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INTEGRANTES:
Asato Arakaki , Yukio Javier 1524110156
Beteta Len, Israel 1524110147
Cuenca Chirinos, Sebastin 1524110183
Guzman Urteaga, Mishelle 1524110227
Mamani Snchez, Lizbeth 1424125069
PRACTICA DE LABORATORIO N4
Las clulas llevan a cabo simultneamente una gran cantidad de reacciones qumicas necesarias
para la vida. Muchos de los productos de esas reacciones se necesitan inmediatamente, y si no
fuera por la participacin de las enzimas, algunas reacciones no se produciran tan rpido. Las
enzimas, en su mayora protenas o RNA (riboenzimas), son catalizadores qumicos que agilizan
una reaccin que envuelve la formacin o rompimiento de enlaces qumicos. Las enzimas no se
consumen en las reacciones, ni tampoco se alteran, razn por lo cual no se necesitan en grandes
cantidades. Las enzimas actan sobre los sustratos formando un complejo enzimasustrato; esto
ocurre en un lugar en especfico conocido como el sitio activo de la enzima. Las enzimas son
muy selectivas porque pocas molculas pueden interactuar bien con este sitio
Las enzimas reducen la energa de activacin necesaria para llevar a cabo una reaccin;
es decir, reducen la barrera de energa que hay que sobrepasar para que la reaccin se
lleve a cabo.
CATALASA
Es un tetrmero en el que cada unidad de protena contiene una porfirina con hierro; solo
una de esta reacciona en el proceso cataltico. Los cuatro tomos de hierro es en la
protena hemo estn en el estado oxidado. En las catalasas, el grupo hemo es el radical
orgnico; en el citocromo c peroxidasa y en otras peroxidasas, el radical est situado en
la cadena lateral o en un tomo de azufre de un aminocido.
REACCION CATALITICA
Una amplia variedad de compuestos orgnicos puede actuar como AH2 . Adems del
H202, Los sustratos para la catalasa incluyen varios alcoholes. Formaldehido hidratado
(H2C(OH)2), acido nitroso yacido frmico. Asimismo pueden utilizarse sustratos
inespecficos como amina aromtica, fenoles y cidos aromticos. La catalasa puede
usar el H202 para oxidar los alcoholes metlico y etlico a sus aldehdos
correspondientes.
Una de las propiedades de las enzimas importantes es que derivan del hecho de ser
protenas de actuar como catalizadores. Como protenas, estos poseen una
conformacin natural ms estable que las dems conformaciones posibles. As,
cambios en la conformacin suelen ir asociados en cambios en la actividad cataltica.
Los factores que influyen de manera ms directa sobre la actividad de una enzima
son:
-PH
-Temperatura
DONDE
Ea La energa de activacin
R La K de los gases(2caK-1mol-1)
T La temperatura Absoluta (k)
1/S
III.- OBJETIVOS
INSTRUMENTOS
GRADILLA
PIPETA
PROPIPETA
TUBO DE ENSAYO
PISETA
MORTERO
RAYADOR
HIGADO DE RES
MAIZ GERMINADO
PAPA
RABANITO
UVA
REACTIVOS
CLORURO DE CADMIO
ZINC
BICARBONATO AL 1%
CLORURO DE COBALTO
VINAGRE
CLORURO DE BARIO
IV.-PROCEDIMIENTO
BARRIDO
V.-RESULTADOS
BARRIDO:
TABLA DE PH:
METALES PESADOS:
En todos los casos estudiados, dar una respuesta razonada al por qu de las
variaciones de la velocidad de la reaccin (actividad enzimtica) observadas cuando
cambiamos el tiempo de la incubacin, cantidad de extracto aadido, Ph, temperatura
y concentracin de sustrato.
EFECTOS DE LOS ACTIVADORES ENZIMATICOS
Los activadores son sustancias que por variados mecanismos incrementan la velocidad de las
reacciones catalizadas por enzimas.
Los inhibidores son sustancias que por variados mecanismos disminuyen la velocidad de las
reacciones catalizadas por enzimas.
Los inhibidores enzimticos son sustancias que tienen en comn la propiedad de disminuir la
velocidad de las reacciones catalizadas por las enzimas. Casi siempre se distinguen dos tipos
generales de inhibicin, la reversible y la irreversible, en el primer caso el inhibidor forma con la
enzima un complejo enzima-inhibidor (EI), unido por fuerzas no covalentes y que, por tanto,
puede disociarse; en el segundo se producen modificaciones covalentes de la enzima que no
pueden eliminarse fcilmente. En este captulo solo se tratarn los primeros.
Para estudiar el efecto y el tipo de los inhibidores se realiza una experiencia igual a la
determinacin del efecto de la concentracin de sustrato sobre la velocidad, pero ahora en cada
uno de los tubos de ensayo se ha aadido un inhibidor en una concentracin fija. Como en los
casos anteriores, los resultados se llevan a una grfica y de acuerdo con esta se clasifican los
inhibidores; solo se estudiarn los casos ms tpicos.
v.-DISCUSION
Vl.-CONCLUCIONES
Vll.-CUESTIONARIO
Elevadas temperaturas.
Muchos organismos pueden descomponer el perxido de hidrgeno (H2O2) por la accin de las
enzimas. Las enzimas son protenas globulares responsables de la mayor parte de la actividad
qumica de los organismos vivos. Actan como catalizadores, que son sustancias que aceleran
las reacciones qumicas sin ser destruidas o alteradas durante el proceso. Las enzimas son
extremadamente eficientes y se pueden utilizar una y otra vez repetidamente. Una enzima puede
catalizar miles de reacciones en cada segundo. Tanto los valores de pH como de la temperatura
a los que trabaja la enzima son extraordinariamente importantes. La mayora de los organismos
tienen un intervalo de temperatura preferente en el cual sobreviven y sus enzimas funcionan
mejor dentro de dicho intervalo de temperatura. Si el ambiente donde se encuentra la enzima es
demasiado cido o demasiado bsico, la enzima puede desnaturalizarse de forma irreversible o
transformarse de modo que su forma no le permita ms realizar su funcionamiento apropiado. El
H2O2 es txico para la mayora de los organismos vivos. Muchos organismos son capaces de
destruir el H2O2 mediante la accin de enzimas antes de que pueda realizar mucho dao. El
H2O2 se convierte en oxgeno y agua segn la siguiente reaccin: 2 H2O2 2 H2O + O2
Espectofometra:
Actividad residual
Las enzimas son protenas, y por tanto pueden desnaturalizarse por los mismos mecanismos
generales que las dems protenas. La forma ms habitual de controlar la actividad enzimtica
en un alimento es mediante su tratamiento trmico.
Cintica de inactivacin
Teniendo en cuenta que los enzimas se comportan desde el punto de vista cintico de forma
semejante a los microrganismos, el efecto del calentamiento se puede analizar matemticamente
por los mismos procedimientos.
Una vez obtenidos los valores de D a distintas temperaturas, se pueden representar los valores
de sus logaritmos frente a las temperaturas correspondientes
Evidentemente, estos valores sern para unas condiciones del medio dadas, especialmente en
lo que respecta al pH y a la fuerza inica. Tambin pueden influir otros factores, como la actividad
de agua, la presencia de ligandos, cofactores o sustratos, etc.
RESIDUOS CATALITICOS
Se pueden definir las siguientes reglas para clasificar los residuos de sitios activos como
catalticos:
MUTASAS
La fosfoglicerato mutasa (PGAM) (EC 5.4.2.1) es
una enzima isomerasa que cataliza la octava etapa de
la gliclisis. Cataliza la transferencia interna de un
grupo fosfato desde el carbono C-3 al carbono C-2 que
resulta en la conversin de 3-fosfoglicerato a 2-
fosfoglicerato a travs del compuesto intermedio 2,3-
bisfosfoglicerato. La reaccin implica a dos grupos fosfato
diferentes, es decir el grupo fosfato final del 2-
fosfoglicerato no es el mismo que el grupo fosfato inicial
del 3-fosfoglicerato.
En el estado inicial de la enzima, el sitio activo contiene un complejo fosfohistidina formado por la
fosforilacin de un residuo especfico de histidina. Cuando el 3-fosfoglicerato entra en el sitio
activo, el complejo fosfohistidina se posiciona para facilitar la transferencia del grupo fosfato desde
la enzima al carbono 2 del fosfoglicerato formndose as el compuesto intermedio 2,3-
bisfosfoglicerato. La defosforilacin del residuo de histidina efecta un cambio alostrico local en
la configuracin de la enzima que alinea el grupo fosfato del carbono 3 del bisfosfoglicerato con la
histidina del sitio activo de la enzima y facilita la transferencia del grupo fosfato. De esta forma se
devuelve a la enzima a su estado inicial fosforilado y se libera el producto 2-fosfoglicerato.
ISOZIMAS
La enzima se encuentra en organismos tan simples como las levaduras o tan complejos
como el homo sapiens. Su estructura ha sido bien conservada a travs de la evolucin.
As, el 74% de los residuos de la fosfoglicerato mutasa de las levaduras coincide con los
residuos de la fosfoglicerato mutasa humana. En las levaduras la fosfoglicerato mutasa
es una protena tetramrica. En los mamferos la fosfoglicerato mutasa se presenta como
un dmero de dos subunidades idnticas o casi idnticas de 32 kDa. Las subunidades
pueden ser:
PGAM-M. Llamada fosfoglicerato mutasa 2 o del msculo.
PGAM-B. Llamada fosfoglicerato mutasa 1 o de otros tejidos, aunque el nombre -PGAM-
B proviene de cerebro (B brain) que fue de donde se aisl por primera vez.
En forma de dmero, la enzima entonces se presenta en 3 isozimas dependiendo de que
subunidades forman la molcula (MM, BB o MB). El tipo MM se encuentra
exclusivamente en el msculo liso. El tipo MB se encuentra en el msculo cardiaco y
esqueltico
INMUNOADSORBENTES
Se trata de una tcnica de laboratorio que fue diseada por cientficos suecos y
holandeses en 1971, que permite detectar pequeas partculas llamadas antgenos, que
habitualmente son fragmentos de protenas. Para poder identificar los antgenos se
utilizan molculas con dos componentes acoplados: un anticuerpo (que se une al
antgeno de forma especfica) y una enzima (que se activa y seala la unin al antgeno).
Antes del descubrimiento del ELISA se utilizaban molculas radioactivas en vez de
enzimas, lo que supona un riesgo aadido innecesario en el laboratorio y un mayor
costo.
Revelado de la reaccin Despus de un lavado para eliminar todas las molculas marcadas no fijadas en
forma de inmunocomplejos; se aade el sustrato enzimtico en solucin. Se
enzimtica deja reaccionar y se lee la densidad ptica mediante espectrofotometra
COMPETITIVO NO COMPETITIVO
CONSTANTE DE DISOCIACION
constante de disociacin cida K se puede definir como una relacin entre las concentraciones
de cido disociado y sin disociar.
Por lo tanto, podemos decir que la constante de disociacin cida K, es una medida cuantitativa
de la fuerza de un cido.
Tambin se le llama constante de disociacin cida al pKa, que es el resultado de -log10 Ka.
De esta manera, para los cidos fuertes, con valor elevado de Ka, el pKa es pequeo, mientras
que en cidos dbiles, con Ka de poco valor, es pKa es elevado.
Tomemos por ejemplo el cido actico. Cuando se encuentra en solucin acuosa, este cido
puede perder el protn de su grupo carboxilo, para dar lugar a su base conjugada (acetato). Su
pKa a 25C es de 4.8, lo que significa que en un medio con pH 4,8, ms o menos la mitad de
sus molculas se encontrarn disociadas. Es un cido dbil, y su constante de disociacin Ka a
20 grados Celsius es 1,7510-5.
La biotecnologa enzimtica, utiliza catalizadores biolgicos, entre ellos clulas y enzimas, para
garantizar una actividad ms ecolgica en los procesos industriales. Estos biocatalizadores
presentan ventajas tales como alta especificidad, eficiencia, reduccin de la contaminacin y
ahorro de energa, caractersticas que los hacen aptos para ser empleados en el desarrollo de
nuevos procesos de produccin sostenible, lo que ha representado un incentivo importante para
el desarrollo de la biocatlisis y la tecnologa enzimtica.
A continuacin se ofrece una visin rpida de los procesos enzimticos que actualmente ya se
utilizan en muchos sectores para reducir la carga qumica eliminando, de la produccin industrial,
sustancias agresivas y txicas o simplemente contaminantes
Industria de detergentes:
Degradacin enzimtica de protenas, almidn y manchas de grasa en el lavado de ropa.
Utilizacin de enzimas lipolticas en las sustancias lavaplatos.
Utilizacin de enzimas como tensioactivos.
Industria cervecera:
Degradacin enzimtica del almidn, protenas y glucanos procedentes de la mezcla de
cereales utilizados en la elaboracin de cerveza.
Industria cosmtica:
Produccin biotecnolgica de colgeno y otros productos de aplicacin en cremas de
belleza.
Industria papelera:
Disolucin enzimtica de los pitchs.
Blanqueo ecolgico de la pasta de papel.
Control enzimtico de la viscosidad de los estucados con almidn.