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DEMANDA Y TRANSFERENCIA DE OXIGENO EN SISTEMAS MICROBIANOS

AIREADOS

- Demanda de oxgeno por parte de los microorganismos.

-Transferencia de oxgeno desde una burbuja de gas a la fase


lquida.
Ecuacin del crecimiento de cultivos aerobios de un
microorganismo quimiooragnotrofo se puede representar por:

CHa2Ob2Nc2 + a NH3 + b O2 yx/s biom. + yp/s prod. + yco2/s CO2 + HR

Esta reaccin ocurre en un lugar fsico llamado biorreactor, bajo


condiciones controladas.
Requerimientos de la reaccin:
1. Oxgeno.
2. Extraccin del calor de reaccin.
3. Sistema homogneo.

Por lo tanto tenemos un biorreactor que debe disponer de

a) Un sistema que disperse el aire.

b) Un agitador, suministrando potencia al sistema.

a) Un sistema que remueve el calor.


1. DEMANDA DE OXIGENO POR PARTE DE LOS MICROORGANISMOS

La velocidad de consumo de oxgeno se puede expresar como:

dO2
ro 2 qO 2 X (molo2/l.h) (1)
dt

Siendo:
qo2 = veloc. esp.de consumo de oxgeno (gO2/gx.h).
x = concentracin de biomasa seca (g/l)

Adems:
Multipl. y dividiendo por x
rx
Yx / o
rO 2 Yx / o qo2 = / yx/o (2)
qO 2
Reemplazando en la ec. 1

(3)
ro 2 X
Yx / o

La velocidad de consumo de oxgeno (ro2) depende de la velocidad especfica de


crecimiento (la cual depende del medio de cultvio, pH, temperatura), concentracin de
microorganismo en el caldo de fermentacin.
Cultivo batch

En un cultivo batch, en la fase


exponencial

m
ro 2 X
Yx / o
ro2 aumenta rpidamente porque x
ro2 = qo2m . x aumenta durante el curso de la
fermentacin, para llegar al mximo al
final de la fase exponencial (Fig. 1).

Esta demanda creciente de oxgeno debe ser satisfecha por la


transferencia de oxgeno del gas al lquido y de ste a las clulas.
En un cultivo batch, en la fase estacionaria

Fase estacionaria: hay muchas clulas pero


consumen poco oxgeno porque dej de
crecer, se le termin el sustrato limitante.
Concentracin crtica de oxgeno disuelto:
Reemplazando en la ec. 2
m S
Recordando la ecuacin de Monod
Ks S
qo2 = / yx/o (2)

Cuando S = CL
S
q 02 q 02 m
Ks S
CL
q 02 q 02 m (4)
(K o C L )

Siendo:
CL = concentracin de oxgeno disuelto.
Ko = constante de afinidad de la reaccin.
qo2m = velocidad especfica mxima de
consumo de oxgeno.
CL
q 02 q 02 m
(K o C L )

Figura 2: Variacin de la velocidad especfica de consumo de


oxgeno, qo2, con la concentracin de oxgeno disuelto (CL).

Cc = concentracin crtica de oxgeno disuelto.

CL > Cc, qo2 es constante e independiente de CL y por lo tanto el


crecimiento no est limitado por oxgeno.

Por debajo del valor de Cc, el oxgeno pasa a ser sustrato


limitante y el crecimiento se vuelve lento.
Tabla 1: Valores tpicos de Cc para algunos microorganismos
Microorganismo Temperarura Cc
(C) (mg/l)
E. coli 37,8 0,26
Levaduras 34,8 0,15
P.chrysogenum 30,0 0,29
A. orizae 30,0 0,64

Los valores de Cc para la mayora de los organismos estn en el


orden de 0,1- 1 mg/l (Tabla 1).

Por lo tanto para evitar que el cultivo est limitado en oxgeno, la


concentracin de oxgeno disuelto en el medio de cultivo deber ser en
todo momento > Cc.
Medida de la velocidad de consumo de oxgeno en cultivos microbiano aireados

Midiendo la composicin de los gases a la salida del reactor se pueden


calcular las velocidades de consumo de O2 y produccin de CO2 por medio de
las siguientes ecuaciones que surgen de un balance en fase gaseosa y lquida.

F 0,79 T0 %O2 s %O2 e


r02 60
Vmediio T 22,4 100 %O2 s %CO2 s 100 %O2 e

F 0,79 T0 %CO2 s %CO2 e


rC 02 60
Vmediio T 22,4 100 %O2 s %CO2 s 0,79

F: caudal de alimentacin de aire (l/min)


0.79: porcentaje de nitrgeno en el aire,
V: volumen del cultivo (l)
T0 y T: 273 K y la temperatura de trabajo respectivamente
22,4: volumen ocupado por un mol de gas en condiciones normales de T y P.
ro2: velocidad de consumo de O2 (moles/l. h).
rCo2: velocidad de produccin de CO2 (moles/l. h).
Ejemplo - Cultivo batch con (NH4)2SO4 como fuente de nitrgeno

rO2
Tiempo Volumen Biomasa Glucosa O2 sal. CO2 sal. (mmol/l.h rCO2
(h) (ml) pH (g/l) (g/l) (%) (%) ) (mmol/l.h) CR

0 2810 4,6 0,327 10,103 20,84 0,13 3,5 3,2 0,92


1 2789 4,4 0,36 10,005 20,78 0,19 4,9 4,7 0,95
2 2768 4,0 0,75 9,275 20,63 0,29 9,0 7,2 0,80
3 2747 - 0,84 8,809 20,46 0,52 12,9 13.0 1,01
4 2727 3,3 1,51 7,212 20,22 0,62 19,9 15,6 0,78
5 2707 3,0 1,72 6,352 19,99 0,96 25,1 24,4 0,97
6 2687 2,8 2,68 4,297 19,68 1,20 33,6 30,7 0,91
7 2668 2,7 3,39 2,494 19,33 1,47 43,1 37,9 0,88
8 2648 2,7 4,17 0,817 19,27 1,65 44,3 42,9 0,97
9 2624 2,6 4,37 0,002 20,33 0,59 17,2 15,5 0,89
Produccin de CO 2 y consumo de
0,05

0,04

O2 (mmol/l.h)
0,03

0,02

0,01

0
0 2 4 6 8 10

Tiempo (h)

Velocidad de consumo de O2 (rO2 ) y velocidad de formacin de CO2 (rCO2).


Smbolos: rO2 () y rCO2 ().

La cantidad total de O2 consumido y CO2 producido durante el cultivo se


calcularon como la integral de las respectivas velocidades en funcin del tiempo:

tf
CO2 total producido rCO 2 dt
tf
O2 total consumido rO 2 dt t0
t0

O2 total CO2 total yx/s yco2/s b Bal. C Bal.


(moles) (moles) (c-mol) (molco2/c-molFCE) (molo2/c-molFCE)
0,187 0,182 0,466 0,543 0,555 1,008 1,043
2. TRANSFERENCIA DE OXIGENO DESDE UNA BURBUJA DE GAS A LA CELULA

En un proceso aerbico, el biorreactor debe tener la capacidad de


transferir a la biomasa la cantidad de O2 qu sta necesita.

El oxgeno que la clula puede tomar es el oxgeno disuelto.

Debido a la baja solubilidad de este gas en agua (7,8 mg/l, aire 1


atm-25 C), surge la necesidad de transferir oxgeno continuamente
desde la fase gaseosa hasta la fase lquida a lo largo del proceso
de crecimiento.
Etapas que comprenden la transferencia de oxgeno desde una burbuja de
aire hasta el interior de una clula o agregado celular.

El oxgeno en su recorrido de la fase


C
gaseosa hasta las enzimas celulares
encuentra una serie de resistencias a
travs de las cuales pasa por difusin.

R1: Res. film gaseoso (entre seno del G y la interfase


G-L).

R2: Res. a travs de la interfase.

R3: Res. film lquido (entre la interfase y el seno de la


fase lquida).

R4: Res. fase lquida.

Mezclado perfecto: R4 = 0 (no hay R5: Res. film lquido que rodea la clula.
gradientes de concentracin en el
seno del lquido). R6:Res. a travs de la membrana.

R5 R8 = 0 (clulas mas pequeas R7: Res. intracelular.


que las burbujas).
R8: Res. debido al consumo de oxgeno dentro de la
Mayor resistencias: R1 y R3 clula microbiana.
Modelo de las dos pelculas

Teora de las dos pelculas desarrollada por Whitman (1923).

Este modelo est basado en las siguientes suposiciones:


1) Existen 2 pelculas o films estancos a ambos lados de la interfase
(pelcula gaseosa y pelcula lquida).
2) La velocidad de transferencia de masa est controlada por la difusin
a travs de ambos, en los que se concentra toda la resistencia a la
transferencia de masa.
2) La resistencia interfacial es despreciable.

Ci concentracin de oxigeno disuelto en la interfase.


En la interfase G-L se supone, no existe resistencia y
segn la Ley de Henry:
pgi= H.Ci

Figura 4: Perfiles de concentracin de oxgeno en los films


gaseosos y lquidos para la tranferencia del gas en el seno de la
fase lquida.
En las pelculas, hay un gradiente de concentracin del gas y el movimiento del
oxgeno ocurre por difusin simple (Ley de Fick):

Ni: flujo del Ci en la direccin x (moles de Ci/area.tiempo).


Ni = Di . dci/dx Di: coeficiente de difusin de i en el fludo (cm2/seg).
dci/dx: gradiente de concentracin en la direccin x (gr/cm3cm).

Difusin de O2 en la fase gaseosa: No2(g) = Do2(g) . (pg - pgi )/hg

Difusin de O2 en la fase lquida: No2(l) = Do2(l) . (Ci - CL) / hL

No2 = velocidad de transferencia de O2 por unidad de area. (moles o2/cm2. h).


hg y hL = espesor de los films gaseoso y lquido respectivamente.

Como hg y hL son difciles de medir, se agrupan como :

kL = Do2 / hL y kg = Do2(g) / hg

kL y kg = coeficientes de transferencia de oxigeno en la fase lquida y gaseosa


respectivamente (cm/seg).

As se obtiene : No2(l) = kL . (CLi - CL) y No2(g) = kg . (pg - pgi)


(5) (6)
Resulta difcil medir pgi y CLi.

Se define una velocidad de transferencia de masa total (Fase gaseosa + fase


liquida):

No2 = Kt (C* - CL) (moles o2/cm2. h) (7)

Siendo:
Kt = coeficientes de transferencia de oxigeno total.
C* concentracin de oxigeno en equilibrio con la presin parcial de oxgeno en la fase
gaseosa segn la Ley de Henry: pg = H. C*:

La resistencia total a la transferencia de masa (1/Kt) es igual a la suma de


las resistencias individuales de los films gaseosos y lquidos.

Para oxgeno, poco soluble, toda la resistencia est en la fase lquida es decir
que:
1/ Kt = 1/kL

La transferencia de o2 del gas a la fase lquida est controlada por la


resistencia en el film lquido que rodea la burbuja de gas, por lo tanto:
No2 = kL (C* - CL) (moles o2/cm2. h) (8)

No2 = velocidad de transferencia de o2 (moles de o2 /cm2 . h)


kL = coeficiente de transferencia de o2 del film lquido (cm/seg).
C* = concentracin de oxgeno disuelto en equilibrio con la presin parcial de
oxgeno en la fase gaseosa segn la ley de henry.
CL = concentracin de oxgeno disuelto en la fase lquida (mMol/l)

a = A/V = rea de intercambio gas-lq./unidad de volumen de lquido

Podemos escribir:

Ro2 = No2.a = kL. a. (C*- CL ) = OTR (oxygen transfer rate) (9)

Ro2: velocidad volumtrica de transferencia de oxgeno (moles de o2/cm3. h)


Ro2 = No2 . a = kL . a . (C*- CL )

La velocidad de transferencia de oxgeno depende por lo tanto de tres


factores:
1. Un trmino de diferencia de concentracin (C*-CL), denominado fuerza
impulsora.
2. Un coeficiente de transferencia kL.
3. Un trmino de rea.

La fuerza impulsora (C) es mxima cuando el lquido est desprovisto de


oxgeno (CL = 0). Pero CL > Cc.

El producto kLa es conocido como coeficiente volumtrico de transferencia


de oxgeno y tiene unidades de tiempo-1.

El valor de kLa est directamente relacionado con la eficiencia de un


biorreactor para transferir oxgeno, a mayor valor de kLa, mayor es la
capacidad de aireacin.
Factores que afectan la velocidad de transferencia de oxgeno

Temperatura Afecta el valor de KLa y la solubilidad de oxgeno (C*).

A 10C< T < 40 C, un incremento de T provoca un incremento del coeficiente


de transferencia.

A Temperaturas mayores (40C < T < 90C), la solubilidad de oxgeno cae


significativamente.

Presin

La presin parcial de oxgeno en la fase gaseosa, afecta la solubilidad de


oxgeno y por lo tanto la fuerza impulsora.
Un incremento en po2 (a T cte.) producir un aumento en el valor de C*, y as
aumentar la fuerza impulsora (C* - CL).

Viscosidad Afecta el valor de KLa.

El aumento de la viscosidad, disminuye el valor de kL (aumenta el espesor


del film lquido, aumentando la resistencia a la transferencia).
Favorece el fenmeno de coalescencia entre burbujas (disminucin del rea
de transferencia.
Agitacin Biorreactor de tanque agitado

La agitacin produce:

Ruptura y distribucin de burbujas, aumenta


el area interfacial (a).
Aumenta la turbulencia (con deflectores),
aumenta el tiempo de contacto (aumenta KL).
Aumento de la turbulencia, produce una
reduccin en el espesor del film lquido Un aumento de la potencia
(aumenta KL). mecnica est relacionado
con un aumento de la
Ruptura de conglomerados (aumento de a).
transferencia de oxgeno.

m
pg
Siendo:
k L a vs
Pg: potencia suministrada al lquido por el agitador (en W) n
V: volumen del fludo (m3)
vs: velocidad superficial del gas (m/seg) V
Velocidades de transferencia y consumo de oxgeno

Haciendo un balance de oxgeno en el cultivo se obtiene:


Cultivo batch: trminos de entrada y salida = 0
Cultivo continuo o batch alimentado: trminos de oxigeno entrada y
salida con el medio es despreciable.

dVC/dt = kL a (C* - CL) .VL - qo2 . x .VL (21)

En un instante pequeo de tiempo (batch o batch alimentado) o en estado


estacionario (c. continuo):

kL a (C* - CL) = qo2 . X (22)

Para evitar limitacin en el suministro de oxgeno se deber cumplir:

ro2m = (qo2 . x )m kL a (C* - CL) (CL Cc)

Cc 5-10% C*

Cuando en el fermentador, el valor de kLa es muy bajo, CL caer por


debajo del nivel crtico y el cultivo estar limitado por oxgeno.
kL. (C*- CL) = qo2 . x (22)

q 02 X
Despejando CL : CL C *
KL a

Donde CL tiene que ser > que Cc, para


evitar limitacin en el suministro de
oxgeno.

En cultivos continuos, qo2 . x y kL. a son constantes por lo tanto CL ser


tambin constante.
En un cultivo batch, qo2 . x (ro2) vara con el tiempo ya que la
concentracin celular aumenta durante el curso de la misma y por lo tanto
CL variar con el tiempo.
En batch alimentado se trabaja a bajo y por lo tanto ro2 ser bajo.
Transferencia de oxigeno en diferentes sistemas de cultivo

Sistema volum. medio Condic. de operac. Transferencia (mMol/l.h)

Tubo (25x150mm) 10 ml agitacin rotatoria 27

Erlen 500 ml 50 ml 200 r.p.m. 39,6


50 ml 300 r.p.m. 48
100 ml 200 r.p.m. 33
100 ml 300 r.p.m. 41,4

Erlen 1000 ml 100 ml 200 r.p.m. 40,8


Tanque agitado 12 lt 500 r.p.m. 432
20 litros caudal aire 2 vvm
Medida de la velocidad de consumo de oxgeno en cultivos microbiano aireados
a) Balance de oxigeno en fase lquida

d C L VL
dt

F1 C L1 k L a C * C L VL qo 2 x VL F2 C L

F1: caudal de alimentacin de medio (l/min)


F2: caudal de salida de medio (l/min)
VL: volumen del cultivo (l)
CL1: concentracin de oxgeno en el medio en la alimentacin (mol/l)
CL: concentracin de oxgeno en el reactor (mol/l)
KL.a: (C*-CL) = velocidad de transferencia de oxgeno (moles/cm3.min)

En un cultivo batch los trminos de entrada y salida se anulan.


En un cultivo continuo (o batch alimentado) la cantidad de oxgeno que ingresa y sale
con el medio se considera despreciable,

d CL VL
dt

k L a C * CL VL qo 2 x VL
En un instante muy pequeo de tiempo o en estado estacionario se considera que:

d C L VL
0
dt

k L a C * CL r02
b) Balance de oxigeno en fase gaseosa

d X o 2 VG
dt

FG1 X o 2 1 FG 2 X o 2 2 VL k L a C * C L

FG1: caudal de alimentacin de aire (l/min)


FG2: caudal de salida de aire (l/min)
VG: volumen de aire (l)
(Xo2)1 y (Xo2)2: fraccin molar de oxgeno a la entrada y salida.
Respectivamente

En un instante muy pequeo de tiempo o en estado estacionario se considera que:

d X o 2 VG
0

FG1 X o 2 1 FG 2 X o 2 2 VL k L a C * CL
dt
FG1 X o 2 1 FG 2 X o 2 2 VL rO 2
FG1 X o 2 1 FG 2 X o 2 2
Despejando ro2: 1
ro 2
VL

Realizando un balance de nitrgeno y teniendo en cuenta que el mismo no se


consume en el transcurso del cultivo se tendr:

X N 2 2 1 X CO2 2 X 02 2
FG1 X N 2 1 FG 2 X N 2 2

FG1 X N 2 1 FG1 0,79


FG 2
X N 2 2 [1 X o 2 2 X CO 2 2 ]

FG1 0,79 X o 2 2
FG1 X o 2 1
1
ro 2
Reemplazando FG2: VL 1 X
o2 2 X
CO 2 2

FG1 0,79 X o 2 1 X o 2 2
ro 2
VL 0,79 1 X o 2 2
X CO 2 2
METODOS PARA DETERMINAR EL COEFICIENTE VOLUMETRICO DE
TRANSFERENCIA DE OXIGENO (kL. a)

En estado no estacionario: Cultivo batch

Haciendo un balance de O2 en un cultivo batch , se obtiene:

dC
kL a ( C* CL ) qo2 . x
dt

1 etapa: se suspende la aireacin durante la fermentacin:

CL
dC
qo 2 . x 1 etapa 2 etapa
dt

Cc
Graficando CL en funcin de t ,
se obtiene una lnea recta cuya
pendiente es qo2.x t
2 etapa: se reinicia el suministro de aire:

1 dCL
CL C* . ( qo2 . x )
kL a dt

Graficando CL en funcin de (qo2 . x + dCL / dt ) se obtiene una lnea recta


cuya pendiente es - 1 / kL a

CL

C*
pendiente = - 1
kL .a

( dCL + ro 2 )
dt
En estado estacionario: Cultivo continuo

Haciendo un balance de oxgeno en el quimiostato se tiene :

dC
k L a ( C* C L ) qo 2 . x
dt

dC
En estado estacionario : 0
dt

k L a ( C* C L ) qo 2 . x


qo 2 . x
Despejando kL a : kL a
C* C L

FG ( X O 2 )1 ( X O2 )2
ro 2 0,79.
VL (1 0,21) 1 ( X O 2 ) 2 ( X CO 2) 2
Medida de kLa en presencia de microorganismos: Mtodo del sulfito

Propuesto por Cooper en 1944, se basa en que la velocidad de transferencia de


oxgeno del G - L es igual a la velocidad de oxidacin de una solucin de sulfito a
sulfato de sodio en presencia de Cobre.

Cu++
2 Na2SO3 + O2 2 Na2SO4

Recordando el balance para el estado no estacionario:

dc
R o2 k L a (C* C L ) ro 2
dt

Como ro2 = 0 y CL = 0 CL

kL a.C*
dC
k L a C*
dt

t ( hs )