA) a un nivel de confianza del 95%, para determinar
diferencias estadsticas significativas entre los resultados obtenidos para cada una
de las condiciones de hidrlisis que se aplicaron a las muestras de lignina.

58
iV
RESULTADOS
y
discusin

59
IV.1 Anlisis qumico porcentual del bagazo de agave
tequilero

La composicin qumica porcentual del bagazo del agave tequilero (Agave tequilana
Weber azul) se muestra en la siguiente tabla (Tabla 8). Se puede observar que existe
cierta heterogeneidad sobre el anlisis qumico porcentual entre los resultados aqu
obtenidos con los reportados por otros investigadores; aun cuando se trata de la
composicin qumica de residuos del mismo agave tequilero (Agave tequilana Weber
azul). La diferente edad de las plantas de agave al momento de la cosecha, as como
a las diferentes condiciones agronmicas de los cultivos se pueden mencionar como
las posibles causas de estas discrepancias.

Tabla 8. Anlisis qumico porcentual del bagazo de agave tequilero


Parmetro Contenido (%BS) Iiguez (2005) Flores (2009)

Humedad 69.87a 71.00a 66.20b


Slidos totales 28.13 29.00a 33.80b
Cenizas 6.96 8.80b 5.30c
Materia orgnica 93.04 91.20 84.70
COT 51.68 60.60 52.61
Nitrgeno total 0.51 0.53 0.35b
Relacin C/N 101.30 95.50b 105.30c
FDN 56.57 58.80 57.80
FDA 45.17 46.70 42.95
Celulosa 14.80 39.50b 14.16
Hemicelulosa 11.40 12.10 14.85b
Lignina 30.37 7.20b 28.79
pH 5.35 5.40 3.52b
Columnas donde aparece la misma letra indica que no existe diferencia estadstica
significativa entre los valores (p<0.05)

60
Los resultados obtenidos son muy similares a los reportados por Iiquez (2005), las
ligeras discrepancias entre estos puede deberse a muchas causas tales como la
edad de la planta, las condiciones agronmicas de los cultivos, la manera en la que
se proces la planta para la elaboracin del tequila, tal como lo menciona Flores
(2009) , donde explica que en las empresas de mayor tecnificacin recurren al
desmenuzado de las pias cocidas para extraer mayor cantidad de material, mientras
que en otras empresas slo someten a una trituracin las pias de agave ya cocidas,
usando para ello molinos de piedra, por lo que los residuos de agave de las
diferentes empresas son bastante diferentes.

La relacin C/N es utilizada tradicionalmente como un indicador del origen de la


materia prima, as como de su grado de biodegradacin, madurez y estabilidad. Se
ha mencionado que relaciones C/N menores de 40 son considerados como ptimas
para emplear dicho material como sustrato para el cultivo de una gran diversidad de
plantas (Abad et al., 2004), aunque tambin autores como Mayer y Hofer en 1987
(citado por Rodrguez et. Al., 2013) proponen una relacin c/N menor de 20, como un
indicador de la madurez de un sustrato.

El contenido de los constituyentes fibrosos (celulosa, hemicelulosa y lignina)


presentes en un sustrato orgnico como el bagazo del agave tequilero, adems de
darnos informacin sobre los usos alternativos a que se puede destinar dicho residuo
agroindustrial, tambin nos habla de su facilidad para biodegradarse, ya que cuanto
mayor es el contenido de compuestos ligno-celulsicos, mayor dificultad tendrn los
microorganismos para degradar dicho material (Thomas et al., 1998).

La lignina representa el principal constituyente fibroso del bagazo de agave tequilero,


su contenido fue del 30.37% en base seca; similar al que se encuentra en los
residuos maderables de la poda de la uva, el cual se reporta de 27.11.1% en base
seca (Max et al., 2009), pero muy superior al 20.3% que se encuentra presente en el
olote del maz (Torre et al., 2008), ambos residuos agroindustriales que tambin han

61
sido propuestos para la produccin de precursores de la vainillina como lo son el
cido ferlico, el cido cafico, y el cido p-cumrico.

Dado que la gran mayora de las reacciones qumicas y enzimticas que se llevan a
cabo durante los procesos de biodegradacin de los residuos agroindustriales se ven
afectadas por el pH de dichos residuos, el conocimiento de este parmetro
fisicoqumico resulta fundamental, para tomar las medidas correctivas pertinentes si
queremos evitar o acelerar la velocidad de dichas reacciones o bien, si queremos
utilizar dichos residuos como sustrato para el crecimiento de otras plantas. Se ha
encontrado que valores de pH cidos favorecen las reacciones de hidrlisis y que el
pH ptimo para un sustrato orgnico va de 5.2 a 6.3, ya que este intervalo de pH
tambin favorece la actividad de microorganismos benficos para las plantas como
son las bacterias nitrificantes y los hongos micorrizicos (Zrate 2006).

IV.2 Hidrlisis cida del bagazo de agave

En esta parte del proyecto se realizaron varios ensayos con el fin de determinar un
ptimo uso del agua y del tiempo del lavado, con lo que se lleg a la colusin de que
los mejores resultados se obtuvieron al lavar la muestra cada 90 minutos dejndola
60 minutos en agitacin mecnica constante y 30 minutos de reposo entre cada
lavado. De este pretratamiento cido se obtuvo un polvo negro con un rendimiento
promedio del 72.8 % en peso.

IV.3 Caracterizacin cualitativa de lignina por espectrofotometra de


infrarrojo

El espectro FT-IR de la lignina obtenida, molida y libre de sales de sulfato de sodio


(Figura 26), es comparado con el espectro de FT-IR de la lignina que aparece en la
biblioteca FT-IR Perkin Elmer Spectrum (Moffat, 2011). Una de las bandas ms
caractersticas de este espectro es la banda que aparece a un nmero de onda de

62
3412 cm-1, la cual tiene una alta intensidad y se le atribuye a los grupos OH de la
lignina. A un nmero de onda de 2929 cm-1 aparece la banda de C-H, la cual en su
mayora pertenecen a los grupos metoxilos del anillo base de las ligninas. Por otro
lado, la banda caracterstica de los grupos carbonilos, la cual normalmente aparece
entre un nmero de onda de 1738-1709 cm-1, no se observa en el espectro, debido
muy probablemente a que el tamao de la molcula permite que haya interacciones
entre otros tomos los cuales tiene una mayor relevancia en el espectro haciendo
que este no se vea tan definidamente y solo se note como un hombro a un nmero
de onda de 1720 cm-1. Por su parte, la banda que aparece a un nmero de onda de
1638 cm-1, se debe a vibraciones del esqueleto aromtico C=C y a dems
interacciones HC =CH. Finalmente las bandas ubicadas en la regin entre los
1000 y 1200 cm-1 corresponden a enlaces CO de metoxilos y de COH.

Figura 26. Espectro de FT-IR de la lignina

63
IV.4 Hidrlisis alcalina de la lignina

La lignina es insoluble en cidos y soluble en lcalis fuertes como el hidrxido de


sodio, no se digiere ni se absorbe en el tracto gastrointestinal humano, tampoco es
atacada por la microflora del colon, por lo que constituye parte de la fibra dietaria
presente en los alimentos (Flamm et al., 2001).

La hidrlisis alcalina de la lignina es una tcnica utilizada para recuperar la fraccin


de celulosa contenida en los materiales lignocelulsicos en fase slida. Durante la
hidrlisis ocurre una deslignificacon parcial de la lignina y de los enlaces lignina-
hemicelulosas. Las estructuras de la lignina despolimerizada incluyen compuestos
fenlicos sustituidos, aldehdos, aceto-fenonas y cidos carboxlicos (Conde; 2009).
Este tratamiento es capaz de modificar la consistencia de la estructura de la celulosa,
hacindola rpidamente disponible para diferentes usos, tales como su hidrlisis
enzimtica, a la vez que facilita la liberacin de los compuestos fenlicos presentes
en la fraccin de lignina del material lignocelulsico, debido a que estos tratamientos
alcalinos disuelven la lignina mediante la escisin de los enlaces ster en los
complejos de polisacrido lignina, liberando as los cidos fenlicos (Torre; et. al.;
2008). Se han utilizan diferentes lcalis como catalizadores para llevar a cabo la
hidrlisis alcalina de la lignina, entre dichos lcalis destacan los siguientes. NaOH,
KOH, Ca (OH)2, NH4OH, y H2O2 frecuentemente. En este trabajo se seleccion el
NaOH porque se ha demostrado que este lcali es ms selectivo en la liberacin de
compuestos fenlicos, tales como el cido p-cumrico y el cidos ferlico con
respecto a los otros agentes, a pesar de su relativamente bajo rendimiento de
deslignificacin (Rodrguez y Daz, 1994).

IV.5 Cuantificacin de compuestos fenlicos

En la Figura 27 se muestra la curva tipo de cido glico la cual fue elaborada a


concentraciones de cido glico que van de 0 a 100 g/mL, y que fue utilizada para
la determinacin del contenido de compuestos fenlicos totales en los extractos

64
etanlicos de las 27 muestras de lignina hidrolizadas (Tabla 9). Se puede observar
que al inicio de la hidrlisis, la concentracin de compuestos fenlicos totales se
incrementa tanto al aumentar la concentracin de NaOH, como al aumentar la
temperatura y el tiempo de reaccin. Este incremento ocurre hasta llegar a un valor
mximo de 4575 mg de compuestos fenlicos totales por 100 g de lignina, el cual se
obtuvo a una concentracin 2N de NaOH, a una temperatura de 80C y un tiempo de
reaccin de 30 minutos. Tambin se puede observar que no existe una diferencia
estadstica significativa (p<0.05) en la cantidad de compuestos fenlicos encontrados
en la muestra de lignina hidrolizada a una concentracin de NaOH 2N, una
temperatura de 80C y tiempo de reaccin de 30 minutos, con respecto a la muestra
de lignina hidrolizada a una concentracin de NaOH 1N, una temperatura de 120C y
durante 90 minutos de tiempo de reaccin.

2.5
y = 0.025x - 0.1357
R = 0.9938

2
Absorbancia a 760 nm

1.5

0.5

0
0 20 40 60 80 100
Concentracin de cido Glico (g/mL)
Figura 27.- Curva tipo de cido glico

La concentracin de compuestos fenlicos fue disminuyendo a condiciones de


hidrlisis ms drsticas, y se hizo nula cuando en la hidrlisis de la lignina se utiliz

65
una solucin de NaOH 2N y temperatura de 120C, al igual que cuando se utiliz una
solucin de NaOH 3N, lo cual se debe posiblemente a que una vez que los
compuestos fenlicos son liberados de la lignina, sufren una degradacin debido a
las drsticas condiciones en que se lleva a cabo el proceso de hidrlisis.

Xu et al., (2005) mencionan que la alta solubilidad de la lignina en solucin alcalina


podra originarse ya sea a partir de la escisin alcalina del cido ferlico que se
encuentra reticulado entre la lignina y la hemicelulosa, o por modificacin de las
propiedades de polielectrolito de la lignina, inducidas por los grupos carboxilo libres
presentes en los steres de cidos fenlicos. Tambin mencionan que el uso de altas
temperaturas y elevada concentracin de lcali, conduce a la degradacin de una
parte significativa de los compuestos fenlicos presentes en la lignina, as como a la
solubilizacin parcial indeseada de oligosacridos. Es por ello que se requiere utilizar
condiciones de hidrlisis ms suaves para optimizar la liberacin de los cidos
fenlicos unidos por enlace ster, para su posible biotransformacin en vainillina.

Tabla 9. Contenido de fenoles totales en los hidrolizados de lignina


cido glico
Muestra cido glico Muestra cido glico
Muestra mg/100g
mg/100g mg/100g
1-80-30 743 16 2-80-30 4575 63 3-80-30 0
1-80-60 965 12 2-80-60 3324 20 3-80-60 0
1-80-90 1528 10 2-80-90 2532 40 3-80-90 0
1-100-30 1908 24 2-100-30 1349 50 3-100-30 0
1-100-60 2567 18 2-100-60 583 40 3-100-60 0
1-100-90 2969 24 2-100-90 272 40 3-100-90 0
1-120-30 3324 37 2-120-30 0 3-120-30 0
1-120-60 3845 28 2-120-60 0 3-120-60 0
1-120-90 4448 55 2-120-90 0 3-120-90 0
*Concentracin de NaOH (N) - Temperatura (C) - tiempo de reaccin (min).

66
IV.6 Evaluacin de la actividad antioxidante

En las figuras 28,29 y 30 se muestra la disminucin de la absorbancia del -caroteno


en presencia de los hidrolizados alcalinos de la lignina extrada a partir del bagazo
del agave tequilero, as como en presencia de -tocoferol, antioxidante conocido
utilizado como estndar. La cintica de decoloracin del -caroteno de los primeros
hidrolizados es muy similar a la del control, el cual no presenta actividad antioxidante,
pero a medida que se incrementa la temperatura y el tiempo de reaccin durante la
hidrlisis de la lignina, la cintica de decoloracin del -caroteno va tendiendo a
parecerse ms a la que presenta el -tocoferol, antioxidante muy conocido utilizado
como estndar.

Figura 28. Disminucin de la absorbancia del -caroteno con las muestras de lignina
hidrolizadas con NaOH 1N.

67
Figura 29. Disminucin de la absorbancia del -caroteno con las muestras de lignina
hidrolizadas con NaOH 2N.

Figura 30. Disminucin de la absorbancia del -caroteno con las muestras de lignina
hidrolizadas con NaOH 3N.

68
Esto se debe a que a medida que se incrementa la temperatura y tiempo de
hidrlisis, se va liberando una mayor cantidad de compuestos fenlicos con actividad
antioxidante. Las muestras cuya cintica de decoloracin del -caroteno fue muy
similar a la que presenta el -tocoferol fueron aquellas que se obtuvieron en
condiciones de hidrlisis de 1-120-90 y 2-80-30; es decir, aquellas cuya hidrlisis se
llev a cabo empleando NaOH 1N, temperatura de 120C y 90 minutos de tiempo de
reaccin, o bien, aquella obtenida con NaOH 2N, temperatura de 80C y un tiempo
de reaccin de 30 minutos, respectivamente, pues no existe una diferencia
estadstica significativa (p<0.05) entre la cintica de decoloracin del -caroteno de
ambas muestras. Cuando la hidrlisis se lleva a cabo con NaOH 2N, a medida que
se incrementa la temperatura (T>80C) y el tiempo de reaccin (t >30 min), la
cintica de decoloracin del -caroteno va tendiendo a parecerse ms a la que
presenta la muestra control; es decir, la pendiente de la recta va disminuyendo hasta
que, a partir del hidrolizado 2-100-60, las cinticas de decoloracin del -caroteno
son similares a las del control, lo cual se debe a que bajo estas condiciones de
hidrlisis, se presenta una posible degradacin de los compuestos fenlicos que han
sido liberados de la lignina, por lo que las muestras pierden su capacidad
antioxidante sobre el -caroteno. Por otro lado, ninguno de los hidrolizados obtenidos
con NaOH 3N presentaron actividad antioxidante, lo cual se debe a las drsticas
condiciones aplicadas en la hidrlisis de la lignina del agave tequilero.

En la Tabla 10 se presenta la actividad antioxidante de cada una de los 27


hidrolizados alcalinos de la lignina de agave tequilero. Podemos observar que
independientemente de la forma de expresin de la actividad antioxidante, esta fue
mxima en las muestras 1-120-90 y 2-80-30; es decir, aquellas muestras que fueron
hidrolizadas con NaOH 1N, a una temperatura de 120C y durante un tiempo de
hidrlisis de 90 minutos, y la muestra cuya hidrlisis se realiz con NaOH 2N, a una
temperatura de 80C y durante un tiempo de reaccin de 30 minutos,
respectivamente. La actividad antioxidante expresada como valor antioxidante
(AOX), vari de 0.264 para el control, a 0.006 para el estndar a-tocoferol; es decir,

69
este valor disminuye a medida que se incrementa la actividad antioxidante del
compuesto. En valor antioxidante fue mnimo (0.042 y 0.038) en las muestras 1-120-
90 y 2-80-30, respectivamente, y no hubo una diferencia estadstica significativa
(p<0.05) en el valor antioxidante entre ambas muestras. Cuando la hidrlisis se llev
a cabo con NaOH 2N, a medida que se incrementa la temperatura (T>80C) y el
tiempo de reaccin (t >30 min), el valor antioxidante de los va tendiendo a parecerse
ms al valor antioxidante que presenta la muestra control; es decir, AOX tiende 0
0.264, que, a partir del hidrolizado 2-100-60, el valor de AOX de los hidrolizados es
igual a AOX del control. Esto se debe a que bajo estas condiciones de hidrlisis, se
presenta una posible degradacin de los compuestos fenlicos que han sido
liberados de la lignina, por lo que las muestras pierden su capacidad antioxidante
sobre el -caroteno. Por otro lado, el valor antioxidante de todas las muestras que
fueron hidrolizadas con NaOH 3N, fue igual al valor antioxidante que presenta la
muestra control; es decir, AOX = 0.264.

70
Tabla 10. Actividad antioxidante de los hidrolizados de lignina

Muestra AOX b AAc ORRd AACe


(C-T-t)a (A/h) (%)
1-80-30 0.258 2.27 0.977 18.2
1-80-60 0.246 6.82 0.932 72.7
1-80-90 0.234 11.36 0.886 127.3
1-100-30 0.222 15.91 0.841 181.8
1-100-60 0.192 27.27 0.727 272.7
1-100-90 0.156 40.91 0.591 418.2
1-120-30 0.120 54.55 0.455 563.6
1-120-60 0.060 77.27 0.227 763.6
1-120-90 0.042 84.09 0.159 827.3
2-80-30 0.038 85.61 0.144 845.5
2-80-60 0.120 54.55 0.455 563.6
2-80-90 0.192 27.27 0.727 272.7
2-100-30 0.234 11.36 0.886 127.3
2-100-60 0.250 5.30 0.947 18.2
2-100-90 0.258 2.27 0.977 9.1
2-120-30 0.264 0.00 1.000 0.0
2-120-60 0.264 0.00 1.000 0.0
2-120-90 0.264 0.00 1.000 0.0
3-80-30 0.264 0.00 1.000 0.0
3-80-60 0.264 0.00 1.000 0.0
3-80-90 0.264 0.00 1.000 0.0
3-100-30 0.264 0.00 1.000 0.0
3-100-60 0.264 0.00 1.000 0.0
3-100-90 0.264 0.00 1.000 0.0
3-120-30 0.264 0.00 1.000 0.0
3-120-60 0.264 0.00 1.000 0.0
3-120-90 0.264 0.00 1.000 0.0
Control 0.264 0.00 1.000 0.0
-Tocoferol 0.006 97.73 0.023 972.7
a C = concentracin (N), T = temperatura (C) y t = tiempo de reaccin (min)
b
Valor antioxidante (AOX), c Actividad antioxidante AA (%), d Velocidad de oxidacin
(ORR), e Coeficiente de actividad antioxidante (AAC)

Cuando la actividad antioxidante se expresa en % de inhibicin relativa al control (AA


%), su valor vari de AA=0% para el control, a AA= 97.73% para el estndar
-tocoferol, y las muestras con mayor valor de actividad antioxidante fueron los
hidrolizados 1-120-90 y 2-80-30, cuya AA fue de 84.09% y de 85.61%,
respectivamente. No hubo diferencia estdstica significativa (p<0.05) en la AA (%) de

71
dichas muestras. Nuevamente observamos que la actividad antioxidante fue nula
(AA=0%), en aquellas muestras hidrolizadas con NaOH 2N, temperaturas T=120 C,
as como en todas las muestras hidrolizadas con NaOH 3N.

Por su parte, la actividad antioxidante expresada como la relacin de la velocidad de


oxidacin (ORR), vari de ORR = 1.00 para el control, a ORR = 0.023 para el
estndar (-tocoferol); es decir, el valor ORR de las muestras con mayor actividad
antioxidante tiende a 0.023, tal como el estndar, mientras que las muestras con
menor actividad antioxidante presentarn un valor de ORR tendiente a 1.00; es decir,
al valor de ORR que presenta el control. Podemos ver que la velocidad de oxidacin
fue mxima en las muestras 1-120-90 y 2-80-30, las cuales tuvieron una velocidad de
oxidacin de o.159 y de 0.144, respectivamente. Aqu tambin podemos ver que la
velocidad de oxidacin fue nula (ORR=0), para todas aquellas muestras hidrolizadas
con una solicin de NaOH 2N y a temperatura de 120C, as como en todas las
muestras cuya hidrlisis alcalina de la lignina se llev a cabo utilizando una
concentracin de NaOH 3N.

Finalmente la actividad antioxidante de las muestras, expresada como el coeficiente


de actividad antioxidante (AAC), vari desde 0 para el control, hasta 972.7 para el
estndar, que en este caso fue el -tocoferol, por lo que los hidrolizados con mayor
actividad antioxidante tuvieron valores del coeficiente de actividad antioxidante AAC
tendientes al del estndar (AAC=972.7). Podemos ver que los hidrolizados con
mayor coeficiente de actividad antioxidante fueron aquellos obtenidos a condiciones
de hidrlisis de 1-120-90 y 2-80-30, cuyo coeficiente de actividad antioxidante fue de
827.3 y de 845.5, respectivamente. No hubo una diferencia estadstica significativa
(p<0.05), en el valor del coeficiente de actividad antioxidante de estas dos muestras
en donde se obtuvo el mayor valor del coeficiente de actividad antioxidante. El
coeficiente de actividad antioxidante fue igual a cero (AAC=0) para aquellas muestras
hidrolizadas con una concentracin de NaOH 2N y a una temperatura de 120C, as
como en todas aquellas muestras cuya hidrlisis se llev a cabo con una
concentracin de NaOH 3N.

72
Deseano et al., (1990) encontraron que las mejores condiciones para obtener
vainillina a partir de la lignina extrada del bagazo de caa de azcar, son aquellas en
las que la hidrlisis alcalina de la lignina se lleva a cabo con una solucin de
hidrxido de calcio al 20% en peso y a una temperatura de 170C; condiciones que
resultan muy diferentes a las utilizadas en este estudio, probablemente debido a que
el Ca(OH)2 es mucho menos agresivo que el NaOH que nosotros empleamos para
llevar a cabo la hidrlisis alcalina de la lignina. Otros autores han utilizado tambin
las mismas condiciones anteriores para llevar a cabo la hidrlisis alcalina de la
lignina extrada de la guadua, para la obtencin de vainillina (Martnez et al., 2011)
Varios investigadores han observado que los rendimientos de extraccin y la
actividad antioxidante de los extractos dependen del tipo de disolvente utilizado,
como consecuencia del diferente potencial antioxidante de compuestos con distinta
polaridad (Conde, 2009). Los disolventes apolares son los ms utilizados para la
extraccin de compuestos fenlicos en medios acuosos. Se han empleado acetato
de etilo y dietil-ter para la extraccin de compuestos fenlicos de bajo peso
molecular de madera de roble observndose que los compuestos polifenlicos
extrados con acetato de etilo a partir de diferentes sustratos naturales presentan una
elevada capacidad antioxidante. Sin embargo, el etanol y el agua son los disolventes
ms frecuentemente utilizados por razones de ausencia de toxicidad, costo y
abundancia, respectivamente.

Tambin se ha comprobado que la temperatura empleada durante el proceso de


extraccin afecta a la estabilidad de los compuestos fenlicos, debido a la
participacin de reacciones de degradacin qumica y enzimtica, prdidas por
volatilizacin o a descomposicin trmica. Larrauri et al., (1997) encontraron que la
temperatura es la variable ms influyente sobre la alteracin de los polifenoles.
Algunos polifenoles aumentan su capacidad antioxidante mediante procesos de
pirolisis suaves sobre los compuestos iniciales, especialmente en el caso del cido
cafeico. En procesos de extraccin enzimticos de pulpas de uvas, el uso de
temperaturas moderadas a tiempos de operacin largos conducen a la degradacin

73
de los compuestos fenlicos, mientras que en procesos de hidrlisis de duracin
entre 1-8 h, no observaron degradacin de estos compuestos.
Al comparar los resultados de las tablas 10 y 11, podemos ver que la mxima
actividad antioxidante, calculada por cualquiera de los cuatro diferentes mtodos
utilizados en este estudio, coincide con el mximo contenido de compuestos
fenlicos en las muestras hidrolizadas. Si hacemos la representacin grfica del
contenido de compuestos fenlicos totales con respecto a la actividad antioxidante
de las muestras (Figura 31), se puede apreciar que existe una correlacin altamente
significativa entre ambos factores, ya que al aumentar el contenido de compuestos
fenlicos totales, tambin aumenta la el % de actividad antioxidante de la muestra,
obtenindose un coeficiente de correlacin R2=0.93 entre dichas variables.

Figura 31.Correlacin entre el contenido de compuestos fenlicos totales y la


actividad antioxidante de los hidrolizados de lignina

74
Se han obtenido resultados contradictorios sobre la relacin que guarda el contenido
de compuestos fenlicos totales con la actividad antioxidante de la muestra (Conde,
2009); mientras algunos autores mencionan haber encontrado una correlacin entre
el contenido en compuestos fenlicos y la actividad antioxidante (Tsaliki et al., 1999),
otros autores no encontraron tal correlacin (Kahkonen et al., 1999; Escobar, 2012).
Por ejemplo, Velioglu et al., (1998) obtuvieron un coeficiente de correlacin de
R2=0.9632 entre el contenido de compuestos fenlicos totales y la actividad
antioxidante de 8 muestras de fibras de cereales, y un coeficiente de correlacin de
R2=0.9051 entre el contenido de compuestos fenlicos totales y el % de AA, al
analizar 4 diferentes productos de cereales, sin embargo, al analizar cinco diferentes
materiales ricos en antocianinas, la relacin entre el contenido de compuestos
fenlicos totales y el % de actividad antioxidante no fue significativo, arrojando un
coeficiente de correlacin entre ambos de R2=0.4623. Estos autores tambin
mencionan que la actividad antioxidante no slo depende del contenido de
compuestos fenlicos, sino tambin del tipo de compuestos fenlicos presentes, ya
que las muestras ricas en antocianinas les dieron mayor actividad antioxidante.

IV.7 Identificacin y cuantificacin de compuestos fenlicos por


ESI-MS-TOF.

Los espectros de elusin de las muestras de lignina tratadas bajo las diferentes
condiciones de hidrlisis se muestran en las figuras 32-48, las cuales se ubican en la
seccin de ANEXOS. Debido a que todos los espectros de elusin obtenidos, desde
la muestra 2-120-30 en adelante fueron idnticos, slo se incluye el espectro de la
muestra 2-120-30 (Figura 47), mientras que en la figura 48 se representa el espectro
de elusin de los estndares utilizados e inyectados a una concentracin de 1
mg/mL. Los estndares utilizados fueron: cido p-carboxibenzico, cido p-cumrico,
cido cafeico y cido ferlico. Por otro lado, con las reas de cada una de las
seales obtenidas, y con los volmenes y diluciones utilizadas para la inyeccin de
las muestras, se obtuvieron las concentraciones de cada uno de los compuestos

75
fenlicos encontrados en las muestras de lignina tratadas bajo las diferentes
condiciones de hidrlisis (Tabla 11).

76
Tabla 11. Compuestos fenlicos encontrados en los hidrolizados de lignina

Muestra* c. ferlico c. cafico c. p-cumrico Ac.-p-carboxifenol


mg/g lignina mg/g lignina mg/g lignina mg/g lignina
1-80-30 2.53 1.52 2.03 1.35
1-80-60 3.34 1.94 2.68 1.69
1-80-90 5.25 3.22 4.18 2.63
1-100-30 6.56 3.96 5.29 3.27
1-100-60 8.80 5.35 7.09 4.42
1-100-90 10.20 6.16 8.22 5.12
1-120-30 11.39 6.92 9.16 5.76
1-120-60 13.25 7.97 10.60 6.63
1-120-90 15.27 9.18 12.26 7.78
2-80-30 15.78 9.47 12.62 7.89
2-80-60 11.44 6.96 9.16 5.68
2-80-90 8.71 5.23 6.96 4.42
2-100-30 4.59 2.82 3.73 2.35
2-100-60 1.98 1.25 1.59 1.01
2-100-90 0.94 0.57 0.76 0.45
2-120-30 ND* ND ND ND
2-120-60 ND ND ND ND
2-120-90 ND ND ND ND
3-80-30 ND ND ND ND
3-80-60 ND ND ND ND
3-80-90 ND ND ND ND
3-100-30 ND ND ND ND
3-100-60 ND ND ND ND
3-100-90 ND ND ND ND
3-120-30 ND ND ND ND
3-120-60 ND ND ND ND
3-120-90 ND ND ND ND
*concentracin(N)-temperatura (C)-tiempo de reaccin (min)

77
Adems de los compuestos mencionados en la tabla 15, tambin se identificaron
trazas de cido sirngico, y cido vainillinico en los hidrolizados de la lignina pero, al
igual que los compuestos mencionados en dicha tabla, slo aparecieron hasta la
muestra 2-100-90; es decir, la muestra hidrolizada con NaOH 2N, a una temperatura
de 100C y durante 90 minutos de tiempo de reaccin. Estos compuestos tambin se
destruyeron a condiciones de hidrlisis ms drsticas.

Podemos observar que la concentracin de cada uno de estos compuestos se va


incrementando gradualmente a medida que se incrementan las condiciones de
hidrlisis; es decir, a medida que se incrementa el tiempo y la temperatura de
reaccin, a una concentracin de NaOH 1N, pues cuando se aumenta la
concentracin del hidrxido de sodio, la concentracin de estos compuestos
disminuye y desaparece a condiciones de hidrlisis ms drsticas. Este efecto ya ha
sido reportado por otros investigadores como Ou et al., (2007) y por Torre et al.,
(2008),

Al analizar los resultados de las tablas 8, 9 y 10, podemos ver que tanto la
concentracin de compuestos fenlicos totales (tabla 8), as como el porciento de
actividad antioxidante (tabla 9) y la concentracin de cada uno de los compuestos
fenlicos encontrados, todo ello se present bajo las mismas condiciones de
hidrlisis de las muestras de lignina, lo cual era de esperarse, puesto que todos estos
parmetros estn correlacionados; es decir, a mayor concentracin de compuestos
fenlicos se tendr mayor actividad antioxidante y por lo tanto, ser tambin mayor la
concentracin de cada uno de los compuestos fenlicos encontrados, aunque esto
ltimo no necesariamente, pues cada uno de los compuestos fenlicos presenta
diferente actividad antioxidante, tal como lo manifiesta Gutirrez et al., (2008).

Por otro lado, las mayores concentraciones de estos compuestos fenlicos se


obtuvieron cuando la hidrlisis de la lignina se llev a cabo a una concentracin de
NaOH 1N, temperatura de 120C y por un tiempo de reaccin de 90 minutos, al igual
que cuando la hidrlisis se realiz con NaOH 2N, temperatura de 80C y por un
tiempo de reaccin de 30 minutos, pues entre dichos muestras (1-120-90 y 2-80-30),
no hubo una diferencia estadstica significativa (p>0.05), en la concentracin de cada

78
uno de los compuestos fenlicos identificados y cuantificados, las cuales fueron:
15.27, 9.18, 12.26, y 7.78 mg/g de lignina de los cidos ferlico, cido cafeico, cido
p-cumrico y cido p-carboxifenol, respectivamente. Si consideramos que el
contenido de lignina en el bagazo de agave fue del 30.37% en base seca, y que el
porcentaje de recuperacin de la lignina despus de la digestin con cido sulfrico
del bagazo de agave fue del 72.8%, los rendimientos obtenidos de cada uno de los
compuestos fenlicos, expresados como gramos del compuesto por cada 100
gramos de bagazo de agave tequilero fueron: 0.0034, 0.0020, 0.0027 y 0.0017 % en
base seca, para los cidos ferlico, cido cafeico, cido p-cumrico y cido p-
carboxifenol, respectivamente.

Realmente resulta muy difcil comparar los resultados aqu obtenidos con los que
aparecen reportados en la literatura; en primer lugar porque se parte de diferente
materia prima y en segundo lugar porque las condiciones de hidrlisis son muy
diferentes, adems de la forma en que se reportan los resultados obtenidos. Al
trabajar en la obtencin de cido ferlico y cido cumrico por hidrlisis alcalina del
bagazo de la industria cervecera, Mussatto et al (2007) encontraron que las mejores
condiciones de hidrlisis fueron cuando la hidrlisis se lleva a cabo utilizando una
relacin slidos lquido de 1:20 p/p, con una solucin alcalina de NaOH 2%, a una
temperatura de 120C y durante 90 min de tiempo de reaccin. Bajo estas
condiciones, los compuestos fenlicos encontrados fueron: 145.3 mg/L de cido
ferlico y 138.8 mg/L de cido p-cumrico, lo cual corresponde a 9.65 mg de cido
ferlico y 9.22 mg de cido p-cumrico por gramo de lignina solubilizada.

Por otra parte, al trabajar en la solubilizacin de cido ferlico y cido p-cumrico por
hidrlisis alcalina aplicada despus de una pre-hidrlisis cida de los residuos slidos
obtenidos de las podas de la vid, Max et al., (2009) encontraron que las mejores
condiciones resultaron cuando utilizaron una relacin slidos-lquido de 1/10 p/p, y la
hidrlisis alcalina la llevaron a cabo con KOH 3N, a una temperatura de 35C. Bajo
estas condiciones los investigadores antes sealados obtuvieron una concentracin
de cido ferlico de 228.6mg/L, lo cual equivale a 0.41mg de cido ferlico/g de

79
residuos y, 102.6mg de cido p-cumrico/L, lo que equivale a 0.147mg de cido p-
cumrico/g de residuos de la vid.

Cuando Torre et al., (2008) trabajaron sobre la obtencin de cido ferlico y cido p-
cumrico a partir de olotes, ellos encontraron que los mejores resultados los
obtuvieron cuando la hidrlisis de la lignina de olote la llevaban a cabo a temperatura
ambiente, empleando una relacin slidos lquido de 0.84 g/g, una solucin alcalina
de NaOH 0.5 y un tiempo de reaccin de 6 horas. Bajo estas condiciones, las
cantidades de cidos fenlicos encontrados fueron de 1171 mg/L de cido ferlico y
de 2156 mg/L de cido p-cumrico.

Los tratamientos qumicos y enzimticos de residuos o excedentes agroindustriales


pueden ocasionar la liberacin de compuestos fenlicos tales como el cido ferlico y
el cido p-cumrico entre otros, y luego utilizar estos en otras transformaciones. Hoy
en da existe un gran inters en el potencial del cido ferlico y otros compuestos
relacionados, ya sea como antioxidantes en la preservacin de alimentos, debido a
su capacidad para inhibir la peroxidacin de cidos grasos, o como materias primas
para la bio-produccin de vainillina, uno de los principales compuestos aromticos y
saborizantes, a travs de un proceso integrado, eco-sostenible (De Faberi et al.,
2007).

Por otra parte, el material resultante despus de la extraccin de los compuestos


fenlicos podra emplearse en tratamientos especficos dirigidos a la explotacin y
utilizacin de los polisacridos presentes, uno de estos aprovechamientos
especficos sera la produccin de composta a partir de dichos residuos slidos.

80
V
CONCLUSIONES

81
Debido a su constante y abundante disponibilidad, su relativo bajo precio y su alto
contenido de lignina, el bagazo de agave tequilero puede ser utilizado a travs de un
mtodo amigable con el medio ambiente, para reducir las grandes cantidades que de
stos residuos slidos genera anualmente la industria tequilera, para la produccin
de diversos compuestos fenlicos entre los que destaca el cido ferlico, compuesto
orgnico que, dadas sus importantes propiedades qumicas y funcionales, encuentra
una gran variedad de aplicaciones, siendo una de sus principales su utilizacin como
material de arranque en la bio-produccin de vainillina, uno de los sabores y aromas
ms gustados y hoy en da, considerado como el saborizante de mayor importancia a
nivel mundial, por lo que es ampliamente utilizado en diversas y variadas industrias,
que van desde la alimentaria, farmacutica, pasando por la licorera, refresquera,
cosmtica y tabacalera.

82
VI

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92
VII

ANEXOS

93
Fifura 32. Perfil de elusin de la muestra 1-80-30

Figura 33. Perfil de elusin de la muestra 1-80-60

94
Figura 34. Perfil de elusin de la muestra 1-80-90

Figura 35. Perfil de elusin de la muestra 1-100-30

95
Figura 36. Perfil de elusin de la muestra 1-100-60

Figura 37. Perfil de elusion de la muestra 1-100-90

96
Figura 38. Perfil de elusin de la muestra 1-120-30

Figura 39. Perfil de elusin de la muestra 1-120-60

97
Figura 40.Perfil de elusin de la muestra 1-120-90

Figura 41. Perfil de elusin de la muestra 2-80-30

98
Figura 42. Perfil de elusin de la muestra 2-80-60

Figura 43. Perfil de elusin de la muestra 2-80-90

99
Figura 44. Perfil de elusion de la muestra 2-100-30

Figura 45. Perfil de elusin de la muestra 2-100-60

100
Figura 46. Perfil de elusin de la muestra 2-100-90

Figura 47. Perfil de elusin de la muestra 2-120-30

101
Figura 48. Perfil de elucin de los estndares: p-carboxifenol (m/z=137), cido p-
cumrico (m/z=163), cido cafeico (m/z=179) y cido ferlico (m/z=193).

102