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protenas y aminocidos
RESUMEN:
Se realiz la hidrlisis de una protena as como su identificacin por medio de distintas pruebas y reacciones, preparando cuatro distintas soluciones
con distintas protenas, la primera solucin fue etiquetada como solucin A y fue grenetina con cido clorhdrico concentrado agua destilada a reflujo, la
segunda solucin etiquetada como solucin B que fue la grenetina hidrolizada neutralizada con hidrxido de sodio al 10%, la tercera solucin
etiquetada como solucin C fue la grenetina sin hidrolizar utilizando agua destilada, la cuarta solucin etiquetada como solucin D, fue la solucin de
albmina preparada con clara de huevo, posteriormente se realizaron pruebas de identificacin de aminocidos en las protenas dichas pruebas
fueron: Reaccin Xantoproteca, reaccin de precipitacin, reaccin de biuret, reaccin con ninhidrina, reaccin con cido nitroso, la accin reguladora
de aminocidos y una cromatografa en placa fina para identificacin de componentes de una protena.
INTRODUCCIN:
Las protenas son biopolmeros de los -aminocido, llamados as debido
a que el grupo amino esta enlazado al tomo de carbono adyacente al
grupo carbonilo. Las propiedades fsicas y qumicas de una protena
estn determinadas por los aminocidos que la constituyen. Las
subunidades individuales de los aminocidos se unen por medio de
Esquema 1. Hidrlisis de una protena
enlaces de amida llamados enlaces peptdicos.
1) Reaccin Xantoproteca:
PRCTICA 11
Esta prueba como sabemos caracteriza a los aminocidos aromticos. reaccionando tanto en la cistena como en la metionina de la albmina
Esta reaccin se debe a la presencia de un grupo fenilo en la molcula que contienen puentes disulfuro.
proteica. Los complejos de la molcula proteica que son de importancia
en esta reaccin son la tirosina y el triptfano. En dos tubos de ensayo
colocamos en el primero 1mL de solucin de grenetina hidrolizada
Esquema 4. Reaccin de precipitacin
(Solucin A) y en el otro, 1mL de solucin de albmina (Solucin D), a
cada tubo agregamos 2.5mL de cido ntrico concentrado, calentamos
lentamente en un bao mara, esto para favorecer la formacin del in
nitronio para que se lleve a cabo la reaccin de nitracin, en esta
reaccin de identificacin esto nos sirvi para poder identificar en que
tubo estaban presentes anillos aromticos, dicha reaccin da positiva
mayoritariamente con la tirosina, al reaccionar obtenemos el anillo de
benceno nitrado, obteniendo un precipitado amarillo del nitrocompuesto.
La reaccin slo dio positiva en la albmina, ya que al analizar la tabla 1, 3) Reaccin de Biuret: Es empleado para detectar la
nos damos cuenta que la albmina tiene el aminocido tirosina, y puesto presencia de protenas o polipptidos, ms especficamente,
que esta reaccin reacciona mayoritariamente en este, obtuvimos un para identificar enlaces peptdicos, cambiando de una
color naranja intenso en este tubo al aadir el hidrxido de sodio, coloracin azul cielo a una azul rey, indicndonos que la
mientras que en el tubo donde estaba la grenetina, no obtuvimos ninguna prueba fue postiva. En seis tubos de ensayo colocamos
coloracin, al no tener aminocidos con anillos aromticos presentes. distintas soluciones, en las cuales colocamos las soluciones
A, C y D, los resultados fueron los siguientes.
SUSTRATO OBSERVACIONES
Agua Destilada Azul cielo
Solucin A (Grenetina Hidrolizada) Sin color
Solucin C (Grenetina sin hidrolizar Azul rey
Solucin D Azul rey
Como podemos darnos cuenta, en los tubos donde se encontr la
solucin de grenetina sin hidrolizar y en donde estaba la solucin de
albmina, dieron la prueba positiva, esto nos quiere decir que en estos
tubos las soluciones que tenan existencia de enlaces peptdicos, esto es
aminos libres en su estructura, esto se debe a que en esos tubos hubo
Tabla 1. Aminocidos de la Albmina una desnaturalizacin de dichas protenas, es decir la estructura terciaria
La reaccin que sucede con la tirosina de la albmina fue la siguiente de las protenas se rompi dejando libres los aminos formando de nuevo
(Esquema 3). los enlaces peptdicos no se hidrolizaron, por ello haba aminos libres
por tanto enlaces peptdicos. (Ver esquema 5).
Sustrato Observaciones
Agua Destilada Negativo, no hubo burbujeo
Solucin A Positivo, mucho burbujeo
Solucin C Negativo, no hubo burbujeo
Solucin D Negativo, no hubo burbujeo
Como podemos darnos cuenta, la nica prueba donde dio positivo fue en
la solucin A, de grenetina hidrolizada, esto quiere decir que la hidrolisis
fue parcial en nuestra solucin, ya que quedaron aminos libres con los Esquema 8. Accin reguladora de aminocidos
cuales pudo reaccionar el cido nitroso y liberar ese nitrgeno gas (Ver 7) Cromatografa en placa fina: En una cromatoplaca
esquema 7). colocamos tres puntos, el primero la solucin de grenetina, en
el siguiente colocamos muestra de fenilalanina y al final glicina,
corrimos la cromatografa en una solucin de isopropanol-agua
(7:3) con 2 gotas de hidrxido de amonio para que no se
corriera toda la placa en un solo rayo, al ser muy polar el
isopropanol con los aminocidos muy polares, la cromatoplaca
se corri muy lento, secamos la cromatoplaca y le aplicamos
solucin de ninhidrina para revelar la placa, obteniendo
Esquema 7. Reaccin con cido Nitroso distintas machas cuyo resultado se muestra a continuacin.
6) Accin Reguladora de Aminocidos
1. Wade, Leroy. Qumica Orgnica, Volumen 2. Sptima. Mxico: 2. Voet, voet, Bioqumica 3 edicin, Mxico, editorial
PEARSON EDUCACION, 2011.pp: 1153-1161 panamericana, 2006, pp:71-100