Ingeniera Bioqumica II

Cursada 2006

CULTIVO DISCONTINUO ALIMENTADO

(BATCH ALIMENTADO)

Otro modo de operar un biorreactor es empleando la tcnica de batch alimentado

(BA) o fed batch. Esta tcnica se define como un cultivo en batch donde se alimenta
continuamente medio nutritivo fresco o alguno de sus componentes. Si el nutriente que se
alimenta es el limitante del crecimiento, esta tcnica permite controlar la velocidad de
crecimiento () del microorganismo.
El BA es particularmente til en procesos en los que el crecimiento celular y/o la
formacin de producto son sensibles a la concentracin del sustrato limitante, es decir
cuando el rendimiento celular o la poductividad de la biomasa o del metabolito buscado se
ven afectados. As, este mtodo se emplea cuando se quieren evitar fenmenos de
inhibicin por sustrato y se requiere alcanzar una alta concentracin de biomasa.

ESQUEMA

F(t)
SR(t)

Vf, Xf

VR = Vf - V0

V0, X0, S0

RESERVORIO BOMBA
BIORREACTOR

Donde F(t): caudal de alimentacin

Sr(t):concentracin de sustrato de la alimentacin
Vf: volumen final de trabajo
Vo: volumen al inicio de la alimentacin
Xo: concentracin de biomasa al inicio de la alimentacin
So: concentracin de sustrato limitante al inicio de la alimentacin

El cultivo BA se inicia a partir de un cultivo en batch, por lo que V o, Xo y So son las

condiciones finales de dicho batch.
Es posible elegir distintas condiciones de alimentacin, ya sea mediante el empleo de
caudales variables (F = F(t)), o bien mediante la variacin de la concentracin de sustrato
limitante (Sr=Sr(t)). En el caso del Trabajo Prctico se utilizar el sistema ms simple, es
decir F=cte y Sr=cte.

PRODUCCION DE BIOMASA: ECUACIONES Y DISEO

El cultivo puede describirse matemticamente. La resolucin de las ecuaciones as

obtenidas permitir calcular la evolucin de la biomasa durante el cultivo, la velocidad
especfica de crecimiento, y la productividad. Asimismo se podrn determinar parmetros de
diseo, tales como F y Sr.
Para estudiar la evolucin de X durante el cultivo se deben plantear las ecuaciones
de balance de materia.

SUSTRATO
acumulacin = suministro - consumo

1
 d(S. V) xV
(1) F SR
dt Yx/s

En este caso el volumen no es constante, como ocurre en cultivos en batch o en

continuo. Por lo tanto la expresin (1) quedar:

dS dV xV
(2) V S F.S R
dt dt Yx/s

La condicin final del batch es S = 0, pues, como se intenta controlar , S no puede

ser saturante (recordar a Monod).
Si S~ 0, dS/dt = 0, con lo que (2) se transforma en

xV
(3)F . SR - 0
Yx/ s

de aqu, y recordando que r x = . X

rx V
(4) F . SR =
Yx/ s

esta ecuacin indica que la velocidad de produccin de biomasa se acomoda a la velocidad

de suministro de sustrato, es decir que r x puede controlarse externamente, modificando F
y/o Sr.
La ecuacin (3) es en realidad un lmite superior ya que dados , X y V, cualquier par
de valores F, Sr que satisfagan la condicin

xV
(4) F . SR Y
x /s

harn que la velocidad de crecimiento est limitada por la velocidad de alimentacin. Esta
ecuacin (3) ser muy til en el momento de disear la alimentacin.

BIOMASA
La velocidad de acumulacin de biomasa ser:

d(xV) d (xV)
(5) x V o bien rx V
dt dt

o, reordenando,
1 d(xV)
(6) rx =
V dt
Si se reemplaza en (4) se obtiene
1 d (x V)
(7) F . SR =
Yx/s dt

que indica que la velocidad de acumulacin de biomasa depende de la velocidad de

alimentacin de sustrato.
Integrando (7), se llega a

(8) X V = xo Vo + Yx/s F SR t

Uno de los objetivos planteados es conocer cmo vara la concentracin de biomasa

con el tiempo. En cultivo en batch, al ser V = cte, X.V es proporcional a X. En BA V no es
constante, sino que vara con el tiempo (F = dV/dt). Integrando se tiene

(9) V = Vo + F t

reemplazando en (8) y despejando X, se tendr

x o Vo Y FS t
(10) X= x/s R
Ft + Vo Ft + Vo

2
expresin que describe la variacin de X con t a lo largo del cultivo alimentado. Puede darse
el caso en que el aumento de V sea tal que haya un efecto de dilucin que provoque la
disminucin de la concentracin de biomasa. As, puede ocurrir que la concentracin final
alcanzada sea menor que la inicial, pero no as la cantidad total X.V.

DISEO

Se desea obtener una concentracin final de biomasa X f, con un volumen final Vf. El
volumen total adicionado durante el BA ser:

(11) Vf - Vo = F.t

donde tf es el tiempo total de alimentacin. Cuando t = t f, la ecuacin (8) se transforma en

(12) XfVf = XoVo + Yx s SR F.tf

Reemplazando (11) en (12), y despejando S r queda

X f V f X oVo
(13) SR =
Yx s (V f Vo )

La ecuacin (13) permite calcular la concentracin de sustrato limitante en el

reservorio. Resta calcular F, cuyo valor debe ser tal que satisfaga la ecuacin (4). En
particular, para t = 0 (inicio de la alimentacin )ser:

o X oVo
(14) F SR ``
Yx s

El valor de tf se calcula a partir de la ecuacin (11).

NOTA: o puede ser igual a max si la alimentacin se inicia el final de la fase exponencial del
batch.

Debe destacarse que si F.S r fuera mayor que la velocidad de consumo de sustrato,
habra una acumulacin de sustrato en el medio, y el crecimiento no sera limitado.

Es interesante conocer la variacin de durante el batch alimentado. Recordando el

balance de materia para la biomasa

d ( xV) 1 d ( xV)
xV =
dt xV dt

d ( xV )
Yx s FS R
dt

Por lo tanto se obtiene

1
(15) = Yx s FS R
xV

Si se reemplaza (8) en (15), ser

FS RYx s
(16) = X V FS Y t
o o R x s

expresin que indica que disminuye con t a lo largo del batch alimentado.

Puede representarse un cultivo en batch alimentado operando en las condiciones

halladas.

3
 S0'
X.V = X0.V0 + F.SR.YX/S.t
X0.V0 < max

X.V

= max

X0'.V0' S0 = 0

BATCH t = t0 BATCH ALIMENTADO t

Al obtener valores de Sr y F, se ha DISEADO una alimentacin para el cultivo en

batch alimentado. El caso descrito hasta aqu tiene en cuenta que tanto F como S r sean
constantes. Es claro que en caso de ser F = F(t) y/o Sr = Sr(t), dicha funcionalidad habr de
ser tenida en cuenta para resolver las ecuaciones planteadas.

COEFICIENTE DE MANTENIMIENTO CELULAR

Los microorganismos requieren energa para mantener ciertas funciones especficas,

tales como recambio de material celular, trabajo osmtico, movilidad, entre otros. Esto es
decir que an cuando el crecimiento celular sea nulo (r x = 0) puede observarse cierto
consumo de fuente de carbono y energa.
As, puede escribirse una ecuacin para expresar la velocidad de consumo de la
fuente de carbono y energa que tenga en cuenta dicho mantenimiento celular

rx
(1) rs = ms x con rx = X (2)
Yx s

Esta es la famosa ecuacin lineal de consumo de sustrato descrita por Pirt, donde:
ms : COEFICIENTE DE MANTENIMIENTO (g sustrato / g biomasa . hora)
Yx/s : rendimiento terico (rendimiento obtenido si no hubiera consumo de fuente de
carbono y energa para mantenimiento)
El valor de Yx/s es mayor que Yx/s, siendo ste el nico posible de ser obtenido a partir
de datos experimentales.
El coeficiente ms puede variar en un amplio intervalo (0,01 - 0,1 g/g.h). ms aumenta
con la temperatura, con el aumento de presin osmtica y con la fuerza inica. Es evidente
que se debe tratar de trabajar en condiciones tales que m s sea bajo si se desea obtener un
alto rendimiento en biomasa.
Las ecuaciones que describen un cultivo en batch alimentado pueden adaptarse para
el caso en que ms 0 (lo que tal vez sea ms real que considerar ms = 0)

El balance de materia para la biomasa ser

d ( xV)
(3) xV
dt

y para el sustrato

d (sV)
FS R rs V 0
dt (4)

que se iguala a 0 por ser crecimiento restricto. Reemplazando (1) y (2) en (4) llegamos a

d ( SV ) xV
(5) F. SR ms xV 0
dt Yx/ s

Si introducimos (3) en (5), ser

4
 1 d ( xV)
(6) F. S R m s xV 0
Yx/ s dt

y reordenando

d ( xV)
(7) m s Yx/ s xV Yx/ s FS R
dt

Debe notarse que si ms = 0, esta es la expresin de velocidad de acumulacin de biomasa

para batch alimentado.

Integrando, con X = Xo y V = Vo para t = 0, obtenemos

FS R FS R msYx / s t
(8) xV x o Vo e
ms ms

(NOTA): para integrar, hacer la sustitucin

Z = Yx/s F SR - ms Yx/s xV

La variacin de X.V con t puede representarse grficamente

ms = 0

ms > 0
X.V

X0.V0

t0 t

En (X.V)max = cte, ser d(X.V)/dt = 0. Por lo tanto, de (7) surge que

(X.V)max = F.Sr / ms
Esto significa que todo el sustrato se utiliza en mantenimiento, y la concentracin
celular X disminuye, pues hay una gran dilucin del sistema. Esto puede analizarse desde el
punto de vista de

d(X.V)/dt = 0 = rx.V
o sea, rx = 0
Con estas consideraciones puede evaluarse ms.

De la ecuacin (6 ) surge que

F. S R 1 d ( xV) 1
(9) ms =
xV Yx/ s dt xV

Experimentalmente podrn encontrarse tres casos:

a) X.V = cte, lo cual implica que

F.S R
(10) ms
xV

b) Acumulacin de biomasa, es decir d(xV)/dt 0. Por lo tanto

F. S R
(11) ms
xV

5
c) Disminucin de la biomasa: d(xV)/dt < 0. En este caso ser

F. S R
(12) ms
xV

(Este ltimo caso se explica mediante el llamado modelo del metabolismo endgeno)