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Cultivos Tropicales, 2015, vol. 36, no. 1, pp.

65-72 enero-marzo

ISSN impreso: 0258-5936 Ministerio de Educacin Superior. Cuba


ISSN digital: 1819-4087 Instituto Nacional de Ciencias Agrcolas
http://ediciones.inca.edu.cu

CARACTERIZACIN DE AISLADOS DE RIZOBIOS


PROVENIENTES DE NDULOS DE SOYA (Glycine max (L.) Merril)
CON POTENCIALIDADES EN LA PROMOCIN
DEL CRECIMIENTO VEGETAL
Caracterization of rizobia isolates from soybean nodules
(Glycine max (L.) Merril) with potenciality to promote
the plant growth

Ionel Hernndez Forte), Mara C. Npoles Garca


y Belkis Morales Mena
Abstract. The objective of this work was to characterize RESUMEN. El objetivo del presente trabajo fue caracterizar
four rhizobia and isolated from soybean nodules about cuatro aislados de rizobios y la cepa Bradyrhizobium
three positive attributes which characterize these promoting elkanii ICA 8001 provenientes de ndulos de plantas de
growth plant rizobacterias. The siderophores and indol soya, en cuanto a su capacidad para exhibir tres atributos
acetic acid (AIA) production and the specific activity of positivos que caracterizan estas rizobacterias promotoras
1-aminocyclopropane-1-carboxylate (ACC) desaminase del crecimiento vegetal. Se determin su capacidad de
enzyme, were determinated. Siderophore was produced producir siderforos; AIA (cido 3-indolactico) y la
only by S11 isolated. All bacterial isolates and the strain actividad especfica de la enzima 1-aminociclopropano-1-
produced IAA, but S11 produced the highest concentrations. cido carboxlico (ACC) desaminasa. Solo el aislado S11
All isolates, except S11, showed ACC deaminase enzyme produjo siderforos en el medio de cultivo. Aunque todos
activity when they were cultivated with the ACC precursor. los aislados y la cepa produjeron AIA, S11 produjo las
The characterization allowed to know beneficial attributes, mayores concentraciones de esta fitohormona. Todos los
which represent advantages in the competitiveness of these aislados, excepto S11, mostraron actividad de la enzima
bacterias in the crop rhizosphere, which together with their ACC desaminasa cuando se cultivaron en presencia del
ability to perform the biological nitrogen fixation, could precursor 1-aminociclopropano-1-cido carboxlico.
promote soybean plants growth. La caracterizacin realizada permiti conocer atributos
beneficiosos que brindan ventajas en la competitividad
de estas bacterias en la rizosfera del cultivo, los que en
conjunto con su capacidad de realizar la Fijacin Biolgica
del Nitrgeno (FBN), pudieran incrementar el crecimiento
de plantas de soya.

Key words: siderophores, Rhizobium, rhizobacteria Palabras clave: siderforos, Rhizobium, rizobacterias

INTRODUCCIN de nutrientes, transformarlos a formas asimilables


por la planta, producir sustancias promotoras del
Las bacterias promotoras del crecimiento crecimiento fitohormonas o servir como control
vegetal PGPB, por sus siglas en ingls, se asocian a biolgico de fitopatgeno denominndose entonces
muchas especies de plantas presentes en la mayora de biocontrol-PGPB (2). Dentro del primero de estos
de los ecosistemas (1). Este grupo bacteriano grupos bacterianos se encuentran los rizobios,
tiene la capacidad de aumentar la disponibilidad microorganismos que se asocian simbiticamente
con las leguminosas, alojndose en el interior de
Instituto Nacional de Ciencias Agrcolas (INCA), gaveta postal 1, San Jos estructuras especializadas denominadas ndulos.
de las Lajas. Mayabeque, CP 32700, Cuba. Estos rganos constituyen el hbitat propicio donde
) ionel@inca.edu.cu se realiza la Fijacin Biolgica de Nitrgeno (FBN) (3).

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La FBN, en conjunto con la produccin de pertenecen al cepario del Laboratorio de Bacteriologa,


siderforos, de cido 3-indolactico (AIA) y la del Departamento de Fisiologa y Bioqumica Vegetal
produccin de la enzima 1-aminociclopropano-1-cido del INCA. Segn estudios anteriores, donde se
carboxlico (ACC) desaminasa, constituyen algunos aplicaron los mtodos convencionales de identificacin
de los mecanismos directos en la promocin del de rizobios velocidad de multiplicacin y produccin
crecimiento de las plantas (4, 5). de cido-base, S11 pertenece al gnero Rhizobium
Algunas cepas de rizobios tienen la capacidad de y el resto de los aislados al gnero BradyrhizobiumA.
producir siderforos, biomolculas que actan como Se realizaron tres ensayos, donde se determin
agentes quelantes especficos de hierro, muchas la produccin de siderforos, la produccin de
veces no disponible para los organismos vivos e metabolitos del tipo AIA y la actividad de la enzima
indispensable para la realizacin de funciones vitales ACC desaminasa. Se prepararon cultivos de los
como la sntesis de ADN, la respiracin, la fotosntesis diferentes aislados bacterianos en Erlenmeyers de
y la FBN (6). As mismo los siderforos son utilizados 25 mL de volumen, conteniendo 5 mL de medio lquido
por los rizobios para disminuir las concentraciones Manitol Extracto de Levadura YEM, por sus siglas en
de hierro disponible en el suelo y con ello inhibir la ingls (11). Los medios se inocularon con una asada
proliferacin de microorganismos fitopatgenos (7). de cada aislado de rizobio previamente conservados
Por otra parte, el cido 3-indolactico es una auxina a 4 0C en tubos de ensayo en el mismo medio de
que regula el crecimiento en las plantas, ya que activa cultivo slido. Los cultivos lquidos se incubaron a
varias repuestas en la clula vegetal a nivel bioqumico, 30 0C, en condiciones de agitacin a 150 r min-1 Optic
fisiolgico y morfolgico. Tal efecto se visualiza en ivimen system-Comecta durante 24 h para el aislado
la divisin, elongacin y diferenciacin celular, en la S11 y 72 h para el resto. En el caso especfico de
formacin de races laterales y de pelos radiculares, as la determinacin de produccin de metabolitos del
como en la apoptosis y la morfognesis (8). tipo AIA, los medios de cultivo se suplementaron
El etileno, fitohormona producida por las plantas, con dos concentraciones de triptfano 200 y
constituye un inhibidor en la progresin de la infeccin 500 g mL-1 en el momento de su preparacin. Como
de los rizobios en el proceso simbitico con las control del experimento se emplearon medios de
leguminosas. Para contrastar esto, algunos rizobios cultivo sin triptfano.
producen la enzima ACC desaminasa, con lo cual
Determinacin de la produccin
disminuyen la concentracin del etileno y de sus
de siderforos
efectos inhibidores en la nodulacin (9).
A pesar de que est bien documentada en la Se tomaron tres alcuotas de 10 L de los
literatura el efecto beneficioso que ocasionan estos cultivos bacterianos y se colocaron en placas Petri
metabolitos producidos por las PGPB en la promocin que contenan medio slido Cromo Azurol Sulfonato
del crecimiento vegetal, an son limitadas las CAS Agar (12). Las placas se incubaron WiseCube-
investigaciones que abordan la produccin de estos Daihan-brand de tres a cinco das a 28 0C. Finalmente
compuestos por los rizobios. Teniendo en cuenta se evalu la produccin de siderforos, a partir de la
lo anteriormente planteado el objetivo del presente presencia de halos de coloracin naranja formados
trabajo fue caracterizar cuatro aislados de rizobios alrededor del crecimiento microbiano (13). Alcuotas
provenientes de ndulos de plantas de soya y la de 10 L de medio de cultivo estril se colocaron en
cepa B. elkanii ICA 8001, en cuanto a su capacidad placas con el medio CAS Agar, las que se utilizaron
para producir siderforos, metabolitos del tipo AIA y como control del experimento.
a la presencia de la enzima ACC desaminasa, como
atributos positivos que caracterizan estas PGPB.
Produccin de metabolitos del tipo cido
3-indolactico (AIA)
MATERIALES Y MTODOS Los cultivos bacterianos inducidos se centrifugaron
a 8000 r min-1 y 4 0C durante 10 min Centrfuga 5804R,
El estudio se realiz en el Departamento de Eppendorf. Se aadi 1 mL de cada sobrenadante
Biologa de la Universidad de Waterloo, Canad y en el obtenido en 4 mL del reactivo de Salkowski (14) y se
Departamento de Fisiologa y Bioqumica Vegetal, del incubaron durante 20 minutos a temperatura ambiente.
Instituto Nacional de Ciencias Agrcolas (INCA), Cuba. La produccin de metabolitos del tipo AIA se detect
Material microbiano en espectrofotmetro Genesys 6, Thermospectronic
a 535 nm. La concentracin de AIA se determin
Se emplearon cuatro aislados de rizobios S1,
S10, S11, Snb y la cepa Bradyrhizobium elkanii ICA
8001 (10). Todos estos microorganismos provienen de A
Garca, D. Aislamiento y seleccin de especies de rizobios asociados al
ndulos de plantas de soya (Glyxine max) y actualmente cultivo de la soya (Glyxine max (L.) Merril). [Tesis de Maestra]. Instituto
Nacional de Ciencias Agrcolas. 2000. 100 pp.

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mediante una curva de calibracin, con un rango de


concentracin de 10-400 g mL-1 de AIA (SIGMA) y los
resultados se expresaron en g mL-1.
Determinacin de la actividad
de la enzimtica ACC desaminasa

Los cultivos bacterianos se centrifugaron a


8000 r min -1 y 4 0C durante 10 min Centrfuga
5804R, Eppendorf. Para inducir la sntesis de la ACC
desaminasa, los sedimentos celulares se lavaron dos
veces con 5 mL del medio mnimo salino M9 estril
(15). Posteriormente se resuspendieron con 7,5 mL
del mismo medio estril suplementado con 0,05 Mol L-1
de 1-aminociclopropano-1-cido carboxlico (ACC)
(SIGMA), como nica fuente de nitrgeno. Los aislados
se cultivaron entonces a 150 r min-1 Optic ivimen
system-Comecta y una temperatura de incubacin
que oscil entre los 28-30 0C, durante 24 horas para
el aislado S11 y 72 h para el resto. Seguidamente,
se determin la actividad ACC desaminasa mediante
la cuantificacin de la produccin de -cetobutirato
generado a partir del ACC (16).
Simultneamente, para calcular la actividad
especfica de la enzima ACC desaminasa, se
determin la concentracin de protenas totales en
el extracto bacteriano, segn el mtodo de Bradford
(17). Se utiliz albmina de suero bovino SIGMA como
estndar para la curva de calibracin, con un rango
de concentracin de 10-100 g mL-1. La actividad
especfica de la enzima ACC desaminasa se expres
en g de -cetobutirato g-1 protena h-1.
Diseo y anlisis estadstico ICA 8001: cepa Bradyrhizobium elkanii ICA 8001, control: Alcuotas
de 10 L de medio de cultivo estril.
Los datos obtenidos de los ensayos donde se
Figura 1. Produccin de siderforos por los
evalu la produccin de metabolitos del tipo AIA
diferentes aislados en medio Cromo
y la actividad de la enzima ACC desaminasa, se
Azurol Sulfonato Agar.
sometieron a la prueba de normalidad test de Bartlett
y homogeneidad de varianza test de Kormogorov- Se observaron halos de coloracin naranja
Smirnov y se aplic anlisis de varianza de clasificacin intensa alrededor de las colonias producidas por este
simple, utilizando el Test de comparacin de medias de aislado, a diferencia del resto de los microorganismos
Tukey para p<0,05 para discriminar diferencias entre estudiados que no se multiplicaron en este medio. Este
las medias (18). Los datos se graficaron utilizando el medio de cultivo, con una coloracin azul al momento
programa SigmaPlot 2001. En cada caso, incluyendo de su preparacin, se torna naranja en aquellas zonas
el ensayo de determinacin de siderforos, se donde crecen microorganismos con la capacidad de
realizaron cuatro rplicas por tratamiento. producir siderforos (13).
Similares resultados a los obtenidos en este
RESULTADOS Y DISCUSIN ensayo fueron observados en estudios realizados con
diez cepas del gnero Rhizobium, procedentes de
Produccin de siderforos por los aislados garbanzo (Cicer arietinum), donde en seis de ellas se
detectaron halos de coloracin naranja con dimetros
de rizobios
entre 1,0-2,22 mm (19).
De los cuatro aislados de rizobios empleados en
este estudio y la cepa B. elkanii ICA 8001, solo S11
tuvo la capacidad de producir siderforos (Figura 1).

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El medio de cultivo Cromo Azurol Sulfonato su concentracin. Los valores de AIA obtenidos en
es usualmente empleado para la determinacin los medios que fueron suplementados con triptfano,
cualitativa de siderforos, pues presenta muy bajas oscilaron aproximadamente entre 3 g mL-1 (para S10)
concentraciones de hierro (1 mM FeCl 3.6H 2O), y 47 g mL-1 para S11 (Figura 2). Estas concentraciones
condicin esencial para que se induzca la sntesis fueron inferiores a los encontrados en otros estudios
de siderforos en aquellos microorganismos con realizados con diferentes cepas de rizobios, donde
capacidad de producirlos (20). En tales condiciones, el en las mismas condiciones de cultivo, las cantidades
Fe2+ presente en el interior de la clula microbiana, se de esta fitohormona fueron de 126 g mL-1 (25) y
disocia de las protenas represoras que se encuentran 142,5 g mL-1 (26). El aislado S11 mostr la capacidad
unidas al ADN para impedir la sntesis de los de producir las mayores concentraciones de AIA, de
siderforos ante altas concentraciones de hierro. Las 29 y 45 g mL-1 en los medios suplementados con
PGPR que producen siderforos utilizan el complejo 200 y 500 g mL-1 de triptfano, respectivamente.
Fe3+-siderforos para incorporar este metal al interior
celular mediado por un receptor especfico localizado 60
en la membrana bacteriana. Este secuestro de hierro

Concentracin de AIA (ug mL-1)


50 a
disminuye su disponibilidad en el medio para otros
microorganismos carentes de este sistema y que en 40
ocasiones son patgenos para las plantas (13).
b
Se conoce que los rizobios tienen la capacidad de 30 cc
producir diversos tipos de siderforos; sin embargo, dd
20
solo algunos de ellos han sido estructuralmente
caracterizados. En bacterias del gnero Rhizobium en 0 ug mL-1
10 ee
forma de vida libre en la rizosfera, se han detectado f f 200 ug mL-1
ggg g g
500 ug mL-1
siderforos del tipo hidroxamatos (21). Aun est por 0
determinar cules son los mecanismos que utilizan S1 S10 S11 Snb ICA 8001
los bacteroides en el interior del ndulo radicular para Aislados de rizobios
la incorporacin del hierro, ya que se ha detectado
que aproximadamente el 44 % del hierro presente en Letras comunes no difieren significativamente (Duncan p<0,05).
ES*** = 0,314, n=4.
las plantas de soya se encuentra localizado en estas
estructuras (22).
Se ha demostrado la importancia que tiene para Figura 2. Produccin de metabolitos del tipo cido
los rizobios la captacin de hierro en el proceso 3-indolactico (g mL-1) por los aislados
de FBN, que realizan en simbiosis con las plantas de rizobios en medio YEM sin triptfano
leguminosas. La nitrogenasa, metaloenzima esencial y suplementado con 200 y 500 g mL-1 de
en este proceso y que constituye del 10-12 % del total este aminocido.
de las protenas de las clulas de rizobio, cataliza
la reduccin del nitrgeno molecular a amonio, por En los aislados de rizobios y la cepa B. elkanii
medio de reacciones redox dependientes de hierro. De ICA 8001, excepto S11, no se evidenci una relacin
manera indirecta tambin este metal contribuye a la directamente proporcional entre la concentracin de
FBN, ya que forma parte importante de los citocromos, triptfano y la concentracin de AIA producida, ya
molculas esenciales en el proceso de respiracin que el aumento en la concentracin de triptfano
celular, a partir del cual se obtiene la energa en el medio de cultivo no signific un incremento
necesaria para el proceso de fijacin del nitrgeno en la concentracin de AIA. Desde el punto de vista
(23). Evidencias del papel importante que juega la bioqumico existen varias causas que pudieran dar
captacin de hierro por los rizobios en simbiosis con explicacin a este fenmeno, sobre todo los aspectos
las leguminosas, se muestran explcitamente en relacionados con las enzimas que participan en
experimentos realizados con Sinorhizobium meliloti, cada una de las vas metablicas involucradas. Para
donde se observ una disminucin en la ocupacin de esclarecer esto sera necesario realizar determinados
los ndulos por las cepas mutantes con deficiencias anlisis isoenzimticos e incluso genticos que
en la sntesis de siderforos, en comparacin con las permitan dilucidar la verdadera causa de este
cepas salvajes (24). comportamiento en los diferentes microorganismos
estudiados.
Produccin de metabolitos del tipo cido Para todos los microorganismos estudiados,
3-indolactico por los aislados de rizobios con excepcin del aislado S10 se observa una
Todos los aislados bacterianos y la cepa B. elkanii induccin en la sntesis de AIA cuando fueron
ICA 8001 produjeron AIA, aunque con diferencias en cultivados en medios suplementados con triptfano.

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Este precursor se utiliza comnmente para la realizado para esclarecer el papel de esta molcula.
induccin de la sntesis del AIA pues se conoce que Se ha observado que cepas de Rhizobium no solo
la formacin de esta fitohormona es producto de tienen la capacidad de producir AIA cuando se
determinadas rutas metablicas cuyo precursor es encuentran en vida libre en el suelo, sino tambin
este aminocido. Hasta el momento se han descrito dentro de los ndulos de las plantas de soya como
cuatro vas dependientes de triptfano presentes bacteroides, una vez establecida la simbiosis (31).
en las rizobacterias: la del cido indol-3-pirvico Los rizobios dentro del ndulo radicular pudieran
(IPyA), la va de la triptamina (TAM), del indol-3- utilizar parte del NH+4, producto del proceso de FBN,
acetonitrilo (IAN) y la va de la indol-3-acetamida para la sntesis de AIA.
(IAM). Se ha descrito, fundamentalmente en plantas, Estudios realizados con cepas mutantes
una quinta va de sntesis de AIA independiente de hiperproductoras de AIA de B. japonicum en el cultivo
triptfano, en la que se presume que el precursor de la soya demostraron un incremento del volumen
de la misma es el indol-3-glicerol fosfato (27). Los y nmero de los ndulos radicales efectivos en la
resultados en este trabajo indican que el aislado FBN, trayendo consigo un efecto positivo en los
S10, aunque en concentraciones muy bajas, tuvo rendimientos del cultivo (32). De manera similar, en
la capacidad de producir AIA en ausencia de investigaciones realizadas con plantas de soya el
triptfano. Resultados similares se obtuvieron en nmero de ndulos se redujo al inocular cepas con
investigaciones llevadas a cabo con aislados de incapacidad para producir AIA (33).
rizobios nativos de suelos amaznicos en los que La sntesis de fitohormonas como el AIA por
incrementos de las concentraciones de triptfano en microorganismos del suelo, que adems tienen la
el medio de cultivo no aumentaron la produccin de capacidad de fijar el nitrgeno atmosfrico, constituye
AIA por estos aislados bacterianos (25). un beneficio adicional que permite promover el
Estudios realizados con determinadas cepas crecimiento de los cultivos de leguminosas y con
de Azospirillum, concluyen que la va independiente ello incrementar los rendimientos y la calidad de las
de triptfano se convierte en la mayor fuente de AIA cosechas.
cuando las bacterias son crecidas en medios sin
Actividad de la enzima 1-aminociclopropano-
el precursor (28). Existen referencias en cepas de
Streptomyces sp. y Flavobacterium sp., donde se 1-carboxilato (ACC) desaminasa
ha comprobado que el amonio es el precursor de la Al analizar la actividad enzimtica ACC
sntesis de AIA, ya que en ausencia de esta molcula desaminasa de los diferentes extractos bacterianos,
las cepas son incapaces de sintetizar esta auxina. todos los aislados, excepto S11, mostraron actividad
Se presume que esto se deba a la competencia de de esta enzima cuando se cultivaron en presencia
esta molcula y el triptfano por los sitios activos del inductor. Un comportamiento similar se evidenci
de determinadas enzimas en el proceso biosinttico cuando se observ un incremento significativo en
del AIA (29). Tales resultados podran sugerir la la actividad de la enzima ACC desaminasa de los
existencia de vas independientes del triptfano para medios inducidos con respecto al control de estos
la sntesis del AIA en el aislado S10. Los niveles aislados sin inducir (Figura 3).
moderados de AIA obtenidos en el aislado S1 y La actividad de la enzima ACC desaminasa en
Snb y la cepa ICA 8001, crecidos en los medios sin los aislados estudiados fluctu entre 0,01 (S11) y
triptfano, podran tambin sustentar esta hiptesis. 0,13 (ICA 8001) -cetobutirato g-1 protena h-1. La
Tal como se ha dicho, muchos estudios se han presencia de la enzima ACC desaminasa en los
enfocado en la determinacin cuantitativa de AIA rizobios ha sido ampliamente descrita en la literatura
producido por cepas de rizobios pertenecientes al (9). Sin embargo, la actividad de esta enzima vara,
gnero Rhizobium. Sin embargo, es en ejemplares incluso entre cepas del mismo gnero. Esto se debe
del gnero Bradyrhizobium mayora de los a que la secuencia de nucletidos que forman el
microorganismos aqu estudiados, donde ms se ha gen acdS (que codifica para la ACC desaminasa)
estudiado el efecto de esta auxina en la tolerancia a es muy variable entre gneros bacterianos, incluso
determinados tipos de estrs abiticos y por tanto en entre especies del mismo gnero (34). Esto pudiera
el aumento de su sobrevivencia en la rizosfera (30). explicar las diferencias encontradas en los valores de
El AIA tambin desempea un papel importante actividad enzimtica en los aislados S1, S10, Snb y
en el proceso de FBN que tiene lugar entre las la cepa ICA 8001, todos del gnero Bradyrhizobium.
plantas leguminosas y los rizobios. A travs de este
proceso metablico, la enzima nitrogenasa presente
en estos microorganismos, cataliza la reduccin del
nitrgeno molecular a amonio. El amonio tambin
se ha encontrado como uno de los precursores en
la sntesis del AIA, pero muy pocos estudios se han

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0,16 de producir la enzima ACC desaminasa, incrementan


Actividad especfica ACC desaminasa

su proliferacin en los sitios de colonizacin de las


(ug cetobutirato ug-1 protena h-1)

0,14 a
0,12 ab races y son favorecidas ante la competencia con
otros microorganismos. En el caso particular de la
0,10 b
interaccin simbitica rizobio-leguminosa, se ha
0,08
observado que el etileno determina el sitio especfico
0,06 de la raz donde se formar el primordio nodular,
c
0,04 ya que mutantes de leguminosas insensibles a
cd d
0,02 d d d d
no inducido
esta fitohormona presentan un mayor nmero de
0,00 inducido primordios nodulares que las plantas salvajes (39).
S1 S10 S11 Snb ICA 8001 De esta forma, el rizobio degrada el ACC exudado por
Tratamientos la raz, disminuyendo las concentraciones de etileno
en la planta y con ello la disminucin de sus efectos
Letras comunes no difieren significativamente (Duncan, p<0,05) inhibitorios sobre la nodulacin (9).
ES*** = 0,007, n=4. Para explicar el efecto promotor del crecimiento
que realizan las PGPR en las plantas, se han
Figura 3. Actividad de la enzima identificado dos tipos de mecanismos, los indirectos
1-aminociclopropano-1-carboxilato o de biocontrol y los directos de promocin del
(ACC) desaminasa en los aislados crecimiento vegetal. El primero se caracteriza por
de rizobios cultivados en medios no la existencia de una actividad antagnica entre el
inducidos e inducidos con 0,05 mol L-1 microorganismo de inters con un fitopatgeno,
de ACC. provocando la disminucin de los efectos dainos de
este ltimo sobre la planta (40). La competencia por
Estudios filogenticos sugieren que el gen acdS nutrientes, minerales y espacio, la detoxificacin de
no siempre se localiza en el cromosoma microbiano, factores de virulencia de los patgenos, la induccin
sino que tambin se ha detectado con cierta de resistencia sistmica en la planta y la sntesis de
estabilidad en plsmidos bacterianos. Adems se ha metabolitos como los antibiticos y los siderforos son
planteado que estos paquetes genmicos pueden algunos de estos mecanismos (41). Los mecanismos
transferirse horizontalmente, provocando la prdida, directos de promocin del crecimiento se evidencian
en alguna medida, de la capacidad de sintetizar la en ausencia de otros microorganismos e incluyen
enzima ACC desaminasa (35). Esto pudiera ser una adems de la FBN, la produccin de enzimas como
posible explicacin de los bajos niveles de actividad la ACC desaminasa, la solubilizacin de minerales
enzimtica obtenidas en el aislado S11, aun en el como el fsforo y la sntesis de fitohormonas como las
medio suplementado con el inductor. En este sentido, giberelinas, citoquininas y el AIA (42). La clasificacin
se han utilizado tcnicas de biologa molecular con anteriormente descrita solo ha servido para estudiar
el objetivo de potenciar la produccin de la ACC con un mayor nivel de profundidad cada uno de
desaminasa en los rizobios y con ello crear cepas ellos, pues se conoce que la actividad promotora del
ms competitivas en el proceso de nodulacin (36). crecimiento que realizan las PGPB como los rizobios,
Esta tecnologa pudiera utilizarse para la elaboracin es el resultado de la accin de mltiples de estos
de inoculantes ms efectivos para las leguminosas, mecanismos simultneos.
que contribuyan positivamente a lograr mayores Tanto los mecanismos directos como los indirectos
rendimientos agrcolas, teniendo en cuenta adems, pueden funcionar, adems, potencindose entre
el papel de esta enzima en la disminucin de los ellos y contribuyendo a la realizacin de procesos
efectos adversos de determinados estreses biticos beneficiosos para la planta como la FBN. La captacin
y abiticos (34, 37). de hierro por los rizobios a travs de los siderforos,
La enzima ACC desaminasa degrada el ACC, favorece la sntesis de la nitrogenasa, as como de otras
precursor del etileno, en -cetobutirato y amonio, molculas que participan en la generacin de la energa
metabolitos muy comunes en las plantas y otros necesaria para llevar a cabo la fijacin. El amonio que
organismos (38). Se conoce que la promocin del se genera de este proceso, as como el obtenido de
crecimiento vegetal se estimula no slo por un la degradacin del ACC por la ACC desaminasa y el
decremento en el contenido de etileno, sino tambin triptfano presente en las clulas radicales, pudieran
por la generacin de amonio a partir del ACC llevada utilizarse por los microorganismos para sintetizar el
a cabo por rizobacterias como los rizobios (35). Con AIA, que de conjunto con el AIA producido por la planta,
esta estrategia las plantas disponen de una fuente estimulan la proliferacin y la elongacin celular. El AIA,
extra de nitrgeno y los microorganismos asociados a su vez, induce la sntesis de la ACC sintasa, la cual
tienen una alternativa ms para su supervivencia en cataliza la formacin de ACC (43) y adems estimula
la rizosfera. De esta manera, las PGPR con capacidad la produccin de la ACC desaminasa (39), con lo cual

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varios procesos se interconectan favorablemente. Al 3. Verma, J. P.; Yadav, J.; Tiwari, K. N. /et al./. Impact
aumentar la concentracin de ACC en la raz, ocurre of plant growth promoting rhizobacteria on crop
su degradacin por la ACC desaminasa producida por production. Int. J Agric. Res., 2010, vol. 5, no. 11,
los rizobios, disminuyendo la concentracin de etileno pp. 954-983. ISSN 0976-058X.
4. Bashan, Y. y de-Bashan, L. E. How the plant growth-
y favoreciendo una mayor cantidad de sitios para la
promoting bacterium Azospirillum promotes plant
proliferacin nodular. De esta manera se pudiera pensar growth-a critical assessment. Chapter two. Adv. Agron.,
en un complejo dilogo molecular entre los rizobios y la 2010. vol. 108, pp. 77-136. ISSN 0065-2113.
planta leguminosa, desde su acercamiento y durante 5. Machado, R. G.; Saccol de S, E. L.; Bruxel, M.;
el establecimiento de la simbiosis, garantizando una Giongo, A.; da Silva Santos, N. y Schnhoffen, A.
mayor efectividad en el proceso de fijacin del nitrgeno Indoleacetic acid producing rhizobia promote growth
y en la promocin del crecimiento vegetal. of Tanzania grass (Panicum maximum) and Pensacola
La caracterizacin realizada en este trabajo a grass (Paspalum saurae). Int. J. Agric. Biol., 2013,
cuatro aislados de rizobios y la cepa B. elkanii ICA 8001, vol. 15, pp. 827-834. ISSN 15608530, 18149596.
6. Arif, K.; Archana, G. y Desai Anjana, J. Engineering
obtenidos de ndulos de soya, permiti conocer que
heterologous iron siderophore complex utilization in
todos produjeron AIA, mientras que el aislado S11 fue rhizobia: Effect on growth of peanut and pigeon pea
el nico con la capacidad de producir siderforos y sin plants. Applied Soil Ecology, 2012, vol. 53, pp. 65-73.
actividad de la enzima ACC desaminasa. Estos atributos ISSN 0929-1393.
positivos, presentes de manera particular en estas 7. Maksimov, I. V.; Abizgildina, R. R. y Pusenkova, L. I.
bacterias, ejercen diferentes efectos sensibles sobre la Plant growth promoting rhizobacteria as alternative to
planta y constituyen a su vez ventajas en la competencia chemical crop protectors from pathogens (Review).
con otros microorganismos que tambin colonizan Appl Biochem Microbiol., 2011, vol. 47, pp. 333-345.
la rizosfera. El aporte de hormonas del crecimiento ISSN 1608-3024.
8. Takahashi, K.; Hayashi, K. I. y Kinoshita, T. Auxin
vegetal, la posibilidad de asimilar formas insolubles de
activates the plasma membrane H+-ATPase by
nutrientes como el hierro y de tolerar estreses biticos y phosphorylation during hypocotyl elongation in
abiticos, sin mencionar que participan indirectamente Arabidopsis. Plant physiology, 2012, vol. 159, no. 2,
en procesos tan importantes como la FBN, son algunos pp. 632-641. ISSN 1532-2548.
beneficios directos derivados de esta contribucin. 9. Desbrosses, G.; Contesto, C. y Varoquaux, F. PGPR-
Estos resultados, junto a otros estudios de Arabidopsis interactions is a useful system to study
caracterizacin de estos aislados en su interaccin signalling pathways involved in plant developmental
con los cultivos, constituyen un aporte en la seleccin control. Plant Signal Behav., 2009, vol. 4, pp. 321-323.
de cepas que pudieran tributar positivamente sobre la ISSN 1559-2324.
10. Npoles, M. C.; Martnez, J.; Costales, D. /et al./.
nutricin, proteccin y desarrollo de cultivos de inters.
Avances en la reidentificacin de la cepa ICA 8001
(Bradyrhizobium japonicum) como perteneciente
CONCLUSIONES a Bradyrhizobium elkanii. Revista Biologa, 2006,
vol. 20, no. 1-2, pp. 43-46. ISSN 1336-9563.
Los cuatro aislados y la cepa B. elkanii ICA 8001, 11. Vincent, J. M. A manual for the practical study of
adems de fijar nitrgeno, exhiben al menos dos de root-nodule bacteria /J. M. Vincent. En: International
las caractersticas evaluadas: produccin de AIA, Programme Handbook. No. 15. Blackwele scientific
siderforos y actividad de la enzima ACC desaminasa; publications, Oxford, England, 1970.
12. Verma, V.; Joshi, K. y Mazumdar, B. Study of
caractersticas que los hacen atractivos para su
Siderophore Formation in Nodule-Forming Bacterial
utilizacin como posibles biofertilizantes que ayuden Species. Research Journal of Chemical Sciences,
a promover el crecimiento y rendimiento del cultivo de 2012, vol. 2, no. 11, pp. 26-29. ISSN 2231-606X.
la soya. 13. Aguado, G. A.; Moreno, B.; Jimnez, B. /et al./. Impacto
de los siderforos microbianos en la asimilacin del
hierro por las plantas: una sntesis. Rev. Fitotec. Mex.,
BIBLIOGRAFA 2012, vol. 35, no. 1, pp. 9-21. ISSN 0187-7380.
1. Martinez-Viveros, O.; Jorquera, M. A.; Crowley, D. E. 14. Salkowski, E. ber das verhalten der skatolcarbonsure
/et al./. Mechanisms and practical considerations im organismus. Physiol Chem., 1885, vol. 9, pp. 23-33.
involved in plant growth promotion by rhizobacteria. DOI:10.1515/bchm1.1885.9.1.23.
J. Soil. Sci. Plant. Nutr., 2010, vol. 10, pp. 293-319. 15. Sambrook, J.; Fritsch, E. F. y Maniatis, T. Molecular
ISSN 1522-2624. Cloning. En: Crimi, M. y Cremonese, G. Molecular
2. Bashan, Y. y Holguin, G. Proposal for the division Biology. 2nd Ed. New York: Plainview: Cold Spring
of Plant Growth-Promoting Rhizobacteria into two Harbor Lab. 1989. pp. 3-5.
classification: biocontrol-PGPB (Plant Growth- 16. Penrose, D. M. y Glick, B. R. Methods for isolating
Promoting Bacteria) and PGPB. Soil Biol. Biochem., and characterizing ACC deaminase containing plant
1998, vol. 30, no. 8-9, pp. 1225-1228. ISSN 0038-0717. growth-promoting rhizobacteria. Physiol. Plant., 2003,
vol. 118, pp. 10-15. ISSN 0031-9317.

71
Cultivos Tropicales, 2015, vol. 36, no. 1, pp. 65-72 enero-marzo

17. Bradford, M. M. A. Rapid and Sensitive Method for the 31. Kumar, P. G.; Saha, P.; Mayilraj, S. /et al./. Role of IAA
Quantitation of Microgram Quantities of Protein Utilizing metabolizing enzymes on production of IAA in root,
the Principle of Protein-Dye Binding. Anal. Biochem., nodule of Cajanus cajan and its PGP Rhizobium sp
1976, vol. 72, pp. 248-254. ISSN 0003-2697. Original. Biocatalysis and Agricultural Biotechnology,
18. Sigarroa, A. Biometra y Diseo Experimental. Primera 2013, no. 3, pp. 234-239. ISSN 1878-8181.
parte. Editorial Pueblo y Educacin. Ciudad de La 32. Kaneshiro, T. y Kwoleck, W. Stimulated nodulation of
Habana, Cuba, 1985. pp. 319-328. soybean by Rhizobium japonicum mutant (B-14075)
19. Pooja, A. Molecular identification of root nodule that catabolizes the conversion of tryptophan to indol-
bacteria from Cicer arietinum. Research Journal 3yl-acetic acid. Plant Sci., 1985, vol. 42, pp. 141-146.
of Biotechnology, 2012, vol. 7, no. 1, pp. 73-79. ISSN 0168-9452.
ISSN 2278-4535. 33. Fukuhara, H.; Minakawa, Y.; Akao, S. /et al./. The
20. Bhattacharya, A. Siderophore mediated metal uptake involvement of indole-3-acetic acid produced by
by Pseudomonas fluorescens and its comparison to Bradyrhizobium elkanii in nodule formation. Plant Cell
iron (III) quelation. Cey. J. Sci. Bio. Sci., 2010, vol. 39, Physiol., 1994, vol. 35, pp. 1261-1265. ISSN 471-9053.
no. 2, pp. 147-155. ISSN 0069-2379. 34. Esquivel, R.; Gavilanes, M.; Cruz, R. /et al./. Importancia
21. Wright, W.; Little, J.; Liu, F. and Chakraborty, R. Isolation agrobiotecnolgica de la enzima ACC desaminasa en
and structural identification of the trihydroxamate rizobacterias, una revisin. Rev. Fitotec. Mex., 2013,
siderophore vicibactin and its degradative products vol. 36, no. 13, pp. 251-258. ISSN 0187-7380.
from Rhizobium leguminosarum ATCC 14479 bv. 35. Glick, B. R; Todorovic, B.; Czarny, J. /et al./. Promotion
trifolii. BioMetals, 2013. vol. 26, no. 2, pp. 271-283. of plant growth by bacterial ACC deaminase. Rev. Plant
DOI: 10.1007/s10534-013-9609-3. Sci., 2007, vol. 26, pp. 227-242. ISSN 0735-2689.
22. Brear, E. M.; Day, D. A. y Smith, P. M. C. Iron: an 36. Conforte, V. P.; Echeverria, M.; Snchez, C. /et al./.
essential micronutrient for the legume-rhizobium Engineered ACC deaminase-expressing free-living
symbiosis. Front Plant Sci., 2013, vol. 4, no. 359, cells of Mesorhizobium loti show increased nodulation
pp. 1-15. ISSN 1664-462X. efficiency and competitiveness on Lotus spp. J. Gen.
23. Kobayashi, T. y Nishizawa, N. K. Iron uptake, Appl. Microbiol, 2010, vol. 54, no. 4, pp. 331-338.
translocation, and regulation in higher plants. Annual ISSN 1349-8037.
review of plant biology, 2012, vol. 63, pp. 131-152. 37. Sharma, D.; Chauhan, S.; Kumar, G. /et al./. Cadmium
ISSN 1543-5008. stabilization by plant growth promotory fluorescent
24. Battistoni, F.; Platero, R.; Noya, F. /et al./. Intracellular pseudomonas in combination with Indian mustard var.
Fe content inuences nodulation competitiveness of Kranti, South Asean. J. Exptl. Biol., 2012, vol. 3, no. 2,
Sinorhizobium meliloti strains as inocula of alfalfa. pp. 128-135. ISSN 1477-9129.
Soil Biol. Biochem., 2002, vol. 34, pp. 593-597. 38. Glick, B. R. Modulation of plant ethylene levels by the
ISSN 0038-0717. bacterial enzyme ACC deaminase. FEMS Microbiol.,
25. Dubler, M. R.; Sacool da S, E. L.; Goulart, R. /et al./. 2005, vol. 251, pp. 1-7. ISSN 1465-2080.
Caracterizacin e influencia de rizobios aislados de 39. Glick, B. Bacteria with ACC deaminase can promote
alfalfa en la geminacin y crecimiento de plntulas plant growth and help to feed the world. Special Issue
de arroz. Ciencia Rural, Santa Mara, 2011, vol. 41, on Plant Growth Promotion, 2014, vol. 169, no. 1,
no. 10, pp. 1738-1743. ISSN 0103-8478. pp. 30-39. ISSN 1435-8107.
26. Kumar, P.; Saha, P.; Mayilraj, S. /et al./. Role of IAA 40. Acebo, Y.; Hernndez, A.; Rives, N. /et al./. Perspectivas
metabolizing enzymes on production of IAA in root, del uso de bacterias rizosfricas en el control de
nodule of Cajanus cajan and its PGP Rhizobium sp. Pyricularia grisea (CookeSacc.) en el cultivo del arroz
Biocatalysis and Agricultural Biotechnology, 2013, (Oryza sativa L.). Rev Colomb Biotecnol, 2011, vol. 13,
vol. 2, no. 3, pp. 234-239. ISSN 1878-8181. no. 1, pp. 16-22. ISSN 1909-8758.
27. Patten, C. L.; Blakney, A. J. y Coulson, T. J. Activity, 41. Hernndez, A.; Rives, N.; Acebo, Y. /et al./.
distribution and function of indole-3-acetic acid Potencialidades de las bacterias diazotrficas
biosynthetic pathways in bacteria. Critical reviews asociativas en la promocin del crecimiento vegetal y
in microbiology, 2013, vol. 39, no. 4, pp. 395-415. el control de Pyricularia oryzae (Sacc.) en el cultivo
ISSN 1549-7828. del arroz (Oryza sativa L.). Rev. Proteccin Veg., 2014,
28. Princen, E.; Costacurta, A.; Michiels, K.; Vanserleyden, J. vol. 29, no. 1, pp. 1-10. ISSN 2224-4697.
y Van Onckelen, H. Azospirillum basilence indile-3- 42. Hernndez, A.; Heydrich, M.; Diallo, B. /et al./. Cell-free
acetic acid biosyntesis: evidence for a non-tryptophan culture medium of Burkholderia cepacia improves seed
dependent pathway. Mol Plant-Microb Interect, 1993, germination and seedling growth in maize (Zea mays)
vol. 6, pp. 609-615. ISSN 0894-0282. and rice (Oryza sativa). Plant Growth Regul., 2010,
29. Merzaeva, O. V. y Shirokikh, I. G. The production of vol. 60, pp. 191-197. ISSN 1573-5087.
auxins by the endophytic bacteria of winter rye. Appilied 43. Hontzeas, N. J.; Zoidakis, B. R.; Glick, M. M.
Biochemistry and Microbiology, 2010, vol. 46, no. 1, /et al./. Expression and characterization of
pp. 44-50. ISSN 1608-3024. 1-aminocyclopropane-1-carboxylate deaminase from
30. Donati, A. J.; Lee, H. I.; Leveau, J. H. J. /et al./. rhizobacterium Pseudomonas putida UW4: a key
Effects of Indole-3-Acetic Acid on the Transcriptional enzyme in bacterial plant growth promotion. Bioch.
Activities and Stress Tolerance of Bradyrhizobium Biophys., 2004, vol. 1703, pp. 11-19. ISSN 0006-291X.
japonicum. PLoS ONE., 2013, vol. 8, no. 10, pp. 1-11.
ISSN 1932-6203. Recibido: 3 de abril de 2014
Aceptado: 28 de agosto de 2014

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