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INTRODUCCIN AL
ESTUDIO DE LA
CLULA
NIVELES DE ORGANIZACIN
En la mayor parte de los individuos pluricelulares, las clulas se organizan de acuerdo a sus
caractersticas y funciones conformando tejidos como el conectivo, muscular, epitelial,
nervioso (Nivel Tisular). Los tejidos estn ordenados en estructuras funcionales, denominadas
rganos como el corazn y los pulmones en los animales, o las hojas y las races en las plantas.
Las funciones biolgicas bsicas se llevan a cabo por un sistema o aparato, que es una
asociacin coordinada de tejidos y rganos. Los organismos o individuos pluricelulares estn
formados por sistemas que actan en forma coordinada y rigurosa.
Esta comunidad comparte el mismo lugar fsico que presenta caractersticas particulares. La
unin de estos factores fsicos con los factores biolgicos constituyen los ECOSISTEMAS.
Todos los ecosistemas de la Tierra estn relacionados, directa o indirectamente. Es por ello
que un cambio drstico o continuo de alguno de ellos indefectiblemente acarrear cambios en
los restantes. Del mantenimiento de un equilibrio entre los distintos ecosistemas, depende la
vida en el planeta.
Tabla 1.1- Niveles de Organizacin
1. Nivel Subatmico
2. Nivel Atmico
3. Nivel Molecular (Monosacridos, Aminocidos, Nucletidos, etc.)
4. Nivel Macromolecular (Polisacridos, Protenas, Acidos nucleicos, Lpidos complejos, etc. )
5. Nivel Prebitico o Supramacromolecular (Virus )
6. Nivel Subcelular (Organoides: Mitocondrias, Cloroplastos, Ribosomas, etc.)
7. NIVEL CELULAR {Clula Procarionte, Clula Eucarionte) Individuos Unicelulares:
Bacterias, Algas unicelulares, Levaduras, Protozoos, etc.
8. Nivel Tisular (Tejidos: Conectivo, Epitelial, Muscular, etc.)
9. Organos (Corazn. Pulmones. Estmago, etc.)
10. Sistemas y Aparatos (Aparato Circulatorio, Sistema digestivo, etc. )
11. Organismos(Individuos Pluricelulares, Animales y Vegetales Superiores).
12. Poblacin
13. Comunidad.
14. Ecosistema
15. Universo
ORGANIZACIN CELULAR
TEORA CELULAR
Posteriormente, Rudolph Virchow (1821-1902) amplio la Teora Celular y afirm: " Todas las
clulas proceden de otra preexistente". Por lo tanto, las clulas no surgen por generacin
espontnea a partir de materia inanimada.
Otra importante conclusin de la Teora Celular afirma que todas las clulas actuales, tienen un
origen comn. La evidencia ms importante, sobre el origen comn de todas las formas
celulares, radica en las similitudes bsicas de sus estructuras y principalmente de su
composicin molecular.
Todas las clulas estn cubiertas por una membrana externa, llamada membrana plasmtica,
que las separa de otras clulas y del medio circundante con el cual intercambian materia y
energa. Este intercambio esta altamente regulado y es selectivo. De esta forma la membrana
plasmtica debe actuar no slo como limite celular sino tambin como barrera selectiva. Por lo
tanto la clula, mantiene una composicin qumica muy ordenada y diferente a la del entorno.
Todas las clulas poseen un metabolismo o conjunto de reacciones qumicas, que posibilitan el
mantenimiento de la vida. Este metabolismo para sustentarse necesita de una o ms fuentes de
energa. Las clulas, necesitan de distintivos tipos de molculas energticas:
Dentro de las reacciones para obtener e interconvertir diferentes forma de energa, son muy
importantes las reacciones de oxido-reduccin o reacciones REDOX. En este tipo de
reacciones es esencial la participacin de las coenzimas de oxido-reduccin, como el NAD+ y el
FAD.
El ADN utiliza un segundo cido nucleico, el ARN, cido ribonucleico, como intermediario. A
partir de la secuencia de bases del ADN, que codifica una protena, se sintetiza una secuencia
de bases de ARN. Este proceso es llamado transcripcin. EL cido ribonucleico encargado de
transportar la informacin, recibe la denominacin de ARN mensajero. Este ARN mensajero,
porta la informacin necesaria para la sntesis de protenas, proceso llamado traduccin, el cual
tiene lugar en el citoplasma con la intervencin de dicho ARNm, los ribosomas y el ARNt que
porta los aminocidos.
Las clulas para perpetuarse necesitan reproducirse. Esto significa que la informacin
almacenada en el ADN debe duplicarse para poder ser transmitida a las clulas hijas. El ADN
tiene la excepcional caracterstica de ser una molcula capaz de autorreplicarse, es decir de
generar una copia de si misma. Este proceso es llamado duplicacin o replicacin.
Por qu son tan pequeas las clulas? Las clulas deben captar alimento y otros materiales a
travs de su membrana plasmtica y deben eliminar los productos de desecho, generados en las
distintas reacciones metablicas rpidamente antes de que estos se acumulen hasta niveles
txicos para la supervivencia celular. Por lo tanto, las clulas son pequeas, de modo que en
ellas las molculas recorren distancias cortas, lo que acelera las actividades celulares.
Por otra parte, debemos recordar que en las clulas el material Gentico (localizado en el
ncleo, en clulas eucariontes), posee un rea limitada de influencia sobre el citoplasma
circundante, que es el que incrementa marcadamente su tamao durante el crecimiento celular,
siendo otra limitante del tamao celular la relacin ncleo/citoplasma.
CARACTERSTICAS PRINCIPALES
Todas las clulas se parecen y responden a un patrn comn por ms diversas que sean. Las
clulas de organismos pluricelulares son diferentes en su funcin, por ser distintas
estructuralmente, pero todas concuerdan con un patrn comn. Por ejemplo, aquellas
especializadas en la sntesis de lpidos, tendrn mayor desarrollo del retculo endoplasmtico
liso y sern distintas de las neuronas especializadas en la transmisin del impulso nervioso,
cuya especializacin es tan grande que pierden su capacidad de reproducirse.
A pesar de las semejanzas y diferencias entre las clulas y que todas cumplen con los
postulados de la Teora Celular, se distinguen dos grandes tipos de clulas:
PROCARIOTAS (sin ncleo verdadero) y EUCARIOTAS (con ncleo).
Las clulas procariontes carecen de ncleo y generalmente son mucho menores que las clulas
eucariontes. El ADN de las clulas procariontes no est rodeado por una membrana, pero puede
estar limitado a determinadas regiones denominadas nucleoides. Las clulas procariontes, al
igual que las clulas eucariontes, poseen una membrana plasmtica, pero carecen de membranas
internas, que formen organelos. Sin embargo, debemos precisar que en algunas clulas
procariontes, la membrana plasmtica forma laminillas fotosintticas.
Las clulas procariontes poseen una caracterstica nica, una pared de peptidoglicanos, un gran
polmero de glcidos y aminocidos.
Las bacterias pueden definirse como organismos unicelulares procariontes que se reproducen
por fisin binaria. Contienen toda su informacin gentica en un nico cromosoma bacteriano
circular. Tambin poseen sistemas productores de energa y biosintticos necesarios para el
crecimiento y la reproduccin. Poseen como caracterstica particular una pared rgida de
peptidoglicanos. Son generalmente de vida libre y poseen ADN extracromosmico en forma de
plsmidos, estos codifican genes de resistencia a antibiticos o factores "sexuales" como los
pili.
Los micoplasmas son las bacterias mas pequeas de vida independiente. Son muy flexibles y
deformables por lo que atraviesan los filtros de esterilizacin. Entre sus caractersticas
principales se encuentran: a) carecen de pared celular, b) en su membrana plasmtica poseen
esteroles, que no son sintetizados por la bacteria sino que son absorbidos del medio de cultivo
o del tejido donde se desarrolla.. Los micoplasmas son resistentes a la penicilina (carecen de
pared de peptidoglucano) y por la misma razn no toman la coloracin de Gram.
En la Tabla 1.4 se aprecian las diferencias ms importantes entre las clulas procariotas
(bacterias) y eucariotas
PLSMIDOS
Un plsmido es una molcula de ADN extracromosmico que se replica en forma autnoma, por
lo que al igual que el cromosoma es un replicn. Puede haber hasta 50 copias de un plsmido en
una bacteria. Funcionalmente los plsmidos son elementos genticos accesorios, es decir que la
bacteria puede vivir sin ellos. Sin embargo, la informacin que contienen puede contribuir a la
adaptacin de la bacteria al medio y a la evolucin de la misma. Los plsmidos pueden contener
genes que codifican factores de resistencia a antibiticos (los plsmidos R) y factores de
patogenicidad como exotoxinas. La evolucin bacteriana a travs de los plsmidos es factible,
ya que pueden ser intercambiados entre distintas bacterias (por ejemplo, el plsmido F). Es
decir que ciertos genes pueden transferirse de una bacteria otra mediante el pasaje de
plsmidos, a este mecanismo se lo denomina conjugacin. Para que la conjugacin pueda llevarse
a cabo las dos bacterias deben ponerse en contacto fsico . Esto es posible debido a que una de
las bacterias, posee pili sexuales (pelos) en su envoltura. Estos pili se encuentran codificados
en el mismo plsmido F (plsmido conjugativo). La bacteria que transfiere el plsmido es la que
posee pili y se la denomina F+, la clula receptora es F-.
TRANSPOSONES
Los transposones son elementos genticos movibles, que se encuentran presentes en los
procariontes (aunque tambin en las clulas eucariontes). El descubrimiento de los
transposones se lo debemos a Barbara McClintock. Los transposones son fragmentos de ADN
que se mueven de una localizacin a otra del cromosoma. Esta transposicin es catalizada por
una enzima llamada transposasa. El gen de la transposasa esta incluido dentro del mismo
transposn. Los transposones al ser elementos mviles, dentro del genoma, pueden provocar
mutaciones al insertarse en nuevas regiones del ADN.
Por fuera de la membrana celular, se encuentra una pared celular rgida de peptidoglicano, que
esta presente en todas las bacterias excepto los micoplasmas. La presencia de la pared
protege a la bacteria de la diferencia de presin osmtica entre el medio interno de la
bacteria y el medio exterior. De no existir la pared la bacteria estallara. Adems la pared
cumple funciones de proteccin como por ejemplo contra sustancias txicas .
Existen dos tipos de pared bacteriana que pueden diferenciarse por la Tincin de Gram (siglo
XIX). El primer grupo de bacterias son aquellas capaces de retener el colorante cristal violeta
luego de la decoloracin con alcohol-cetona. Estas bacterias son llamadas Grampositivas. El
segundo grupo esta conformado por aquellas bacterias incapaces de retener el colorante luego
del tratamiento decolorante, por lo tanto son llamadas Gramnegativas.
Por fuera del periplasma se encuentra una estructura exclusiva de las Gramnegativas, la
denominada membrana externa. Si bien es estructuralmente similar a una bicapa lipdica, su
composicin es diferente de la de otras membranas biolgicas. Esta bicapa es muy asimtrica,
la semicapa interna esta compuesta por fosfolpidos, pero la semicapa externa esta compuesta
por lipopolisacridos (LPS), altamente txico para el ser humano (endotoxina).
Para obtener nutrientes las bacterias Gramnegativas, poseen porinas que son protenas que
forman poros en la membrana externa.
CPSULAS
Presentan este modelo celular, los organismos de los reinos Protista, Hongos, Plantas y
Animales.
Si bien existe una gran diversidad entre estas clulas, el modelo bsico es similar,
presentando como estructura sobresaliente el ncleo celular.
NCLEO CELULAR
Las diversas partes de una clula eucaritica interactan de forma integrada. Esto es posible
porque existe un centro primordial de control: el ncleo celular. Una membrana doble, la
envoltura nuclear (constituida por dos unidades de membrana), controla el transporte, muy
selectivo, de sustancias entre el ncleo y el citoplasma. El pasaje se realiza a travs de los
poros nucleares. La envoltura nuclear posee ribosomas adheridos a la cara citoplasmtica y una
estructura proteica en su parte interna llamada lamina nuclear, que sirve como esqueleto al
ncleo.
En el interior del ncleo, se encuentra el material gentico (ADN) asociado a protenas bsicas
llamadas histonas, formando una estructura fibrilar muy enrollada denominada cromatina y el
nucleolo, sitio de ensamblaje de los ribosomas (estructuras esenciales para la sntesis de
protenas, formados por ARN ribosomal y protena). El ARN ribosmico se sintetiza en el
nucleolo, y las protenas ribosmicas en el citoplasma, para pasar despus al ncleo y de all al
nucleolo, donde se unen al ARN ribosomal para formar los ribosomas.
SISTEMA DE ENDOMEMBRANAS
ORGANELAS
RIBOSOMAS Y POLIRRIBOSOMAS
Estn constituidos por dos subunidades, mayor y menor separadas entre s. Ambas subunidades
se unen cuando leen una molcula de ARNm. Las subunidades estn formadas por ARNr y
protenas, siendo ensambladas en el nucleolo. Cuando hay varios ribosomas unidos a una
molcula de ARNm, lo denominamos polirribosoma.
Fig. 1.7- Esquemas de una clula vegetal (izquierda) y tridimencional de un cloroplasto con sus
componentes (derecha)
Las clulas eucariontes poseen dos modelos estructurales bsicos: a) clulas auttrofas
fotosintticas y b) clulas hetertrofas.
Las clulas auttrofas son aquellas que sintetizan su propio alimento, es decir sus propias
molculas combustibles. En este caso las clulas eucariontes vegetales son clulas
auttrofas fotosintticas, por lo tanto utilizan la luz solar como fuente de energa.
Transforman la energa solar en energa qumica, este proceso es llamado fotosntesis. La
fotosntesis en las clulas vegetales se lleva a cabo en un organelo membranoso llamado
cloroplasto. Dentro del cloroplasto se encuentran sacos membranosos apilados, denominados
tilacoides, en cuyas membranas encontramos el pigmento llamado clorofila, esencial para la
fotosntesis.
Las clulas hetertrofas son aquellas que no sintetizan su propio alimento sino que necesitan
una fuente externa de energa tanto como de materiales de construccin de sus propias
molculas. Las clulas animales (y los hongos), son clulas eucariontes hetertrofas.
Las clulas animales y las clulas vegetales poseen unas organelas membranosas llamadas
mitocondrias, donde se lleva acabo la respiracin celular. En este proceso son rotos los enlaces
de alta energa de las molculas combustibles orgnicas. Esta energa liberada es utilizada para
la sntesis de las monedas energticas como el ATP. El ATP es esencial para las diferentes
funciones celulares. Para que este proceso se lleve a cabo dentro de las mitocondrias es
necesaria la presencia de oxigeno.
Por lo tanto en ambos tipos celulares son necesarias las mitocondrias , para obtener energa
qumica en forma de ATP a partir de las molculas combustibles. Pero es diferente el origen
VIRUS
Hacia fines del siglo pasado se formulo la teora de que cada enfermedad era producida
por un germen especfico. Hasta ese momento los patlogos estaban convencidos de que para
cada enfermedad seria posible encontrar el microorganismo responsable, utilizando las
siguientes tcnicas: a) observacin del germen con la ayuda del microscopio, b) cultivo sobre un
medio nutritivo y c) retencin por filtros. Sin embargo, en 1892, Iwanowski (o Ivanovsky?)
pudo demostrar que el agente productor de la enfermedad del mosaico de tabaco pasaba a
travs de los filtros para bacterias y no poda ni verse ni cultivarse. Luego en 1898 Beijerinck,
determin que la enfermedad del mosaico del tabaco era provocada por un nuevo agente
infeccioso a los que denomino virus filtrables (virus: palabra de origen latino que significa
veneno). Los virus estn ampliamente distribuidos en la naturaleza y afectan a todo tipo de
organismos, tanto del reino animal, vegetal o protista.
La estructura de los virus esta integrada por dos tipos de macromolculas: cidos
nucleicos y protenas, los que forman las partculas virales o viriones. Bsicamente existen dos
tipos de partculas virales: partculas virales simples (virus desnudo) o partculas virales
envueltas (virus envuelto). El virus desnudo consta de un cido nucleico (genoma) asociado a
protenas y una cubierta proteica o cpside. Por otra parte los virus envueltos aaden a esta
estructura bsica una envoltura lipoproteica de origen celular. La funcin de la cpside es de
servir al cido nucleico como proteccin y vehculo.
Postulado de Lwoff
"nicamente sern considerados virus aquellos agentes infecciosos cuya partcula elemental
contenga un solo tipo de cido nucleico". Es decir poseen ARN o ADN, pero no ambos tipos de
cidos nucleicos funcionales a la vez. Por lo tanto los virus pueden ser ADN o ARN virus.
Debido a la estructura simple de virus, para su multiplicacin dependen en forma absoluta de la
clula husped que infectan. Por lo tanto consideraremos a los virus como parsitos
intracelulares obligados.
REPLICACIN VIRAL
La clula husped, una vez infectada, sintetizar nuevas molculas de cido nucleico viral,
ya que el genoma viral tomara el control de las actividades metablicas de la clula. Bajo este
control, tambin se producirn gran cantidad de protenas virales. De esta manera el
ensamblado de nuevas partculas virales provendr de la asociacin de las nuevas molculas de
cido nucleico viral con las protenas. Este proceso es muy diferente de la reproduccin
celular, tanto de los procariontes como de los eucariontes. Por lo tanto es mas apropiado
hablar de REPLICACION VIRAL.
Hasta el momento no se ha podido demostrar que ningn virus aislado pueda utilizar o
almacenar energa mediante procesos similares a la respiracin, tampoco pueden sintetizar
protenas. Es decir no tienen metabolismo propio, dependiendo en forma absoluta del medio
ambiente celular.
El parasitismo de los virus se ejerce a nivel gentico, ya que el genoma viral dentro de la clula
desplaza al genoma de la clula hospedadora del control celular.
PROVIRUS
Anteriormente hemos explicado que los virus, infectan las clulas y hacen replicas de si
mismos. Luego abandonan la clula husped y pasan a otra, recomenzando su ciclo. Pero tambin
puede ocurrir que el genoma viral se integre al ADN del husped. Cuando el genoma viral se
integra al genoma celular y se replica junto con este se lo denomina PROVIRUS. Un provirus
puede activarse espontneamente o bien expuesto a diversos estmulos, una vez activado puede
inducir la produccin de virus completos. Los provirus pueden modificar la morfologa celular y
su metabolismo, esto puede deberse a la produccin de alguna protena viral. Estos cambios en
la estructura celular, generalmente asociados a cambios en la membrana celular, inducidos por
un provirus reciben el nombre de transformacin. En algunos casos estas clulas
transformadas por los provirus pueden ser cancerosas.
El parasitismo celular obligado es la causa bsica por la cual un virus puede causar dao. La
relacin que establece un virus y su clula husped es variable. El resultado de la interaccin
depende tanto del virus en cuestin como de la clula husped. Por ejemplo, se denominan virus
citocdicos , a los que como resultado de su multiplicacin, producen una rpida induccin hacia
la muerte celular. Por otra parte se encuentran los virus no citocdicos, que son aquellos que no
provocan la muerte celular. Ejemplos de virus no citocdicos serian los virus moderados y los
virus oncognicos. Los virus moderados son aquellos que producen partculas virales y no
producen la muerte celular. Han llegado con la clula husped a un estado de equilibrio ms o
menos estable. Luego estn los virus oncognicos, capaces de estimular la divisin celular,
estos cambios pueden ser irreversibles si la clula pierde la capacidad de regular su ciclo
celular. Este estado se denomina transformacin celular.
1- Las infecciones latentes, donde el virus permanece sin manifestarse, alojado en clulas no
productoras. Ante determinados estmulos, estrs, enfermedades, exposicin a la luz solar, el
virus se reactiva, recomenzando la sntesis de cidos nucleicos y protenas virales. Ejemplos: L
Herpes simplex, Varicela zoster.
2- Las infecciones crnicas, donde de una persona enferma siempre es posible obtener virus
infeccioso, aun por periodos muy prolongados de tiempo. Por ejemplo, virus de la hepatitis B,
Epstein-Barr, virus de la rubola.
Fig. 1.10- Virus del Mosaico del Tabaco (ARN virus) y Bacterifago T4 (ADN virus)
MORFOLOGA VIRAL
Los virus poseen gran variedad de formas y tamaos. Por ejemplo los virus que al microscopio
electrnico aparecen aproximadamente esfricos se denominan isomtricos. En estos virus el
cido nucleico esta rodeado por una cpside (caja) proteica. Las subunidades estructurales que
forman la cpside, visibles al microscopio electrnico, se denominan capsmeros. A su vez los
capsmeros estn formados por subunidades proteicas. La cpside por su naturaleza antignica
es la que determina la identidad viral.
El cido nucleico viral no se encuentra desnudo, sino que esta asociado a protenas distintas de
las de la cpside, cuya funcin puede ser estructural (plegado del ADN) o enzimtica
(polimerasa). Al conjunto de cido nucleico y protenas asociadas se lo denomina "core". Por
ultimo diremos que los virus donde la cpside rodea directamente al cido nucleico (es decir
que no hay un "core" evidente), el conjunto de cpside y cido nucleico recibe la denominacin
de nucleocpside.
GENOMA VIRAL
El genoma, que puede encontrase en los distintos tipos de virus, puede sistematizarse de
acuerdo a diversos criterios:
De acuerdo a este criterio se considera que un virus es + (o cadena +), cuando su genoma
monocatenario tiene la misma polaridad que un ARNm. Es decir el mismo genoma viral, puede
actuar dentro de la clula como ARNm y llevar a cabo directamente la sntesis de protenas
virales. Los "virus +", pueden infectar con el cido nucleico solo, salvo los retrovirus que siendo
+, necesitan una transcriptasa reversa asociada al genoma para poder infectar. Por el
contrario, se denomina "virus -" cuando el genoma no puede actuar directamente como
mensajeros. El ARN - puede actuar como molde, para la sntesis de ARN +, el ARNm viral.
BACTERIFAGOS
Los Bacterifagos son virus especficos de las bacterias. Bacterifagos, significa que se
"alimenta" o multiplica a expensas de bacterias.
Los Bacterifagos que infectan clulas husped, pueden establecer dos tipos de procesos:
1- Ciclo Ltico: en este tipo de ciclo el virus produce inmediatamente gran cantidad de cidos
nucleicos virales y protenas de la cpside. Estos se ensamblan produciendo nuevas partculas
virales que son liberadas al medio al producirse la lisis celular.
2- Ciclo Lisognico: en este ciclo la relacin entre clula husped y virus, puede prolongase por
periodos variables de tiempo. El virus integra su genoma al cromosoma bacteriano, replicndose
conjuntamente el cido nucleico del parsito y el del husped. Un virus bacteriano integrado al
cromosoma se denomina profago. Por lo tanto el profago se replica junto con el ADN
bacteriano. En determinadas circunstancias (por ejemplo ruptura del ADN bacteriano por luz
ultravioleta o agentes qumicos), el profago se activa, y comienza la produccin de cido
nucleico viral y protenas virales, produciendo luego la lisis celular. Las bacterias que portan
profagos se denominan lisognicas. Los Bacterifagos que pueden integrarse como profagos y
que no lisan inmediatamente a las clulas se denominan fagos atenuados.
Fig. 1.12- Esquema del Ciclo Ltico Viral (de multiplicacn) y del Ciclo Lisogenico Viral
Los virus pueden servir como vehculos (vectores), para transferir material gentico de
una clula a otra. Este fenmeno se denomina transduccin. Durante el ciclo ltico, el ADN del
husped queda fragmentado y alguno de esos fragmentos puede ser tomado al azar y quedar
dentro de la cpside. De esta forma, cuando el virus infecta una nueva clula, transporta genes
de una antigua clula husped a otra nueva.
El HIV es un retrovirus. Los retrovirus son virus cuyo material gentico es ARN. Una vez que
el virus ha penetrado en una clula, una enzima llamada retrotranscriptasa, produce ADN a
partir del ARN viral. El ADN recin sintetizado viaja al ncleo y se integra al ADN
cromosmico . En este punto la infeccin se ha hecho permanente , y la forma integrada del
virus se denomina provirus. El HIV es un LENTIVIRUS. Por lo tanto su ciclo vital intracelular
(ciclo de infeccin) puede prolongarse por aos. Sus genomas son complejos y sus mecanismos
regulatorios son solo parcialmente conocidos. Los Lentivirus causan infecciones crnicas.
El sistema inmune del hombre reconoce las protenas del HIV como antgenos y produce
anticuerpos contra ellas. Por lo tanto una persona infectada tendr circulando en sangre
anticuerpos contra las protenas del HIV. En este aspecto se basa el test de diagnstico ms
utilizado en la actualidad: el test de ELISA (inmunoensayo ligado a enzima).
Fig. 1.13- Esquema del Virus de la Inmunideficiencia Hunama (HIV)
El virin del HIV, esta recubierto por una membrana lipdica, por lo tanto se trata de un virus
envuelto. De la membrana sobresalen glicoprotenas: la gp41 y la gp120. La membrana
compuesta por lpidos y protenas recubre el ncleo (core) del virin, formado por las protenas
p28 y p24. En el core se encuentran el ARN del virus y la enzima transcriptasa inversa.
Empieza cuando un virin o partcula vrica , se une a la superficie externa de una clula
susceptible. Este primer estadio del ciclo se lo denomina adsorcin. Luego el virus fusiona su
envoltura lipoproteica con la membrana celular, introduciendo en la clula su nucleocpside
junto con el ARN que constituye su dotacin gentica. En cada partcula viral se encuentran
dos cadenas de ARN vrico. A este proceso se lo conoce como penetracin.
La enzima transcriptasa inversa es una ADN polimerasa que primero produce una copia de ADN
simple cadena que a continuacin se copia a si misma obtenindose ADN doble cadena. Por lo
tanto este ADN doble cadena se obtuvo a partir de ARN. La sntesis del ADN doble cadena
ocurre junto con la degradacin del ARN original. El ADN doble cadena (provirus), emigra hacia
el ncleo y se integra en el propio ADN celular. La integracin de este ADN doble cadena en el
cromosoma del husped es necesaria para la sntesis de nuevas molculas de ARN, por la ARN
polimerasa celular, ya que el virus carece completamente de la maquinaria metablica necesaria
para realizar la transcripcin y la sntesis de protenas necesarias para la cpside y la misma
transcriptasa reversa.
Este experimento demostr que el ARN es el material gentico del virus del mosaico del
tabaco. Los resultados del experimento son extensibles a otros tipos de virus con genoma a
ADN.
VIROIDES
Los viroides son agentes infecciosos que poseen al igual que los virus un solo tipo de cido
nucleico y son parsitos absolutos, pero y esta es la gran diferencia con los virus, carecen de
cpside y envoltura. Por lo tanto los viroides estn constituidos solo por una secuencia de
nucletidos, adems los viroides carecen de informacin para la sntesis de protenas, en
cambio los virus siempre poseen dicha informacin.
PRIONES
Las partculas infecciosas llamadas priones, estn constituidas nicamente por una protena de
aproximadamente 250 aminocidos. Es decir carecen completamente de cidos nucleicos. Es
esta la razn por la cual fue resistida durante mucho tiempo, la hiptesis de que las protenas
por si solas podan ser la causa de enfermedades infecciosas. De acuerdo al dogma imperante
hasta 1980, las enfermedades transmisibles (infecciosas) necesitaban material gentico, para
que la infeccin se asentara en el husped. Hasta ese momento eran los virus los agentes
infecciosos ms pequeos conocidos, y todos ellos poseen ADN o ARN como material gentico
necesario para codificar sus protenas y dirigir la replicacin viral en el husped.
Pero ahora sabemos que las partculas protenicas infecciosas (priones), pueden ser el sustrato
de diversas enfermedades, hereditarias o contagiosas. Este comportamiento dual tanto
infeccioso como hereditario era desconocido. Posteriormente se descubri que los priones se
multiplican por una va increble y desconocida hasta ese momento: convierten protenas
normales en MOLECULAS INFECCIOSAS, con solo alterar la estructura proteica.
Las EET se caracterizan por su prolongado periodo de incubacin (en el hombre puede tener un
periodo de incubacin de 30 o mas aos), generalmente asociadas a declives progresivos de las
funciones motoras y cognitivas (enfermedad activa), y por su evolucin inevitablemente fatal.
Las EET en el ser humano generalmente aparecen en personas de edad avanzada.
Aparentemente todas las EET son causadas por el cambio en la estructura de una protena
normalmente presente en las membranas celulares, denominada protena prinica (PrP). La
forma anormal de la PrP se designa PrPsc (scrapie), para diferenciarla de la forma normal
llamada PrPc (celular). La secuencia de aminocidos (estructura primaria) de la PrP c y la PrPsc es
idntica lo que varia es su conformacin (plegamiento en el espacio). De acuerdo a esta teora
la protena alterada (PrPsc), puede unirse a la protena normal (PrPc) y cambiar su conformacin,
transformndola a su vez en una protena alterada. De esta forma se propagara la enfermedad
y se generaran nuevas protenas infecciosas. De esta forma el pasaje de la forma normal a la
patolgica es catalizada por el mismo prin (PrPsc), por lo tanto solo hace falta una pequea
cantidad de este para provocar la transformacin de toda la protena normal, ya que se trata
de un fenmeno de crecimiento exponencial.
Recientemente , se ha aceptado que los priones pueden ser transmitidos, posiblemente por
comida, inoculacin directa en el cerebro, piel, msculo o estmago. Por esto la epidemia de
EEB, ocurrida en Gran Bretaa provoco un enorme inters en todo el mundo.
Desafortunadamente han aparecido en ese pas una nueva variedad de la ECJ (casos en
personas mucho mas jvenes que lo usual), lo que probara una relacin causal entre la EEB y los
casos seres humanos. El gobierno britnico tuvo que admitir la posibilidad de que la aparicin
de estos extraos casos de la ECJ hubieran sido provocados al ingerirse carne vacuna
infectada (tejido nervioso).
Al principio habamos hablado de la dualidad de los priones, por un lado partculas infecciosas y
por el otro responsables de enfermedades hereditarias. Esto es naturalmente confuso. Por
ejemplo, ciertas enfermedades prinicas como la GSS, son hereditarias. Esta enfermedad
tiene una herencia autosomal y dominante, lo cual significa que si un padre desarrolla la
enfermedad , los hijos tienen un 50 por ciento de probabilidades de desarrollarla. La
explicacin a estos hechos vino dado por el descubrimiento de mutaciones gnicas puntuales en
la secuencia de nucletidos del gen que codifica la PrP . Estos genes mutados provocan cambios
en la secuencia de aminocidos de la protena PrP. Estos cambios podran incrementar la
probabilidad de la transformacin de la protena PrP mutante de una forma normal a una
anormal patgena. Diferentes mutaciones en el gen provocaran diferentes protenas mutantes,
con mayor o menor tendencia a transformarse en la forma aberrante patgena. Esto explica
tambin las distintas enfermedades prinicas hereditarias, la ECJ espordica , un 15 por
ciento de los casos hereditaria y la GSS autosomal dominante.
Raramente por
infeccin (por ejemplo
por un transplante u
otro tratamiento
medico)
EGSS Prdida de Herencia de una 50 familias
coordinacin, demencia mutacin en gen de la identificadas
PrP
IFF Trastornos del Sueo, Herencia en una 9 familias
insomnio demencia mutacin del gen de la identificadas
PrP
Por otra parte, la mayora de los componentes de la clula viva son transparentes debido a su
alto contenido de agua. Al disecarla no presenta un significativo contraste. Entonces la tincin
selectiva de ciertos componentes celulares resuelve el problema del contraste. Sin embargo la
mayora de estas tcnicas conduce a la muerte de la clula y an ms, a cambios qumicos y
morfolgicos que no se encuentran en las clulas activas y en la matriz extracelular.
Cabe destacar que algunos pigmentos del citoplasma y de organoides vegetales pueden
absorber determinadas longitudes de onda (l) [1] y no necesitan de previo tratamiento para su
observacin al microscopio ptico.
Para el estudio de la clula viva se emplean tcnicas pticas especiales como, por ejemplo, la
microscopia de contraste de fase o la de interferencia.
Los compuestos qumicos que constituyen la clula pueden ser detectados, descriptos y
localizados dentro y fuera de la clula mediante mtodos adaptados de la Qumica Analtica.
Las tcnicas aislamiento y separacin especfica de clulas, organelas y macromolculas y
el preparado de cultivos celulares para el estudio detallado son herramientas invalorables para
el avance de la biologa celular y molecular.
Los microscopios primeramente usados en el Renacimiento tanto como los que son utilizados en
los laboratorios hoy, son microscopios pticos. La luz visible pasa a travs de la muestra y de
las lentes de vidrio por donde la luz es refractada (doblada) de tal manera, que la imagen del
espcimen es amplificada cuando se proyecta en el ojo.
El microscopio ptico nunca puede resolver detalles menores a 0,2mm, la medida de una
pequea bacteria. Esta resolucin es limitada por la longitud de onda de la luz visible usada
para iluminar la muestra. Los microscopios pticos o de luz pueden aumentar efectivamente
alrededor de 1000 a 1500 veces el tamao de la muestra real; si se incrementase el aumento la
imagen proyectada sera borrosa. La mayora de las mejoras en microscopia de luz del comienzo
de este siglo ha involucrado nuevos mtodos para aumentar el contraste. Sin estas tcnicas
sera imposible para el ojo humano el conocimiento del mundo celular.
La mayora de las organelas son demasiado pequeas para ser visualizadas por la microscopia de
luz. La Biologa Celular avanz rpidamente hace un poco ms de cincuenta aos con la
introduccin del microscopio electrnico. En lugar de luz visible, el microscopio electrnico
utiliz un haz de electrones [2] a travs de la muestra. El poder de resolucin est
inversamente relacionado con la longitud de onda (l) de la radiacin que un microscopio usa y un
haz de electrones tiene longitudes de onda mucho ms cortas que la luz visible. Para mayores
precisiones al respecto, consulte el cuadro 1.4
A su vez,
AN = n . seno a
donde, n es el ndice de refraccin del medio que atraviesa el haz y a es el ngulo de apertura
La mayora de los microscopios electrnicos modernos pueden lograr una resolucin de 0,2 nm,
unas 1000 veces mejor que la obtenida con el microscopio ptico.
Los bilogos usan el trmino ultraestructura celular para referirse a la anatoma celular cuando
se resuelve por un microscopio electrnico.
El ME revela muchas organelas que son imposibles de resolver con MO. Pero el MO ofrece
muchas ventajas especialmente para el estudio de la clula viva. Una desventaja de ME es que
los mtodos qumicos y fsicos usados para preparar la muestra, no slo matan a las clulas sino
que puedan introducir artefactos, estructuras peculiares vistas en micrografas que no existe
en una clula viva.
La preparacin de la muestra para el MO y el ME resulta similar si se trabaja con las
clulas muertas.
En la tabla 1.9 se comparan los pasos a seguir en ambos tipos de microscopia para la
preparacin de la muestra:
Tabla 1.12 -Tcnicas para Preparar una Muestra en Microscopia ptica y Electrnica
Paso Microscopia ptica Microscopia Electrnica
OBTENCIN: Se hace
cuidadosamente con
instrumental adecuado.
FIJACIN: se destina a Pueden usarse fijadores Se realiza con
impedir la autodegradacin qumicos (formol, etanol, paraformaldehido, con
enzimtica (autlisis)de las metanol o mezclas fijadoras). tetrxido de osmio o,
clulas tratando de evitar, en Tambin se utilizan mtodos ltimamente, con
lo posible, la alteracin de las fsicos como la desecacin, el glutaraldehido, en soluciones
estructuras originales y su calor seco, el fro o la acuosas de pH neutro y
autodigestin. congelacin. concentracin salina semejante
al medio. Luego se lava la pieza
y se post-fija con tetrxido de
osmio durante una hora; el
osmio se une a estructuras
lipoproteicas (membranas
celulares) ofreciendo mayor
contraste en la imagen. Esto se
conoce como coloracin o
contrastado.
DESHIDRATACIN: retira el Pasajes sucesivos por Baos con alcohol o acetona.
agua de las piezas fijadas, para alcoholes de concentracin
que luego puedan ser incluidas creciente.
en un elemento que es
insolubles en solventes acuosos.
ACLARACIN Se realiza para eliminar de la No requiere
muestra restos de alcohol y
toda sustancia hidrosoluble.
Se impregna la muestra con un
solvente no acuoso, orgnico y
soluble en parafina, como
xileno, tolueno o benceno.
INCLUSIN Se incluye el material en Se utilizan resinas sintticas
parafina o celoidina tipo epoxi que luego de secarse
previamente calentada, la que se transforman en un material
al solidificarse sirve de sostn muy duro, apto para que se le
de la muestra y posibilita su efecten cortes
corte. Se forma el taco. extremadamente delgados.
CORTE Es lo suficientemente delgado Debe obtenerse un corte de la
como para ser atravesado por muestra tal que el haz de
la luz. Esto se logra utilizando electrones logre atravesarla.
el micrtomo con el que se El ultramicrtomo realiza
realiza cortes uniformes del cortes de 20 a 100 nm de
tejido a un dado espesor. espesor con cuchillas de vidrio
o diamante.
REHIDRATACIN Se retira la parafina con xilol
y se lava con alcoholes de
concentracin creciente. Al
ser los colorantes solubles en
agua resulta indispensable
rehidratar
COLORACIN Las clulas y los tejidos son
coloreados para lograr
mayores contrastes
facilitando la observacin. La
coloracin de hematoxilina-
eosina es una de las ms
comnmente utilizadas. Tie el
ncleo de azul y el citoplasma
de rosa.
MONTAJE El corte se monta sobre un Estas muestras se montan en
portaobjetos. El cubreobjetos pequeas grillas de cobre
El corte se coloca sobre puede colocarse por encima
ciertas clases de estructuras. para proteger el preparado.
Este puede conservarse
durante dcadas si el
cubreobjetos se sella.
CONTRASTADO La pieza se impregna en
acetato de uranilo, citrato de
plomo u otras sustancias.
10 (en la prctica)
5.500 (trmino medio) 8) LONGITUD DE ONDA 0,056
500 X a 1500 X 9) AUMENTO (el signo X 30.000 X a 1.000.000 X
significa aumento)
Carnoy u otros fijadores 10) FIJACIN Bicromato de potasio, tetrxido
de osmio, formaldehdo.
Parafina o coloidina 11) INCLUSIN Acrlicos o resinas de epoxi.
Con el micrtomo. (cuchilla 12) CORTES Con ultramicrtomo. (cuchilla de
de acero). Cortes de 10m diamante o vidrio) Cortes de
100 a 500 .
De vidrio 13) PORTAOBJETO Placas de Colodion, aluminio o
berilio.
Nivel microscpico: 14) NIVEL DE OBSERVACIN Nivel submicroscpico:
ESTRUCTURA ULTRAESTRUCTURA
Los microscopio de contraste de fase y de interferencia son sistemas pticos especiales que
logran intensificar la escasa interferencia [3] y proporcionan mayor contraste que el obtenido
con un MO comn.
El microscopio de luz polarizada puede proveer datos sobre la estructura a nivel molecular de
las clulas y los tejidos no slo en las clulas vivas sino en preparados post-mortem. Ciertos
componentes celulares y tisulares se comportan peculiarmente cuando la luz polarizada (luz que
gira nicamente en un plano) los atraviesa.
La descripcin de las diversas organelas dentro de la clula revela poco acerca de su funcin.
La Biologa Celular actual desarrolla la integracin de la Citologa con la Bioqumica, es decir el
estudio de la estructura celular junto con el anlisis de los procesos qumicos de la vida
(metabolismo). El fraccionamiento celular ha sido particularmente importante en esta ciencia.
El objetivo del fraccionamiento celular es disgregar las clulas separando las organelas
principales de modo que, sus funciones individuales puedan ser estudiadas. El instrumento
usado para fraccionar las clulas es la centrfuga capaz de girar a diversas velocidades. La ms
poderosa, llamada ultracentrfuga puede dar vueltas tan rpidamente como 80000 revoluciones
por minuto (RPM) y aplicar fuerzas sobre las partculas de 500000 veces mayores que la
fuerza de la gravedad (500000g).
Este instrumento posee un tubo muy delgado por donde se hacen pasar a las clulas una tras
otra. Un determinado tipo celular emitir fluorescencia, previo tratamiento con fluorocromo
(pigmento fluorescente). Esto permite la discriminacin y, por lo tanto, la separacin de las
clulas as tratadas de acuerdo a la fluorescencia que emitan.
Con el objetivo de preservar toda la informacin que sea posible sobre todos los tipos
celulares, se han desarrollado tcnicas de disociacin de las clulas.
A nivel molecular, los organismos estn formados por relativamente pocos tipos de compuestos.
El agua constituye alrededor del 70% de la mayora de los seres vivos. De los dems
compuestos, los principales son los glcidos, los lpidos, las protenas y los nucletidos, muchos
de ellos combinados para formar los cidos nucleicos, cido ribonucleicos (ARN) y cido
desoxirribonucleico(ADN). Aunque hay muchos otros compuestos presentes, estas cuatro
categoras constituyen la mayora de las molculas orgnicas de los seres vivos y son los
actores de los procesos metablicos. Por lo tanto, su localizacin y funcin dentro de la clula
como un estudio ms detallado fuera de ella se hace necesario.
DIFRACCIN DE RAYOS X
Los compuestos qumicos se identifican "in situ" por medio de mtodos citoqumicos.
Este objetivo es cualitativo y cuantitativo y muchas veces persigue el estudio de los cambios
dinmicos producidos en el contenido qumico celular en las distintas etapas del metabolismo.
Los mtodos fsicos y reacciones qumicas similares a las implementadas en Qumica Analtica
pero adaptadas a tejidos se usan para llevar a cabo este tipo de identificacin.
Cuando los vertebrados superiores, los animales e incluso el hombre, son expuestos a la
actividad de los microorganismos o a molculas ajenas a sus ultraestructuras, ya sea
naturalmente o por inyeccin, aquellos sintetizan anticuerpos. Estos son protenas que pueden
fijarse selectivamente a los materiales extraos que desencadenaron su sntesis. Por lo tanto,
el organismo produce tantos anticuerpos como partculas extraas (antgenos) son reconocidas.
As, se puede obtener una gran variedad de anticuerpos.
Los anticuerpos son herramientas experimentales muy verstiles para reconocer y manipular
clulas y molculas. Si un animal de una especie determinada es inyectado con un componente
celular o molecular de otra especie, el primero logra fabricar anticuerpos capaces de
reconocer y fijar fuertemente aquel componente (el del segundo animal). A estos anticuerpos
se acoplan colorantes fluorescentes que son visibles al MO. De modo similar, con el M.E. se
pueden detectar molculas trazadoras acopladas en anticuerpos. De esta manera, los
componentes celulares y moleculares quedan teidos en forma diferencial por los anticuerpos
que se fijan a ellos.
CUESTIONARIO DE AUTOEVALUCIN
a. envoltura nuclear
b. cloroplasto
c. aparato de Golgi
d. retculo endoplasmtico
a. la divisin celular
b. la respiracin celular
c. la fotosntesis
d. la sntesis de protenas
a. cloroplasto
b. pared celular
c. mitocondria
d. centrolos.
a. mitocondria
b. ribosoma
c. cloroplasto
d. retculo endoplasmtico
8. Si Ud. tuviera que argumentar acerca de que los virus son organismos vivos, qu
caractersticas estructurales y funcionales del virus podra utilizar para apoyar su
argumentacin?
9. Qu tipo de clulas pensara Ud. que alcanzaran el mayor tamao: una clula muy
aplanada o una esfrica? Por qu?
10. Por qu casi todas las clulas casi siempre son microscpicas?
11. Cules son las propiedades fundamentales que comparten todas las clulas? Describa la
importancia de cada una de ellas.
12. Compare en un cuadro las diferencias estructurales, funcionales y metablicas entre las
clulas procariontes y eucariontes.
14. Enumere los pasos de la infeccin viral, y describa brevemente cada paso.
15. Utilizando el Sistema Mtrico Decimal resuelva las equivalencias en metros de: a) 1 nm; b)
1 mm.
a. AN / 0.61 x l
b. 0.61 x l / AN
c. 0.61 / AN x l
d. 0.61 x AN /l.
20. Explique qu tcnicas utilizara para crear suficiente contraste cuando se usa el M.O. y el
M.E.
22. Cules son las ventajas de estudiar las clulas con el M.E.T. y el M.E.B.?
27. Cuando una clula de forma esfrica crece, los mm 2 de superficie de la membrana
plasmtica por mm3 del volumen celular:
a. decrece
b. aumenta
c. se mantiene constante
d. se vuelve ms delgada
a. citometra de flujo
b. b) microscopia electrnica
c. fraccionamiento celular
d. difraccin de rayos
30. Las muestras de clulas vivas o preparados fijados se pueden estudiar indistintamente
con:
a. microscopia electrnica
b. microscopia de interferencia
d. difraccin de rayos X.
BIBLIOGRAFA
Alberts, B et al; (1996) Biologa Molecular de la Clula. 3 ra Edicin. Ediciones Omega S.A.
Barcelona.
Campbell, N; (1997) Biology. 4th Edition. the Benjamin Cummings Publishing Company. Inc.
California
De Robertis, E.; Hib, J.; (1998) .Fundamentos de Biologa Celular y Molecular. El Ateneo.
Bs.As.
Freidfelder, D. (1982) Physical Biochemestry. 2 Ed. W.H. Freeman and Co.
Karp, G.; (1998) Biologa Celular y Molecular. Ed. Mc Graw Hill Interamericana. Mxico.
[1] La longitud de onda (l) es la distancia entre dos puntos consecutivos que vibran en fase.
Siempre que dos puntos estn separados por una distancia igual a la que recorre la onda en un
perodo, o a un mltiplo de ella, los dos puntos vibrarn en fase.
[2] Los electrones pueden considerarse como una variedad de radiacin de pequea longitud de
onda.
[3] Interferencia: Es un fenmeno fsico producido entre ondas cuyos "picos" y "valles" no
coinciden, es decir no estn en fase.