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FACULTAD DE CIENCIAS BIOQUMICAS Y

FARMACUTICAS

TRABAJO PRCTICO N 2: REPARTO DE

AFINIDAD

MATERIA: Procesos Biotecnolgicos I

DOCENTES: Eberhardt, Florencia

Tubio, Gisela

COMISIN: 2

ALUMNOS: Battista, Bernab

Brtolo, Luca
OBJETIVOS
Analizar el principio de extraccin utilizando sistemas bifsicos acuosos de afinidad empleando un ligando
libre.

DESARROLLO DEL PRCTICO

1 ETAPA

Se prepar un sistema bifsico acuoso (SBA) de Maltodextrina (Mdx) y PEG6000, siguiendo las proporciones
dadas por la siguiente tabla:

GRUPO DE TRABAJO COMPOSICIN DE SBA MASA A AGREGAR

PARA ARMAR SBA

PEG (%P/P) Mdx (%P/P) PEG (g) Mdx (g) AGUA (g)

1 5 25 5,6 28,1 11,3

Clculos:

Masa total: 45 g (se trabaj en un tubo Falcon de 50 mL, considerando densidad unitaria, y se eligi esta masa
total para no exceder las dimensiones del recipiente).

Masa PEG = 45 g . 0,05 = 2,25 g

Masa Mdx = 45 g . 0,25 = 11,25 g
[PEG]inicial = 40% P/P
[Mdx]inicial = 40% P/P

40 g PEG-------100g solucin 40 g Mdx-------100 g solucin

2,25 g PEG-----X= 5,6 g solucin 11,25 g Mdx----X= 38,1 g solucin

Una vez preparada la mezcla, se agit suavemente durante 5 minutos, luego se dej en reposo por la misma
cantidad de tiempo y finalmente se centrifug a 5000 RPM por 5 minutos. De esta manera se obtuvo un
sistema de dos fases definidas, con las siguientes caractersticas:

2 ETAPA
Se arm un nico sistema por triplicado con las fases superior e inferior de la primera etapa, conteniendo 3 g
de cada fase cada uno (6 g totales). Posteriormente, los grupos adicionaron diferentes volmenes del colorante
Reactive Yellow 2 (RY2). Para que se estableciera el reparto en las diferentes fases, se agit el sistema durante
5 minutos y luego se lo dej reposar la misma cantidad de tiempo para finalmente centrifugarlo a 5000 RPM
durante 5 minutos.
A continuacin, se extrajeron alcuotas (50 L) de cada fase y se las llev a un volumen final de 2 mL con
agua. Se determin la absorbancia utilizando un mtodo espectrofotomtrico.

RESULTADOS
SBA absorbancia a 407 nm GRUPO DE TRABAJO

1 2 3

A F. Superior 0,109 0,192 0,209

F. Inferior 0,910 1,030 0,804

B F. Superior 0,108 0,243 0,306

F. Inferior 0,847 1,101 0,992

C F. Superior 0,107 0,261 0,353

F. Inferior 0,740 1,268 1,036

PROMEDIO SUPERIOR 0,108 0,232 0,317

PROMEDIO INFERIOR 0,832 1,133 0,944

PROCESAMIENTO DE DATOS

Considerando la curva de calibracin Abs vs. [RY2] previamente realizada ( Abs = 0,0139 + 115,3733 [RY2]),
fue posible calcular la concentracin de colorante RY2 para ambas fases en el volumen total de 2 mL
([RY2]dil). Una vez obtenidas las concentraciones el colorante en las diluciones, se pudieron calcular las
concentraciones originales de colorante en cada fase ([RY2]F), datos necesarios para calcular la Kr segn la
ecuacin:

Kr = [RY2]sup/[RY2]inf

Asumiendo que el colorante posee densidad unitaria, fue posible obtener la masa de colorante presente en cada
fase, posibilitando el clculo de rendimiento, segn la siguiente ecuacin:

R% fase = (masa RY2 en fase)/ (masa RY2 sembrada SBA)

SBA GRUPO DE TRABAJO

1 2 3

Abs F. Superior (promedio) 0,108 0,232 0,317

Abs F. Inferior (promedio) 0,832 1,133 0,944

[RY2] F. Superior, dil (%P/P) 8,16 x10-4 1,89 x10-3 2,60 x10-3

[RY2] F. Inferior, dil (%P/P) 7,09 x10-3 9,69 x10-3 7,80 x10-3

[RY2] F. Superior (%P/P) 0,033 0,076 0,111

[RY2] F. Inferior (%P/P) 0,243 0,387 0,322

[RY2] SBA (%P/P) sembrada 0,030 0,050 0,070

Masa de RY2 sembrada en SBA (mg) 1,728 3,024 4,320

Masa RY2 Superior (mg) 0,978 2,270 3,336

Masa RY2 Inferior (mg) 7,280 11,600 9,670

Kr 0,134 0,195 0,345

R% F. Superior

R% F.Inferior

(Los siguientes tres grficos estn hechos en funcin de la concentracin de RY2 sembrada en cada sistestema)
CONCLUSIONES
Dado que el valor de las constantes de reparto obtenidas es siempre menor a la unidad, el colorante RY2 posee
una mayor afinidad por la fase inferior (rica en maltodextrina). A pesar de este hecho, a medida que aumenta
la concentracin de RY2 sembrado, el valor de estas constantes incrementa, acercndose ms a uno, lo cual
sugiere que las molculas de colorante empiezan a pasar a la fase superior. Esto ltimo puede deberse a que al
aumentar el nmero de molculas totales en la fase inferior, ests comiencen a competir por el polmero,
haciendo que algunas sean excluidas hacia la fase superior. A su vez lo dicho anteriormente justifica el
incremento del rendimiento porcentual en la fase superior conforme a aumenta la concentracin de colorante
sembrado en el sistema bifsico.
Viendo los resultados de los mg de RY2 obtenidos en la fase inferior se asume que hubo problemas con las
mediciones de absorbancia con respecto a esta fase, ya que los miligramos obtenidos en esta fase para los tres
casos son mayores a los miligramos totales sembrados en el sistema.