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C.- AFINIDAD
A. CROMATOGRAFA DE INTERCAMBIO INICO.
Usos
1.- Purificar Protenas
2.- Concentrar Protenas
Ventajas
a.- Alta resolucin
b.- Fcil de usar
c.- Resultados altamente reproducibles
d.- Bajo costo.
CROMATOGRAFIA DE INTERCAMBIO IONICO
Selectivity Efficiency
2
VR2- V0 VR1
= N= 5.54 wh
VR1-V0
W= ancho del pico
Vo= Volumen vac o; VR1= Volumen de elucin de peak 1; VR2= Volumen de elucin peak 2;
Vt = Volumen total; w1= Ancho de peak 1; w2= Ancho de peak 2; w3= Ancho de peak 3.
Determinacin de la resolucin (Rs) entre dos peaks
Separacin con diferente resolucin
1.d. Estrategias de elucin.
Para romper las interacciones electrostticas entre la protena y la matriz,
se eleva la concentracin del contra-ion (sal).
Contra iones (sodio o cloruro, bajo PM),
a.- en concentraciones bajas : son desplazados por la protena,
b.- en concentraciones altas : compiten con la protena.
3. Elucin de la Muestra
La protena unida a la matriz puede ser eluida:
a) aumentando la fuerza inica en concentraciones discretas,
b) aumentando la concentracin en forma gradual, en una gradiente
lineal.
4. Algunos problemas.