Artculo de Investigacin

Susceptibilidad antimicrobiana de Escherichia coli aisladas en el Comercializado fresco de la

tilapia del Nilo (Oreochromis niloticus)

Rafael dos Santos Rocha, 1 Lana Oliveira Leite, 1

Oscarina Viana de Sousa, 1 y Regine Helena Silva dos Fernandes Vieira1, 2

1 Laboratorio de Microbiologa Ambiental y Pesca, Instituto de Ciencias Marinas de la

Universidad Federal de Cear, Abolicao Avenida, 3207, 60168-081 Fortaleza, CE, Brasil

2 Departamento de Pesca de Ingeniera de la Universidad Federal de Cear, seor Casco

Avenida, 60356-000 Fortaleza, CE, Brasil

La correspondencia debe ser dirigida a Rafael dos Santos Rocha; rafaelsanro@gmail.com

Recibido el 8 de enero de 2014; Aceptado 10 de marzo 2014; Publicado 07 de abril 2014

Editor Acadmico: Hin-Chung Wong

Copyright 2014 Rafael dos Santos Rocha et al. Esto es un artculo de acceso abierto
distribuido bajo la licencia Creative Commons Attribution . Licencia, que permite el uso
irrestricto, la distribucin y reproduccin en cualquier medio, siempre que el trabajo original es
debidamente citado.

La contaminacin de los mariscos por bacterias de origen fecal, especialmente Escherichia coli,
es un problema sanitario ampliamente documentado. El objetivo del presente estudio fue
aislar cepas de E. coli de la superficie de las branquias, msculo, y el cuerpo de la tilapia del
Nilo de granja (Oreochromis niloticus) frescos comercializados en supermercados en Fortaleza
(Cear , Brasil) , para determinar su susceptibilidad a los antibiticos de diferentes familias
(amikacina , gentamicina , imipenem , cefalotina , cefotaxima , ciprofloxacino , aztreonam ,
ampicilina , nalidxico cido , tetraciclina , trimetoprim y sulfametoxazol) , y para determinar la
naturaleza de la resistencia por el plsmido de curado . Cuarenta y cuatro cepas (superficie
corporal = 25, branquias = 15, msculo = 4) se aislaron, todos los cuales eran susceptibles a la
amikacina, aztreonam, cefotaxima, ciprofloxacino, gentamicina, imipenem y. Muestras de
enmalle y de la superficie corporal produjeron 11 aislamientos resistentes a ampicilina,
tetraciclina y sulfametoxazol - trimetoprim, 4 de las cuales del ndice de resistencia a los
antibiticos naturales. La mltiple resistencia antibitica indic que fue mayor para las cepas
aisladas desde la superficie del cuerpo que de branquias. La alta sensibilidad a los antibiticos
en general de cepas de E. coli aisladas de tilapia fresca comercializada fue satisfactoria,
aunque el hallazgo ocasional de resistencia plasmidial apunta a la necesidad de una estrecha
vigilancia microbiolgica de las condiciones de cultivo, manipulacin y comercializacin de
productos de la acuicultura.
1. Introduccin

La bacteria Escherichia coli se utiliza ampliamente como indicador de la condicin

bacteriolgica de los alimentos y ambientes debido a su origen casi exclusivamente fecal [1]. La
presencia de E. coli en pescados y mariscos recin comercializado indica contaminacin
reciente y por lo general se atribuye a los manipuladores infectados o almacenamiento en
hielos contaminados [2].

La intensificacin de la produccin y el consecuente aumento de la densidad de poblacin han

hecho la piscicultura ms vulnerable a la enfermedad [3, 4]. El uso indiscriminado de
antibiticos para tratar infecciones y promover el crecimiento ha demostrado ser ineficaz en el
largo plazo y para ejercer presin selectiva sobre las poblaciones de bacterias que favorecen el
desarrollo de la resistencia.

De hecho, las cepas bacterianas son resistentes a diferentes familias de antibiticos que se han
aislado a partir de muestras ambientales por un nmero de investigadores [8-10]. Cepas
resistentes de Transmisin Alimentaria a los antibiticos representan un riesgo para la salud de
los consumidores y favorecen la transferencia del fenotipo a los seres humanos a travs de la
cadena alimenticia [11-13]. No hay reportes de enfermedades causadas por E. coli en los peces
de cultivo, pero las cepas resistentes pueden ser seleccionados por el presencia de antibiticos
en el ambiente de cultivo, lo que lleva a la difusin por parte de elementos genticos mviles
de resistencia a la bacterias potencialmente patgenas [14-17].

Debido a la importancia del cultivo de tilapia en el noreste Brasil, el objetivo del presente
estudio fue (a) el de investigar la presencia de E. coli en la tilapia del Nilo recin comercializado
que se obtuvieron de los supermercados en Fortaleza, Brasil, (b) establecer el perfil de
susceptibilidad a antibiticos de cepas de E. coli aisladas de Muestras de tilapia del Nilo, (c)
determinar si la resistencia era potencialmente cromosmicas o plasmidial, y (d) determinar el
ndice de resistencia mltiple a los antibiticos de las cepas aisladas de branquias, msculo, y la
superficie corporal.
2. Materiales y Mtodos

2.1. Toma de muestra. Treinta y seis ejemplares de tilapia del Nilo (Oreochromis niloticus) se
obtuvieron de doce supermercados en Fortaleza (Cear, Brasil). Los especmenes fueron
envasados individualmente en una pelcula de plstico y transportado en hielo enfriado
mediante cajas isotrmicas para el Laboratorio de Productos del mar y Microbiologa
Ambiental del Instituto de Ciencias del Mar (Universidad Federal de Cear) para exmenes
bacteriolgicos inmediata anlisis.

2.2. Aislamiento de Escherichia coli. La investigacin de E. coli seguido las directrices de la

cuarta edicin del Compendio de Mtodos para el anlisis microbiolgico de Alimentos
publicadas por la Asociacin Americana de Salud Pblica [18]. Pruebas presuntivas se
realizaron por separado para las branquias, muscular, y la superficie corporal. Para muestra, la
superficie del cuerpo, un rea que mide 10 10 cm se acarici con un hisopo de algodn estril
empapado previamente en Difco infusin de cerebro corazn (BHI) y posteriormente
sumergido en 9 ml de solucin de NaCl 0,85% (VETEC) diluido en serie a 0.0001. Para muestra,
las branquias, a 25 g alcuota fue homogeneizada en 225 ml de solucin de NaCl 0,85%, se
agit en un agitador magntico durante 30 minutos, y se diluy en serie a 0.000001. Para
muestra el msculo, una alcuota de 25 g se moli y se homogeneizaron en 225 ml de solucin
de NaCl 0,85% y diluida en serie a 0.001. Una alcuota de 1 ml se recuper de cada
solucin salina dilucin y se sembr con tres repeticiones en un tubo de ensayo que
contiene lauril sulfato de 10 ml de triptosa (LST, Difco). La muestras se colocaron a
continuacin en una incubadora bacteriolgica en 35 C durante 48 horas.
Alcuotas de tubos LST positivos fueron sembradas en tubos que contenan 4 ml de
caldo EC y se incubaron en un bao de agua a 45C durante 48 horas. De E. coli se
aisl utilizando placas de agar-eosina azul de metileno (Difco), de los cuales 3-5
colonias sospechosas de E. coli fueron seleccionados y sometidos a Pruebas IMViC.
Las colonias fueron consideradas como de E. coli cuando dio positivo en la prueba
de indol y de rojo de metilo, negativa en el Voges-Proskauer y prueba de citrato y
Gram-negativa con varillas cortas en la prueba de tincin de Gram [16].

2.3. Susceptibilidad antimicrobiana. El antibiograma se hizo con el mtodo de

difusin del disco [19] con Mueller-Hintonagar (Difco) . Se utiliz la cepa estndar de
E. coli ATCC 25922como control positivo [18]. Inicialmente, una emulsin de la
muestra en solucin salina se prepar por el ajuste a la 0,5 McFarland patrn de
turbidez, lo que equivale a 1 108 UFC ml - 1 (CLSI 2010). La susceptibilidad de
las cepas de E. coli se prob en relacin con varias familias de antibiticos,
incluyendo la familia de los aminoglicsidos : amikacina (IAM , 30 mg ) y
gentamicina( GEN ; 10 mg ); la familia carbapenem : imipenem (IMP ;30 mg ); la
familia de las cefalosporinas : cefalotina (CET ; 30 mg)y cefotaxima (CTX ; 30 mg);
la familia de las fluor-oquinolonas: ciprofloxacina (CIP ; 5 mg ); la familia
monoatmico : aztreonam (ATM ; 30 mg ); la familia de las penicilinas : ampicilina
(AMP ; 30 mg );la familia de las quinolonas: cido nalidxico (NAL ; 30 mg ); la
sulfonamida familia: sulfametoxazol - trimetoprim (SUT ; 25 mg ); y la familia de las
tetraciclinas: la tetraciclina (TC ; 30 mg). Utilizando pinzas estriles, los discos de
antibiticos disponibles en el mercado (Laborclin) se colocaron individualmente
sobre la superficie de agar de Mueller-Hinton. Despus de 24 horas de incubacin a
35 C, las cepas fueron marcado como "susceptible", "intermedio", o "resistente" a
cada uno de los antibiticos basados en la medicin del halo de inhibicin, segn lo
recomendado por el CLSI [20].

2.4. ndice MAR. La resistencia a mltiples antibiticos (MAR) ndice se determin

por el nmero total de cepas de E. coli de cada tipo de tejido muestreado
(branquias, msculo, y el cuerpo superficie) utilizando la frmula / ( ), donde
es total puntuacin de resistencia de las cepas, es el nmero total de familias de
los antibiticos probados, y es el nmero de cepas de cada uno tipo de muestra de
tejido [21].

2.5. El plsmido de curado. Se presentaron las cepas de E. coli resistentes al

plsmido curado usando el tinte naranja de acridina a 100 g ml-1 (Sigma).
Despus de la exposicin al mutgeno, las cepas fueron a reexponerse a los
antibiticos que inicialmente fueron resistentes [22].

3. Resultados y Discusin

Cuarenta y cuatro de los aislados fueron confirmados como E. coli, 25 (56,82%) de las cuales
fueron aisladas de las branquias, 15 (34,09%) de la superficie del cuerpo, y 4 (9,09%) a partir
del msculo. Once cepas de E. coli aisladas de las branquias y la superficie corporal fueron
resistentes a la AMP, IVU, y TC, sobre todo a la ltima de estas (branquias = 4; superficie
= 3). Por otro lado, las cepas aisladas de muestras de msculo fueron susceptibles a todos los
antibiticos probados (Tabla 1). Todas las cepas aisladas de las branquias, msculo y rgano
superficie fueron susceptibles a AMI, ATM, CET, CTX, CIP, GEN, e IMP.

Segn algunos autores, las branquias tienen una mayor diversificacin microbiota, cualitativa y
cuantitativamente, debido a su contacto directo con el agua, especialmente en alimentadores
de plancton tales como la tilapia del Nilo [23-26]. Mandal et al. [27] tambin detectado E. coli
en muestras de msculo de tilapia del Nilo, pero muchos autores creen que el msculo es un
tejido relativamente inocuo [28-30]. Sin embargo, el msculo puede contaminarse durante
cosecha, un proceso estresante que a menudo causa dao a la superficie del cuerpo, y / o
durante el almacenamiento en hielo contaminada [31, 32]. Molinari et al. [33] aade que la E.
coli se encuentra comnmente en el intestino de la tilapia; por lo tanto, para estos autores, su
presencia en el msculo es una indicacin de las prcticas de manipulacin pobres.

Se observaron cuatro perfiles de resistencia en este estudio: resistencia a la TC ( = 5), la

resistencia a AMP ( = 4), la resistencia a IVU + Tc ( = 1), y la resistencia a Amp + IVU + Tc
( = 1) (Tabla 2). Los perfiles SUT + TC y AMP + IVU + TC intervenido ms de un tipo de
medicamentos y eran, por tanto, considerados perfiles de resistencia a mltiples antibiticos
[21]. La ndices MAR para las cepas aisladas de la superficie del cuerpo y agallas fueron 0,037 y
0,026, respectivamente.

En un estudio realizado por Jiao et al. [34] sobre la presencia de E. coli en el intestino de tilapia
del Nilo, las cepas aisladas fueron susceptibles a la AMI, ATM, CTX y GEN, igualando nuestros
propios hallazgos y el apoyo a la idea de que estos antibiticos son poco utilizados en la
acuicultura. Cepas de E. coli resistentes a la AMP, SUT, y TC tambin fueron denunciados por
Ryu et al. [12]. Del mismo modo, Se encontraron cepas resistentes de E. coli a TC por Wang et
al. [35].