PRACTICA N 6

IDENTIFICACION DE AMINOACIDOS

1. Introduccin

Los aminocidos que constituyen alas protenas, son sunstancias que tienen
como caracterstica general el hecho de poseer un carboxilo libre y
un grupo amino, situado en el carbono alfa con respecto al carboxilo. En todos
los aminocidos alfa que forman a las protenas, e
grupo amino alfa es un grupo primario, es decir que no tiene sustituyentes. La
nica excepcin ocurre con la prolina, que es un
aminocido, ya que su grupo es secundario.

Los aminocidos difieren entre s nicamente por las caractersticas del resto
de su molcula o cadena lateral (R), de manera que su formula general es
propiedades de cada aminocido depende tanto de su grupo carboxlico como
de su grupo amino alfa, y de su cadena lateral (R). En un
polmero lineal de aminocidos opolipptido, de todos los gruposcarboxilo alfa y
amino de losaminocidos que intervienen, soloquedan libres un grupo amino
alfa, el grupo terminal y un grupo carboxilo alfa, el grupo carboxilo terminal.
As pues, en una protena las cadenas.
MARCO TEORICO

Los grupos R de los aminocidos son diversos, por lo que pueden reaccionar
de varias maneras. As, aminocidos como al cido asprtico y el cido
glutmico poseen un segundo cido carboxlico, la lisina, posee un segundo
grupo amino. Adems, otros aminocidos con grupos laterales reactivos son: la
cistena (-SH), la arginina (guanidio), la histidina (imidazol), la serina, la
treonina y la tirosina (alcoholes), la asparagina y la glutamina (amidas), la
metionina (un tioeter) y el triptofano (indol).

La reactividad de estos grupos funcionales ha sido aprovechada de diversas

maneras en el estudio y anlisis de las protenas. Como un ejemplo, se
menciona el caso de las lisinas, que reaccionan con aldehdos (carbonilo) para
formar bases de shift, esto se ha aprovechado para producir un papel
aldehdico, al que las protenas se unen covalentemente , lo que permite fijarlas
para su estudio.

Tambin es posible hacer reaccionar las cistenas o las lisinas con diversos
grupos qumicos reactivos presentes en resinas, con lo que es posible unir
protenas a materiales para columnas de cromatografa y fabricar columnas con
enzimas inmovilizadas, anticuerpos y receptores estere o selectivos para
ligandos especficos.

Una tercera aplicacin de la reactividad de los restos laterales de los

aminocidos est en identificar el tipo de aminocidos involucrados
directamente en cierta funcin de unas protenas. As. Por ejemplo, si un
residuo de cistena participa en el reconocimiento de un ligando especfico, al
modificar este residuo con metil-metano-tiosulfonato, la protena pierde su
actividad biolgica. En cambio, si el metil-metano-tiosulfonato se aade cuando
el ligando est presente, la presencia del ligando protege a la cistena con la
que interacta y evita la prdida de la funcin.

Adems, las propiedades qumicas de los aminocidos ciertamente son

aprovechadas por los sistemas vivos para realizar diferentes funciones.
MATERIALES

Tubo de ensayo Bao Maria

Gradilla Gotero de plstico
Pipeta Beacker 100 ml
Mechero Lentes de proteccin


REACTIVOS

SOLUCION de proteina de huevo(separara

de la yema,disolverlo en un volumen
20 veces mayor de agua destilada,filtrar
a travez de varias capas de gasa y consevarlo.
Proteina de huevo fresco no diluida.
Hidroxido de sodio al 10%
Acido acetico glacial
Acetato de plomo al 5 %
Reactivo de biuret (ninhidrina al 1 %)
Tirosina al 1%
Triptofano al 1 %
Fenilalanina al 1 %
Cisteina al 1%

PROCEDIMIENTO

1.- REACCION DE LA NINHIDRINA:

Al realizar este ensayo se encontr que el reactivo ninhidrina reaccion

con el grupo alfa-amino libre (al ser sometidos a calentamiento) de los
aminocidos), la solucin de albmina de huevo diluida (++), la muestra
problema (++),
 . Reaccin
general de la
ninhidrina con los
aminocidos

Colocar

en 1 tubo de
ensayo 5
gotas
de solucin protena de huevo, en otro alfa
alanina y en el tercero beta alanina. Agregamos a cada tubo 2
gotas del reactivo de ninhidrina, calentamos hasta ebullicin y
luego de que paso de 1 a 3 minutos observamos la
aparicin de coloracin.
.

2.- REACCION DEL MILLON

Con el milln fue positivo para tirosina

(color rojo ), albmina de huevo (rojo claro )
indicando la presencia de tirosina en dichas
muestras, ya que la prueba es especfica para
este aminocido, el cual contiene un anillo de
benceno al que se une un grupo
hidroxilo .En esta prueba los compuestos
mercricos en medio fuertemente cido
(cido ntrico del reactivo) se condensan
con el grupo fenlico formando un
compuesto de color rojo ladrillo o rojizo


En un tubo de ensayo colocar 5 gotas de la solucin de protena de
huevo en otro tirosina y en un tercero fenilalanina, a cada uno de ellos
se le aade 3 gotas del reactivo de milln y cuidadosamente calentamos
a bao maria,agua no menos de 50 C .

3.- REACCION XANTOPROTEICA

se presentaron los resultados

positivos de las diferentes
muestras(tirosina,albmina) s
e evidenci que
inicialmente la coloracin fue l
a
esperada para dicha prueba
y de igual forma para la
confirmacin con el NaOH ,
este cambio se debe a que se produce la nitracin del anillo bencnico
presente en los aminocidos aromticos como lo son
tirosina , fenilalanina y triptfano, obtenindose
nitrocompuestos de color amarillo, que se vuelven anaranjado en medio
fuertemente alcalino (formacin de cido picrmico o trinitrofenol


En un tubo de ensayo colocamos 5

gotas de solucin de protena de
huevo,en otro tirosina y en el tercer
tubo fenilalanina y en el cuarto
histidina. A cada uno de ellos
aadimos 3 gotas de acido ntrico
concentrado y con cuidado
calentamos a ebullicin, observamos
la coloracin y el contenido del tubo
lo enfriamos a bajo chorro de agua
luego a cada uno por gotas aadimos
solucin de NaOH.

4.- REACCION DE BIURET

La Prueba de Biuret es un ensayo general para las protenas. Cuando una protena
reacciona con el cobre (II) sulfato (azul), la prueba positiva es la formacin de un
complejo de color violeta.

 En un tubo colocamos 5 gotas de solucin proteica de huevo, en otro
glicilglicina y en el tercero glicina. A cada tubo agregamos 2 gotas del
reactivo de biuret, agitamos suavemente y observamos.

5.- REACCION DE ADAMKIEWICK SOBRE TRITOFANO.

La reaccin Adamkiewick, o tambin conocida como reaccin de

Hopkins-Cole en la cual los derivados del indol dan productos de
condensacin cuando se tratan con aldehdos aromticos en presencia
de acido sulfrico o clorhdrico, esta es una prueba especfica para el
triptfano , al ser el nico aminocido con el grupo indol presente, la
 reaccin con dicho aminocido presenta un anillo violeta en la interface.
La estructura exacta del compuesto violeta no se conoce, pero parece
estar relacionado con el producto de condensacin del aldehdo del
cido Glioxlico con los nitrgenos de dos anillos indlicos, como se
muestra en la reaccin, ya que tambin se pueden formar complejos con
otros aldehdos. La reaccin general est dada de la siguiente manera

El triptfano

Es un aminocido aromtico, el grupo R contiene una
estructura heterocclica denominada indol, el indol es un
anillo bencnico fusionado con los enlaces C2-C3 del pirrol.
Es un aminocido no polar y segn su conformacin esde
esperar que tambin reaccione a la prueba xantroproteica.El Reactivo de
Adamkiewick es una disolucin de Acido Glioxilico en agua que
almezclarse con el triptfano el grupo carbonilo del acido glioxilico se
condensa con el grupo indol generando un color purpura en presencia
de acido sulfrico(H2SO4)como agente deshidratante. Se observo
claramente una coloracin violeta en la interface del acido sulfrico y la
solucin debido a una reaccin especifica con el grupo -R (indol) del
triptfano, como reaccin especifica para este aminocido. El triptfano
puro no da la reacciona menos que contenga

indicios de iones frricos o cpricos. Los cloratos, nitratos, nitritos y

cloruros en exceso impiden la reaccin.(Vejar.2005)El triptfano es un
aminocido fundamental cuando le ocurre una descarboxilacin y
produce triptamina, fundamental para el sistema nervioso y el cerebro, al
reaccionar con un grupo OH u obtener la serotonina, un neurotransmisor
y vaso conductor del sistema nervioso central.

Procedimiento:

en un tubo de ensayo colocamos 2 gotas de protena no diluida de

huevo fresco en oro solucin de triptofano,a cada uno agregamos 10
gots de acido actico glacial y cuidadosamente calentamos ambos hasta
 l disolucin del preciptadp formado en el primer tubo, luego enfriamos,
con cuidado inclinamos el tubo y por la pared del tubo agregamos con la
pipeta de 1 ml acido sulfrico concentrado,cuidando que los liquidos no
se mezclen.

En el limite de las dos capas suge un anillo coloreado caracterstico .

CONCLUSIONES

Las protenas constituyen una de las molculas ms importantes en el

organismo, ya que cumple muchas funciones.

*Las reacciones se utiliza en trabajos analticos, as como en la

visualizacin de las bandas de los aminocidos despus de su separacin
por electroforesis o por cromatografa.

*Las protenas estn constituidos por aminocidos, por los cuales los
mtodos se basan en el reconocimiento de los amincidos.
 Indicamos la presencia de protenas en diferentes muestras de alimentos
mediante pruebas cualitativas, del mismo modo identificamos algunos de
los aminocidos presentes en ellas por medio de las reacciones que
ocurrieron en cada caso de acuerdo al radical o al grupo que caracteriza al
aminocido. Identificamos estructuralmente diferentes aminocidos
presentes en determinadas protenas o en su defecto como aminocidos
libres. Por medio de la marcha analtica, identificamos, que la muestra
problema en su composicin contiene albminas. Segn los resultados
contiene varios tipos de aminocidos .Las pruebas realizadas no
permitieron reconocer aminocidos esenciales el triptfano al parecer por
error es durante la realizacin de la prctica o por el estado de los
reactivos.

CONCLUSIONES

Para la reaccion de ninhidrina, observamos que dio positivo para

la muestraproblema, la metionina. En el caso de la albumina solo se noto
una levecoloracion opaca tipo blancusca, y teniendo en cuanta las
demascoloraciones en tonos de violeta diferentes podemos concluir que
podrianhaber deficiencia en la preparacion del reactivo, el cual nos permite
laidentificacion de los aminoacidos.
 La reaccion xantroproteica obserbamos resultados positivos para
eltiptofano, albumina y muestra problema, debido a sus
anillosfenlicos, los cuales por la nitracin del anillo bencnicopresente en
los residuos de aminocidos y la albumina se obtubieron
nitrocompuestosde color amarillo. Los anillos Benceno del Triptofano estn
activados y reaccionanfcilmente, mientras que el benceno de la
Fenilalanina no tiene sustituyentes que loactivan y no reacciona o
reacciona con ms dificultad.

La reaccin de dio positiva para triptofano, como reaccion especifica

para esteaminoacido, al ser el unico que posee un grupo indol en su
estructura molecular. Estaprueba tambien permite determinar la presencia
de tiptofano en proteinas como laalbumina, sin embargo hay que tener en
cuanta que la reaccion no sera totalmentepositiva o puede arrojar
resultados errados si el triptofano se encuantra en estado
puroy no hay la presencia de oxidantes. La reaccion del grupo indol deltript
ofanocon el cido glioxlico en presencia decido sulfrico concentrado,
dan positivo alobservarse el anillo violeta.

La reaccion de tiogrupos para la deteccion de aminoacidosazufrados

dio positivo para cistina, metionina y albumina,confirmando la existencia del
grupo -S en la estructura

molecular. Sin embargo hay que mencionar que no se observocomo tal

un precipitado oscuro sino una coloracion

CUESTIONARIO

1. cules son los aminocidos esenciales y con que pruebas

especficas podra diferenciar?

AMINOCIDOS ESENCIALES:


Isoleucina:

Junto con la L-Leucina y la hormona del crecimiento intervienen en la

formacin y reparacin del tejido muscular.

Leucina:

Junto con la L-Isoleucina y la hormona del crecimiento (HG), interviene

con la formacin y reparacin del tejido muscular.

Lisina:

Es uno de los ms importantes aminocidos porque, en asociacin con

varios aminocidos ms, interviene en diversas funciones, incluyendo el
crecimiento,reparacin de tejidos, anticuerpos del sistema inmunolgico
y sntesis de hormonas

Metionina:

Colabora en la sntesis de protenas y constituye el principal limitante en

las protenas de la dieta. El aminocido limitante, determina el
porcentaje de alimento que va a utilizarse a nivel celular.

Fenilalanina:

Interviene en la produccin del colgeno, fundamentalmente en la

estructura de la piel y el tejido conectivo, y tambin en la formacin de
diversas neuro-hormonas.

Triptfano:

Est implicado en el crecimiento y en la produccin hormonal,

16especialmente en la funcin de las glndulas de secrecin adrenal.

Tambin interviene,en la sntesis de la serotonina, neuro-hormona
involucrada en la relajacin y el sueo.

Treonina:
 Junto con la con la L-Metionina y el cido Asprtico, ayuda al hgado en
sus funciones generales de desintoxicacin.

Valina:

Estimula el crecimiento y reparacin de los tejidos, el mantenimiento de

diversos sistemas y balance de nitrgeno

2.- A que se denomina Zwitterion?

Un zwitterin (del alemn "zwitter" "hbrido", "hermafrodita") es un

compuesto qumico que es elctricamente neutro pero que tiene cargas
formales positivas y negativas sobre tomos diferentes.1 Los
zwitteriones son especies polares y usualmente presentan una elevada
solubilidad en agua y bastante baja en muchos disolventes orgnicos de
carcter apolar.

Los anfteros son molculas que contienen grupos cidos y grupos

bsicos (y son, por tanto, anfteros) existiendo como iones dipolares en
ciertos intervalos de pH. El pH al cual todas las molculas estn en la
forma de ion dipolar se conoce como punto isoelctrico de la molcula.
Las molculas anfolitas son excelentes para la elaboracin de las
disoluciones tampn ya que soportan leves adiciones de cidos o bases
amortiguando los cambios de pH de la disolucin por ionizacin
selectiva. En presencia de cidos, estas molculas aceptarn iones
hidrgeno, eliminndolos de la disolucin. Por el contrario, en presencia
de bases, soltarn iones hidrgeno a la disolucin, amortiguando
igualmente el pH.

3.- Cmo se manifiesta la desnaturalizacin de la clara de huevo ?

La protena es una sustancia qumica que forma parte de la estructura

de las membranas celulares y es el constituyente esencial de las clulas
vivas; sus funciones biolgicas principales son la de actuar como
biocatalizador del metabolismo y la de actuar como anticuerpo. Tienen
una estructura primaria, secundaria, terciaria y cuaternaria. Cuando la
protena no ha sufrido ningn cambio, esta presenta una estructura
nativa. Las protenas se desnaturalizan cuando pierden su estructura
nativa, es decir, pierden su estructura tridimensional (estructura
secundaria, terciaria y cuaternaria), una protena desnaturalizada cuenta
nicamente con su estructura primaria. Esto ocurre cuando la protena
es alterada por algn factor externo (por ejemplo: aplicndole calor,
cidos o lcalis) y esta se vuelve incapaz de cumplir su funcin celular,
cuando es una caso irreversible de desnaturalizacin, cuando es
reversible, podemos hacer que la protena vuelva a la normalidad y as
esta podr cumplir su funcin.

Una desnaturalizacin provoca diversos efectos en la protena

-Cambios en las propiedades hidrodinmicas de la protena: Aumenta la

viscosidad y disminuye el coeficiente de difusin.

-Una drstica disminucin de la solubilidad, ya que los residuos

hidrolgicos* del interior aparecen en la superficie.

-Perdida de las propiedades biolgicas.

Al cambiar el pH o calentar en exceso las protenas se

desnaturalizan y se manifiestan en forma de un precipitado.

4. Cul de los tres agentes utilizados tiene mayor poder de

desnaturalizacin?

Donde ms se not la desnaturalizacin de protenas fue cuando se us

el cido ntrico porque cambi el pH y la clara de huevo se solidific.

5. Cmo podramos saber que una sustancia desconocida es una

protena?

Utilizando distintas pruebas que dan distintos colores o indicaciones que

comprueban la existencia de protenas.
 6. Qu coloracin da la reaccin del Biuret?

Color violeta

7. Una protena coagulada podra dar la reaccin del Biuret?

Cualquier forma de protena puede ser comprobada por esta reaccin

8. Si se realiza la reaccin del Biuret sobre un aminocido como la

Glicina es positiva o negativa?

Por qu?

Saldr negativo ya que la reaccin de Biuret se encarg de descubrir

enlaces peptdicos entre varios aminocidos que conforman protenas.Si
solo hay un aminocido no indicar nada.

BIBLIOGRAFIA

Pea A (2004), Bioqumica.Segunda edicin. Mxico: EditorialLIMUSA,

Pg. 66-67[2]

Mancilla, C; Blanco E; Prez, S;Rosas, T y Castrejn, C.

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http://www.scribd.com/doc/15958125/1-PROPIEDADES-QUIMICAS-Y-
FISICOQUIMICAS-DE-LAS-PROTEINAS

De la vega. G (2009) Propiedadesde la harina de trigo: Clasificacin

ypropiedades funcionales. Consultadoel 4 de Noviembre de 2009 en:

http://www.utm.mx/edi_anteriores/Temas38/2NOTAS%2038-1.p

[4] Universidad Nacional de RioCuarto (2008) Qumica biolgica2110.

Microbiologa y tcnico delaboratorio. Reacciones deprecipitacin de
protenas.Consultado el da 3 de noviembre de2009

OBJETIVOS

Identificar y reconocer los aminocidos, mediante las reacciones y la

coloracin que da por los reactivos.
La importancia de los aminocidos y sus propiedades.
Adquirir informacin sobre algunas propiedades fsicas y qumicas de
aminocidos