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Clase II

Lo que vamos a ver hoy son unas tcnicas bsicas de biologa celular, las tcnicas que nos
han permitido estudiar la clula. La tcnica clsica es la microscopa, nosotros con nuestro
ojo tenemos una limitante para observar lo que constituye un tejido.

Gracias al desarrollo de la microscopa ptica podemos llegar hasta este recuadro, en donde
ya podemos observar un poco sobre la estructura interna de una clula, que hay un ncleo,
un retculo, un golgi, que hay clulas que tienen un retculo mas desarrollados que otras,
etc. Pero luego viene todo el desarrollo de la microscopa electrnica, que nos permite
observar hasta la estructura por ejemplo de un ribosoma, que es un organelo.

Hoy en da existe una microscopa que es de nivel atmico, que se utiliza mas que nada
para materiales, corrosin de materiales en la industria del petrleo, y esa permite ver
inclusive la estructura, la distribucin de un tomo, de una molcula.

Microscopa ptica.

Aqu esta el esquema generalizado de un


microscopio ptico, el que tiene una fuente de luz
natural, luz blanca que es la que irradiamos sobre
la muestra que vamos a observar, tiene un
sistema de lentes, por un lado un condensador que
dirige este haz de luz hacia donde tenemos puesta
nuestra muestra y luego tiene un sistema de lente
que recibe la imagen desde esa muestra y la
amplifica. Un objetivo que es el que nosotros
podemos ir variando y un ocular a travs del cual
nosotros observamos el campo.

La muestra para ser observada a travs de un


microscopio de tipo ptico, puede ser una muestra
fresca, es decir una muestra sin tratamiento, o
puede ser una muestra fijada o tratada, para poder
visualizar mejor los detalles dentro de esa clula.
Este tratamiento tiene pasos, primero una etapa de
fijacin, en donde se agrega un polmero, una
molcula cuyo objetivo es impedir que durante el
tratamiento de la muestra (que son los pasos
posteriores), la estructura interna de la clula no se altere. Luego viene el embebido, la
muestra puede ser una clula, puede ser un pequeo trozo de tejido, lo ponemos dentro de
un material grande, slido, generalmente cera, para permitir hacer cortes de esa muestra,
esto se hace en un micrtomo que saca unas pequeas rebanadas de este tejido, de manera
que podemos observar la estructura interna de la clula y finalmente si es necesario y la
muestra no tienen una pigmentacin propia, natural tambin se puede realizar una etapa de
tincin, existen tinciones bastante especificas que me permiten observar distintas
estructuras dentro de la clula.
Hay diferentes tipos de microscopa y dispositivos que puedo ir agregando a un
microscopio base con el objetivo de obtener una mejor imagen de distintos tipos de
muestras

Microscopa ptica normal (de campo brillante coloreado): El material a observar se tie
con colorantes especficos que aumentan el contraste (cidos o bsicos).

Aqu se observa una tincin violeta fuerte de todo lo que es el medio


extracelular y una tincin rosada del ncleo de la clula, este es un corte de
tejido de rin, en donde podemos observar las clulas dispuestas, el lumen
y toda la matriz extracelular.

En la microscopia ptica normal generalmente se observan clulas con un


mtodo de tincin.

Microscopa de campo claro: el material se observa sin tincin. La


luz pasa directamente y se aprecian detalles que estn naturalmente
coloreados.

Microscopa en campo oscuro utiliza una luz muy intensa en forma de un cono hueco
concentrado sobre el espcimen, de manera que la parte lumnica de este
cono es la que atraviesa la muestra y todo el resto el campo queda
oscuro. El campo de visin del objetivo se encuentra en la zona hueca
del cono de luz y slo recoge la luz que se refleja en el objeto. Esto
entrega un mayor contraste y podemos observar tambin el material que
tenga algn pigmento.

Microscopa en contraste de fase: Utiliza los principales ndices de refraccin que tienen
las distintas partes dentro de una clula (capacidad que tiene el
material de poder desviar el haz de luz, cada parte de la clula tiene
un diferente ndice de refraccin). Se usa principalmente para
aumentar el contraste entre las partes claras y oscuras de las clulas
sin teir. Es ideal para especimenes delgados, o clulas aisladas y
vivas. Se pueden ver clulas IN VIVO.
Nomarski (DIC): Utiliza dos rayos de luz polarizada y las
imgenes combinadas aparecen como si la clula estuviera proyectando
sombras hacia un lado. Es ideal para especimenes delgados, o clulas
aisladas y vivas. Es un dispositivo que yo agrego, que pongo luego de la
fuente de luz a un microscopio y me permite tener esta idea de luz y
sombra, una idea tridimensional de espcimen.
Aqu hay una
comparacin de
cmo podemos
ver una
micromuestra con
los diferentes
tipos de
microscopia.

De que va a depender la microscopia que yo vaya a utilizar, especficamente del tipo de


muestra y del objetivo, que es lo que quiero analizar, y si la muestra necesito que este in
vivo no voy a poder teirla, y si necesito ver con mayor detalle una estructura que este
dentro de la clula lo mas probable es que si elija un proceso de tincin que me permita
diferenciar esas distintas estructuras,

El mayor avance de la microscopa ptica vino de la mano con el avance de la fluorescencia


y la microscopa de fluorescencia es una variacin de la microscopia ptica, por que tiene la
misma resolucin, estamos irradiando nuestra muestra con longitudes de onda de la luz
natural, por lo tanto el limite de resolucin esta dado por la longitud de onda que podemos
alcanzar con esa luz, y tiene la ventaja que permite observar distintas estructuras dentro de
la clula en forma muy especifica gracias a la presencia de un fluorocromo que es una
molcula que tiene la capacidad de absorber una determinada longitud de onda y luego
emiten una longitud de onda mayor, tenemos el ejemplo de distintos fluorocromos, por
ejemplo el DAPI que es un colorante, un fluorocromo que se une espontneamente a la
molcula de DNA, absorbe la luz con longitud de onda correspondiente a la UV y luego
emite una luz que corresponde a la long de onda del color azul. Esta molcula al absorber
esta energa pasa a un estado de mayor excitacin y cuando vuelve a su estado normal
libera esa energa en una long de onda mayor.

La microscopia ptica de fluorescencia lo que hace es adaptar el microscopio con filtro, que
van a por un lado dejar pasar una longitud de onda especifica dependiendo del fluorocromo
con el cual nosotros hayamos tratado la muestra, puede ser un fluorocromo natural y luego
con un sistema de filtros que recogen y dejan pasar especficamente la long de onda de
emisin de ese mismo fluorocromo. Por ejemplo yo tengo una muestra que trate con un
fluorocromo que se llama la fluorescena, que absorbe una long de onda correspondiente al
color azul y luego emite en la gama de los verdes. El fluorocromo lo puedo hacer llegar a
mi muestra por ejemplo unido a un anticuerpo (protenas que reconocen con una alta
especificidad la protena para la cual se produjeron) y yo puedo poner ese anticuerpo con
un fluorocromo, y ese fluorocromo lo hago llegar al componente especfico dentro de la
clula. Quiero observar por ejemplo microtubulos, que voy a utilizar?, un anticuerpo anti
tubulina y de esa forma al poner al anticuerpo en contacto con la clula, llevo el
fluorocromo especficamente a los microtubulos.

Resultado, se ve exclusivamente la organizacin del componente celular al cual yo dirig el


fluorocromo en este caso los microtubulo.
Las imgenes que podemos tener de la fluorescencia son como las que tenemos aqu, por
ejemplo ah esta la tincin de microtubulos en una clula en divisin con fluorescena, y yo
marque exclusivamente los microtubulos, hoy en da los microscopios de fluorescencia
tiene filtros mltiples que pueden dejar pasar no solo una longitud de onda sino que dos
otros, sino se puede hacer una tincin con 3 fluorocromos distintos
y al mismo campo cambiar los filtros y despus hago un montaje.
De esa forma puedo obtener una imagen como esta donde en verde
estn los microtubulos. El DAPi es un fluorocromo que se une
naturalmente al ADN, los centrmeros de estos cromosomas que
estn condensados y alineados en el ecuador del huso mittico.

Aqu tenemos una clula en la que


hemos teido microtubulos, ADN y actina, y podemos ver
como se distribuyen los microtubulos en una clula en
interfase, los filamentos de actina y como est el ncleo de esa
clula.
El lmite de la resolucin sigue siendo el mismo de la
microscopa ptica.

Otra variacin de la microscopa ptica de fluorescencia es lo que se denomina la


microscopa con focal que combina la microscopa de fluorescencia con el anlisis
electrnico para obtener una imagen tridimensional del espcimen,
esta se utiliza cuando uno quiere realizar una co-localizacin
dentro de una clula, o sea saber si una protena A esta unida a el
citoesqueleto, o se une a otra protena dentro de la clula, que se
una quiere decir que estn interaccionando, que est una al lado de
la otra. En una microscopia normal de fluorescencia si yo tio algo
no se ve si esta uno sobre el otro, o uno al lado del otro, en cambio
la confocal si lo permite, se ve la microscopia de fluorescencia a
distintos planos dentro de la clula.

Lo que se hace en una microscopia confocal, es que la muestra se


trata con fluorocromo para la microscopia de fluorescencia, y luego lo someto a este
microscopio confocal que tiene un detector como un lser que va obteniendo imgenes a
distintas profundidades.

Corte de embrin de erizo de mar donde se


colocaliz protenas que estn presentes en el
desarrollo temprano del erizo de mar. ADN en
verde, protenas en rojo y colocalizacin en
amarillo. Con todo este set de imagen yo puedo
hacer una reconstruccin tridimensional del
espcimen que estoy observando.
Aqu hay un gramo de polen donde lo que se tio son componentes de la pared celular y
luego al hacer una combinacin de estos distintos planos yo obtengo imgenes
tridimensionales del espcimen

Luego tenemos la microscopia electrnica, lo que utilizamos para irradiar nuestra muestra
es un haz de electrones, quienes tienen un tamao muy inferior a la long de onda de la luz
visible, por lo tanto el lmite de resolucin de esta es mucho mayor que la microscopia
ptica, la electrnica puede aumentar un objeto hasta un milln de veces.

Tenemos la diferencia en un cultivo de estafilococo aureus, con microscopia ptica y


microscopia electrnica.

Aqu esta el esquema bsico de un microscopio electrnico,


tienen un sistema computacional adosado en donde analiza
la imagen obtenida de la desviacin del haz de electrones al
pasar a travs de la muestra.
Tenemos un emisor de electrones, un condensador que es el
que va a dirigir este haz de electrones hacia donde tenemos
puesta nuestra muestra y el condensador, no es ahora un
lente sino que es una bobina magntica, a travs de un
campo magntico alineamos los electrones y los dirigimos
hacia donde esta puesta la muestra. Como es un haz de
electrones, el que puede ser desviado por presencia de aire,
todo esto se realiza en una cmara al vaco, por lo tanto
bajo microscopia electrnica no podemos observar una
clula in vivo. Adems la muestra hay que tratarla en un
proceso de fijacin, de embebido, corte y sobre todo un
proceso en el que yo agrego a esta muestra un metal
pesado, que unido a las estructuras de la muestra es el
responsable de desviar el haz de electrones y esta desviacin es lo que va a recoger en una
placa fotogrfica todo el sistema de deteccin de imagen. Una muestra que no ha sido
tratada con un metal pesado no tiene la capacidad de desviar el haz de electrones para poder
obtener una imagen.
Hay dos tipos de microscopia, las que mas se utilizan son la microscopia electrnica de
transmisin y la microscopia electrnica de barrido.

En la de transmisin, a la muestra se le realiza el tratamiento clsico y puedo elegir con


mucho mayor detalle estructuras dentro de la clula y no solo dentro de una clula, sino
dentro de una mitocondria o cualquier organelo. En la microscopia electrnica (ME) yo tb
puedo hacer una tincin un poquito mas especfica y ahora llevar anticuerpos a estructuras
especficas de la clula, pero estos anticuerpos marcados con un metal pesado, se utiliza
mucho oro coloidal, que es una solucin en el que el oro queda pegado al anticuerpo y el
anticuerpo va a teir en forma especfica la estructura dentro de esa clula, lo que tenemos
ac son bacterias escherichia coli que estn observadas con ME y hoy en da gracias a
todo el desarrollo computacional, adems yo puedo ir coloreando las distintas estructuras.

La ME de barrido a diferencia de la de transmisin, en la que lo que yo mido es lo que


desvi el haz de electrones al atravesar la muestra, utiliza un haz de electrones que va
barriendo la superficie de la clula y lo que yo capto son todos esos electrones que rebotan
desde esa muestra y por lo tanto obtengo una imagen tridimensional de la superficie
celular.

Ac hay una comparacin de los estereo cilios de una clula


ciliada del odo interno, los que son los responsables de captar
las ondas sonoras, en la superficie de la clula por microscopia
electrnica de barrido y la misma imagen obtenida con el
dispositivo de
normanski y una
microscopia electrnica
de transmisin.

Hay tcnicas de biologa celular que me permiten


determinar la funcin de los distintos componentes
de la clula, la primera es la tcnica de
FRACCIONAMIENTO CELULAR, que tiene
como objetivo separar los diferentes componentes
celulares (ncleo, mitocondrias, vesculas, etc),

Etapas:

Disgregacin de los tejidos o rompimiento de la clula, puede


ser una clula aislada o un pequeo trozo de un tejido. Esta se puede
realizar a travs de tres mtodos (fsico, qco o mecnico) y va a
depender de que es lo que estoy partiendo cual es el mtodo que voy a
utilizar.
Mtodo fsico: utiliza el ultrasonido para romper las clulas. Por medio de la vibracin
rompemos la membrana de la clula y se produce un vaciamiento de todo el contenido
celular, lo que yo obtengo es lo que se denomina un homogeneizado celular

Mtodo Qco: Utiliza detergente, que son molculas que yo agrego en


una concentracin determinada, de manera que yo rompo la membrana
plasmtica para vaciar todo el contenido celular y obtener el
homogeneizado celular.

Las concentraciones del detergente y la frecuencia y tiempo del US


son importantes, por que lo que nosotros queremos lograr aqu es solo
romper la membrana externa, no todo lo que esta all adentro.

Mtodo mecnico: Se utiliza cuando yo trabajo con


tejidos, cuando trabajo con clulas aisladas es mas fcil
trabajar con US o con detergente, pero cuando trabajo
con un tejido, primero tengo que separar las clulas
entre si y luego romper, por eso se utiliza el mtodo
mecnico donde se utilizan estos vstagos de vidrio o
de tefln que yo hago pasar a travs de un tubo adems
esta unido a un motor rotatorio a alta velocidad,
entonces se libera este vstago al fondo del tuvo y
obligo con esto a las clulas a pasar a travs del vstago y la pared del tubo y eso hace
entonces que la clula se rompa. Este homogeneizado celular luego lo someto a la segunda
etapa del fraccionamiento celular que es la centrifugacin.

Centrifugacin: Meto el homogeneizado celular a un tubo de centrifuga y lo llevo a


una centrifuga comn u otra mas especializada que disminuye la temperatura para as poder
preservar la muestra, que no se degraden y pierdan su funcin. Se produce la separacin de
los diferentes componentes de acuerdo
al peso y los voy a separar por que a
una determinada velocidad de
centrifugacin y a un determinado
tiempo van a ir sedimentando
distintos componentes de acuerdo a su
tamao, primero caen los organelos
mas grandes que son los ncleos, lo
que sobra lo vuelvo a centrifugar,
ahora aumentando la velocidad de
centrifugacin, en el segundo pellet
caen los organelos que siguen de
tamao (mitocondrias, cloroplastos,
ribosomas y peroxisomas), vuelvo a
aumentar el tpo y velocidad y cae la fraccin microsomal donde estn el retculos
endoplasmico, algunos poliribosomas y todas las pequeas vesculas que se originan del
rompimiento de la membrana celular.

Para aislar las mitocondrias voy a tener que realizar una centrifugacin en gradiente de
densidad, donde voy a separar estos compuestos por distinta densidad, cada uno de estos
componentes de esta fraccin si bien tienen un tamao similar poseen una distinta densidad,
lo que les da un diferente coeficiente de sedimentacin, y en un gradiente de densidad estos
componentes se van a movilizar dentro de esta, hasta que encuentre la lnea de gradiente
que tenga la densidad igual a la densidad de ellos, por que no va a poder avanzar hacia una
densidad mayor, por lo tanto construyo en un tubo una gradiente de densidad, la que se
utiliza generalmente es el gradiente de sacarosa, el que puede ser fraccionado, poniendo
solucin de sacarosa a distinta densidad o bien puedo hacer un gradiente continuo, donde a
travs de la mezcla de dos soluciones de densidades diferentes, lleno este tubito y hago un
gradiente continuo.

Yo tengo el tubito donde voy a construir la gradiente, pongo una pipeta al fondo y de aqu
lo que yo hago es sacar de dos vasitos que estn intercomunicados uno con la solucin al
5% y otro con la solucin al 15%, tienen un volumen determinado as que lo primero que
yo saco de aqu es del 5 % , y medida que va bajando va a ir pasando solucin del 15 a la
de 5 y yo estoy constantemente agitando la solucin, de manera que en la medida que vaya
bajando va a ir pasando solucin de mayor densidad, y la densidad de esta solucin (la de
5%) va a ir aumentando continuamente, como esto esta al fondo, la primera que sali de 5
va a ir subiendo y va a ir quedando en forma continua 5, 6, 7, 8 gradiente de densidad, el 5
arriba y el 15 abajo.

De esa forma construyo un gradiente de densidades continuas, lo importante ahora es que


dentro de este gradiente, los distintos componentes de la fraccin que tengo yo aqu, al ser
sometidos a la centrifugacin, van a avanzar exclusivamente hacia la densidad equivalente,
por lo que van a quedar separados ahora por densidad, los peroxixomas que tienen una
mayor densidad quedaron abajo, las mitocondrias que tienen una densidad de 1,8 mas
arriba y los lisosomas llegaron a 1,2 y por lo tanto ahora yo puedo sacar de aqu mi fraccin
correspondiente a mitocondrias y puedo hacer todos los estudios de funciones.

Otra tcnica utilizada es la CROMATOGRAFA DE COLUMNA su objetivo es separar


distintas biomolculas. Los organelos los separo por fraccionamiento celular, las
biomolculas por cromatografa en columna,
cual es el principio de esto, se tiene una
columna de vidrio larga que dentro tiene una
matriz slida que son unas bolitas chiquititas
de algn polmero, a travs de ella, impulsado
por un buffer, por una solucin salina, va a
pasar una muestra donde tengo una mezcla de
distintos componentes, distintas biomolculas
que empujadas por un solvente que va a ir
pasando por esta columna, estos distintos
componentes van a avanzar por esta matriz
slida a distintas velocidades de acuerdo a
distinta interaccin que tengan con esta, a unos les va a costar ms avanzar que a otros, a
los componentes que presenten algn tipo de interaccin con la matriz slida les va a costar
avanzar ms, en cambio los que no tienen ningn tipo de interaccin con esta matriz slida
van a pasar rpidamente y se van a separar por que van a pasar a travs de la columna a
distintas velocidades, este es el principio general de la cromatografa.

Cromatografa de filtracin en gel

Se basa en la interaccin que puedan tener los distintos


componentes de mi mezcla con una matriz slida que es un
polmero poroso, con poros de un determinado tamao que
van a ir atrapando la muestra.
Tengo una mezcla de distintas protenas que van a ir
avanzando empujadas por un solvente, a travs de esta
matriz slida, estas se van a ir separando por tamao, las
mas pequeas son las que van a interaccionar con la matriz, por que logran entrar en el
poro, por esto son las molculas ms grandes las que van a pasar mas rpido, por que pasan
entre medio de este polmero. Por lo tanto se separan protenas de acuerdo a su tamao.

Cromatografa de intercambio inico

Aqu lo que yo tengo como matriz slida, son partculas con una determinada carga, por lo
tanto va a haber una interaccin con partculas de
carga contraria y repulsin con las de la misma carga.

El ejemplo tiene partculas cargadas negativamente,


por lo tanto son las cargadas negativamente las que
salen antes, por la repulsin, se van sacando en
orden, las partculas que tienen menos cargas
negativas, las con carga neutra y en forma creciente
las partculas que tengan menos carga positiva o ms
carga positiva, en este caso para ir soltando las
partculas que tengan carga positiva que se ven
atradas por esta partcula negativa, por que tengo que
soltarlas para poder recogerlas, lo que yo hago es ir
cambiando la fuerza inica del solvente que esta pasando a travs de esta matriz y mientras
mas sales ponga yo, voy a ir poniendo mas cargas y por lo tanto va a haber competencia y
se van a ir desplazando las protenas que a mi me interesan y las voy a ir separando en
distintas fracciones.

Cromatografa de afinidad

En este caso la matriz slida tiene un grupo qumico que


interacciona con un grupo qumico de los distintos
componentes que yo voy a hacer pasar a travs de esta
cromatografa, pasan de largo aquellas que no tienen ninguna afinidad con la partcula y se
quedan en la matriz slida las que si la tienen.

CITOMETRIA DE FLUJO

Separa distintos tipos celulares o clulas que tienen distintas caractersticas y que tienen por
ejemplo a nivel de membrana, distintas protenas o distintos componentes expresados,
adems me puede caracterizar un conjunto de clulas y puede entregar datos de ese
conjunto de clulas en forma diferenciada, midiendo distintos parmetros. Lo que yo puedo
someter a una citometria de flujo es una suspensin de clulas, clulas aisladas en una
solucin, yo pongo esta suspensin en el citmetro, y este se encarga de separar estas
clulas una por una por unos capilares finsimos en donde se alinean una clula tras otra,
dentro de este citmetro las clulas son reconocidas por que previo a esto a la clula yo la
tengo que tratar con distintos fluorocromos que la marquen de acuerdo a sus tipos celulares,
por lo tanto distintos tipos celulares van a ir marcados con distintos colores (distintos
fluorocromos).

El citmetro de flujo las hace pasar una tras


otra, con un sistema de deteccin de luz las
identifica, de que tipo celular son cada una y
luego las pulveriza (aerosol) en donde cada una
de las clulas esta contenida en una gotita de
solvente cargada (por el citmetro), lo que pasa
a travs de un campo elctrico que las va a
separar por carga, y al pasar por este campo
elctrico puede desviarlos dependiendo de la
carga y caen en receptculos distintos. El
citmetro de flujo las identifica, las caracteriza y
tambin las separa. Esto lo hace a travs de la
medicin de distintos parmetros, se utiliza
mucho el marcar las clulas a travs de
anticuerpos con fluorocromo que identifican
marcadores celulares que son protenas que son
caractersticas de un determinado tipo celular y
esto se utiliza mucho en la caracterizacin de
clulas del sistema inmune, por ejemplo puedo
separar linfocitos b de linfocitos T que bajo el
microscopio es imposible de diferenciar. Yo
marco todas las clulas que son CD8 con un
fluorocromo especfico y todas las clulas que son CD3 con otro fluorocromo especfico, el
citmetro me las separa, me las identifica, por lo tanto me dice
cuanto hay de cada una y adems me las entrega en tubitos
distintos, pero adems me clasifica la poblacin y me puede
decir que hay un 19,4% de clulas que son CD8 negativo, CD3
negativo, un 14,3% CD8 positivo, CD3 negativo, etc.
La clasificacin de las clulas puede pasar tambin por la granularidad o complejidad de
estas, es decir no solo me va a identificar las clulas que tienen una marca por fuera, sino
que tambin las analiza al interior y dependiendo de la
complejidad y de la granularidad, las puede dividir en
distintas sub poblaciones, por ejemplo lo que tenemos aqu
que es una clasificacin de acuerdo a su granularidad y
tamao de las clulas sanguneas.

Sabemos que los linfocitos tienen un tamao pequeo y muy


baja granularidad, que los monocitos tienen un mayor tamao
y son mas complejos que los anteriores y que qu los
granulocitos presentan una gran granularidad y tambin tienen un mayor tamao. Esto se
ocupa por ejemplo para la caracterizacin de distintos tipos de leucemia que se debe a una
proliferacin de distintos glbulos blancos, pero hay distintos tipos de leucemia y la forma
ms rpida de caracterizar una leucemia es a travs de la citometria.

CULTIVO CELULAR

Las clulas hoy en da es posible cultivarlas, esta muy en boga todo lo que es el cultivo de
clulas madres.

Antiguamente era una tcnica que no se lograba, por que las clulas somticas de cualquier
tejido de un mamfero, suelen crecer o dividirse bastante lento y con algunos requisitos
mnimos del medio en el cual se encuentran. El cultivo celular se logra si yo lo hago en un
medio de cultivo slido, en donde la clula se ancla, o sea depende de poder afirmarse de
un sustrato slido y tambin crecen hasta que se topan una con otra o con la superficie
donde se esta llevando a cabo el crecimiento, lo que se llama inhibicin por confluencia,
adems estas clulas tienen un numero de divisiones predeterminadas, que tiene que ver
con la vida de esa clula. Entonces se tiene una solucin de clulas que se pone en un
medio semislido para que se puedan anclar y eso es lo que se denomina un cultivo
primario y van a crecer hasta que se produzca esta inhibicin por confluencia, saco una de
estas clulas y la hago crecer en un segundo cultivo, y esto es un cultivo secundario donde
puedo volver a tener inhibicin por confluencia o antes de eso las clulas pueden llegar al
numero predeterminado de divisiones que tienen y as este tejido deja de crecer y empieza a
morir. Es una tcnica terriblemente engorrosa y delicada.

Hoy en da se dispone de una lnea de clulas inmortales que son la clulas HELA, no tiene
un numero predeterminado de divisiones celulares, estas clulas datan de 1961(clulas
cancergenas), esta se usan para realizar estudios en clulas animales, ya que son
inmortales.

Las clulas somticas necesitan factores de crecimiento, vitaminas y aminocidos para


crecer y dividirse, las HELA tb tienen requisitos de nutrientes pero tienen una proliferacin
importante. La clulas CHO son otro tipo de clulas que vienen del ovario del hmster
chino, que no son tumorales, pero por las caractersticas de la clula en si son fcilmente
proliferables.
En las clulas HELA aunque sea una clula tumoral, yo puedo medir dentro de ella muchos
procesos naturales y yo puedo hacer funcionar a esta clula HELA como una maquina
productora de protenas que en un sistema procarionte no logro hacer, las clulas CHO por
ejemplo son clulas que se utilizan en la industria farmacutica para sntesis de productos
como por ejemplo hormonas proteicas que en sistemas procariontes como las bacterias son
mas difciles de sintetizar, con estos fines se utilizan estas lneas celulares, adems sirven
para ver por ejemplo como reacciona una clula tumoral a distintas drogas, hay tambin
screening de toxicidad de distintos compuestos donde yo quiero determinar la citotoxicidad
que pueden tener a nivel de una clula, las clulas CHO que son clulas normales que se
han adaptado y que se pueden cultivar, pueden ser tambin utilizadas para estudiar
mecanismos de accin de distintas seales, y yo puedo someter a estas clulas CHO a
distintas hormonas o distintos tipos de seales qumicas o seales celulares y ver como esta
clula responde a estos distintos componentes, tienen todas esas funciones, sobre todo hoy
en da en la industria farmacutica y en la industria biotecnolgica.