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INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL

ESCUELA SUPERIOR DE INGENIERA MECNICA


Y ELCTRICA

SECCIN DE ESTUDIOS DE POSGRADO E


INVESTIGACIN

PARAMETROS DE IRRADIACIN
LSER
PARA PRODUCIR EFECTOS DE ESTIMULACIN
EN SEMILLAS DE MAZ
(Zea mays L.)

CLAUDIA HERNNDEZ AGUILAR

TESIS

PRESENTADA COMO REQUISITO PARCIAL


PARA OBTENER EL GRADO DE :

DOCTOR EN CIENCIAS
EN
COMUNICACIONES Y ELECTRNICA
Mxico, D.F.
Diciembre del 2004
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3
PARMETROS DE IRRADIACIN LSER PARA PRODUCIR
EFECTOS DE ESTIMULACIN EN SEMILLAS DE MAZ
(Zea mays L.)

CONTENIDO
ndice de Cuadros .. (iii)
ndice de Figuras . (iv)
Resumen General .. (v)
General Summary

I. Introduccin General

1.1 Base cientfica de la estimulacin. .. (17)


1.1.1 Fitocromos ... (18)
1.2 Vigor de la semilla ... (20)
1.3 Tcnica Fotoacstica (21)
1.4 Patgenos (22)
1.5 Justificacin . . (23)
1.6 Objetivos . (24)
1.7 Hiptesis . (24)

2. Lseres en la Agricultura y la eleccin del lser

2.1 Emisin Estimulada .. (27)


2.1.1 Elementos bsicos de un lser ... (29)
2.2 Tipos de lseres empleados en la Agricultura ... (30)
2.2.1 Lser de Rub (31)
2.2.2 Lser de He-Ne (32)
2.2.3 Lser de Argn . . (33)
2.2.4 Lser de CO2 . (34)
2.2.5 Lser de Nitrgeno . (34)
2.3 Lseres Semiconductores . (35)
2.4 Eleccin del lser . (37)

3. Efectos de la irradiacin lser en el vigor de la semilla de maz (Zea


mays L.): Semilla coloreada.
3.1 Resumen (42)
3.2 Summary (43)
3.3 Introduccin (44)
3.4 Objetivos (46)
3.5 Hiptesis (46)
3.6 Materiales y Mtodos (46)
3.7 Resultados y Discusin (48)

4
3.8 Conclusiones (38)
3.9 Bibliografa (39)

4. Efectos de la luz lser en el vigor de la semilla de maz (Zea mays L.):


Semilla sin colorante.
4.1 Resumen (41)
4.2 Summary (42)
4.3 Introduccin (43)
4.4 Objetivos (44)
4.5 Hiptesis (44)
4.6 Materiales y Mtodos (44)
4.7 Resultados y Discusin (47)
4.8 Conclusiones (51)
4.9 Bibliografa (52)
5. Influencia de la luz lser en el contenido de clorofilas a y b en hojas de
plntulas provenientes de semilla irradiada.

5.1 Resumen .. (55)


5.2 Summary .. (56)
5.3 Introduccin .. (57)
5.4 Objetivos .. (57)
5.5 Hiptesis .. (57)
5.6 Materiales y Mtodos .. (58)
5.7 Resultados y Discusin .. (61)
5.8 Conclusiones .. (65)
5.9 Bibliografa .. (66)

6. Estudio del efecto de diferentes intensidades y tiempos de irradiacin


lser sobre la calidad sanitaria de la semilla de maz.

6.1 Resumen .. (55)


6.2 Summary .. (56)
6.3 Introduccin (69)
6.4 Objetivos (70)
6.5 Hiptesis ... (70)
6.6 Materiales y Mtodos (70)
6.7 Resultados y Discusin (73)
6.8 Conclusiones (78)
6.9 Bibliografa (79)

7. Discusin General
7.1 La luz lser y el vigor de las semillas de maz (80)
7.2 La luz lser y la clorofila (85)
7.3 La luz lser y la calidad sanitaria de la semilla (88)

8 Conclusiones generales y perspectivas


8.1 Conclusiones finales (92)

5
8.2 Parmetros de irradiacin y su factibilidad de uso en la Agricultura. .. (94)
8.3 Orientacin para futuras investigaciones (95)

9. Bibliografa citada en la introduccin general y Discusin General (98)

X Anexos (106)

A). Diseo experimental y tablas de resultados de la prueba de . ( )


vigor reportado en el captulo 3.
B). Diseo experimental y tablas de resultados de la prueba de ( )
Vigor reportados en el captulo 4.
C). Espectroscopa Fotoacstica, tablas de resultados. .. ( )
D). Tablas de resultados, experimento de patgenos. .. ( )
E). Anlisis de varianza en el Diseo de Bloques Completos al
Azar. .. ( )
F) Modelo de Jerarquizacin Analtica .. ( )

6
INDICE DE CUADROS

No. de Cuadros Ttulo Pgina

2.1 Dosis de irradiacin lser aplicados a la semilla de maz . .. 33


2.2. Anlisis de varianza para velocidad de emergencia,
plntulas emergidas (%) y peso seco de plntulas (g) . .. 35
3.1 Dosis de irradiacin aplicadas a las semillas de maz como
tratamiento pre-siembra. 47
3.2. Anlisis de varianza para velocidad de emergencia,
emergencia (%) y peso seco de plntulas (g). .. 49
4.1. Dosis de irradiacin aplicadas. . . 60
4.2. Anlisis de varianza de la amplitud de la seal fotoacstica
correspondientes a los picos de absorcin .... 63
4.2 Parmetros de irradiacin empleados en experimento con
semilla sin teir que al evaluar los espectros de clorofila
no mostraron diferencias significativas. .. 65
5.1 Dosis de irradiacin del diodo lser aplicados a la semilla
de maz .. 73
5.2. Anlisis de varianza del porcentaje de semilla desinfectada y No
desinfestada: patgenos totales y Fusarium ..75
5.3 Valores promedio del porcentaje (%) de semillaD y semillaND
con micoflora asociada de cada uno de los tratamientos.
(patgenos totales) 79
5.4. Valores promedio del porcentaje (%) de semillaD y semillaND
con el hongo Fusarium de cada uno de los tratamientos. 79

7
NDICE DE FIGURAS

No. de Ttulo Pgina


Figura

1.1 Espectro de absorcin de los fitocromos. (19)


2.1 Efectos de la irradiacin de semillas en la velocidad de
emergencia de plntulas . (34)
2.2 Efectos de la irradiacin lser en el peso seco de las plntulas ... (34)
2.3 Efectos de la irradiacin lser en la emergencia de plntulas .. (35)
2.4. Emergencia diaria de plntulas del testigo y del mejor
tratamiento .. (37)
3.1. Efectos de la irradiacin lser en la velocidad de emergencia
de las plntulas. (48)
3.2. Efectos de la irradiacin lser en el peso seco de las plntulas . (48)
3.3 Efectos de la irradiacin lser en la emergencia de plntulas (49)
3.4 Cintica de emergencia de plntulas (50)
4.1 Instrumentacin fotoacstica . (60)

4.2 Espectros de absorcin promedios del nivel de clorofila en


La 1er hoja ligulada de plntulas de maz (Zea mays L.) (62)
4.3 Influencia de los tiempos de irradiacin en el contenido de
clorofila a, para I1 = 27.3 mW/cm2 e I2 = 4.9 mW/cm2 . . (63)
4.4 Influencia de los tiempos de irradiacin en el contenido de
clorofila b para I1 = 27.3 mW/cm2 e I2 = 4.9 mW/cm2 . .. (63)

5.1 Influencia de la luz lser en la cantidad de semilla con micoflora


asociada y con el hongo fusarium sp a dos niveles de
Intensidad (75)
5.2 Semilla ND. Influencia de la luz lser en la cantidad de
semilla con micoflora asociada y con el hongo fusarium sp
a dos niveles de Intensidad: ... (76)

6.1 Efectos de la irradiacin lser a diferentes tiempos e intensidades de


irradiacin, semilla teida con rojo metil (83)
6.2 Efectos de la irradiacin lser a diferentes tiempos e
intensidades de irradiacin .. (84)
6.3. Espectro de absorcin ptico de hojas de plntulas,
Para las clorofilas a y b .. (87)

8
RESUMEN GENERAL

Considerando la necesidad de ofrecer a Mxico y al mundo nuevos


mtodos ecolgicos para emplearse en la agricultura, los cuales buscan mejorar
la calidad de la semilla; en esta investigacin se plantearon los siguientes
objetivos: 1). Determinar los tiempos e intensidades de irradiacin lser de baja
intensidad que pueden producir efectos benficos en la semilla de maz, a travs
del establecimiento de diversos experimentos, 2). Determinar si la irradiacin de
las semillas de maz con un lser de baja intensidad modifica el vigor de las
plntulas, semilla: teida, 3). Determinar en condiciones de invernadero si la
irradiacin con un lser de baja intensidad mejora el vigor de la semilla de maz:
semilla sin colorante. 4). Analizar la influencia de la irradiacin lser de baja
intensidad en las hojas de las plntulas, provenientes de semilla tratada con 2
niveles de intensidad y cuatro tiempos de irradiacin emitida por un lser
semiconductor de AsAlGa. 5). Estudiar el efecto de diferentes intensidades y
tiempos de irradiacin lser, sobre la calidad sanitaria de la semilla de maz. Los
experimentos se llevaron a cabo en la estacin experimental e Invernadero del
rea de Mejoramiento de la Calidad Gentica y en el Laboratorio de Fitopatologa
pertenecientes al Programa en Produccin de semillas del Colegio de
postgraduados Instituto de Recursos Genticos y Productividad (Montecillo-
Estado de Mxico). Despus de diversos estudios e investigacin preliminar; se
estableci en diciembre del 2002 un experimento, considerando que un problema
dentro de la industria de la semilla es la produccin de semillas con bajo vigor,
propuestas de mtodos que lo mejoren, y que estn encaminadas a mantener
una agricultura sustentable es muy importante para Mxico y el mundo. Para
esto se propuso en este estudio el empleo de la luz lser de baja intensidad en
la semilla de maz (Zea mays L.) como tratamiento previo a la siembra. Un
factorial de 3 intensidades y 6 tiempos de irradiacin, empleando como fuente
emisora un lser semiconductor de AsAlGa (Arseniuro-Aluminio-Galio), con salida
de 30 mW de potencia y longitud de onda de 660nm fue aplicado en semillas de

9
un hbrido de cruza simple, el cual antes de ser tratado con la luz lser se colore
con rojo metil. Los resultados fueron, que a determinada combinacin de tiempo e
intensidad de irradiacin lser en la semilla se increment significativamente la
velocidad de emergencia de plntulas, peso seco y emergencia. En este estudio,
la combinacin con la cual se obtuvo el mejor resultado fue a una intensidad de
20 mW/cm2 durante un tiempo de 1 minuto; ya que el incremento fue altamente
significativo a una (P0.01) en velocidad de emergencia de plntulas (42.89%), en
peso seco (63.24%) y en emergencia (48.07%) con relacin a la muestra de
control (no radiada). Debido a la bsqueda de condiciones de semilla que
requieran menos sustancias adicionales, como lo fue el colorante en el anterior
resultado, se sigui investigando hasta que, se plane el establecimiento de otro
experimento, empleando semilla sin sustancias adicionales, este experimento se
llevo a cabo a nivel de invernadero, se aplicaron 16 tratamientos de luz lser en
las semillas de maz. El experimento fue conducido en el invernadero del rea de
Mejoramiento y Control de la Calidad Gentica del Programa de Semillas del
Colegio de Postgraduados, Montecillo, Texcoco (Edo de Mxico). Un factorial de
4 intensidades y 4 tiempos de irradiacin emitidas por un lser de AsAlGa en una
longitud de onda de 660nm fueron aplicados a la semilla antes de la siembra de
un maz hbrido de cruza simple. La radiacin lser increment significativamente
la velocidad de emergencia, peso seco y emergencia de plntulas. Los resultados
de nuestro estudio puntualizan que la combinacin que obtuvo una mejor
respuesta fue a una intensidad de 10 mW/cm2 durante un minuto; este tratamiento
origin incrementos significativos (P 0.05) en velocidad de emergencia
(33.19%), en peso seco (14.45%) y emergencia (25%) con relacin al control
(muestras de semillas no irradiadas). Al interactuar la luz lser con la semilla de
maz tambin produce efectos de fotoactivacin en los genes responsables del
contenido de pigmento en las hojas, ya que a travs del establecimiento de un
experimento cuyo inters fue investigar el efecto producido en el contenido de
clorofilas en hojas de plntulas de maz, cuya semilla fue tratada con luz lser
emitida por un lser semiconductor de AsAlGa, pre-siembra. El experimento fue
establecido en el invernadero del rea de Mejoramiento y Control de la Calidad

10
Gentica. El espectro de absorcin ptico de una porcin de las hojas de las
plntulas fue obtenido mediante la tcnica de espectroscopia fotoacstica. El
espectro de absorcin de una porcin de las hojas fue obtenido para evaluar las
diferencias cualitativas en los picos de absorcin de las clorofilas as y clorofilas
bs. Los resultados para ambas clorofilas revelaron diferencias significativas en los
tratamientos a una P0.05. Por ltimo, al conocer que las semillas de maz
normalmente tienen el problema de la existencia de hongos y que estos
microorganismos deterioran la calidad de la semilla, se dispuso el conocer que
esta pasando con la micoflora asociada a la semilla de maz. La investigacin que
revel resultados de afectacin de esta micoflora fue al emplear un diodo lser
semiconductor de 660 nm y P = 27.4 mW. aplicando cuatro tiempos de irradiacin
(30, 60, 180, 300 y 600 segundos) y dos niveles de intensidad de irradiacin ( I1 =
16.31 e I2 = 4.65 mW/cm2) con un diodo lser de = 660 nm, potencia 27.4 mW).
Posterior a la irradiacin a las semillas le fueron llevadas a cabo la prueba de
germinacin y de sanidad de la semilla. La irradiacin lser en la semilla
disminuy significativamente la cantidad de semilla infestada con el hongo
fusarium s.p.. En este estudio, la combinacin de I1 e I2 a un tiempo de irradiacin
de 5 minutos hubo una reduccin en la cantidad de semilla infestada con el hongo
significativamente a una (P0.05) en un 66.66%, con relacin al control (no
radiada).
De este conjunto de resultados se desprende que la aplicacin de la luz
emitida por lseres semiconductores o diodos lser puede potencialmente
convertirse en una alternativa para el manejo de la calidad de la semilla de maz,
as como en futuras investigaciones en semillas de otras especies.

PALABRAS CLAVES : Zea mays, semillas de maz, radiacin lser, vigor de la


semilla, clorofila, espectroscopia fotoacstica, hongos, fusarium, diodo lser.

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GENERAL SUMMARY

High seed quality is absolutely necessary in the context of modern crop


production systems, and it is a specific requirement because affects crop
establishment, growth and yield, therefore, the development of a technique for
improved quality is very important, considering the world problem at present and in
the future, For this proposes, the effects of low intensity laser irradiation on Zea
mays L. The experiments were conducted in the experimental station, greenhouse
and laboratorys of the Post- graduated College. A factorial of three intensities and
six times of GaAlAs laser radiation, with an output power of 30 mW and
wavelength of 660 nm, was applied in pre-sowing to seeds from a single cross
hybrid: the seeds were soaked in the dye methyl red. The laser seed irradiation
significantly increased seedling emergence rate, seedling dry weight and
emergence in soil. Due that laser irradiation originated positive and negative bio-
stimulations in seed vigour, it was very important to estimate the specific
combination of parameters. In this study, the optimum combination was an
intensity of 20 mW/cm2 during one minute; this treatment originated highly
significant (P0.01) increases in seedling emergence rate (42.89%), in dry weight
(63.24%) and emergence (48.07%) with relation to the control (without irradiation).

On the other hand a factorial of four intensities and four times of AsAIGa laser
radiation at a wavelength of 660 nm was applied in pre-sowing to seeds from a
single cross hybrid. The laser seed irradiation significantly increased seedling
emergence rate, seedling dry weight and emergence in soil. The results of our
study point to that, the optimum combination was an intensity of 9.7 mW/cm2
during 1 minute; this treatment originated highly significant (p 0.05) increases in
seedling emergence rate (33.19%), in dry weight (14.45%) and emergence (25%)
with relation to the control (without irradiation). Other experiment was when the
seeds were exposed to different laser intensities and radiation times . The optical
absorption spectra of their seedling leaves was obtained, by using photoacoustic

12
spectroscopy, in order to obtain qualitative differences in the chrolorophyll a and b
absorption peaks. A randomized complete block experimental design with 3
replications was utilized. The experimental unit was 10 seeds, from which we
randomly choose three seedlings. Data were subjected to variance analysis
(anova) using the SAS GLM procedures (SAS, 1998 version) The least significant
difference test (LSD) at the 5% probability level was studied for comparing
treatments (3). The anova for both chlorophylls revealed highly significant (p
0.05) differences among treatments. In chlorophylls a and b at 30 seconds of
irradiation time and 27.3 mW/cm2 of laser intensity, the PA signal decreases
22.75% and 16.2% respectively, when compared with the PA signal amplitude of
control sample. In other study we investigated about the effects of the low intensity
laser irradiation on the Mycoflora content in corn seeds. Also the effects on the
germination, grown and morphology of the seedlings, under controled confitions,
were studied. Five irradiation times were applied (30, 60, 180, 300 and 600
seconds and two intensity levels (( I1 = 16.31 e I2 = 4.65 mW/cm2) by using a diode
laser ( = 660nm and power of 27.4 mW). After of the seed irradiation studies of
germination and seed healthy were developed. Laser irradiation significantly
diminish the quality of seeds infested with Fusarium s.p. fungi. The combination of
I1 and I2 , at five minutes of irradiation time, diminish (p 0.05) the quantity of
infested seeds with the fungi up to 38.88% when compared with the control seed
(no irradiated)

From these results the laser irradiation seed enhancement technology deserves
further investigation in maize.

Keywords:
Zea mays L., laser irradiation, laser semiconductor, diode laser, seed
vigour, seed enhancement, seedling emergence. Chrolorophylls, fungi, fusarium.

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I. INTRODUCCIN GENERAL

En Mxico, el maz (Zea mays L.) es la base de la alimentacin del


pueblo (Zepeda et al., 2003), el contenido promedio de protena asimilable es del
39% y representa el 59% de la energa que ingieren los mexicanos. El consumo
anual aparente es de 209.8 Kg per cpita (Sierra Macas et al., 2003). En 1997 se
sembraron 9.13 millones de hectreas con una produccin de 17.66 millones de
toneladas (SAGAR-CEA, 1997), que no cubri el consumo nacional de 23.8
millones y hubo que recurrir a la importacin; situacin que no ha cambiado a la
fecha tenemos que recurrir a la importacin (INEGI, 2003); esto es, nuestro pas
no fue, ni es capaz de cubrir las necesidades del pueblo, a pesar de que ms del
90% del suelo cultivable est sembrado con esta especie. De acuerdo a los datos
del Departamento de Agricultura de los Estados Unidos indica, las importaciones
que realiza Mxico y que en 2002 representaron ms de dos mil millones de
dlares, continuarn creciendo; se prev que en este ao (2004) llegarn a ocho
millones de toneladas, muy arriba de los 4.4 millones registrados en 2001. Se
requiere indudablemente incrementar la produccin para que el pas cubra las
necesidades nacionales.

Para incrementar la produccin, en el siglo pasado se aplicaron diferentes


qumicos en la agricultura gracias a los descubrimientos de cientficos que
realmente produjeron una revolucin; por ejemplo: muchos qumicos son
empleados para la fertilizacin de las cosechas, para el control de plagas, control
de hongos, etc. y ayudan al alto desarrollo de los sistemas de cultivo, seguros y
abundantes, y que inicialmente fueron una fuente de alimentacin saludable, pero
stos mtodos han impactado la salud pblica y el ambiente. Por otro lado el uso
de qumicos por largo tiempo en la produccin de comida ha disminuido la
resistencia de las plantas y la estructura bioenergtica de la tierra lo cual se
manifiesta como: disminucin en la resistencia de las plantas, disminucin de la
productividad y prdidas de la capacidad de la tierra; esto significa que han
ocasionado consecuencias negativas en los suelos y en el ambiente y en los

14
productos que nos sirven de alimentacin. Los cientficos del mundo deben
encaminar los esfuerzos hacia el desarrollo de mtodos que protejan las
cosechas y el ambiente, buscando fuentes bioenergticas y bioestimuladores,
indicar nuevos mtodos en la produccin agrcola que no produzcan el deterioro
de la Naturaleza y en consecuencia de nuestra vida.

Uno de estos bioestimuladores propuestos es el LASER (Light Amplification by


Stimulated Emission of Radiation-Amplificacin de la luz por emisin estimulada
de la radiacin).
Con la creacin del LASER en 1961, se abri un amplio espacio para la aplicacin
del lser de baja intensidad en distintas reas como la medicina, la biologa, y la
agricultura, siendo Hungra el pas que dio mayor prestigio al lser de baja
intensidad. En la medicina; se ha empleado en la terapia lser de baja intensidad
(Giavelli et al., 1998; Harazaki y Isshiki, 1997; Bruce et al., 1987). Las primeras
publicaciones acerca de la terapia lser de baja intensidad aparecieron hace ms
de 30 aos. En los aos 60s y 70s investigadores del Este de Europa y
especialmente en Hungra y la Unin Sovitica activamente desarrollaron la
bioestimulacin lser. Partidarios de pases occidentales, como Italia, Francia y
Espaa, as como Japn y China tambin adoptaron y desarrollaron este mtodo.
Actualmente la terapia lser de baja intensidad, es empleada por fisioterapistas,
dentistas, dermatlogos, en la medicina del deporte y la rehabilitacin clnica.
(Karu, 2003). En biologa, se ha convertido en un mtodo aplicado para modificar
el comportamiento celular y molecular de diferentes tejidos vivos (Karu et al.,
2004; Karu et al., 2001a; Karu et al., 2001b; Manteifel et al., 2000).

En la agricultura un grupo pequeo de reportes sealan su aplicacin en


semillas, plntulas y plantas.
La aplicacin de la irradiacin lser en algunas semillas antes de la siembra se
han llevado a cabo manejando diferentes tipos de lseres, las fuentes de luz
empleadas han tenido diferentes parmetros de irradiacin: longitud de onda,
potencia de salida, tipo de onda, tiempos y dosis de irradiacin.

15
Wilde et al., (1969) expusieron 4 diferentes tipos de semilla a la radiacin lser
antes de sembrar, empleando dos lseres de rub. Las semillas fueron
sembradas inmediatamente despus del tratamiento y los resultados mostraron
una tendencia al incremento de la velocidad de germinacin.
Paleg y Aspinall (1970) reportan el empleo del lseres de He- Ne para activar los
procesos controlados por el fitocromo incluyendo la germinacin de semillas.
En 1979 empleando un lser de He-Ne en Canad reportan la activacin del
fitocromo que controla la germinacin de la semilla de Pinus Banksiana, por lo
que recomiendan emplearla ya que podra ser una herramienta til para tener
eventos metablicos asociados a la germinacin ms tempranamente (Campbell y
Donald, 1979).
En la India otro grupo de investigadores proponen el empleo del lser de
Nitrgeno pulsado (337.1 nm) ya que encontraron que a 30 minutos se
incrementaron los brotes de la planta, la longitud de las races, y el peso fresco y
seco de las plntulas (Sudha Rani et al., 1985). Posteriormente, ese mismo grupo
de investigadores experimentan combinando dos lseres distintos: el lser de
Nitrgeno y el lser de Argn (514.5nm), de esta combinacin reportan tambin
un incremento de brotes de la planta, longitud de races y peso fresco y seco de
las plntulas, empleando 30 minutos de irradiacin con el lser de Nitrgeno y 5
minutos con el lser de Argn.

En Bulgaria Shaban y Kartalov, (1988) irradiaron semilla de pepino y estudiaron el


crecimiento de la raz embrional, la actividad fotosinttica y el contenido de
pigmento en las hojas de las plntulas cuyas semillas fueron irradiadas con luz
lser de He- Ne (632.8 nm) con potencia de 24mW. Las semillas se iluminaron con
varios regmenes de irradiacin. Con respecto a la semilla no irradiada en todos
los parmetros evaluados encontraron diferencias.
Otros estudios reportan el empleo de 3 lseres con 337.1 nm, 510 nm y 632.8 nm
para radiar semilla de maz y evaluar la influencia sobre el metabolismo de los
carbohidratos en la germinacin de las semillas, reportando que la actividad de la
amilasa fue ms alta que la de control para la longitud de 337.1nm, para la de

16
510nm la actividad de la amilasa fue ms baja que para las muestras de control ,
en tanto que para la longitud de 632.8 nm no hubo diferencias concernientes a
esta actividad de la amilasa.
La influencia de la bioestimulacin lser a la semilla antes de la siembra ha
probado efectos positivos usando como bioestimulador un lser de He-Ne (R.
Koper, 1994); que muestran efectos positivos, como un incremento en la
productividad y el contenido de azcar con respecto al control (Koper et al., 1996).
Drozd y Szajsner, (1999) empleando radiacin antes de la siembra, con una
fuente lser de He-Ne en la semilla de trigo, con dosis del orden de 4 x 10-3 J/cm2
y 4 x 10-5 J/cm2, con varios regmenes de irradiacin (simple, doble y tripe
irradiacin) reportan variaciones en la longitud de las espigas; para la dosis mayor
la longitud de la espiga aumenta, (produciendo las espigas ms grande cuando se
irradian tres veces) y para la dosis ms pequea la longitud de las espigas
disminuye.
En Macedonia, Vasilevski y Bosev, (1997) concluyen que dentro del campo de
produccin de vegetales existen reacciones positivas al tratar semillas y plantas
con luz lser; la productividad se increment en un 20-24 % en tomates, 13% en
pimienta, 15% en pepino, 15.5 % en cebolla y 27% en haba. El perodo de
vegetacin del tomate fue reducido en 8 das, no especifican cules resultados
corresponden a qu niveles de irradiacin en plantas y cules corresponden a
radiacin de semilla antes de la siembra o en la planta. Lo que s indican es que
la estimulacin en plantas causa efectos visuales positivos y adems cambios en
la calidad de los productos como en contenido de vitaminas, clorofila y peso seco.

Por otro lado, en Egipto reportan la influencia de la irradiacin lser empleando el


lser de He-Ne para radiar semilla de soya, y analizando la micoflora, el
crecimiento, la nodulacin y la resistencia al hongo Fusarium Solani, los
resultados que indican son: estimulacin de la germinacin a 1 minuto de
irradiacin, en semillas irradiadas a 1 o 3 minutos la formacin de clorofila a fue
menos afectada que la formacin de clorofila b; en semillas irradiadas a 10
minutos ambas clorofilas fueron disminuidas, sobre todo cuando la semilla de

17
soya fue teida; el nmero de ndulos y peso seco fue mayor para las semillas
irradiadas entre 1 y tres minutos en relacin con las de control. En este reporte
recomiendan el tratamiento de la semilla con luz lser en combinacin con el
empleo de fotosensitizadores para tratar la semilla como tratamientos fungicidas
(Ouf y Abdel, 1999).
En China realizaron experimentos en donde emplearon una combinacin de
lseres de He-Ne y CO2. El lser de He-Ne de 5.43 mW/mm2 y el de CO2 de 20.1
mW/mm2 para pre-tratar la semilla de Vicia faba L. Los resultados que
encontraron fue que los pre-tratamientos con la radiacin lser increment la
resistencia al estrs de luz UV ya que protegen las clulas de las plntulas
provenientes de semilla irradiada (Zhi Qi et al.,2000).
En la cuarta conferencia Internacional de Ecofisiologa del proceso de produccin
de plantas en condiciones de estrs, reportan efectos de la bioestimulacin en
crecimiento de plntulas de semillas de haba reportando diferencias a distintas
condiciones de temperatura, as como ante diferentes condiciones de humedad
(Conferencia, 2000).
Estudios para evaluar algunos cambios qumicos y fisiolgicos en las semillas de
haba reportan que la irradiacin de las semillas influy en una mayor velocidad de
germinacin y adems modific el curso de los estados de desarrollo influyendo
en la madurez de las plantas (Podlesney, 2002).
La irradiacin de semillas con lseres de baja intensidad da lugar a incremento en
la biomasa de las plantas (Ivanova y Stoyanova, 2000), en la produccin de frutos
(Gladyszewska et al., 1998a y Gladyszewska et al., 1998b) en las propiedades
mecnicas de las semillas de la siguiente generacin (Koper et al., 1999) o bien en
la tolerancia a bajas temperaturas de las plntulas despus de la germinacin de
las semillas irradiadas (Podlena y Podleny, 2001).
La mayora de los autores coinciden que la luz lser de He-Ne brinda resultados
positivos haciendo que el crecimiento y desarrollo del sistema radical sea ms
rpido, as como una mejor adaptacin a los cambios ambientales, ms alta
resistencia a las enfermedades e incremento en la productividad. En los ltimos
aos se le da mayor importancia ya que el siglo pasado la incorporacin de

18
sustancias qumicas provoc un deterioro ambiental a nivel mundial y ahora los
mtodos que se incorporen en el sector agrcola no deben daar el ambiente y en
consecuencia la salud de las personas (Vasilevski, 2004). Por las razones
anteriores algunos cientficos creen que este siglo ser de aplicacin de mtodos
biofsicos en la agricultura en donde hay todo un camino por desarrollar e
investigar.
Polonia es otro de los pases donde ms fuertemente trabajan investigando sobre
este tema. Y es ah donde se han llevado a cabo dos conferencias internacionales
tituladas, Influencia del Campo Electromagntico en el Ambiente Agrcola (2001 y
2003). En estas conferencias internacionales se han presentado resultados de
investigaciones que se indican a continuacin:
Danila et al., (2003) expusieron los resultados encontrados al emplear un par de
lseres de He-Ne de 5mW de potencia en la respuesta en germinacin de
semillas de plantas de maz, habiendo empleado tres diferentes valores de dosis
de irradiacin y cambiando el tamao del ancho del haz de luz mediante un
arreglo ptico; los niveles de dosis de irradiacin fueron 1 J/cm2, 2 J/cm2 , and
3J/cm2 ; los resultados que reportan son: Las plntulas que son crecidas de las
semillas irradiadas presentaron un crecimiento significativo en la longitud del
coleoptilo en comparacin con las semillas no irradiadas, adems la elongacin
de los tallos tambin es ms rpida para las muestras irradiadas. Los mejores
resultados que obtuvieron fueron a las dosis de irradiacin ms pequeas. Otros
resultados reportan una estimulacin en la velocidad de germinacin de plntulas
cuya semilla fue irradiada con luz lser (Konstanty , 2003).

En la aplicacin de la bioestimulacin lser en el cultivo de trigo de primavera se


encontr un incremento en la energa germinativa y la capacidad germinativa. La
luz lser influy sobre la primer hoja de la plntula y la longitud del coleoptilo y
las races (Drozd et al., 2001). Resultados sobre la influencia de la radiacin de
la luz antes de la siembra en cebada indic un incremento del 14.81% (Simn y
Michal, 2001), mtodos para irradiar la semilla tambin fueron presentados ya que
confirman una necesidad para usar este procedimiento en la agricultura (Koper,
2001). Otros reportes fueron acerca de los resultados de irradiar cinco tipos

19
diferentes de semilla de trigo en donde reportan que mejor la calidad de siembra
(Laszkiewicz, 2001), as como tambin indican la eficiencia de la bioestimulacin
lser en semillas de maz en diferentes condiciones de humedad reportaron una
aceleracin significativa de la emergencia de plntulas a un rgimen de
irradiacin de cinco dosis (Lipski, 2001a). En todas estas investigaciones
emplearon lseres de He-Ne.

Sylwester Lipski tambin reporta la evaluacin de los efectos de la irradiacin


lser sobre las semillas de maz (Zea mays L.) al emplear dos dosis de irradiacin
-3
(D1 = 4 x 10 J/cm2 y la dosis D2, fueron 5 rgimenes de esa misma dosis de
irradiacin); efectos benficos solo fueron reportados en condiciones trmicas
desfavorables, incrementando la productividad del grano que fue relacionado
con el incremento del nmero promedio de mazorcas por planta (Liipski, 2001b).

Efectos sobre los hongos encontrados en semillas de rbano, marcan el empleo


de una intensidad de irradiacin de 1 mW/cm2 para causar alteracin en la
cantidad de hongos al emplear 4 diferentes tiempos de irradiacin: 30, 90,120 y
180 minutos, con un lser de 632.8nm (Dakowska et al., 2001)

Por otra parte otros autores reportan la influencia de la irradiacin lser en la


determinacin de la dosis de irradiacin en los procesos de bioestimulacin de
semillas (Gladyszewska y Koper, 2001a); en los procesos de germinacin de
semillas de tomate (Gladyszewska y Koper, 2001b), en la estructura de la
cosecha de plantas de tomate y pepino (Klimont,2001a), en la cosecha y la calidad
de las semillas de amaranto (Klimont (2001b), en la cosecha y la calidad de la
siembra de la semilla de cebada (Klimont, 2001c) y en las propiedades qumicas
y la cosecha de semillas de haba (Koper et al., 2001a), semillas de tomate (Koper
et al., 2001b), de la caa de azcar (Koper et al., 2001c) y en las propiedades
mecnicas de la cosecha de las semillas de haba (Koper, et al., 2001d)

20
En los ltimos aos cuando se le ha dado un mayor auge a este tipo de
investigaciones (Benavides et al., 2003; Vasilevski, 2004), por la necesidad que
se vive a nivel mundial por mantener una agricultura sustentable.

Como vemos, los efectos de la bioestimulacin lser de semillas de plantas


cultivadas se han llevado a cabo en diferentes partes del mundo.

1.1 Base cientfica de la fotoestimulacin (bioestimulacin).

Fotobiologa es el estudio de las interacciones de la radiacin electromagntica


no-ionizante con biomolculas. La Fotobiologa estudia las radiaciones cuya
longitud de onda se encuentra entre 200 800 nm, y con alteraciones en
biomolculas que afectan la viabilidad o funciones de la materia viva.
La energa de fotones en la regin ultravioleta (200-400 nm) y algunas veces la
visibles (400-700 nm) es suficiente para causar excitacin electrnica de
molculas cromforas especficas, conduciendo a reacciones qumicas, por lo que
la radiacin ultravioleta y visible ofrecen la posibilidad de causar reacciones
fotoqumicas. (Parrish y Deutsch, 1984).

La interaccin de la luz con sistemas biolgicos causa un amplio espectro de


efectos los cuales pueden ser divididos en tres grupos (Karu, 1991):
Primero. La luz lser es absorbida, reflejada o re-irradiada por la sustancia as
que no ocurren cambios adentro de ste.
Segundo. La radiacin visible y ultravioleta puede excitar estados electrnicos en
molculas, y efectos fotobiolgicos especficos que ocurren debido a la excitacin
de cromforos en clulas. Estos procesos ocurren desde fuentes de luz no-
coherentes, pero el uso de la luz lser puede dar beneficios diversos desde un
punto de vista prctico. Este grupo de efectos abarcan la fotobiologa molecular y
la fotomedicina. El mecanismo de accin no depende de la coherencia y
polarizacin de la luz (Karu, 1987) nicamente, la bioestimulacin lser es un
fenmeno de naturaleza fotobiolgica (Karu, 1989 y Karu, 1988). Dos aspectos
tienen que ser distinguidos: la coherencia de la luz por s misma y la coherencia

21
de la interaccin de luz con la materia ( Karu, 2003; Karu 1989b). Estos procesos
que ocurren bajo el efecto de la luz encuentran diversas aplicaciones prcticas.
Para lo cual la luz lser presenta propiedades nicas como lo son:
monocromaticidad, coherencia y polarizacin (Fenyo, 1984).

1.1.2 Fitocromos

La reaccin fotobiolgica envuelve la absorcin de una longitud de onda especfica


de la luz por la funcin de los fotorreceptores, molculas fotoaceptoras. Para
distinguir molculas fotorreceptoras tal como rodopsina, fitocromos,
bacteriorodopsina y clorofila. Despus de la absorcin de la luz de la longitud
empleada por la irradiacin, asumen estas molculas un estado de excitacin
electrnica desde los cuales los procesos moleculares primarios pueden conducir
a efectos biolgicos medibles en ciertas circunstancias (Karu, 1999).

De acuerdo al objeto biolgico manejado en esta investigacin, corresponde


a molculas fotorreceptoras denominadas como fitocromos.

Estas molculas son cromoprotenas, las cuales consisten de dos partes: un


polipptido y un cromforo, que absorbe la luz de longitudes de onda especficas.
Para las plantas, la luz es posiblemente el parmetro ambiental ms importante
ya que pueden monitorear la presencia, ausencia, calidad espectral (longitud de
onda), intensidad, direccionalidad y duracin diurna de las seales de luz
incidentes y modular su desarrollo y crecimiento. Este proceso es llamado
fotomorfognesis y es facilitado a travs de fotorreceptores, familias pequeas
de criptocromos y fototropinas, los cuales monitorean la regin de azul/UV del
espectro, y los fitocromos son los que monitorean la regin roja e infrarroja (Quail,
2002).
La conclusin de que bajo condiciones fisiolgicas normales, la absorcin
de la luz de baja intensidad por sistemas biolgicos es de una pureza no-
coherente (Karu, 1989), ha sido verificado por diversos experimentos hechos
desde hace ms de 50 aos (B. Hendricks, 1980), en plantas, empleando
diferentes tipos de fuentes de irradiacin en las distintas etapas fenolgicas

22
(Arturas Zukauskas et al., 2002). El pionero en este tipo de investigaciones S.
Henricks, H. Borthwick y colegas propusieron la hiptesis central de la accin de
los fitocromos: Estos fotorreceptores existen en dos formas fotoconvertibles Pr y
Pfr. Pr es biolgicamente inactiva y hasta la absorcin de fotones rojos es
convertida a Pfr, la forma activa. Pfr es convertida de regreso a Pr por fotones
infrarrojos (Smith, 2000).

El espectro de absorcin de los fitocromos tienen sus mximos de absorcin en


665nm y 730nm (Figura 1.1).

Los fitocromos son una familia de


sensores fotorreceptores que regulan el
crecimiento y desarrollo de la planta en
respuesta a las seales de luz (Shimizu-
Sato, 2002 y Fankhauser, 2001).

400 500 600 700

Figura 1.1 Espectro de absorcin


de los fitocromos. (Smith,2000)

Los fitocromos son capaces de regular casi todas las fases de desarrollo de las
plantas: germinacin, establecimiento de plntulas, arquitectura de la madurez de
las plantas y floracin (Smith, 2000).
Bajo la base terica y prctica, la luz lser roja tiene efectos en las plantas,
en sus diferentes etapas fenomenolgicas.
A partir de la incorporacin del uso del lser en la ciencia de la agricultura se han
empleado en diferentes regiones del espectro electromagntico, y en diferentes
etapas de la produccin de las plantas. La luz lser se ha empleado para tratar la
semilla, las plntulas, las plantas y el agua de irrigacin (Vasilevski, e-mail), y es
el lser de He-Ne, el que ha resultado ser el ms empleado por la mayora de
investigadores en el mundo.

23
Resumiendo, existen evidencias suficientes, terica y prctica, que permiten
afirmar que el tratamiento de semillas con luz lser tiene efectos en las plantas.

Diversos investigadores varan en los mtodos, lseres, y las dosis de irradiacin


empleados, as como tambin en la cantidad de regmenes de irradiacin
aplicados a diferentes especies de semillas.
En los ltimos aos la literatura seala mayormente el empleo del lser de He-Ne.

Algunos de los efectos benficos originados se han mencionado y es suficiente


para afirmar que se favorecen los procesos fisiolgicos de las semillas y en
consecuencia el establecimiento de los cultivos a determinados parmetros de
irradiacin, siendo importante el definir la combinacin de tiempos e intensidades
de irradiacin lser adecuada para producir los efectos favorables en las semillas
de cada especie, cabe aclarar que existe poca informacin del impacto en
cereales en el mundo, as como tambin la inexistencia en Mxico de lneas de
investigacin que realice estudios de este tipo.

1.2 Vigor de la semilla

En el comercio de semillas existen organizaciones nacionales e internacionales


que regulan el mismo. Se establecen normas y se estandarizan procedimientos
que permiten evaluar la calidad de la semilla con propsitos agrcolas. La
globalizacin del comercio de semilla ha llevado a que asociaciones como la
international Seed Testing Association (ISTA) y Association of Oficial Seed
Analysts (AOSA) establezcan tcnicas y procedimientos estndares cuyos
resultados sean ampliamente repetibles entre laboratorios (Artola, 2003)

Para estimar el vigor de la semilla se han desarrollado y evaluado diversas


pruebas, como medida de crecimiento, un parmetro reconocido a nivel
internacional es el conocido como peso seco de la plntula y la velocidad de

24
emergencia, es uno de los primeros conceptos de vigor y se citan a Maguire
quin sugiri la siguiente frmula para obtener su clculo (Maguire,1959):

X = Nmero de plntulas normales + ..... + Nmero de plntulas normales .(2.3.1)


Das al primer conteo Das al conteo final

En esta prueba, se emplea una estructura metlica o de madera, con dimensiones


definidas empleando como sustrato arena o tierra. Iniciada la emergencia de las
plntulas se realizan conteos diarios hasta la culminacin de sta; con los datos
obtenidos se calcula la velocidad de emergencia de acuerdo a la expresin
anterior.

1.3 Tcnica fotoacstica

En 1880 A. G. Bell, descubri el efecto fotoacstico. Este consiste en la


generacin de una seal acstica en un gas (normalmente aire) dentro de una
celda cerrada. Esta seal es generada por la absorcin de luz modulada por la
muestra. Al absober la radiacin, la muestra pasa a niveles de energa excitados,
que al decaer de forma no-radiativa, causa un calentamiento local peridico
(pulsos de calor), provocando modulacin de temperatura en la interfase
muestra-gas, la que a su vez genera ondas de presin que son detectadas por
un micrfono.

El efecto fotoacstico permaneci mucho tiempo olvidado y a mitad del siglo


pasado se le utiliz para realizar espectroscopia en gases pero no fue hasta 1976
que se da la primera base terica por Rosencwaig y Gersho. Rosencwaig tambin
establece la espectroscopia fotoacstica como una herramienta til para estudios
pticos en slidos. En la actualidad la tcnica fotoacstica es utilizada para
caracterizar las propiedades trmicas y pticas de ciertos materiales (Calderon y
Cols, 2000).

El modelo de Rosencwaig y Gersho (RG) toma en cuenta la generacin de seal


fotoacstica en slidos, la base es que una luz modulada incide en una muestra

25
que est en contacto con la cmara de gas (generalmente el aire). La cmara
fotoacstica, generalmente sellada con una ventana de cuarzo, tiene acoplado un
micrfono que detecta las variaciones de presin en el gas. En el modelo RG se
considera que una luz monocromtica modulada incide sobre la muestra de una
cmara fotoacstica, este modelo considera que solo hay relajacin trmica, o sea
que toda la luz absorbida es convertida en calor.

1.4 Patgenos

Para tener exitosos establecimientos de cosecha se requiere contar con semilla


de alta calidad, uno de los aspectos que repercuten en la calidad de la semilla es
la salud de la semilla (McDonald, 1998). Las enfermedades ms usuales que
pueden tener las semillas de maz es la producida por los hongos.

Los hongos se dividen en dos grupos ecolgicos: hongos de campo, los cuales
son ms o menos parasticos y afectan las semillas antes de la cosecha y hongos
de almacenamiento, los cuales generalmente son parsitos facultativos que se
desarrollan despus de la cosecha (Castao-Zapata y Zepeda, 1987). Los de
campo invaden las semillas cuando stas poseen humedad an alta (por encima
de 20%). Cuando la humedad baja a niveles apropiados para almacenamiento, los
hongos de campo desaparecen y los hongos de almacenamiento empiezan a
invadir las semillas (Pacheco, 1989). Semillas enfermas tienen ms bajo nivel de
germinacin y de velocidad de emergencia que semillas saludables (Wen, 2001).
La desinfeccin de la semilla es el nico procedimiento del tipo preventivo
relativamente eficaz para combatir estas enfermedades (Llanos, 1984) y hasta el
da de hoy se buscan mtodos para combatirlas, debido a que los hongos pueden
causar grandes prdidas en la agricultura (Prez, 2000). Neergaard, citado por
Pacheco (1989), reporta que el 90% de los cultivos destinados a la produccin de
alimentos, pueden sufrir algn tipo de enfermedad y sus agentes en gran mayora
pueden ser transmitidos por la semilla. Pacheco (1989), cita prdidas de 135
millones de toneladas de cereales.

26
En el caso de la semilla de maz, se considera a dos especies de hongo
Fusarium responsables del deterioro de la raz de la planta: el Fusarium
moniliforme y Fusarium graminearum.

1.5 Justificacin

Para incrementar la produccin es esencial contar con semilla de calidad, con


todos los atributos, biolgicos, sanitarios y genticos (Basra,1995) que
aseguren un rpido y uniforme establecimiento de cultivo, y que permitan
desarrollar el mximo potencial de rendimiento en diversas condiciones de campo
(Dornbos, 1995 ), ya que al obtener una poblacin ptima de plantas, que se
establezcan en forma rpida y uniforme bajo diferentes condiciones ambientales,
es primordial para maximizar los rendimientos y/o calidad (Artola et al., 2003).

De acuerdo con la International Seed Testing Association (ISTA, 1993), calidad de


semilla es un concepto constituido por diferentes atributos, que permiten obtener
abundantes cosechas del cultivo deseado. Tanto el productor de semillas como
el comprador, desean encontrar esos atributos expresados en todo su potencial
en las semillas que producen o que compran. Por lo tanto, es necesario
investigar y experimentar mtodos que ayuden a mejorar la calidad de la semilla,
as como que al ser empleados no daen el ambiente (Vasilevski, 2003).

Tomando en consideracin la importancia de estos aspectos, y con base a la


necesidad de ofrecer una alternativa al mundo para emplearse en la agricultura
como un bioestimulador, se plante el siguiente trabajo de investigacin donde se
ha propuesto el empleo de una fuente de luz lser emitida por un lser
semiconductor para tratar la semilla de maz antes de la siembra para definir si
existen efectos de bioestimulacin, ya que no hay reportes en la literatura sobre
la influencia de la luz lser como tratamiento en la semilla antes de la siembra
empleando lseres semiconductores, en consecuencia no hay literatura
disponible as como tampoco el nivel de parmetros de irradiacin que se deben
emplear para producir algn efecto en las semillas de maz.

27
1.6 Objetivos

Con base a estos fundamentos los objetivos de la investigacin fueron:

Determinar los tiempos e intensidades de irradiacin lser de baja


intensidad que pueden producir efectos benficos en la semilla de maz.

Determinar los tiempos y las intensidades para los cuales se mejore el vigor
de la semilla de maz (Zea mays L.): con colorante.

Determinar si la irradiacin con un lser de baja intensidad mejora el vigor


de la semilla de maz (Zea mays L.): sin colorante.

Estudiar la influencia diferentes tiempos y las intensidades de irradiacin


lser de baja intensidad en el contenido de clorofila a y b en la 1er hoja
ligulada de plntulas provenientes de semilla de maz irradiada .

Estudiar el efecto de diferentes intensidades y tiempos de irradiacin lser,


sobre la calidad sanitaria de la semilla de maz.

1.7 Hiptesis

Las hiptesis planteadas fueron:

. La luz emitida por un lser semiconductor a determinada combinacin de


tiempos e intensidades de irradiacin produce efectos de estimulacin en
la semilla de maz tratada con esta luz antes de la siembra.

. La irradiacin lser de baja intensidad puede incrementar la calidad de la


semilla de maz a determinada combinacin de tiempo e intensidad de
irradiacin.

28
. El vigor de las semillas de maz puede ser mejorado al ser irradiadas las
semillas de maz: sin colorante a determinada combinacin de parmetros
de irradiacin lser de baja intensidad.

La luz emitida por un lser semiconductor puede modificar el contenido de


clorofilas a y b, de hojas de plntulas provenientes de semilla irradiada a
ciertos tiempos e intensidades de irradiacin.

. La irradiacin lser interacta con los patgenos asociados a la semilla de


maz y con la adecuada dosis de irradiacin se pueden reducir la cantidad
de semilla infestada por patgenos

Para cubrir el objetivo y demostrar las hiptesis planteadas en este trabajo, fueron
realizados diversos ensayos experimentales empleando la metodologa que
seala la Asociacin Internacional de Pruebas de Semilla (ISTA, 1993). La
semilla de maz hbrida empleada fue proporcionada por el rea de Mejoramiento
y Control de la Calidad Gentica del Programa de Semillas del Instituto de
Recursos Genticos y Productividad del Colegio de Postgraduados.

29
2. LASERES EN LA AGRICULTURA Y LA ELECCION DEL
LSER

El lser, acrnimo de las iniciales inglesas que significan amplificacin de luz por
emisin estimulada de radiacin, es una fuente de luz con unas caractersticas de
monocromaticidad, coherencia y direccionalidad que la hacen completamente
diferente de otras fuentes luminosas (el Sol, las bombillas incandescentes, tubos
fluorescentes., etc.).

2.1 La emisin estimulada

El efecto fsico que permite la obtencin de un haz con estas caractersticas


de monocromaticidad y direccionalidad es la emisin estimulada. Su existencia fue
propuesta por Albert Einstein en 1917. La figura 2.1 muestra esquemticamente
tal proceso. En l tenemos la interaccin entre un fotn y un tomo que
inicialmente se encuentra en su estado excitado. Como resultado de esta
interaccin el tomo pasa a su estado base emitiendo en el proceso un fotn que
tiene las mismas caractersticas de direccin y de fase que el fotn inicial. Por lo
tanto, decimos que la radiacin electromagntica que resulta es coherente.

Figura 2.1. Emisin estimulada

Cuando un electrn est en un nivel de energa distinto del nivel


fundamental, puede emitirse un fotn (o cuanto de energa electromagntica) y

30
bajar al estado fundamental. Cuando esta desexcitacin est desencadenada por
un fotn incidente, el nuevo fotn es exactamente igual (en frecuencia, direccin y
fase) al fotn incidente. A este proceso, conocido como emisin estimulada (para
diferenciarlo de la emisin espontnea, que es la desexcitacin producida sin la
necesidad del fotn incidente) se le puede considerar como el fundamento fsico
del lser.

Los primeros esfuerzos encaminados a construir dispositivos prcticos que hacan


uso del concepto de emisin estimulada se dieron en 1954, ao en el cual, de
manera simultnea pero independiente, Nikolay G. Basov y Alexander M.
Prokhorov del Instituto Lebedev de Mosc, y Charles H. Townes de la Universidad
de Columbia, en Estados Unidos de Amrica, construyeron un amplificador de
microondas llamado MSER (por el acrnimo de Microwave Amplification by
Stimulated Emission of Radiation), (cuando los fotones de la radiacin amplificada
caen en el rango de las microondas). La contribucin de estos tres cientficos fue
internacionalmente reconocida cuando en 1964 se les otorg el premio Nobel de
fsica.

Inmediatamente despus de la construccin de los primeros MSER, varios


cientficos intentaron poner dicho aparato en operacin a longitudes de onda cada
vez menores. Pronto se dieron cuenta de que las condiciones fsicas de operacin
para producir la emisin estimulada en la regin de luz visible eran muy diferentes
de las requeridas en un MASER. Nuevamente en forma simultnea pero
independiente, en la Unin Sovitica Alexander M. Prokhorov y en Estados Unidos
de Amrica Charles H. Townes y Arthur L. Schawlow este ltimo investigador de
los Laboratorios Bell, justificaron tericamente la idea del LSER (palabra
compuesta, como hemos visto, por el acrnimo de Light Amplification by
Stimulated Emission of Radiation). A partir de ese momento se inici una carrera
por construir el primer lser. Schawlow, como muchos otros investigadores, pens
que el mejor medio activo que se podra utilizar sera un gas, mientras que
Theodore H. Mainman, entonces joven investigador de los Laboratorios Hughes en
Malib, California, prefiri trabajar utilizando como medio activo cristales sintticos

31
de rub. En 1960, Mainman mostr orgullosamente al mundo el primer lser en
operacin; posteriormente, aunque tambin en 1960, el investigador de los
Laboratorios Bell , Ali Javan, puso a funcionar el primer lser de gas en el mundo,
utilizando una mezcla de helio y nen.

Desde entonces la carrera por estudiar nuevas aplicaciones para stos ha


continuado sin cesar y lo ms probable es que dicha siga creciendo.

2.1.1 Elementos bsicos de un lser

Los elementos esenciales son:

. Un medio lser que consiste en un apropiado conunto de tomos, molculas,


iones, materiales semiconductores. Este medio es lo que caracteriza el lser,
pudindose ser medios gaseosos (He- Ne, etc) slidos (dielctricos, cristales
preciosos, etc) o lquidos (colorantes).

. Un elemento de bombeo para excitar a los tomos del medio lser a un nivel de
energa ms alto. Algunos tomos excitados pasan posteriormente a un estado
intermedio de energa que es metaestable; es decir, la probabilidad de transicin
al estado fundamental es muy baja. Pero para que la accin lser ocurra no slo
debe producirse la excitacin de tomos sino la condicin de inversin de
poblacin , en la cual hay una cantidad de tomos en el nivel metaestable de
energa que los que se encuentran en un nivel ms bajo en el medio lser. La
radiacin de frecuencia estimular transiciones del estado metaestable al estado
fundamental, produciendo una amplificacin coherente.

. Apropiados elementos pticos de realimentacin (espejos, etc) que reinyectan


una parte de la seal nuevamente en el amplificador de luz.

El material donde se produce la excitacin y la emisin estimulada se conoce


como MEDIO ACTIVO. El medo activo puede ser un slido, como en el caso del
lser de rub, en el que las transiciones electrnicas se producen entre los iones
de cromo triplemente ionizado (las mismas impurezas caractersticas del color rojo

32
del rub). En otros casos el medio activo es un gas, como en el caso de los lseres
de helio-neon o de argon. La energa necesaria se proporciona a travs de un
mecanismo de BOMBEO.

Figura 2.2. Elementos bsicos de un lser

2.2 Tipos de Lseres empleados en la Agricultura.

Existen muy diversos tipos de lseres, dependiendo del medio activo empleado y
de las caractersticas de la luz emitida. Una primera clasificacin podemos hacerla
segn su longitud de onda. Existen lseres desde el infrarrojo hasta el ultravioleta,
cubriendo todo el intervalo visible. Actualmente se estn desarrollando lseres en
la regin de los rayos X. Como se indico en el captulo anterior, la aplicacin de
la irradiacin lser antes de la siembra en algunas semillas se ha llevado a cabo
manejando diferentes tipos de lseres (Figura 2.3):

33
Fig. (2.3 ) Longitud de onda de los lseres empleados para irradiar semilla antes
de la siembra.

1. Lser de Rub (694 nm)


2. Lser de He-Ne (632.8 nm)
3. Lser de Nitrgeno (337.1 nm)
4. Lser de Argn (514.5 nm)
5. Lser de CO2 (10,060nm)

3.2.1 Lser de Rub (694 nm)

El lser de Rub fu el primer lser hecho por el hombre, que fue construido
por Theodore Maiman en 1960. El Rub es un cristal sinttico de xido de
Aluminio (Al2 O3), y es ms familiar en la vida cotidiana como una piedra preciosa
para joyera. La estructura qumica del Rub est compuesta de Al2O3 (que es
llamado Zafiro), impurificada con alrededor del 0.05% (en peso) de iones Cromo
(Cr+3). El in activo es el Cr+3, el cul reemplaza tomos de Al en el cristal. Este
in es la causa el color rojo del cristal. La impureza del in Cr+3 es responsable de
los niveles de energa que participan.

34
Los tomos (o iones o molculas) del medio activo presentan una estructura de
niveles cunticos similar a la del in cromo en un cristal de rub. El bombeo sube
los electrones a un estado (o banda de estados) de energa elevada. De ah los
electrones caen rpidamente a otro nivel (el estado excitado). El estado excitado
tiene una vida media relativamente grande para las escalas atmicas (estado
metastable), que suele ser del orden del microsegundo o menor. Cuando los
electrones bajan de nuevo al estado fundamental, emiten un nuevo fotn
coherente por emisin estimulada y se completa el ciclo.

3.2.2 Lser de He-Ne


Los lseres de gas se caracterizan por tener por tener como medio activo
un gas atmico. El lser He-Ne fue el primer lser gaseoso en funcionar y tambin
fue el primero en producir un haz de salida continuo en 1961 por Ali Javan,
funcionando en una longitud de onda de 1152,27 nm (cerca de infrarrojo). El lser
helio nen era el lser ms comn hasta la extensin de los lseres de diodo en
los ltimos aos.

El medio activo es una mezcla gaseosa de helio y nen, en proporcin aproximada


de 10:1, contenida en un tubo de cuarzo cerrado. Se crea una descarga brillante
en el gas mediante la aplicacin de un alto voltaje de entre 1 y 10 000 volts entre
un par de electrodos insertados en extremos opuestos del tubo. Una vez
encendido, para mantener la descarga basta una corriente directa estable
tpicamente de entre 3 a 10 mA. La corriente elctrica que fluye produce excitacin
de los tomos de helio debido a colisiones con los electrones energizados. A su
vez, los tomos excitados de He transfieren parte de esta energa, mediante
colisiones atmicas, a los tomos de Ne, con lo que stos son elevados a sus
niveles de excitacin superiores. En este nivel se establece una inversin de
poblacin y se lleva a cabo el efecto lser a una longitud de onda de 632.8 nm. Es
importante observar que los tomos de He proporcionan el medio para excitar los
tomos de Ne; el efecto lser se lleva acabo en los niveles del Ne.

35
El efecto lser contina en tanto sea posible mantener la inversin de poblaciones
y sea emitido un haz continuo con potencias en el intervalo de 0.5 a 50 mW. La
ganancia del lser de He-Ne a esta longitud de onda es baja , los anchos de lnea
en los lseres gaseosos son mucho ms bajos que en cualquier otro tipo de
sistema lser. En particular, para el lser He-Ne los anchos de lnea suelen ser del
orden de unos cuantos picometros.

El lser de helio-nen fue el primer lser de gas que se construy. Actualmente


sigue siendo muy til y se emplea con mucha frecuencia. Los centros activos de
este lser son los tomos de nen, pero la excitacin de stos se realiza a travs
de los tomos de helio. Una mezcla tpica de He-Ne para estos lseres contiene
siete partes de helio por una parte de nen.

Generalmente estos lseres operan a una longitud de onda de 0.6328m, y las


potencias tpicas de salida son de 1 a 50 mW de potencia continua.

2.2.3. El lser de Argn

El lser de Argn fue inventado en 1964 por William Bridges en Hughes. El lser
de in Argn contiene un tubo lleno con Argn gas que se transforma en plasma
en un estado excitado.

El plasma es un estado de la materia en el cul los electrones estn separados de


los tomos y de las molculas, lo que significa que ste contiene electrones libres
e iones). Las transiciones radiativas entre niveles altamente excitados de gases
nobles se conocen desde hace largo tiempo, y la oscilacin lser en este medio
activo data desde la dcada de los sesenta. Entre estos lseres, el de argn
ionizado es el que ms se utiliza, debido a sus intensas lneas de emisin en la
regin azul-verde del espectro electromagntico y a la relativa alta potencia
continua que se puede obtener de l.

El lser de argn tiene varias lneas de emisin, Como hemos visto, en este lser
el bombeo se realiza por una descarga elctrica cuya corriente tpica es entre 15 y
50 amperes, que al pasar por el tubo de descarga puede producir densidades de

36
corriente del orden de 1 000 amperes/ cm. Para evitar que los electrones de
excitacin pierdan energa al colisionar con las paredes del tubo de descarga se
utiliza una bobina que produce un campo magntico para limitar el movimiento de
los electrones en la direccin lon

2.2.4 Lser de Dixido de Carbono (CO2)

La accin lser en una molcula de CO2 fue descubierta por Patel en 1964.
El transmiti un pulso de descarga elctrica a travs del gas de CO2 puro en un
tubo lser, y obtuvo una pequea salida lser.
El CO2 es el gas en el que se produce la accin lser, pero agregando otros gases
en el tubo lser se aumenta la eficiencia total del lser.

El lser estndar de CO2 incluye en el medio activo una mezcla de CO2 con N2 y
He. La proporcin ptima de estos tres gases en la mezcla depende del sistema
lser y del mecanismo de excitacin.

El CO2 es una molcula lineal, y los tres tomos estn situados en una lnea recta,
con el tomo de carbono en el centro.

2.2.5 Lser de Nitrgeno

El lser de Nitrgeno fue desarrollado por primera vez en 1963 y se ha vendido


como un producto comercial desde 1972. El medio activo de los lseres de
Nitrgeno es el gas de Nitrgeno a una presin de 20 [torr] hasta 1 [At]. En
algunos lseres de Nitrgeno el gas fluye en el tubo, mientras que otros son de
tubo sellado. Como muchos lseres, el lser de Nitrgeno est basado en las
transiciones entre los niveles de energa vibracional, y se excita elctricamente.
La emisin de radiacin lser se produce con l = 0.337mm. El bombeo es ptico
y por choque electrnico. El nivel inferior de las transiciones lser tiene un tiempo
de vida mayor que el nivel superior, lo cual ocasiona la acumulacin de partculas
en ese nivel. Esto a su vez provoca que la inversin de poblacin dure un tiempo

37
muy corto y que el bombeo deba realizarse en pulsos de muy corta duracin
(Aboites, 1991).

2.3 Lseres de Semiconductores

Los lseres de semiconductores son los lseres ms eficientes, baratos y


pequeos que es posible obtener en la actualidad. Desde su invencin en 1962 se
han mantenido como lderes en muchas aplicaciones cientfico-tecnolgicas y su
continua produccin masiva nos da un inicio de que esta situacin se prolongar
por mucho tiempo.

Se puede considerar a los tomos como pequeos sistemas solares con


electrones girando en rbitas especficas alrededor de un ncleo con carga
positiva. Los electrones localizados en la ltima rbita son llamados electrones de
valencia y no son retenidos tan firmemente como los que se encuentran en las
rbitas interiores. Todos los materiales existentes pueden clasificarse en las
siguientes categoras: conductores, aislantes o semiconductores. Los primeros
son materiales que conducen con facilidad una corriente elctrica a travs de
ellos. Los segundos difcilmente conducen corrientes elctricas y los ltimos estn
en una situacin intermedia.

Un buen conductor como la plata tiene una conductividad de 6 x 107 mohs/ metro,
mientras que un buen aislante como el cuarzo fundido tiene una conductividad de
2 x 10-17 mohs/ metro. Es decir que hay 24 rdenes de magnitud de diferencia en
su conductividad. Un semiconductor tiene una conductividad tpica de 7 a 14
rdenes de magnitud menor que un buen conductor. Ejemplos de materiales
semiconductores son el germanio (Ge), el silicio (Si) y algunos compuestos como
el arsenuro de galio (GaAs) y el sulfuro de plomo (PbS).

Es posible aumentar en forma controlada la conductividad de un semiconductor.


Para realizar esto, durante la formacin del semiconductor puro se introduce una
pequea cantidad de tomos "contaminantes" con tres o con cinco electrones de

38
valencia en lugar de slo cuatro. La introduccin de tomos contaminantes con
tres electrones de valencia como por ejemplo el bario (Ba), el galio (Ga) o el indio
(In), da lugar a una estructura cristalina imperfecta en la cual han quedado
"huecos positivos" que aumentan la conductividad del material. Este tipo de
materiales se conocen como semiconductores tipo P . De manera similar, la
introduccin de tomos contaminantes con cinco electrones de valencia, como por
ejemplo el fsforo (P), el arsnico (As), el bismuto (B) o el antimonio (Sb), da
origen a una estructura cristalina imperfecta en la cual han quedado electrones en
exceso qu incrementan la conductividad del material. Estos materiales
contaminados con tomos con cinco electrones de valencia son llamados
semiconductores tipo N.

Cuando un trozo de material semiconductor tipo P y uno tipo N se unen se tiene


una "unin P-N que es tambin conocida como diodo. En electrnica se conocen
muchos tipos de diodos.

Diseando una unin P-N de forma adecuada, podemos formar una cavidad lser,
cuya regin activa est formada por la regin de unin de los materiales P y N.
Existen dos formas fundamentales de lseres semiconductores a) por bombeo de
haz electrnico y b) por bombeo por inyeccin de portadores de carga, ms
conocidos como diodos lser.
Los diodos lser pueden tener estructura homounin o heterounin. Los diodos
lser homounin se caracterizan porque las zonas N y P se hacen de un mismo
material con diferentes tipos de impurezas. Los diodos lser heterounin se
distinguen porque las zonas N y P se hacen de diferentes materiales, por ejemplo
de Ga As y AlGaAs. Los diodos lser ms difundidos son los de Arseniuro de
Ga/Aluminio-Galio-Arsnico (GaAs/AlGaAs). En donde la longitud de onda
depende de la concentracin de aluminio. Estos diodos lser pueden trabajar en
rgimen contnuo o pulsado (Mart y Altamirano, 1997).

39
Figura 2.4 Estructura del diodo lser a) Homounin, b) Heterounin

2.4 Eleccin del lser

El planteamiento para visualizar la eleccin del lser a manejar en la

presente investigacin se observa en la Figura 2.4, en donde se presentan las

diferentes alternativas de lser a emplear, en base a los que han sido manejados

en la agricultura en el estrato inferior. En el siguiente estrato inmediato superior se

esta presentando las caractersticas o atributos que son relevantes para el

propsito de esta investigacin y que hemos decidido son de mayor relevancia en

la toma de decisin, a estas caractersticas se les dio una clasificacin en el tercer

estrato formando as una estructura de jerarquizacin analtica para auxiliar a

visualizar las alternativas de eleccin de lser; as como las caractersticas que

son relevantes en esta investigacin.

40
Eleccin de lser
Para aplicarse en la
Eleccin irradiacin de semilla
pre-siembra

Parmetros Parmetros
Tcnicos Econmicos
Y Dimensiones

Costo
Longitud de Eficiencia Monocromaticidad Tamao Factibilidad lser
Onda De uso en la
Agricultura

Lser Lser Lser LASER LASER


HE-NE N CO2 Rub Argn

Figura 2.4 Estructura jerrquica para la eleccin del lser


En los ltimos aos en el mercado se venden mdulos pticos , que contienen
dentro de s lser de diodo de baja potencia. El color de la luz que emite este
diodo lser, abarca todo el diapasn visible de azul hasta rojo.

Para los objetivos de esta aplicacin, en donde se manejan las Hiptesis de que la
irradiacin lser produce efectos de estimulacin en la semilla tratada antes de la
siembra, planteando la afectacin en parmetros cuyos efectos tienen que ver con
los fitocromos. De acuerdo a la Figura 1.1 se observa que la mayor absorcin
corresponde a la porcin espectral que corresponde a la luz roja e infrarroja.
De los lseres que han sido empleados en la Agricultura los que tendramos
entonces como opcin seran:

Lser LASER
HE-NE Rub

Proponiendo usar en esta investigacin el lser semiconductor.

LASER
Diodo

El lser de He- Ne, de Rub y semiconductor emiten en el rango de la luz roja.


Para observar en forma cualitativa el desempeo de los atributos tcnicos y
econmicos de estos lseres formamos la estructura jerrquica haciendo uso del
mtodo de jerarquizacin analtica para la eleccin (Mercado, 1997).

Este mtodo consiste de aplicar el siguiente algoritmo en donde se basa en hacer


las comparaciones de las tres alternativas calificando a travs de una escala
establecida (anexo) cul es mejor y qu tanto es mejor en el desempeo de los
atributos. De esta manera quedara la siguiente estructura con sus respectivas
relevancias relativas Figura 2.5.
Eleccin de lser
Eleccin Para aplicarse en la
irradiacin de semilla
pre-siembra

Parmetros
Tcnicos Parmetros
Y Dimensiones Econmicos

Longitud de Eficiencia Tamao Factibilidad Costo


Monocromaticidad
Onda De uso en la lser
Agricultura

Lser LASER LASER


HE-NE Rub Diodo
632.8 nm 694 nm 660nm

1. Longitud de onda 17.21 % 10.20% 72.58%


2. Eficiencia 17.73 % 8.52% 73.75%
3. Monocromaticidad 63.01 % 21.84% 15.15% Relevancias relativas
4. Tamao 9.09% 9.09 % 81.82
5. Factibilidad de uso 11.11% 11.11% 77.78%
en la Agricultura
6. Costo del lser 11.06% 8.61% 80.33%

Figura 2.5 Estructura jerrquica para la eleccin del lser con las relevancias relativas

Por costo, eficiencia,tamao y factibilidad de uso en la


Agricultura, es conveniente emplear el lser de diodos
De acuerdo a diversos experimentos preliminares descartamos el empleo de la luz
lser infrarroja en el rango de 890 nm, ya que inhibi los procesos de germinacin,
en todos loss experimentos realizados con diferentes tipos de semilla.
3. EFECTOS DE LA IRRADIACIN LSER EN EL VIGOR DE LA
SEMILLA DE MAZ (Zea mays L.): Semilla coloreada

LASER IRRADIATION EFFECTS ON MAIZE SEED VIGOUR

3.1 RESUMEN
La alta calidad de la semilla es absolutamente necesaria en el contexto de

los sistemas de produccin de cosecha modernos, es un requerimiento bsico

porque afecta el establecimiento del cultivo, crecimiento y productividad. El vigor

de la semilla es una componente importante de la calidad que esta relacionado

con un rpido y uniforme desarrollo y emergencia de plntulas. Considerando que

un problema crtico dentro de la industria semillera es la produccin de semillas

con bajo vigor, el desarrollo de una tcnica que lo mejore es muy importante en

Mxico y el mundo. De aqu que en este estudio se propone el empleo de la luz

lser de baja intensidad en la semilla de maz (Zea mays L.) como tratamiento

previo a la siembra. Bajo un diseo factorial fueron aplicados en semillas de un

hbrido de cruza simple 3 intensidades y 6 tiempos de irradiacin, empleando

como fuente emisora un lser semiconductor de AsAlGa (Arseniuro-Aluminio-Ga),

con salida de 30 mW de potencia y longitud de onda de 660nm. La irradiacin

lser en la semilla increment significativamente la velocidad de emergencia de

plntulas, peso seco y emergencia total. Debido a que la irradiacin lser origin

bioestimulaciones tanto positivas como negativas en el vigor de la semilla, es

importante especificar la combinacin de parmetros adecuados. La combinacin

ptima fue a una intensidad de 20 mW/cm2 durante un minuto; qu origin

incremento altamente significativo (p 0.01) en velocidad de emergencia de


plntulas (42.89%), en peso seco (63.24%) y en emergencia (48.07%) con

relacin al tratamiento control (no radiada). De estos resultados se desprende

que esta tecnologa lser puede potencialmente convertirse en una alternativa

econmica para el manejo del vigor en diferentes especies, as como en futuras

investigaciones de las semillas de maz.

Palabras clave:

Zea mays L., radiacin lser, lser, vigor de semilla, emergencia de

plntulas, velocidad de emergencia.

3.2 SUMMARY

High seed quality is absolutely necessary in the context of modern crop


production systems, and it is a specific requirement because affects crop
establishment, growth and yield. Seed vigour is an important seed quality
component related with a rapid and uniform seedling emergence and development.
Considering that a chronic problem in the seed industry is the production of seeds
with low seed vigour; therefore, the development of a technique to enhance it is
very important. For this proposes, the effects of low intensity laser irradiation on
Zea mays L. seed vigour was studied. A factorial of three intensities and six times
of GaAlAs laser radiation, with an output power of 30 mW and wavelength of 660
nm, was applied in pre-sowing to seeds from a single cross hybrid. The laser seed
irradiation significantly increased seedling emergence rate, seedling dry weight and
emergence in soil. Due that laser irradiation originated positive and negative bio-
stimulations in seed vigour, it was very important to estimate the specific
combination of parameters. In this study, the optimum combination was an
intensity of 20 mW/cm2 during one minute; this treatment originated highly
significant (P0.01) increases in seedling emergence rate (42.89%), in dry weight
(63.24%) and emergence (48.07%) with relation to the control (without irradiation).

46
From these results the laser irradiation seed enhancement technology deserves
further investigation in maize.
Keywords:
Zea mays L., laser irradiation, seed vigour, seed enhancement,
seedling emergence.

3.3 INTRODUCCIN

Estudios fotobiolgicos y genticos revelan que los fitocromos son una familia de
fotoreceptores absorbedores de luz, roja e infrarroja (Fankhauser, 2002).
Estas molculas son cromoprotenas que regulan el crecimiento y desarrollo de las
plantas en respuesta a las seales de luz. Las cromoprotenas tienen dos formas
que son reversiblemente intercambiables por la luz. La forma biolgica inactiva Pr
que absorbe la luz roja, y la forma biolgicamente activa Pfr que absorbe la luz
infrarroja (Quail, 2002). Pulsos cortos de luz maximiza la conversin de molculas
fitocromos a la forma activa Pfr (Shimizu-Sato et al., 2002).

La luz lser es usada como un bioestimulador en la agricultura y es un


mtodo aplicado para proteccin del ambiente. Es importante puntualizar que los
mtodos biofsicos de estimulacin no cambian el curso de procesos fisiolgicos
controlados por el sistema gentico, siempre y cuando se apliquen las dosis
ptimas para las semillas, no se provocarn efectos genticos (Vasilevski, 2003).

Diferentes tipos de luz lser han sido empleados dentro del rango de la luz visible
y ultravioleta (Ouf y Abdel-Hady, 1999). La irradiacin con lser de nitrgeno
(337.1nm) en Vigna radiata L. origin incrementos en peso seco de raz y tallo
(Govil et al., 1985). La combinacin del lser de Nitrgeno (337.1 nm) y Argn
(514.5 nm) produjo un incremento en el contenido de protena de semillas de
Vigna radiata L. (Govil at al., 1991). La irradiacin de semillas kenaf (Hibiscus
cannabinus L.) con lser de He-Ne (632.8 nm) increment la produccin de
semillas y redujo el periodo de crecimiento (Son, 1990). La influencia de la
irradiacin lser de He-Ne fue estudiado por Ouf y Abdel-Hady (1999) en la

47
micoflora, crecimiento, nodulacn y mayor resistencia al hongo Fusarium solani en
las semillas de soya (Glycine max L. MERRILL). En semillas de pepino la
irradiacin lser antes de la siembra estimul el crecimiento de las races
embrinicas, el nivel de fotosntesis, la actividad de la peroxidasa y redujo el
contenido de pigmentos en las hojas (Shaban et al., 1988). Efectos relacionados
con la luz lser de baja intensidad puntualizan la importancia de las caractersticas
de la irradiacin como: longitud de onda (, nm), tiempo de irradiacin (t, s) y dosis
de irradiacin (D, J/cm2) para producir efectos favorables (Michtchenko et al.,
2001).

La calidad de la semilla es un requerimiento en la cosecha moderna y esto


tiene una influencia en la produccin econmica (Hampton, 2002). En Mxico, uno
de los cultivos bsicos es el maz (Zea mays L.), donde la calidad fisiolgica juega
un papel fundamental para lograr una adecuada emergencia y establecimiento de
plntulas (Zepeda et al., 2002). Para obtener cosechas potencialmente ms altas
en productividad y/o calidad, se requieren semillas con mejor calidad para producir
emergencia rpida y uniforme (Artola et al., 2003). La componente de calidad
fisiolgica responsable de este comportamiento se llama vigor de la semilla y est
relacionado con la rpida y uniforme emergencia y desarrollo de plntulas
normales bajo un amplio rango de condiciones de campo (Van de Venter, 2000).

El desarrollo de una tcnica que pueda ser aplicada como un tratamiento pre-
siembra para mejorar el vigor de la semilla podra ser de gran utilidad.
La tecnologa de lseres semiconductores ha experimentado un decremento en
los precios (Steele, 2002); debido a los cambios en la industria de procesos
manufactureros. Esto hace que los lseres semiconductores sean una opcin
potencialmente vlida en el rea de semillas; por lo cual el presente trabajo de
investigacin se plante con el objetivo de estudiar los efectos de la radiacin
lser de baja intensidad en el vigor de las semillas de maz.

48
3.4 OBJETIVO

Investigar el efecto de la irradiacin lser en el vigor de las semillas de maz.

3.5 HIPTESIS

Existen determinados valores de intensidad y tiempos de irradiacin que al ser


aplicados a las semillas antes de sembrar, siempre y cuando se haya teido y
remojado durante 25 minutos, incrementan el vigor de la semilla de maz (Zea
mays, L.) y por lo tanto mejoran su calidad .

MATERIALES Y MTODOS

El presente trabajo se realiz en el rea de Mejoramiento y Control de la Calidad


Gentica de la Semilla del Instituto de Recursos Genticos y Productividad del
Colegio de Postgraduados, ubicado en Montecillo, Texcoco, Edo. de Mxico
cuyas coordenadas geogrficas son: 19 29 latitud norte , 98 54 longitud oeste
del meridiano de Greenwich y 2,250m de altura sobre el nivel del mar.
Un hbrido de maz de cruza simple (CL1 x CL4), de semillas de maz Zea mays L.,
proporcionada por el rea de Mejoramiento y Control de la Calidad Gentica, fue
utilizada en este estudio. El tamao de la semilla fue uniformizado usando cribas
de 8mm y el peso promedio de 1000 semillas fue de 273.6 g. La aplicacin de los
tratamientos a la semilla fueron usando un lser semiconductor de AsAlGa con
una potencia de salida de 30mW y 660nm de longitud de onda. Previo a la
siembra, se aplicaron a la semilla tres intensidades y seis tiempos de irradiacin
El arreglo factorial de 3 intensidades y 6 tiempos ms el control (sin irradiacin )
son descritos en el Cuadro 3.1.

49
Cuadro 3.1 Dosis de irradiacin lser aplicados a la semilla de maz.

Tiempo de irradiacin tiempo(s)


Intensidad
(mW/cm2 ) 30 60 120 180 300 600

3.2 96 192 384 576 960 1,920

5.55 166.5 333 666 999 1,665 3,330

20 600 1200 2,400 3,600 6000 12,000

Dosis = mJ/cm

Las semillas fueron teidas antes de la irradiacin lser, al ser remojadas en un


colorante por 25 minutos. El colorante utilizado fue el rojo metil en una
concentracin de 1:104. Las semillas de maz fueron ubicadas en forma aleatoria
para la irradiacin de las semillas. El medidor empleado para determinar la
potencia del lser fue el modelo 45-545 de la compaa Metrologic Instruments,
Inc.

Los 18 tratamientos ms el testigo fueron sembradas el 16 de diciembre del


2002 en un almcigo (5.0m x 2.10m x 20cm) establecido a la intemperie, protegido
con un micro-tnel; empleando un suelo tipo franco arcilloso como substrato. La
siembra se realiz en surcos los cuales tuvieron una separacin de 6 cm,
correspondiendo a cada parcela un surco de 1.06 m; las 25 semillas de cada
parcela fueron colocadas a una profundidad de 5cm. Se sembr la semilla
introduciendo el pedicelo en la arena y dejando expuesta la corona; luego se
cubri con una capa de arena de 5cm; se reg y se coloc sobre el almcigo un
microtnel elaborado con metal y plstico semitransparente. Se reg diariamente a
la misma hora la cama de siembra, cuyas condiciones ambientales fueron:
temperatura promedio de 14.05 C, siendo la temperatura mxima de 28.88 C y
temperatura mnima de -0.4 C. Se evaluaron tres variables: porcentaje de
establecimiento en base al nmero de plntulas emergidas, velocidad de

50
emergencia de plntulas, estimada de acuerdo a Maguire (1962) y peso seco de
las mismas. Las evaluaciones de la emergencia de las plntulas fueron
efectuadas diariamente durante 9 das consecutivos contndose a partir del
dcimo en que inici la emergencia de plntulas. Slo plntulas normales fueron
registradas de acuerdo con las reglas de la ISTA (ISTA, 1993). Al final del
experimento se determin la materia seca de las plntulas separando su parte
area de la raz para introducirlas por separado en bolsas de papel perforado y
despus colocarlas en una estufa a una temperatura de 70 C por 72 horas,
tiempo despus del cual fue evaluado el peso seco.

3.6.1 DISEO EXPERIMENTAL Y ANLISIS ESTADSTICO.

Se utiliz un diseo experimental de bloques completos al azar con 4 repeticiones.


En todos los casos la unidad experimental fue de 25 semillas. Los anlisis de
varianza se realizaron con los procedimientos GLM del SAS (SAS, versin de
1998) y las diferencias entre medias de tratamientos fueron estimadas mediante
la prueba de Diferencias Mnimas Significativas (DMS) al nivel 5% de probabilidad
de error (Steel y Torrie, 1980).

3.7 RESULTADOS Y DISCUSIN

En el Cuadro 2.2 se presentan los resultados del anlisis de varianza para las tres
variables de vigor de semilla estudiadas.

51
Cuadro 3.2. Anlisis de varianza para velocidad de emergencia, plntulas
emergidas (%) y peso seco de plntulas (g).

Variables de Respuesta Media Prueba F C.V.(%) D.M.S(0.05)

Velocidad de emergencia 1.318 3.09 ++ 14.1 0.264

Plntulas emergidas 59.737 2.88 ++ 14.3 12.181

Peso seco de plntulas 0.770 5.37 ++ 16.3 0.178

++ = diferencias significativas al nivel 1% de probabilidad


DMS (0.05) = Diferencias mnimas significativas al nivel 5% de probabilidad

De los resultados presentados en el Cuadro 3.2 se desprende que existieron


diferencias altamente significativas (p 0.01) entre tratamientos para las tres
variables estudiadas.

Los efectos de la irradiacin lser en las tres variables analizadas: velocidad de


emergencia de plntulas, peso seco y emergencia de plntulas se presentan en
las Figuras 3.1, 3.2 y 3.3 respectivamente. En estas grficas se observa un patrn
de comportamiento similar, ya que hubo tanto respuestas positivas como
negativas con respecto al tratamiento de control, dependiendo de los niveles de
irradiacin aplicados.

52
2,0 2
3.2 mW/cm
ED 2
1,9 t = 1 minuto 5.5 mW/cm
E 2
BA A I = 20 mW/cm2 20 mW/cm
1,8 BC
Velocidad de Emergencia

BCD ECD
1,7 BCD BC
ED ECD
1,6 ECD
ECD
ED ED
1,5 ED
ECD
ECD
1,4

1,3

1,2

1,1
ECD
1,0
DMS = 0.2641
0,9
0 100 200 300 400 500 600
Control
Tiempo (s)

Figura 3.1. Efectos de la irradiacin de semillas en la velocidad de emergencia de plntulas


Medias con la misma letra son estadisticamente iguales (DMS, p = 0.05)
1,4 FHEG 2
3.2 mW/cm
FHG t = 1 minuto
1,3 5.5 mW/cm
2
A I = 20 mW/cm2 CBD 2
1,2 CB 20 mW/cm
FCEBD
FCED FEGD
1,1 B CEBD
FCED
1,0 FHEG FEGD
Peso seco (g)

FHEG H
0,9 FEGD FHG
FHG
0,8

0,7

0,6 FHEG

0,5

0,4

0,3 DMS = 0.1788 (g)


0,2
0 100 200 300 400 500 600
Control
Tiempo (s)

Figura 3.2. Efectos de la irradiacin lser en el peso seco de las plntulas


Medias con la misma letra son estadisticamente iguales (DMS, p = 0.05)

54
100 t = 1 minuto 2
I = 20 mW/cm2 3.2 mW/cm
% de Emergencia de Plntulas

2
EGDF 5.5 mW/cm
2
90 G 20 mW/cm
BA A
BDAC EGDFC
EBDFC BAC
80 EBDAC EGDFC EGDFC
EGDFC EGDFC
EGDF EGF
70 EGDFC EGDFC
EGDFC

60

50

GF
40 DMS = 12.181 %

0 100 200 300 400 500 600


Control Tiempo (s)

Figura 3.3. Efectos de la irradiacin lser en la emergencia de plntulas

Medias con la misma letra son estadisticamente iguales (DMS, p = 0.05)


55
En general, las respuestas positivas fueron encontradas cuando los tiempos de exposicin de las semillas fueron cortos
(30 y 60 segundos) y con la intensidad de 20mW/cm2. De esta forma, la
combinacin de niveles con los cuales se obtuvieron los efectos ms favorables
en los parmetros de vigor evaluados (velocidad de emergencia, peso seco y
emergencia) fue: intensidad de 20 mW/cm2, y tiempo de irradiacin de 1 minuto, a
la longitud de onda de 660nm.
Con esta combinacin de niveles de irradiacin se obtuvieron respuestas
altamente significativas (P 0.01) con relacin al testigo, incrementndose en un
42.89% la velocidad de emergencia, en un 48.07% ms las plntulas emergidas y
siendo dichas plntulas un 63.24% ms pesadas que el testigo.
En la Figura 2.4, se ilustra este comportamiento, al comparar la emergencia diaria
de plntulas de la combinacin ms favorable con relacin al testigo., se observa
que las semillas tratadas presentaron una velocidad de emergencia muy superior
al testigo entre el primer y tercer da y que las mayores diferencias en nmero de
plntulas emergidas se originaron entre el segundo y cuarto da de iniciada la
emergencia.

El tratamiento de la semilla de maz (Zea mays L.) con luz lser emitida por un
lser semiconductor dio lugar a bioestimulaciones que incrementaron
significativamente los tres parmetros de vigor estudiados, y por ende la calidad
fisiolgica de las semillas.
Considerando la definicin de la AOSA (1983) para el vigor: son aquellas
propiedades de las semillas, las cuales determinan el potencial para una rpida y
uniforme emergencia de plntulas y desarrollo de plntulas normales bajo un
amplio rango de condiciones de campo; los resultados obtenidos confirman que la
irradiacin lser es un mtodo viable para mejorar el vigor de la semilla, porque
hubo un incremento de tres parmetros de vigor: velocidad de emergencia
(emergencia rpida), peso seco (rpido desarrollo), y emergencia de plntulas
(potencial superior).

El logro de bioestimulaciones significativas, al tratar semilla de maz previo a la


siembra con irradiacin lser, abre el camino a futuras investigaciones en el rea
del acondicionamiento de semillas de este cultivo bsico. Estos resultados
confirman trabajos previos donde el empleo de lseres para irradiar semilla antes
de la siembra producen efectos de bioestimulacin (Vasilevski, 1997), slo que
ahora empleando un lser semiconductor a una longitud de onda de 660 nm; por
lo cual se puede afirmar que para el caso de la cruza simple de maz CL1 x CL4
puede ser un mtodo de utilidad prctica para incrementar el vigor, en la medida
en que se genere mayor informacin, sobre la combinacin de parmetros de
irradiacin adecuados para cada tipo de semilla. Debido a que las respuestas a la
irradiacin lser dieron origen a bioestimulaciones tanto benficas como
negativas, es importante definir para cada tipo de semilla la combinacin de
parmetros de irradiacin adecuados, ya que de las caractersticas que tenga el
objeto biolgico (su constitucin qumica, genotpica, color, etc) va a depender la
respuesta que se obtenga.

58
90

80

70
N de plntulas emergidas

60

50

40

30

20

10
Testigo Mejor com binacin

0
1 2 3 4 5 6 7 8 9

Das desde el inicio de la emergencia

Figura 3.4. Emergencia diaria de plntulas del testigo y del mejor tratamiento

3.8 CONCLUSIONES

Se obtuvieron respuestas altamente significativas en velocidad de emergencia de


plntulas, peso seco de plntulas y porcentaje de plntulas emergidas, resultantes
de la utilizacin del lser semiconductor de AsAlGa de baja intensidad.

Con niveles de irradiacin lser de = 660 nm, intensidad = 20 mW/cm2 y


tiempo de irradiacin = 1 minuto, se incrementaron en un 42.89% la velocidad de
emergencia, en un 48.07% la emergencia y en un 63.24% el peso seco de
plntulas.

La irradiacin con lser de baja intensidad induce una bioestimulacin positiva


que se traduce en una mejora significativa de la calidad fisiolgica de la semilla.

59
Debido a que las respuestas a la irradiacin lser dieron origen a
bioestimulaciones tanto benficas como negativas en vigor de semilla, es muy
importante definir dosis especficas de irradiacin para cada genotipo estudiado.

Las respuestas altamente significativas de la irradiacin lser en el vigor de


semilla de maz, sugiere seguir investigando en esta tcnica, como una
herramienta para coadyuvar en el logro de un buen establecimiento de este
cultivo.

AGRADECIMIENTOS
Expreso mi profundo agradecimiento por la cooperacin y apoyo brindado en el
rea de Mejoramiento y Control de la Calidad Gentica del Programa de Semillas
del Colegio de Postgraduados.

3.9 BIBLIOGRAFA

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61
EFECTOS DE LA LUZ LSER EN EL VIGOR DE LA SEMILLA DE
MAZ (Zea mays. L): Semilla sin colorante

4.1 RESUMEN

El objetivo de esta investigacin fue determinar los niveles de intensidad y


tiempo adecuados para producir efectos en semillas de maz al utilizarlos como
tratamiento con un simple rgimen de irradiacin. La evaluacin se realiz en un
experimento que fue conducido en el invernadero del rea de Mejoramiento y
Control de Calidad Gentica de la Semilla del Programa en Produccin de
Semillas del Colegio de Postgraduados, ubicado en Montecillo, Texcoco, Edo de
Mxico. Bajo un diseo factorial, con 4 intensidades y 4 tiempos de irradiacin
emitidas por un lser de AsAlGa en una longitud de onda de 660nm fueron
aplicados 16 tratamientos a la semilla de un maz hbrido de cruza simple antes de
la siembra. La radiacin lser increment significativamente la velocidad de
emergencia, peso seco y emergencia de plntulas. Los resultados obtenidos
puntualizan que la combinacin ptima fue a una intensidad de 10 mW/cm2
durante un minuto; este tratamiento origin incrementos significativos (p 0.05)
en velocidad de emergencia (33.19%), en peso seco (14.45%) y emergencia total
(25%) con relacin al control (muestras de semillas no irradiadas).

Palabras clave: Zea mays L., lser semiconductor, vigor de semilla,


mejoramiento de semilla, emergencia de plntulas.

62
4.2 SUMMARY

The objective of the research was to determine the effect of 16 doses of

laser light treatment on Zea mays L. seed with single irradiation. The experiment

was conducted in the greenhouse of the IREGEP Seed Program of Post-

graduated College (Mexico). A factorial of four intensities and four times of AsAIGa

laser radiation at a wavelength of 660 nm was applied in pre-sowing to seeds from

a single cross hybrid. The laser seed irradiation significantly increased seedling

emergence rate, seedling dry weight and emergence in soil. The results of our

study point to that, the optimum combination was an intensity of 9.7 mW/cm2

during 1 minute; this treatment originated highly significant (p 0.05) increases in

seedling emergence rate (33.19%), in dry weight (14.45%) and emergence (25%)

with relation to the control (without irradiation). From these results the laser

irradiation of the seeds increases the seedling emergence in the second and third

day.

Keywords:
Zea mays L., laser irradiation, seed vigour, seed enhancement,
seedling emergence.

63
4.3 INTRODUCCIN.

Los cientficos del mundo en este siglo ms que nunca se encuentran


buscando fuentes bioenergticas, los cuales habiliten y mejoren el desarrollo de
las plantas, ya que es una de las formas para detener los procesos destructivos
de la tierra, el ambiente y en consecuencia de la produccin futura de la
alimentacin de los seres vivos en nuestro planeta. Hoy es importante encontrar
fuentes adicionales de luz para incrementar el desarrollo y capacidad de
productividad en las plantas, (Vasilevski, 2003).
De las seales de luz dependen los estados de desarrollo de las plantas:
germinacin, establecimiento de plntulas, arquitectura y floracin (Smith, 2000).
La luz es percibida por diferentes fotorreceptores de las plantas : los criptocromos
para la luz azul y ultravioleta y los fitocromos para la luz roja e infrarroja (Casal et
al., 1998).
Los fitocromos son una familia de fotorreceptores de luz roja designados por phyA
a phyE, que regulan cada uno de ellos los procesos involucrados en el crecimiento
y desarrollo de las plantas, teniendo funciones definidas. Por ejemplo el phyB, se
encarga del establecimiento de plntulas, para algunos sistemas de planta
(Shimizu-Sato et al., 20002).
El lser es un emisor de energa electromagntica con caractersticas particulares:
la luz emitida es coherente, monocromtica y polarizada. Por medio de la luz
lser es llevada a cabo la excitacin resonante de las estructuras bioenergticas,
resultando clulas con energa adicional e incremento en el nivel bioenergtico
del organismo (Vasilevski, 1997).
Se han empleado diferentes tipos de lseres en la agricultura en la etapa previa a
la siembra; el lser de Rub, el lser de Nitrgeno, de Argn, de CO2 y el de He-
Ne. Siendo el lser de He-Ne, el que ms se ha empleado en los ltimos aos.
El uso de lseres semiconductores no ha sido reportado y podra ser una opcin
vlida para emplearse en la agricultura porque en los recientes aos han sufrido
un decremento en los precios (Steele, 2002). El presente trabajo de investigacin
pretende buscar una tcnica que mejore el vigor de la semilla de maz. De

64
resultar efectiva la aplicacin de la irradiacin en semillas, este tipo de lseres
pueden convertirse en una alternativa para mejorar el vigor inicial en diferentes
especies.

4.4 OBJETIVOS

Determinar el efecto que tiene la irradiacin lser en el vigor de las semillas de


maz, empleando un lser semiconductor de AsAlGa, cuya longitud de onda es de
660nm y potencia de 30 mW. (semilla sin tratar con colorante).

4.5 HIPTESIS

El vigor en semillas de maz, sin humedecerlas ni teirlas, se incrementa


aplicando determinada combinacin de tiempos e intensidad de irradiacin, con un
lser semiconductor de baja intensidad, con una = 660 nm y P = 30 mW .

4.6 MATERIALES Y MTODOS

4.6.1 Material Biolgico

Semillas de maz (Zea mays L.) del hbrido de cruza simple CL1 x CL4, producida
en 1999; proporcionada por el rea de Mejoramiento y Control de Calidad
Gentica del Programa en Produccin de Semillas del Colegio de Postgraduados.
El tamao de la semilla fue uniformizado usando cribas redonda y oblonga de
6.5mm y 5.5 mm respectivamente, siendo de 189.5 g el peso promedio de 1000
semillas.

65
4.6.2 Luz lser
Se emple un lser semiconductor de AsAlGa con una potencia de 30 mW y =
660nm, como medidor de potencia se utiliz el modelo 45-545 de la compaa
Metrologic Instruments, Inc.

Cuadro 4.1 Dosis de irradiacin aplicadas a las semillas de maz como


tratamiento pre-siembra

Tiempos de irradiacin (s)

Intensidades
mW/cm2 0 30 60 120 300
0 0*
4.9 0.1471 0.294 0.588 1.47
9.7 0.291 0.582 1.164 2.91
19.8 0.594 1.188 2.376 5.94
27.3 0.819 1.638 3.276 8.19
* Control
Dosis = J/cm2

Para la aplicacin de los tratamientos que se indican en el Cuadro 4.1, las


semillas se colocaron en forma aleatoria en una posicin fija.

4.6.3 Diseo Experimental y Anlisis Estadstico.

Se utiliz un diseo experimental de bloques completos al azar con 3 repeticiones.


En todos los casos la unidad experimental fue de 20 semillas. Los anlisis de
varianza, se realizaron con los procedimientos del SAS (SAS: Sistema avanzado
de Estadstica, versin de 1998) y las diferencias entre medias de tratamientos
fueron estimadas mediante la prueba de Diferencias Mnimas Significativas (DMS)
al nivel 5% de probabilidad de error (Steel y Torrie, 1980).

66
4.6.4 Prueba de Vigor

Las semillas correspondientes a los 17 tratamientos (Cuadro 3.1) fueron

sembradas el 26 de agosto del 2003 en semilleros con 200 cavidades; cada

cavidad tuvo 2.6 cm de dimetro y 5.5 cm de profundidad. Como sustrato se

emple un suelo del tipo franco arcilloso. Cada semilla fue ubicada a 1 cm de

profundidad, colocando el pedicelo dentro del sustrato, dejando expuesta la

corona; luego se cubri con una capa de sustrato y se reg diariamente. Los

datos obtenidos fueron nmero de plntulas, velocidad de emergencia y peso

seco de plntulas. La velocidad de emergencia fue estimada de acuerdo a la

metodologa de Maguire (1962) contabilizando desde el inicio y 6 das

consecutivos la emergencia de plntulas, considerando slo plntulas normales.

Las plntulas se extrajeron a los 11 das y fueron ubicadas en una estufa a 70C

durante 72 horas para determinar su peso seco (g). Esta prueba ha sido validada y

recomendada por la ISTA (Van de Venter, 2000).

67
4.7 RESULTADOS Y DISCUSIN
El ANOVA para las tres variables revelan diferencias significativas (p < 0.05) en

los tratamientos (Cuadro 4.2).

Cuadro 4.2. Anlisis de varianza para velocidad de emergencia, emergencia (%)


y peso seco de plntulas (g).

Variables de Respuesta Media Prueba F C.V.(%) D.M.S(0.05)

Velocidad de emergencia 2.9104 2.65+ 11.085 0.5366

Plntulas emergidas 77.3529 2.07+ 10.4995 13.508

Peso seco de plntulas 1.1721 2.51+ 7.59505 0.1481

+ = Significancias al 5% de probabilidad
LSD (0.05) = Diferencias significativas mnimas al 5% de probabilidad.
C.V. = Coeficiente de variacin

En las Figuras 4.1, 4.2 y 4.3 se aprecian respectivamente los efectos de la


irradiacin lser en la velocidad de emergencia, peso seco de plntulas y
emergencia.

68
BAC
t = 1 minuto
A
BA I = 9.7 mW/cm2 4.9 mW/cm
2

DEC 9.7 mW/cm


2
3,6
2
19.8 mW/cm
2
BDAC 27.3 mW/cm
Velocidad de Emergencia

3,4 DE
BDEC
DE DE DE
DE BDEC
3,2 BDEC E
DE BDEC

3,0 DE

2,8

2,6

2,4
DMS = 0.5366 %

0 30 60 90 120 150 180 210 240 270 300


Tiempo (s)
Figura 4.1. Efectos de la irradiacin de semillas en la velocidad de emergencia de plntulas

Medias con la misma letra son estadisticamente iguales (DMS, p = 0.05)


t = 1 minuto
BAC I = 9.7 mW/cm2
1,4 BAC BDC
BAC 2
BA 4.9 mW/cm
BAC BAC 2
BAC
BDC BAC 9.7 mW/cm D
BAC 2
1,3 DC BAC 19.8 mW/cm DC
2
BAC 27.3 mW/cm

1,2 DC
Peso seco (g)

1,1

1,0

0,9

DMS = 0.1481 ( g )
0,8

0 30 60 90 120 150 180 210 240 270 300


Tiempo (s)

Figura 4.2. Efectos de la irradiacin lser en el peso seco de las plntulas

Medias con la misma letra son estadisticamente iguales (DMS, p = 0.05) 70


BAC t = 1 minuto
A I = 9.7 mW/cm2
100 BA 2
EBDAC 4.9 mW/cm ED
ED
95 ED BDAC 9.7 mW/cm
2 EBDAC
ED E
% de Emergencia de Plntulas

2
BDAC 19.8 mW/cm
90 EBDC EDC 2
EBDC
ED 27.3 mW/cm
85 ED

80

75

70

65

60

55
DMS = 13..508 %
50

45

40
0 30 60 90 120 150 180 210 240 270 300
Tiempo
Figura 4.3. Efectos de la irradiacin (s)
lser en la emergencia de plntulas

Medias con la misma letra son estadisticamente iguales (DMS, p = 0.05)


71
La combinacin de los niveles de irradiacin que producen los efectos ms

favorables en los parmetros de vigor de la semilla (velocidad de emergencia,

peso seco de plntulas y emergencia) fue a una intensidad de 9.7 mW/cm2 y

tiempo de irradiacin = 1 minuto. Este tratamiento mostr incrementos

significativos (P 0.05) respecto a las de control en velocidad de emergencia

(33.19%), emergencia (25%) y peso seco (14.45%).

El desempeo de las semillas irradiadas en la prueba de vigor revelan diferencias


en comparacin con las semillas del control, con una emergencia ms rpida del
mejor tratamiento en el segundo y tercer da (Figura 4.4).

60
No. de plntulas emergidas

50

40
El mejor
tratamiento
30 Control

20

10

0
0 1 2 3 4 5 6 7
Tiempo (das desde el inicio de la emergencia)

Fig. 4.4 Cintica de emergencia de plntulas


La irradiacin con el lser semiconductor de baja intensidad en las semillas de
maz. Increment significativamente la velocidad de emergencia, peso seco de
plntulas y emergencia. Este mejoramiento en las tres variables de vigor
confirman que la luz lser con la longitud de onda que se esta manejando en este
experimento, que corresponde a la luz roja est interactuando con el fitocromo que
tiene la funcin de controlar el establecimiento de plntulas, ya que Quail, (2002)
menciona la existencia dentro de la familia de fotocromos, uno que es el
encargado de sta funcin. El objeto de una prueba de vigor es proporcionar
informacin del desempeo de las plntulas en un amplio rango de condiciones
ambientales (Tektrony, 2003). El estrs ambiental es una fuerte restriccin para el
aumento de la productividad y de la extensin de los cultivos Se estima que
nicamente un 10% de la superficie de tierra arable se encuentra libre de estrs,
cerca del 20% de la tierra presenta algn tipo de deficiencia o toxicidad mineral,
26% es afectada por estrs de sequa y 15% por congelacin (Blum, 1988).
Los resultados obtenidos confirman que la irradiacin lser es un mtodo viable
para el mejoramiento del vigor de la semilla de maz, siendo esta una prueba que
favorecer al desempeo de sembrados en campo bajo las diversas condiciones
ambientales y tipos de suelo, esto es bajo condiciones de estrs.
Otros autores reportan que la irradiacin lser de semillas influy
significativamente la germinacin y modific el curso del desarrollo de las plantas
de haba manifestando una aceleracin de la germinacin y madurez de las plantas
(Podlesney, 2002), empleando un lser de He-Ne.
Resultados previos a la investigacin muestran un patrn de comportamiento
anlogo, al emplear diferente condicin de la semilla: remojada por 25 minutos
para teirla con rojo metil antes de ser irradiada (Hernandez et al., 2004), aunque
en ese trabajo se lograron menores porcentajes de diferencias con respecto al
control en todas las variables de vigor.

74
4.8 CONCLUSIONES
1. La luz lser a determinados parmetros de irradiacin increment el vigor
de las semillas de maz.

2. La combinacin de tiempo e intensidad de irradiacin que origin la mejor


respuesta significativa (p 0.05) con respecto a la muestra de control;
incrementndose en 33.19 % la velocidad de emergencia, en un 25% el
porcentaje de plntulas que emergieron y el 14.45 porciento en peso seco;
fue a un tiempo de 1 minuto y una intensidad de I = 9.7 mW/cm2.

3. Cualitativamente la evidencia experimental se manifest por resulto que el


crecimiento y morfologa de las plntulas que fue modificado por la
irradiacin de la semilla.

4. Se puede emplear para tratar la semilla de maz un lser semiconductor de


AsAlGa y aplicar un tiempo de 1 minuto e intensidad de 9.7 mW/cm2, a la
semilla de maz para mejorar el vigor de la semilla.
5. Con respecto al peso seco de las plntulas, a mayores niveles de
intensidad de irradiacin o mayores tiempos de exposicin a la irradiacin
de la semilla se pueden inhibir los procesos metablicos, porque el
resultado que se genera esta por debajo del recontrol.
6. Es importante la definicin de combinacin adecuada de tiempo e
intensidad de irradiacin para producir efectos favorables.
7. Sin agregar algn fotosensitizador y humedecer la semilla, la irradiacin
lser esta activando los procesos metablicos que se traducen en un mayor
vigor de la semilla de maz.

75
4.9 BIBLIOGRAFA
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AGRADECIMIENTOS

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del Colegio de Postgraduados.

78
5. CONTENIDO DE CLOROFILAS EN HOJAS DE PLNTULAS
PROVENIENTES DE SEMILLA IRRADIADA CON LUZ LSER

5.1 RESUMEN
El objetivo en este estudio fue evaluar el efecto producido en el contenido de
clorofilas en hojas de plntulas de maz, a partir de semilla tratada con luz lser
emitida por un lser semiconductor de AsAlGa, en pre-siembra. Se utilizaron
semillas del hbrido de cruza simple CL1 x CL4, las cuales fueron expuestas a
diferentes intensidades y tiempos de irradiacin. El experimento se condujo en
condiciones de invernadero; bajo un diseo de bloques completos al azar con tres
repeticiones. La unidad experimental consisti de 10 semillas. El espectro de
absorcin ptico de una porcin de las hojas de las plntulas se obtuvo mediante
la tcnica de espectroscopia fotoacstica. El espectro de absorcin de una porcin
de las hojas fue obtenido para evaluar las diferencias cualitativas en los picos de
absorcin de las clorofilas as y clorofilas bs. Los datos fueron sujetos al anlisis
de varianza (ANOVA) usando el procedimiento del SAS (SAS, Versin 1998). Para
la comparacin de los tratamientos se emple la prueba de diferencias mnimas
significativas (DMS) al nivel del 5% de probabilidad. El ANOVA para ambas
clorofilas revelan diferencias significativas en los tratamientos (P 0.05).
decrementando hasta un 22.731% el nivel de la seal fotoacstica a un tiempo
de 30 segundos, e intensidad de 27.3 mW/cm2 el nivel de clorofila a y aumentando
9.96%, para un tiempo de 5 minutos y un nivel de Intensidad de I1 = 4.9 mW/cm2,
la clorofila b.

Palabras clave:

Zea mays, semillas de maz, radiacin lser, clorofila, espectroscopia


fotoacstica.

79
5.2 SUMMARY

The phytochromes are signal-transducing photoreceptors that convert between


inactive and active forms in response to different wavelengths of light. This
conversion is used to synchronize plant development to the exigencies of the light
environment. Light signals provide information of crucial ecological value at many
stages in development. Seed germination, seedlings establishment, the proper
development of photosynthetic machinery, etc; are all potentially controlled by the
perception of environmental light signals by the phytochromes (1). By other hand
since some years ago laser radiation has been expanded in the field of seed
science by using different lasers sources. Laser was successively used to
increase seed germination, seed yield, length, fresh mass and dry mass of
seedlings of different seeds. It has been observed differences in the formation of
chrolorophyll a and chrolorophyll b and also differences of content in these
pigments when soybean seeds were exposed to He-Ne Laser irradiation at
different times(2). In the present study we were interested in the effects of low
intensity laser irradiation, of AsAlGa semiconductor, on hybrid corn seeds CL1 x
CL4 when these seeds were exposed to different laser intensities and radiation
times . The optical absorption spectra of their seedling leaves was obtained, by
using photoacoustic spectroscopy, in order to obtain qualitative differences in the
chrolorophyll a and b absorption peaks. A randomized complete block
experimental design with 3 replications was utilized. The experimental unit was 10
seeds, from which we randomly choose three seedlings. Data were subjected to
variance analysis (anova) using the SAS GLM procedures (SAS, 1998 version)
The least significant difference test (LSD) at the 5% probability level was studied
for comparing treatments (3). The anova for both chrolorophylls revealed highly
significant (p 0.05) differences among treatments

Keywords: Zea mays L., corn seeds, laser irradiation, chlorophyll , photoacoustic
spectroscopy

80
5.3 INTRODUCCIN

La luz producida por los lseres encuentran numerosas aplicaciones en la


agricultura como un bioestimulador de diferentes procesos fisiolgicos y
biolgicos (Vasilevski, 2003).
Los fitocromos son fotoreceptores que convierten formas activas y viceversa en
respuesta a diferentes longitudes de onda de seales de luz. Esta conversin es
usada para sincronizar el desarrollo de las plantas a las exigencias de la luz
ambiental. Las seales de luz proveen informacin de muchos estados de
desarrollo de las plantas: germinacin de semillas, establecimiento de plntulas,
etc, y son todos potencialmente controlados por los fitocromos (Harry Smith,
2000). Se han empleado diversos tipos de lseres: laser de Nitrgeno (Govil et
al., 1985); combinacin de lser de Nitrgeno y Argon (Govil at al., 1991); lser
de H-Ne (Danila C. et al., 2003; Podlesny, 2002; Drozd and Szajsner, 1999;
Vasilevski and Bosev, 1999; Ouf and Abdel-Hady, 1999; Vasilevski and Bosev,
1997; Shaban et al., 1988); combinacin del lser de He-Ne y CO2 (Zhi Qi et
al.2000) y lser semiconductor (Hernndez et al., 2004, Hernndez et al., 2001).
Se han reportado algunas diferencias en el contenido de clorofila a y clorofila b
cuando las semillas fueron irradiadas antes de la siembra con un lser de He-Ne
(Ouf and Abdel-Hady, 1999; Shaban et al., 1988).

5.4 OBJETIVOS
Estudiar el efecto de diferentes intensidades y tiempos de radiacin lser de baja
intensidad en el espectro de absorcin de hojas de plntulas de maz ,
provenientes de semillas tratada con luz lser.

5.5 HIPTESIS

La luz emitida por un lser semiconductor puede interactuar con el gen


responsable del contenido de la clorofila, a ciertos parmetros de irradiacin.

81
5.6 MATERIALES Y MTODOS

5.6.1 Material biolgico.

Se utiliz semilla del hbrido de cruza simple (CL1 x CL4) proporcionada por el
Area de Mejoramiento y Control de la Calidad Gentica del IREGEP, y producido
en 1999. El tamao de la semilla fue uniformizado usando cribas redonda y
oblonga de 6.5mm y 5.5 mm respectivamente, siendo el peso promedio de 1000
semillas de 189.5 g.

5.6.2 Tratamientos de luz lser


Fue empleado un lser semiconductor con una salida de 30 mW y 660 nm de
longitud de onda. Los tratamientos aplicados resultaron de un arreglo de dos
intensidades y cuatro tiempos de irradiacin ms el control (Cuadro 4.1).

Cuadro 5.1 . Dosis de irradiacin aplicadas.


Tiempos de irradiacin (s)
Intensidades
mW/cm2 30 60 120 300
0*
I1 = 27.27 0.81811 1.6362 3.2724 8.181
I2 = 4.9 0.1473 0.2946 0.5892 1.473

* Control
Dosis = J/cm2

Las semillas se tieron en un concentrado de 1 gr por litro de agua; para lo cual se


humedecieron en el colorante (rojo metil) durante 25 minutos antes de ser
expuestas a la irradiacin lser. Para el tratamiento de irradiacin las semillas se
colocaron en forma aleatoria. El medidor empleado para determinar la potencia
del lser fue el modelo 45-545 de la compaa Metrologic Instruments, Inc.

82
5.6.3 Establecimiento de la prueba

Las semillas correspondientes a los 9 tratamientos que se muestran en el Cuadro


5.1 fueron sembradas el 26 de Agosto del 2003 en semilleros con 200 cavidades,
bajo un diseo de bloques completos, donde la unidad experimental fue de 10
semillas, empleando como sustrato un suelo del tipo franco arcilloso. Cada
semilla fue ubicada a 1 cm de profundidad, colocando hacia abajo el pedicelo y
dejando expuesta la corona; para luego cubrir con una capa de sustrato. Se reg
diariamente. 11 das despus de la emergencia de las plntulas fue evaluado el
contenido de clorofila de la primer hoja ligulada de las plntulas. Slo plntulas
normales fueron evaluadas (ISTA, 1993), eligiendo una plntula de cada una de
las tres repeticiones por cada tratamiento. De la primer hoja de la plntula fue
cortado un disco de la hoja con dimetro de 6mm, los cuales se colocaron dentro
de la celda fotoacstica para obtener sus espectros pticos de absorcin. Estos
procedimientos fueron repetidos tres veces para cada tratamiento para completar
las tres repeticiones.

5.6.4 Diseo experimental y anlisis estadstico

Los datos registrados fueron sometidos a una anlisis de varianza usando los
procedimientos del SAS GLM (SAS, versin1998). La prueba de diferencias
mnimas significativas (DMS) al nivel de 5% de probabilidad fue aplicado para la
comparacin de los tratamientos (Steel and Torrie, 1980).

5.6.5 Instrumentacin ptica empleada para la medicin del contenido de


pigmento en las hojas.

La evaluacin del espectro de absorcin ptico se realiz en el rango de 600


700 nm, mediante la tcnica de espectroscopa fotoacstica. La instrumentacin
ptica consisti de una lmpara de Xenn, la cual se interrumpe peridicamente
mediante un modulador mecnico de frecuencia fija. El haz de luz modulado se
hace pasar a travs de un monocromador, y la luz emergente se dirige mediante

83
un fibra ptica hacia la ventana de una celda fotoacstica cerrada
hermticamente, de tal forma que incide sobre la muestra que se est analizando.
La seal generada en la celda fotoacstica , se detecta mediante un amplificador
lock in que est conectado a una terminal de datos que mediante un programa va
registrando los resultados de las mediciones obtenidas La configuracin
experimental usada en este estudio se muestra en la Figura 4.1.

Figura 5.1 Instrumentacin fotoacstica

Montaje experimental para la espectroscopa fotoacstica (EFA). a)


Lmpara de Xenn, b) modulador mecnico, c) monocromador, d) fibra
ptica, e) celda fotoacstica, f) lock-in y g) computadora

Las evaluaciones se realizaron eligiendo en forma aleatoria tres plntulas de cada


tratamiento, de las cuales se eligi la primera hoja ligulada para realizar la
espectroscopia. Este objeto biolgico se fue colocando en la celda fotoacstica y
se obtuvieron los espectros pticos.

84
5.7 RESULTADOS Y DISCUSIN
Las amplitudes de la seales fotoacsticas que corresponden a las clorofilas a (en
680 nm) y b (en 650 nm) fueron introducidas en el programa SAS, considerando
los 8 tratamientos ms el control (semillas sin radiacin) en sus tres repeticiones.
El ANOVA para los dos parmetros revelaron diferencias significativas (p < 0.05)
en los tratamientos (Cuadro 4.2).

Cuadro 5.2. Anlisis de varianza de la amplitud de la seal fotoacstica


correspondientes a los picos de absorcin.

Variables de respuesta Media Prueba F C.V. % DMS (0.05)

Clorofila b 1.067981 * 7.6773 0.1419


(650 nm)

Clorofila a 1.178862 * 8.6070 0.1756


(680 nm)

* = Significancias al nivel del 5% de probabilidad.


DMS(0.05) = Diferencias Mnimas Significativas a un nivel del 5% de
probabilidad.

Del Cuadro 5.2 se desprende que los tratamientos aplicados presentaron una
respuesta diferente por el efecto de irradiacin lser; esto es, que existieron
diferencias significativas (p 0.05) entre tratamientos para las variables
estudiadas.
En la Figura 5.2 se muestran los efectos de la irradiacin lser en los espectros
promedios de absorcin ptico de las hojas de plntulas, obtenidos de las tres
repeticiones.

85
1.35

1.3
I1 , t =30 s
1.25
I1, t =60 s
Amplitud de la seal PA

1.2 I1 , t = 120 s
I1 , t = 300 s
1.15 I4, t = 30 s
1.1 I4, t =60 s
I4, t =120 s
1.05 I4, t =300 s
control
1

0.95

0.9
600 620 640 660 680 700 720 740 760 780 800
Longitud de onda (nm)

Figura 5.2 Espectros de absorcin promedios del nivel de clorofila en la primera hoja ligulada de plntulas de maz (Zea
mays L.) a). A una Intensidad de I1 = 27.3 mW/cm2 b) A una Intensidad de I2= 4.9 mW/cm2 y c ). Control
2
27.3 mW/cm
1,4 A 4.9 mW/cm
2

C
BAC
1,3 BA
BA
BC
Seal FA

1,2
A

1,1

1,0
BAC
A
0,9 DMS = 0.1756

0 30 60 90 120 150 180 210 240 270 300


Tiempo (s)

Figura 5.3 Influencia de los tiempos de irradiacin en el contenido de clorofila a, para I1 = 27.3 mW/cm2
e I2 = 4.9 mW/cm2 .
2
27.3 mW/cm
1,4 4.9 mW/cm
2
DC
A

1,3 D
BA
BDC
Seal FA

1,2 DC
BDC
BAC

1,1

BAC
1,0

0,9 DMS = 0.1419

0 30 60 90 120 150 180 210 240 270 300


Tiempo (s)

Figura 5.4 Influencia de los tiempos de irradiacin en el contenido de clorofila b, para I1 = 27.3 mW/cm2
e I2 = 4.9 mW/cm2

88
En la Fig
ura 5.2 se puede observar que existen diferencias entre las curvas resultantes del
espectro de absorcin ptico de cada tratamiento y el control; as mismo existen
diferencias en los puntos picos del nivel de clorofila a (680nm) y clorofila b (650
nm).

Visualizando el comportamiento especfico de la clorofila a (680 nm) y la clorofila


b (650 nm) se tienen las Figura 5.3 y 5.4 respectivamente.

Se puede observar que la clorofila a, bajo las condiciones en que fue llevado a
cabo el experimento y con los tiempos e intensidades de irradiacin manejados
, se ve afectada, con una reduccin de hasta un 22.731% en el nivel de la seal
FA a un tiempo de 30 segundos, e intensidad de 27.3 mW/cm2; aumentando para
un tiempo de 30 s , slo un 0.59%, a una intensidad de 4.9 mW/cm2. Para el caso
de la clorofila b, se tiene, para igualmente una reduccin en su nivel para un
tiempo de 30 s, pero el decremento es de un 16.185%, con I = 27.3 mW/cm2 en
cambio, el aumento de la clorofila es del, 9.96%, para un tiempo de 5 minutos y un
nivel de Intensidad de I = 4.9 mW/cm2. La interaccin de la luz lser con la semilla
produce una afectacin menor en la clorofila a, para producir el aumento de sta,
a una intensidad menor; en cambio la afectacin para disminuir el nivel del
espectro se presenta al nivel de intensidad mayor y un tiempo de 30 s. Para el
caso de la clorofila b, se presenta mayor aumento que la clorofila a, al nivel mas
bajo de intensidad aplicado y en relacin al decremento, ste es menor que el
producido en la clorofila a
Shaban et al. (1988) reportan modificaciones en algunos procesos fisiolgicos
mediante la irradiacin lser antes de la siembra en semillas de pepino como lo
es en el nivel de clororofila a y b; en ambos los contenidos de pigmentos
disminuyeron y la intensidad de la fotosntesis aument. Ouf et al. (1999) indican
que con un lser de He-Ne la clorofila a fue menos afectada que la clorofila b. La
Protochlorophyllide es una sustancia clave en la biosntesis de la clorofila en las
angiospermas. Las reacciones a travs de las cuales la clorofila es formada son
catalizados por la fotoencima NADP: photochlorophyllide oxidoreductase, la cual
es controlada por un gen definido. Esto sugiere que la irradiacin lser interacta
con el gen responsable para la sntesis de la clorofila, de acuerdo a estos
resultados y los resultados reportados por OUF et al. (1999).
En otros estudios realizados en donde se establecieron los niveles de intensidad
similares a stos, pero en condiciones de la semilla sin colorante, no se
encontraron diferencias significativas.

5.8 CONCLUSIONES
Los resultados experimentales muestran que hay una bioestimulacin por la
interaccin de la luz lser en los fotorreceptores de las semillas de maz. Se
encontraron diferencias significativas en la amplitud de la seal PA, para las
semillas tratadas en los picos correspondientes en las clorofilas a y b.
Para las clorofila a (680 nm) y b (650 nm) a 30 segundos de irradiacin y 27.3
mW /cm2 de intensidad lser, la seal fotoacstica tuvo una reduccin del 22.75%
y del 16.2 % respectivamente, cuando se compararon con la muestra de control.

Para la intensidad de 4.9 mW /cm2 y el tiempo de irradiacin de 300 segundos , el


nivel de la seal fotoacstica se increment en 0.59% y el 10.02% en la clorofila a

y b respectivamente.

AGRADECIMIENTOS

Expreso mi profundo agradecimiento por la cooperacin y apoyo brindado en el


rea de Mejoramiento y Control de la Calidad Gentica del Programa de Semillas
del Colegio de Postgraduados, y el Centro de Investigacin de Estudios
Avanzados CINVESTAV.

5.9 BIBLIOGRAFA
1. Vasilevski, G. (2003) Perspectives of the application of biophysical
methods in sustainable agriculture. Bulgarian Journal Plant Physiology.,
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2 Vasilevski, G. and Bosev, D. (1999). Results of the effect of the laser light
on some vegetables. Acta Hort. (ISHS) 462:473-476

3. Vasilevski, G. and Bosev, D. (1997). laser light as a biostimulator into the


potato production. Acta Hort. (ISHS) 462:325-328

92
4. Hernndez, Aguilar C., Michtchenko, A. and Dominguez, J. (2001)
Biostimulation effects of low-intensity laser light on cucumbers seeds. 6to
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5. Govil, S. R., Agrawal D. C., Kai K. P. and Thakur, S. N. (1985) Growth


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Physiological responses of Vigna radiata L. to nitrogen and argon laser
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7 Zhi Qi, Ming Yue, Xun-Ling Wang. (2000) Laser pretreatment protects
cells of broad bean from UV-B radiation damage. Journal of Photochemistry
and photobiology B: 59, 33-37

8. Adalberto Benavides Mendoza1, Julia Garnica-Serna1, Alexandre


Michtchenko, Claudia Hernndez-Aguilar, Homero Ramrez-Rodrguez,
Jos Hernndez-Dvila, Valentn Robledo-Torres (2003) Respuesta al
estrs y crecimiento de plntulas cuyas semillas fueron irradiadas con lser
de baja intensidad. Agrofaz 3 (1), 269-272

9. Hernndez, Aguilar C., Carballo, Carballo A., Artola, A. , Michtchenko,


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10. A. Rosencwaig (1975) Photoacoustic Spectroscopy. Analytical Chemistry.


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11. Steel, R. D. G. and Torrie, J. M. (1980) Principles and procedures of


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12. Zepeda, B. R., Carballo, C. A., Alcntar, G. G., Hernndez, L. A.,


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13. Steele, R. (2002) Review and Forecast of the laser markets, part II: Diode
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14. Shaban. N., Kartalov, P. and Kolarov, V. (1988) Influence of laser


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Sciences, (Bulgaria) vol. XXV, No. 5 pp. 64-68.

93
15. Ouf, S. A. and Abdel-Hady, N. F. (1999) Influence of He-Ne Laser
Irradiation of Soybean seeds on seed myclofora, growth, nodulation, and
resistance to Fusarium solani. Folia Microbiologica 44, 388-396.

16. Boddi B., Frank.(1997): Room temperature fluorescence spectra of


protochlorophyllide and chrophyllide forms in etiolated bean leaves. Journal
of Photochemistry and Photobiology B: Biology 41, 73-8

17. Harry Smith. (2000) Phytochromes and light signal perception by plants-an
merging synthesis. Nature 407, 585-589.
18. Ouf, S. A. and Abdel-Hady, N. F. (1999) Influence of He-Ne Laser
Irradiation of Soybean seeds on seed myclofora, growth, nodulation, and
resistance to Fusarium solani. Folia Microbiologica 44, 388-396.

19. Steel, R. D. G. and Torrie, J. M. (1980) Principles and procedures of


statistics. 2-edition. Mc Graw Hill, New York.

20. C. Hernndez Aguilar, A. Carballo C. , A. Artola and A. Michtchenko


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Symposium, Budapest, Hungary. Towards the future in seed production,
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21. Hernndez, A. C., Michtchenko, A. and Dominguez, J. (2001)


Biostimulation effects of low-intensity laser light on cucumbers seeds. 6to
Sexto Congreso Nacional de Ingeniera Electromecnica y de Sistemas,
ESIME-IPN, D.F (Mxico).

22. Goce Vasilevski (2003) Perspectives of the application of biophysical


methods in sustainable agriculture. Bulg. J. Plant Physiol., Special Issue ,
179-186

6. Estudio del efecto de diferentes intensidades y tiempos de


irradiacin lser sobre la calidad sanitaria de la semilla de maz
(Zea mays L.)

6.1 RESUMEN

94
En el presente estudio se plante el objetivo de determinar si la irradiacin
de las semillas de maz con un diodo lser de baja intensidad modifica la cantidad
de semilla que contiene micoflora, as como la germinacin, crecimiento y
morfologa de las plntulas bajo condiciones controladas. Se aplicaron cinco
tiempos de irradiacin (30, 60, 180, 300 y 600 segundos) y dos niveles de
intensidad de irradiacin ( I1 = 16.31 e I2 = 4.65 mW/cm2) con un diodo lser de
= 660 nm, potencia 27.4 mW). Posterior a la irradiacin de las semillas, se llevaron
a cabo las pruebas de germinacin y de sanidad de la semilla. La irradiacin lser
disminuy significativamente la cantidad de semilla infestada con el hongo
fusarium s.p. La combinacin de I1 e I2 a un tiempo de irradiacin de 5 minutos
disminuy significativamente (p 0.05) la cantidad de semilla infestada con el
hongo en un 61.11%, con relacin al control (no radiada). De estos resultados se
desprende que la tecnologa lser puede potencialmente convertirse en una
alternativa para el control de la sanidad en semillas de diferentes especies, as
como en futuras investigaciones de las semillas de maz.

Palabras clave: Diodo lser, Fusarium, lser de baja intensidad, hongos

6.2 SUMMARY

In the present study we investigated about the effects of the low intensity laser
irradiation on the Mycoflora content in corn seeds. Also the effects on the
germination, grown and morphology of the seedlings, under controled confitions,

95
were studied. Five irradiation times were applied (30, 60, 180, 300 and 600
seconds and two intensity levels (( I1 = 16.31 e I2 = 4.65 mW/cm2) by using a diode
laser ( = 660nm and power of 27.4 mW). After of the seed irradiation studies of
germination and seed healthy were developed. Laser irradiation significantly
diminish the quality of seeds infested with Fusarium s.p. fungi. The combination of
I1 and I2 , at five minutes of irradiation time, diminish (p 0.05) the quantity of
infested seeds with the fungi up to 61.11% when compared with the control seed
(no irradiated). From these results we conclude that low intensity laser irradiation
could be an alternative method to control the pathogenicity of seed in different
species.

Keywords:
Zea mays L., laser irradiation, fungi, fusarium spt, diode laser.

6.3 INTRODUCCIN

La luz es uno de los factores ambientales ms importantes, juega un papel


fundamental en la fotosntesis. La accin no fotosinttica de la luz tambin es bien
conocida; procesos como la visin, fototropismo, fototaxis, fotomorfognesis, y
fotobiosntesis han sido estudiados por dcadas (Karu, 1996).

96
El empleo de lseres de baja intensidad es una tcnica aplicada para
modificar el comportamiento celular y molecular de diferentes tejidos vivos. Su
aplicacin ms amplia es de carcter mdico (Giavelli et al., 1998; Harazaki y
Isshiki, 1997) y aunque algunos reportes indican que su aplicacin en plantas y
plntulas aumenta el crecimiento y la tolerancia a ciertas enfermedades (Ouf y
Abdel-Hady, 1999); no se han desarrollado suficientes experimentos para analizar
los efectos producidos en semilla infestada.

Entre los factores que limitan la produccin del cultivo del maz, se
considera a la pudricin radical y del tallo como las ms importantes y destructivas
de este cultivo en el mundo, siendo el Fusarium moniliforme y el Fusarium
graminearum algunos de los hongos asociados con ms frecuencia (De Len,
1984; Agrios, 1985). En Mxico, esta enfermedad se encuentra presente en las
zonas maiceras, asociadas a especies de Fusarium y la magnitud de los daos
es mayor al causado por cualquier otra enfermedad de este cultivo (Revelo Morn,
1993). Adems que las enfermedades se pueden transmitir de un cultivo al
siguiente, a travs de la semilla, la infestacin de semillas o granos con hongos
genera una reduccin en la germinacin, reduccin de salud y de longevidad,
prdidas en masa y cambios bioqumicos (Ouf et al., 1999), adems de que
producen micotoxinas que son txicas para el hombre y el ganado cuando se
consume grano muy infectado (CIMMYT, 2000)
Hasta el momento no se dispone de informacin acerca de si la irradiacin
con un diodo lser de 660 nm, modifica la cantidad de semilla de maz con
patgenos. Por ello se plante esta investigacin, con los objetivos e hiptesis
siguientes.

6.4 OBJETIVOS

Determinar si hay una combinacin de tiempo e intensidad de irradiacin


de las semillas de maz que modifique la cantidad de semilla que contiene
patgenos.

97
6.5 HIPTESIS
La irradiacin lser a determinada combinacin de tiempo e intensidad de
irradiacin puede afectar a los patgenos asociados en la semilla de maz ( Zea
mays L.

6.6 MATERIALES Y MTODOS

La investigacin se llev a cabo en el laboratorio de Fitopatologa, del Colegio de


Postgraduados, en Montecillo, Edo. de Mxico,

6.6.1 Material biolgico


Se utilizaron semillas de maz de un hbrido de cruza simple (CL1 x CL4)
proporcionada por el rea de Mejoramiento y Control de la Calidad Gentica, del
Programa en Produccin de Semillas del Colegio de Postgraduados. El tamao de
la semilla fue uniformizado usando cribas de 8mm y el peso promedio de 1000
semillas fue de 273.6g. Los tratamientos a la semilla se dieron usando un diodo
lser con una potencia de salida de 27.4mW y 660nm de longitud de onda, con
dos niveles de intensidad y cinco tiempos de irradiacin que fueron aplicados
como tratamientos a la semilla antes de la siembra. El arreglo factorial de dos
intensidades y cinco tiempos ms el control (sin irradiacin ) son descritos en el
Cuadro 5.1.

Cuadro 6.1 Intensidades y tiempos de irradiacin del diodo lser aplicados a la


semilla de maz
Tiempo de irradiacin (segundos)
Intensidad
(mW/cm2 ) 0 30 60 180 300 600
0 Control*
4.65 139.5 279 558 1,395 2,790
16.31 489.3 978.6 1,9572 4,893 9,786

98
Dosis = mJ/cm

La semilla fue teida con rojo metil en un concentrado de 1gr por 1 litro de agua,
para lo cual se humedecieron en el colorante antes de ser expuestas a la
irradiacin. El medidor empleado para determinar la potencia del lser fue el
modelo 45-545 de la compaa Metrologic Instruments, Inc.

6.6.2 Prueba de sanidad de la semilla


Prueba con papel secante y congelacin (Neergaard, 1977)
Las semillas de los 10 tratamientos ms el testigo fueron sembradas el 5
de julio del 2004. Antes de sembrarse se dividi la cantidad de semilla de cada
tratamiento y la del control a la mitad, para establecer los experimentos con una
mitad de la semilla infestada y la otra mitad desinfectada.
Para llevar a cabo la desinfestacin, las semillas fueron remojadas por un tiempo
de 3 minutos en una solucin al 10% de blanqueador comercial de hipoclorito de
sodio y posteriormente enjuagadas con agua destilada.
Para cada tratamiento y para el control se colocaron las 20 semillas separadas por
espacios uniformes sobre dos capas de papel secante hmedo en una caja
transparente de plstico; una vez colocadas las semillas dentro de las cajas, stas
se sellaron con parafilm.
El conjunto de cajas incubaron a 25 C durante dos das, periodo despus del
cual se trasladaron a un congelador con una temperatura de -15 C durante 24
horas. Posteriormente se volvieron a poner las cajas en la incubadora a 25 C
por 3 das, e inmediatamente despus se realiz la evaluacin de la sanidad de
la semilla, empleando un microscopio para las colonias fungosas.

6.6.3 Prueba de Germinacin


Prueba de germinacin de la semilla en toallas de papel enrolladas.
(ISTA, 1985).
Se colocaron 5 repeticiones de 20 semillas cada una, separadas por espacios
uniformes; en las toallas de papel hmedas stas se pusieron con el extremo de

99
la radcula apuntando hacia la parte inferior de la toalla y el lado del embrin
hacia arriba; una vez colocadas las semillas se taparon con papel hmedo y se
enrollaron, para luego colocarlas en bolsas de plstico abiertas en la parte
superior. Se introdujeron las bolsas de plstico; en una cmara de germinacin a
25 C, ponindolas en posicin vertical; para al sptimo da de haber sido
sembradas se determinaron las cantidades de plntulas normales y anormales, y
semillas no germinadas en cada repeticin. El conteo de las semillas germinadas
se realiz al sptimo da tal y como lo dicta la ISTA.

6.6.4 Diseo experimental y anlisis estadstico.


Se utiliz un diseo experimental de bloques completos al azar con 5 repeticiones.
En todos los casos la unidad experimental fue de 20 semillas. Los anlisis de
varianza se realizaron con los procedimientos del SAS (SAS, versin de 1998) y
las diferencias entre medias de tratamientos fueron estimadas mediante la prueba
de Diferencias Mnimas Significativas (DMS) al nivel 5% de probabilidad de error
(Steel y Torrie, 1980).

6.7 RESULTADOS Y DISCUSIN

En el Cuadro 6.2 se presentan los resultados del anlisis de varianza para las
variables estudiadas: Cantidad de semilla con algn tipo de patgeno y cantidad
de semilla que contiene el hongo Fusarium sp, en dos situaciones: semilla
desinfectada para realizar la prueba y semilla no desinfestada

Cuadro 6.2. Anlisis de varianza del porcentaje de semilla desinfectada y no


desinfectada con patgenos totales y con Fusarium

100
Variables de respuesta Media Prueba F C.V. DMS (0.05)

Semilla Desinfestada

Patgenos totales 46.54545 2.34 + 40.2666 23.957

Fusarium sp 42.59259 2.35 + 43.07188 23.734

Semilla No Desinfestada

Patgenos totales 98.54545 2.67 + 6.703285 8.4438

Fusarium sp 98.54545 2.67 + 6.703285 8.4438

Germinacin 95.63636 1.54 ns 9.2023 11.25


_______________________________________________________________

n.s.= diferencias no significativas al nivel 5% de probabilidad


+ = diferencias significativas al nivel 5% de probabilidad
DMS (0.05) = Diferencias mnimas significativas al nivel 5% de probabilidad

Del Cuadro 6.2 se desprende que la semilla de maz CL1 X CL4 (producida en
1999), present una respuesta diferente en la cantidad de semilla infestada por
efecto de irradiacin, con los tratamientos que se aplicaron al combinar 2
intensidades y 5 tiempos de irradiacin. Para las variables estudiadas: cantidad de
semilla con patgenos asociados, desinfectada y no desinfectada, as como
tambin la cantidad de semilla infestada con el hongo Fusarium sp, igualmente
para condiciones de semilla infestada y no desinfectada,
En la Figura 6.1 se muestran los efectos de la irradiacin lser en las variables
estudiadas, graficando el porcentaje de la cantidad de semilla infestada por
cualquier tipo de hongo a los dos niveles de intensidad aplicados I1 e I2, as como
tambin se presenta el porcentaje de semilla infestada con el hongo Fusarium sp.;
igualmente para los dos niveles de intensidad I1 e I2. La condicin de esta semilla
es la de desinfectada antes de establecer la prueba (D=Semilla desinfestada).
Se observa que las respuestas dependiendo del tiempo de irradiacin fueron en
todos los tiempos para disminuir la cantidad de semilla infestada, tanto de
cualquier tipo de patgeno como en especfico de Fusarium sp. al comparar los

101
resultados con las muestras del control ( t = 0, I = 0). Como se puede observar, la
mejor respuesta cuando para el tiempo de 5 minutos, existiendo slo una pequea
diferencia al aplicar distinto nivel de intensidad; aunque para todos los tiempos
aplicados, bajo las condiciones en que se llevo a cabo este experimento hubo
disminucin de patgenos en la semilla de maz.
Para el caso de la semilla no desinfectada (ND), se observa la grfica de la Figura
5.2, en la cual se distingue que slo al tiempo de irradiacin de 5 minutos, en el
caso de la semilla infestada con el hongo Fusarium sp hubo un decremento en el
porcentaje de la cantidad de semilla infestada.

En ambos casos hay coincidencias en cuanto que a un tiempo de 5 minutos, se


tienen los mejores resultados, en la disminucin de la cantidad de semilla
infestada con hongos.

Del anlisis de las Figuras 6.1 y 6.2 es posible afirmar que con tratamientos de
la semilla antes de la siembra, empleando un diodo lser de 660 nm y P = 27.4
mW, se puede disminuir la cantidad de semilla infestada por hongo.

En esta investigacin, para la semilla D la combinacin de niveles de irradiacin


que producen los efectos ms favorables para disminuir el porcentaje de semilla
infestada por el hongo fusarium sp es: = 660 nm, intensidad = 16.35 mW/cm2
I = 4.65 mW/cm2 y tiempo de irradiacin = 5 minutos.

102
BC Semilla con patgenos, I1
BA Semilla con patgenos, I2
BC
80
BC BC Semilla con Fusarium sp, I1
BC
BA Semilla con Fusarium sp, I2
BC BC
BA
BC
60 C BC
C
Porcentaje (%)

A
C C
C
40

BC
BA

20 BA
BA
Total patgenos, DMS = 23.957
Fusarium, , DMS = 23.734

0
0 30 60 90 120 150 180 210 240 270 300
Tiempo (s)
Figura 6.1 Influencia de los tiempos de irradiacin en el contenido de clorofila b, para I1 = 27.3 mW/cm2
e I2 = 4.9 mW/cm2
100

80 BC
BA
Porcentaje (%)

BC Semilla con patgenos, I1


60 BA BC
Semilla con patgenos, I2
BA
Semilla con Fusarium sp, I1
BC Semilla con Fusarium sp, I2
40 BA

20

0
0 100 200 300 400 500 600
Tiempo (s)

Figura 6.2 Influencia de los tiempos de irradiacin en el contenido de clorofila b, para I1 = 27.3 mW/cm2
e I2 = 4.9 mW/cm2

104
Dichos tratamientos fueron significativamente (P 0.05) diferentes con respecto al testigo, disminuyndose en un 62.5%
la cantidad de semilla con ese tipo de hongo; en tanto que la mejor combinacin de tiempo e intensidad a la longitud de
onda manejada para disminuir la cantidad de semilla infestada por cualquier patgeno es la I = 16.35 mW/cm2 y un t = 5
minutos, ya que el decremento es de un 61.11% , con respecto al testigo.

En la semilla ND (Figura 6.2) el comportamiento para ambas situaciones; esto es patgenos de cualquier tipo y en
especfico el fusarium sp. Exclusivamente para el caso de el nivel de I2 = 4.65 mW/cm2 y para el hongo especficamente
fusarium, se da un decremento del 16.% en la cantidad de semilla infestada al compararla con relacin al testigo.
Estas respuestas estadsticamente significativas (Cuadros 5.3 y 5.4) de la irradiacin lser en el decremento de la
cantidad de patgenos en las semillas de maz, sugieren la necesidad de seguir investigando en esta tcnica, ya que es
prometedora y puede permitir el control de patgenos de la semilla de maz y en consecuencia mejorar su
establecimiento, a la vez que se limita la dispersin de enfermedades. No obstante, cabe reiterar la importancia de
encontrar la combinacin de tiempo e intensidad de irradiacin para lograr los resultados deseados.
Cuadro 6.3 Valores promedio del porcentaje (%) de semillaD y semillaND con
micoflora asociada de cada uno de los tratamientos. (patgenos totales)

Tiempo de irradiacin tiempo(s)


Intensidad
(mW/cm2 ) 0 30 60 180 300 600
Control*,
D, 72
0 ND, 100
D 60 bc 48 bc 52 ba 28 c 48 bc
4.65 ND 100 a
100 a
100 a
84 b
100 a
D 48 bc 40 bc 48 bc 28 c 40 bc
16.31 ND 100 a
100 a
100 a
100 a
100 a

Promedios seguidos de la misma letra no son diferentes segn la prueba de

Cuadro 6.4. Valores promedio del porcentaje (%) de semillaD y semillaND con el
hongo Fusarium de cada uno de los tratamientos.
Tiempo de irradiacin tiempo(s)
Intensidad
(mW/cm2 ) 0 30 60 180 300 600
Control*,
64
0 100
D 56 ba 48 ba 52 ba 24 c 40 bc
4.65 ND 100 a 100 a 100 a 84 b 100 a
D 36 bc 40 bc 48 ba 24 c 36 bc
16.31 ND 100 a 100 a 100 a 100 a 100 a

Promedios seguidos de la misma letra no son diferentes segn la prueba de DMS


(=0.05).

Para el caso particular de la cruza simple de maz CL1 x CL4, la irradiacin lser
puede ser un mtodo de utilidad prctica para mejorar las condiciones de sanidad
de la semilla. Es conveniente ampliar el mbito de su aplicacin considerando que
otros autores en el rea de microorganismos puntualizan los parmetros de
irradiacin que producen una estimulacin en crecimiento de cultivos de la
bacteria E.Coli, (Karu, 1987). Otros microorganismos eucariticos pueden ser
acelerados tambin con la adecuada combinacin de parmetros de irradiacin de
luz monocromtica (Karu, 1989).
Un comportamiento anlogo indica que con un lser de He-Ne con =
632.8 nm y potencia de salida de 7.3 mW, Ouf (1999) elimin la poblacin de
hongos en la semilla de soya a un tiempo de 3 minutos de irradiacin; Por ello
puede suponerse que de alguna manera el estmulo del lser se relaciona no solo
con la activacin del sistema bioqumico que permite el establecimiento de las
plntulas, sino que adems con los microorganismos que contenga la semilla, ya
sea en forma interna o externa
Por otro lado, no se encontraron diferencias estadsticamente significativas
entre los tratamientos en el nmero de semillas germinadas. Este resultado es
diferente a los trabajos reportados en donde la aplicacin de un lser de HeNe
aumenta la germinacin de todas las especies vegetales probadas (Ouf y Abdel-
Hady, 1999; Koper et al., 1999; Gladyszewska et al., 1998a y 1998b; Podleny y
Koper, 1998). Se cree que la percepcin del estmulo del lser HeNe ocurre va
fitocromos en una reaccin dependiente de Ca2+ (Skvarko y Demkiv, 1994). Es
posible entonces que para manifestarse el efecto de la irradiacin sea necesario
someterla a una condicin de estrs, ya que en condiciones controladas, tanto
para el diodo lser como para el lser semiconductor de los otros experimentos no
se encontraron diferencias estadsticamente significativas.

6.8 CONCLUSIONES

107
Se obtuvieron respuestas estadsticamente significativas en la disminucin de
patgenos en la semilla de maz empleando un diodo lser de 660 nm de longitud
de onda y 27.4 mW de potencia.
Para la semilla desinfectada (D) la combinacin de niveles de irradiacin que
producen los efectos ms favorables para disminuir el porcentaje de semilla
infestada por el hongo fusarium sp es: = 660 nm, intensidad = 16.35 mW/cm2
I = 4.65 mW/cm2 y tiempo de irradiacin = 5 minutos. Dichos tratamientos
fueron significativamente (P 0.05) superior al testigo, disminuyndose en un
62.5% la cantidad de semilla con ese tipo de hongo.

La mejor combinacin de tiempo e intensidad a la longitud de onda manejada


para disminuir la cantidad de semilla infestada por cualquier patgeno es la I =
16.35 mW/cm2 y un t = 5 minutos, ya que el decremento es de un 61.11% , con
respecto al testigo.

En la semilla no desinfectada (ND) para patgenos de cualquier tipo y en


especfico el fusarium sp; exclusivamente para el caso del nivel de I2 = 4.65
mW/cm2 y para el hongo especficamente fusarium s.p., hubo una disminucin de
la cantidad de semilla infestada del 16% al compararla con relacin al testigo.

Los diodos lser pueden convertirse en una alternativa para el control de la


sanidad en semillas en diferentes especies.

6.6 BIBLIOGRAFA
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pre-sowing laser biostimulation of white lupine sedes on mecanical properties of
crop yield. Inzynieria Rolnicza 2:21-28.

7. DISCUSIN GENERAL

Si bien es cierto la luz lser puede ayudar al mejor establecimiento de los


cultivos, tambin es cierto que estos se pueden perjudicar; por tal motivo, es
necesario aplicar las dosis adecuadas de irradiacin para encontrar efectos que
sean benficos en semillas de especies diversas.
Para este caso se plante la investigacin proponiendo como elemento fuente de
luz, a un lser semiconductor que emite luz roja, dispositivo que nunca antes
haba sido reportado en la literatura, con stos fines.

7.1 La luz lser y el vigor de la semilla.


Los resultados obtenidos pueden valorarse de manera objetiva, observando las
siguientes grficas en las que se aprecia el comportamiento de los efectos en las
diferentes variables de la prueba de vigor. Para el caso de la semilla teida se
observa que:

1. Semilla irradiada, previamente teida.

110
Io = 0 (Control)
1.75
I1 = 3.2 mW/cm2
1.6 I2 = 5.5 mW/cm2
1.45 I3 = 20 mW/cm2
1.3

1.15

1
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

Tiempo (minutos)

1.2 80

1.05
Peso seco de plntulas. (g)

70

0.9
60

0.75
50

0.6

40
0.45
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

Tiempo (minutos) T ie m p o (m in u to s )

Figura 6.1 Efectos de la irradiacin lser a diferentes tiempos e intensidades de


irradiacin, en semilla teida con rojo metil

2. Semilla irradiada, no teida


Velocidad de Emeregencia

1.4
4
1.3
Peso seco (g)

3.5 1.2
3 1.1
2.5 1
2 0.9

0 200 400 0 100 200 300 400

Tiempo (s) Tiempo (s)

111
% de Plntulas emergidas
100
90
80
70
60 I1 = 4.9 mW/cm2
0 100 200 300 400
I2 = 9.7 mW/cm2
Tiempo (s) I3 = 19.8 mW/cm2
I4 = 27.3 mW/cm2

Figura 7.2 Efectos de la irradiacin lser a diferentes tiempos e intensidades de


irradiacin.

Se puede observar en las figuras 1 y 2, bajo las condiciones experimentales


manejadas que fueron en distinta poca de ao y en forma independiente, que
existe un patrn de comportamiento con respuesta similar, en cada una de las
variables estudiadas: velocidad de emergencia, peso seco y porcentaje de
plntulas emergidas; se aprecia que para un tiempo de 1 minuto se obtienen las
mejores respuestas en las tres variables a una intensidad para el primer caso de
20 mW/cm2, y para el segundo caso en donde se incluy un nivel ms de
intensidad del orden de 9.7 mWcm2, que el mejor resultado es para este nivel de
intensidad; el segundo lugar en cuanto a la mejora de las caractersticas de vigor,
esta para la intensidad de 19.8 mW/cm2. Es de notarse que la respuesta va
aumentando con respecto a la del control, llegando a un valor mximo, para
despus disminuir, y luego nuevamente tiende a aumentar y posteriormente a
disminuir.
En esta prueba de vigor se obtuvieron respuestas altamente significativas para el
caso de semilla teida y solamente significativas para la semilla no teida en
velocidad de emergencia de plntulas, peso seco de plntulas y porcentaje de
plntulas emergidas; resultantes de la utilizacin del lser semiconductor de
AsAlGa de baja intensidad en la cruza simple de maz CL1 x CL4. Para el caso de
la semilla teida con niveles de irradiacin lser de = 660 nm, intensidad = 20
mW/cm2 y tiempo de irradiacin = 1 minuto las respuestas fueron altamente

112
significativas (P 0.01) con relacin al testigo; incrementndose en un 42.89% la
velocidad de emergencia, en 48.07% las plntulas emergidas, siendo dichas
plntulas 63.24% ms pesadas que el testigo; en semilla no teida porcentajes
menores de diferencia con respecto al control fueron encontrados en la prueba de
vigor. La combinacin de los niveles de irradiacin que producen los efectos ms
favorables en los parmetros de vigor de la semilla fue la intensidad de
9.7mW/cm2 y tiempo de irradiacin = 1 minuto. Este tratamiento mostr
incrementos significativos (p 0.05) respecto a las de control en velocidad de
emergencia (33.19%), emergencia (25%) y peso seco (14.45%).

Lo anterior indica que para obtener mejores resultados es importante humedecer


la semilla y teirla; pero para los intereses de los agricultores, eso implica
inversin adicional, as como tambin generar condiciones para el desarrollo de
patgenos de la semilla en caso de que se requiriera almacenar, por lo tanto
aunque se logren porcentajes de diferencias menores, es conveniente emplear la
combinacin de intensidad y tiempos de irradiacin lser, con el tipo de lser
empleado en estos experimentos de t = 1 minuto e I = 9.7 mWcm2
Un comportamiento similar fue observado en semilla de la leguminosa
forrajera Lotus corniculatus L. en la que en el parmetro de vigor fue observado
empleando como mtodo el hidroacondicionamiento a la semilla (Artola, et al.,
2003).

Para esta investigacin se puede afirmar que la irradiacin con lser de baja
intensidad induce una bioestimulacin positiva a determinada combinacin de
intensidad y tiempo de irradiacin que se traduce en una mejora significativa de la
calidad fisiolgica de la semilla.
Debido a que las respuestas a la irradiacin lser dieron origen a
bioestimulaciones tanto benficas como negativas en vigor de semilla, es muy
importante definir dosis especficas de irradiacin para cada genotipo estudiado.
En la literatura, no existen investigaciones donde muestren los resultados de
aplicar diferentes tratamientos de irradiacin empleando como fuente de luz un

113
lser semiconductor, para tratar la semilla de maz, ni sobre su evaluacin
empleando pruebas de vigor.
Los resultados presentados, al igual que los que se describen en el Captulo 2 y 3
presentan diferencias estadsticas significativas; en estos resultados se puede
confirmar la necesidad de elegir la combinacin de tiempo e intensidad adecuados
para lograr los efectos favorables,
En algunos resultados aplicando un tiempo de irradiacin de 1 minuto en
semillas de trigo, en una prueba de germinacin no se encontraron diferencias
estadsticas significativas entre los tratamientos (Benavides, 2003). Esto sugiere
que bajo condiciones controladas de germinacin, esto es sin someterlas al estrs
a las semillas, no existe evidencia experimental de las diferencias con respecto al
control. En cambio en las semillas irradiadas sometidas al estrs salino en ese
mismo reporte, se observ una tendencia clara hacia la disminucin de la
densidad estomtica en las plntulas conforme aument la concentracin salina a
que fue expuesta la semilla (Benavides, 2003).
Trabajos reportados en donde la aplicacin fue de un lser de HeNe han
indicado el aumento de la germinacin de todas las especies de semillas
probadas (Ouf y Abdel-Hady, 1999; Koper et al., 1999; Gladyszewska et al., 1998a
y 1998b; Podleny y Koper, 1998). Se cree que la percepcin del estmulo del
lser HeNe ocurre va fitocromos en una reaccin dependiente de Ca2+ (Skvarko y
Demkiv, 1994). Es posible entonces que el estmulo originado por el lser
semiconductor de AsAlGa sea percibido o transducido en forma tal que interacte
con el subsistema de la semilla encargado de esas funciones. Por ello puede
suponerse que de alguna manera el estmulo del lser se relaciona con la
activacin del sistema bioqumico de la planta que tiene que ver con la tolerancia
al estrs, tal como fue demostrado por Kapelev (1989)(citado por Benavides,
2003) al encontrar mayor actividad de lipasa (una enzima involucrada en las
cascadas de transduccin de seales de estrs) en semillas de Nepeta cataria
tratadas con un lser HeNe.
Es necesario seguir investigando en esta tcnica, ya que se ha probado ser un
mtodo adecuado y el productor de semillas puede aplicarlo como una

114
herramienta y as coadyuvar en el logro de un buen establecimiento del cultivo
de maz, incrementndose de esta forma la productividad de los cultivos y en
consecuencia repercutir en las cifras nacionales que impiden al pas ser
autosuficientes en la produccin de este cultivo primordial para el consumo
humano.

La luz lser y el contenido de clorofila de las hojas de plntulas

Al interactuar la luz lser con la semilla de maz, estimula tambin a los fitocromos
encargados de establecer el contenido del pigmento en las hojas de las plntulas,
ya que los resultados encontrados reflejan este comportamiento a determinadas
combinaciones de intensidad y tiempo de irradiacin.
Como se describi en el Captulo 4 se obtuvieron respuestas estadsticas
significativas en las clorofilas a y b contenidas en las hojas de plntulas de maz
provenientes de semilla (cruza simple de maz CL1 x CL4) que fue irradiada con un
lser semiconductor de AsAlGa de 660 nm y P = 30 mW; as para dos condiciones
diferentes de intensidad existe un patrn de comportamiento de los espectros de
absorcin (Figura 6.3)

1.35 1.35
Amplitud de la seal Fotoacstica

1.3 1.3
1.25 t1=30 s
Amplitud de la seal Fotoacstica

1.25
1.2 t2=60 s
1.2 t1 =30 s
1.15 t3= 120 s
1.15 t2= 60 s
1.1 t4 = 300 seg t3= 120 s
1.1
1.05 control t4= 300 s
1.05
1 control

0.95 1

0.9 0.95

600 650 700 0.9


600 620 640 660 680 700
Longitud de onda (nm)
Longitud de onda (nm)

(a) (b)
Figuras 7.3. Espectro de absorcin ptico de hojas de plntulas, Para las
clorofilas a y b.
Nota: Para a). I = 27.3 mW/cm2 , y para b). I = 4.9 mW/cm2.

115
De acuerdo a los resultados de la investigacin no se identificaron diferencias
significativas en los niveles adecuados para tratar la semilla de maz de un hbrido
CL1 x CL4 que mejoraron el vigor de la semilla y en consecuencia su calidad, ya
que: stas slo se obtuvieron con un valor alto de intensidad de irradiacin bajo y
un nivel bajo.

Es interesante observar la modificacin de los niveles de clorofila a y b; ya que


con un valor alto de intensidad de irradiacin lser, a cualquiera de los tiempos
manejados se obtuvieron valores de clorofila por debajo del valor de control para
cualquier tiempo de irradiacin aplicado; sin embargo, para el nivel de intensidad
de 4.9 mW/cm2 para los tiempos de 2 y 5 minutos se increment el nivel de
clorofila b.

Al contenido de pigmentos en las hojas, algunos autores lo asocian con la


intensidad de la fotosntesis, por ejemplo para Shaban et al., (1988) la intensidad
de la fotosntesis aument despus de la iluminacin con lser, y el contenido de
pigmentos verdes disminuy al emplear varios regmenes de irradiacin. En los
resultados de esta investigacin se tiene que dependiendo de la combinacin de
intensidad y tiempo de irradiacin lser el contenido de clorofila se ve modificado
al irradiar la semilla con un solo rgimen de irradiacin empleando un lser
semiconductor y este puede ser incrementado o disminuido de acuerdo al tiempo
e intensidad de irradiacin.
La carencia de clorofila no permite que la planta utilice la luz solar como fuente de
energa en el proceso de la fotosntesis y la planta pierde la habilidad de ejecutar
funciones esenciales como la absorcin de nutrientes. La acumulacin y
aprovechamiento de la energa en las clulas se asegura en los cloroplastos y las
mitocondras de la clula; esta energa se obtiene de procesos de fosforizacin
oxidante, que producen aumento del almacenamiento de la energa en la clula.
La investigacin realizada confirma la influencia tanto positiva como negativa, y
est acorde con los reportes de otros autores que mencionan la disminucin del
contenido de pigmentos en las hojas a determinados regmenes de irradiacin

116
emplendo un lser de He-Ne (Shaban et al., 1988). Por otro lado, Ouf et al.,
(1999) reportan que el contenido de clorofila a y b vari dependiendo de la dosis
de irradiacin con las cuales fueron tratadas las semilla de soya antes de la
siembra; indican que para semilla irradiada por un tiempo de 1 o 3 minutos, la
formacin de clorofila a fue menos afectada que la clorofila b, con un lser de He-
Ne de P = 7.3mW. Tambin Vasilevski y Bosev (1997) reportan un incremento del
41% en clorofila en plantas de cebolla. En los resultados de esta investigacin se
concluye que en funcin de la combinacin del nivel de intensidad y del tiempo de
irradiacin se afecta mayor o menor grado tanto a la clorofila a como a la clorofila
b. Las reacciones a travs de las cuales la clorofila es formada son catalizadas por
la fotoenzima NADP: Photochlorophyllide oxidoreductase, la cual es controlada por
un gen definido (Boddi y Frank, 1997). Los resultados de esta investigacin
confirman que la irradiacin lser emitida por un lser semiconductor de 660 nm
y P = 30 mW, interacta con el gen responsable de sintetizar la clorofila, variando
de acuerdo a la combinacin de intensidad y tiempo de irradiacin.

Es un hecho conocido desde hace aos, que el maz (Zea mays L.) es un cultivo
muy exigente de fertilizantes nitrogenados. Cantidades adecuadas de nitrgeno
producen hojas de color verde oscuro, debido a que stas tienen una alta
concentracin de clorofila. La deficiencia de N resulta en clorosis (amarillamiento)
de las hojas debido a presencia de cantidades reducidas de clorofila. Este
amarillamiento se inicia en las hojas ms viejas y luego se traslada a las hojas
ms jvenes, a medida que la deficiencia se torna ms severa (Novoa, 2002)
El pigmento verde de la clorofila absorbe la energa de la luz necesaria para
iniciar la fotosntesis. La clorofila ayuda a convertir el carbono, el hidrgeno y el
oxigeno en azcares simples. Estos azcares y los productos de su
transformacin son usados para el crecimiento y desarrollo de la planta. Cuando el
N es insuficiente, las semillas y las partes vegetativas de la planta tienen bajo
contenido de protenas, en cambio cuando se aplica la cantidad de fertilizacin
adecuada de N se puede mejorar la calidad y nivel protenico del producto final
(Zepeda, 2004).

117
Vasilevski y Bosev (1997) reportan un incremento del grado de azcar en
pepinos y tomates, del 1.5 % y del 33% de vitaminas, con la aplicacin de la luz
lser. En los valores que resultaron de un anlisis bromatolgico en donde se
aplic semilla de lechuga a un minuto de irradiacin con el lser semiconductor
empleado en esta investigacin se encontr un nivel ms bajo de protena, grasas,
nitrgeno y fibra cruda en las plntulas (2003 - no publicados los resultados), lo
cual se puede deber a que ese valor de tiempo e intensidad de irradiacin no son
los adecuados para la semilla de lechuga, ya que de acuerdo a las caractersticas
de la semilla, color, tamao, estructura genotpica, etc. sern la combinacin de
tiempo e intensidad adecuados.

Por otra parte la necesidad creciente de reducir costos, de mejorar la eficiencia en


el uso de los fertilizantes nitrogenados, de macronutrientes y micronutrientes, y
evitar la contaminacin ambiental con nitratos, hace necesario el uso de nuevas
metodologas a incorporar en la agricultura, que mejoren las condiciones de las
plantas y no se dae el ambiente.

7.3 La luz lser y la micoflora asociada en la semilla de maz.


Considerando las diferentes enfermedades que puede atacar a la semilla
de maz que pueden transportarse por la misma; se plante el investigar si la luz
lser interacta con la micoflora asociada a la semilla. De acuerdo a las figuras
presentadas en el Captulo 5, claramente se observa que el tiempo de irradiacin
afecta la cantidad total de la semilla. Los resultados obtenidos obedecen al empleo
de un diodo lser de 650 nm y P = 27. 4 nm, del cual se produjeron dos niveles
diferentes de irradiacin, variando adems el tiempo de irradiacin aplicado a la
semilla. Se encontr que se puede lograr disminuir el 61.11% de la cantidad total
de la semilla infestada por hongo en el interior de la semilla y el 16% del total que
contiene hongo en forma externa. Considerando unicamente al hongo Fusarium
sp, que es el que mayormente predomina en la semilla de maz, se puede lograr
disminuir el 62.5% de la cantidad total de la semilla infestada por hongo interno de
la semilla y el 16% del total que contiene este hongo en forma externa.

118
Ouf et al., (1999) indican que lograron la eliminacin total empleando un lser de
He-Ne cuya potencia fue de 7.3 mW y a un tiempo mayor a 5 minutos;
probablemente las diferencias provengan de la respuesta del lser, pus se sabe
que el lser de He-Ne posee mejores caractersticas de irradiacin que un lser
semiconductor, o tambin puede deberse a la forma en colocarse la semilla de
maz para la aplicacin de los tratamientos, que en este caso fue en semilla en
movimiento, mientras que en este estudio la posicin fue aleatoria pero fija. Otro
factor de variacin puede ser el tipo de semilla empleado, que es totalmente
distinta a la del presente estudio; adems del tipo de hongo, que en el caso
reportado fue Fusarium solani. En lo que s se coincide es que existe un tiempo
adecuado en donde se pueden eliminar los patgenos contenidos en las semillas.
Estudios en hongos Endomyces magnusii Torulopsis sphaerica y otros ms, han
reportado cambios en la actividad respiratoria y la sensitividad a varios agentes
qumicos (Karu, 1996). Lo que ha sido indudablemente repetible a nivel de
microorganismos es la necesidad de emplear la dosis, la intensidad y el tiempo de
irradiacin adecuados para estimular el crecimiento de los microorganismos; de
los resultados de esta investigacin puede decirse que cuando la semilla est
contaminada con patgenos, el efecto del tratamiento depender de las
caractersticas del lser, de las condiciones de la semilla y del tiempo e intensidad
de irradiacin de la luz lser y as, bajo las condiciones de los experimentos
realizados, se pudieran eliminar parcialmente los patgenos contenidos en la
semilla, no totalmente pero si en cierto porcentaje.
Las necesidades actuales de los productores de semilla son entre otras cosas
tener mtodos viables para conservar en las mejores condiciones a la semilla,
sobre todo cuando se tiene almacenada, ya que es un ente vulnerable a cualquier
contaminacin por enfermedades; por tal motivo antes de sembrar se podra estar
pensando en tcnicas de tratamiento con luz lser para mejorar de esta forma la
calidad de la semilla, eliminando en gran medida patgenos asociados.

119
En esta investigacin se demostr que un lser semiconductor puede ser
un elemento bioestimulador de procesos metablicos en la semilla, ya que gracias
al mecanismo de accin de la radiacin lser con el objeto biolgico estudiado, se
encontraron diferencias estadsticas significativas en los parmetros evaluados.
En la agricultura sustentable, una de las metas es utilizar ms bioestimuladores,
(Vasilevski, 2003). El emplear como bioestimulador un lser para fotoactivar
semillas, requiere investigacin de la combinacin de los parmetros de
irradiacin, hablando de longitud de onda, intensidad y tiempo de irradiacin. Con
los datos disponibles en la literatura, se encontraron que se han manejado los
lseres de Nitrgeno (337.1 nm), de argn (514.5 nm), de CO2 (10,060 nm), de
Rub (694 nm) y mas ampliamente el lser de He-Ne.
El lser de He-Ne emite en la regin del espectro visible a una longitud de onda
de 632.8 nm y es el que ms ha sido empleado en diversas investigaciones, en los
ltimos aos; para las cuales en todas ellas han variado las dosis de irradiacin
aplicadas. De acuerdo a los resultados en esta investigacin se puede decir que
el lser semiconductor o diodos lser pueden ser empleados para tratar la semilla
de maz antes de la siembra ya que produce efectos al irradiar la semilla a
determinada combinacin de tiempo e intensidad de irradiacin.
La base del mecanismo de la estimulacin de acuerdo a Bielozierskich y
Zolotariewa citado en Koper et al., (1996); indican que: es el sinergismo entre
las propiedades de la luz lser : coherencia, polaridad y monocromaticidad y la
familia de fotorreceptores: los fitocromos, trayendo como resultado de la
irradiacin de semillas la fotoactivacin de stos. Los cuales intensifican el
desarrollo de las plantas en las fases de crecimiento. De esta forma de acuerdo a
la Figura 6.4 (Quail, 2002) que representa el espectro de absorcin de los
fitocromos, se observa que para fotoactivar los procesos fisiolgicos que llevan a
cabo los fitocromos conviene estar ubicados en un rango de longitud de onda de
610 nm a 680 nm; as es que en los ltimos aos la mayora de las investigaciones
reportadas corresponden al empleo del lser de He-Ne, el cual se ubica en la
longitud de onda de 632.8 nm.

120
1.2

0.8

0.6
Pr
Pfr
0.4

0.2

0
350 375 400 425 450 475 500 525 550 575 600 625 650 675 700 725 750 775 800

-0.2 Longitud de onda (nm)

Figura 7.4 Espectro de Absorcin de los fitocromos (Quail, 2002)

Los diodos lser en los ltimos aos han reportado precios ms econmicos,
(mucho ms bajos que los lser de He-Ne.) Con este trabajo, se proporcionan las
caractersticas en funcin del tiempo e intensidades necesarias para que se
puedan radiar las semillas de maz y mejorar las condiciones de calidad, hablando
en trminos de mejoramiento de vigor y mejoramiento de la calidad sanitaria.

En este contexto es una opcin viable el manejar lseres semiconductores


en la industria semillera nacional e internacional; lo que va a depender del grado
de consciencia que se tenga para limitar el uso de mtodos que puedan afectar a
la salud y de que se llegue a concretar la tecnologa del lser como una opcin
segura para mejorar la calidad fisiolgica de la semilla y para eliminar posibles
patgenos perjudiciales a la agricultura.

121
8. CONCLUSIONES GENERALES
Y PERSPECTIVAS

8.1 Conclusiones finales

De acuerdo a las condiciones experimentales en las cuales se desarroll la


investigacin y por los resultados obtenidos se concluye:

El crecimiento de las plntulas provenientes de semilla de maz CL1 XCL4


fue modificado por la luz emitida por un lser semiconductor de AsAlGa.

El vigor de la semilla medido por el peso seco, porcentaje de emergencia


de plntulas y velocidad de emergencia, fue modificado por la luz emitida por un
lser semiconductor de AsAlGa.

El vigor de la semilla en sus tres variables peso seco, porcentaje de


emergencia de plntulas y velocidad de emergencia, de las plntulas de maz
provenientes de semilla de maz CL1 XCL4 ( sin fotosensitizar, ni humedecer) fue
modificado por la luz emitida por un lser semiconductor de AsAlGa.

La existencia de un colorante, en la semilla de maz, incrementa el efecto


de la luz lser en el vigor de las plntulas.

Se postula que la luz lser emitida por un lser semiconductor interacta


con el gen responsable del contenido de la clorofila en las hojas de las plntulas
de las semillas de maz, produciendo la variacin del nivel de clorofila a y b

Existe una combinacin de tiempos e intensidades de irradiacin para los


cuales se pueden encontrar los mejores resultados, tanto para incrementar el vigor
de la semilla de maz que haya sidoo no fotosensitizada.

122
Existen decremento o aumento del nivel de clorofila a y b dependiendo de
la combinacin del tiempos e intensidades de irradiacin de la luz lser de baja
intensidad.

El contenido de patgenos totales, y en particular el hongo Fusarium sp


asociados a la semilla de maz se ve modificado por la irradiacin de un diodo
lser, disminuyendo su contenido externa e internamente.

La interaccin de la luz lser de baja intensidad emitida por un lser


semiconductor en el rango de la luz roja, produce mecanismos de fotoactivacin
simultneos que traen consigo a determinado tiempo e intensidad de irradiacin
un mejor establecimiento de los cultivos y modificacin del nivel de clorofila
contenido en las hojas.

El tratamiento con luz lser con las caractersticas del lser semiconductor
manejado en esta investigacin, resulto ser un mtodo viable para ser empleado
en el rea agrcola.

8.2 Parmetros de irradiacin y su factibilidad de uso en la Agricultura.

Los mejores resultados para irradiar la semilla con lseres


semiconductores, con las caractersticas del empleado en esta investigacin;
revelan la posibilidad de utilizarlos en la agricultura, instrumentndolos como un
equipo independiente o como parte de un proceso industrial, tal como el que se
lleva a cabo en la planta ubicada en el Colegio de Postgraduados en Montecillo
Texcoco, Edo. de Mxico. Esta planta lleva a cabo el acondicionamiento de la
semilla a travs de diversas etapas.
Previo al inicio del proceso, se hace un muestreo en la semilla para medir el
contenido de humedad; en caso de que se registren valores superiores al 13% se
pasa a una etapa de secado; paso siguiente se hacen pasar a las mazorcas por
una banda, desde la cual se van observando y seleccionando visualmente,

123
retirndose las mazorcas daadas, para dejar exclusivamente las que a la vista
no presentan gran dao visual, as se pasa desgranado. Una vez desgranadas las
mazorcas se pasa por elevadores para subirlas a tolbas, en donde se lleva a cabo
una clasificacin de acuerdo al tamao de la semilla (grandes, medianas, chicas),
para bajar en forma independiente los distintos tamaos hacia el tratamiento de la
semilla con un colorante (llamado Rodhamina) y un fungicida, por ejemplo el
Intercaptan para los hongos o Carbocaptan.

Dentro de ese proceso, en la banda que antecede al tratamiento con productos


qumicos, se pudiera incorporar el tratamiento con luz lser adecuando la
velocidad de la banda al tiempo que se encontr en la presente investigacin
como el adecuado para tratar la semilla de maz, que es de 1 minuto; ya
nicamente; slo habr que instrumentar un control de salida de la semilla para
que solo pase una capa uniforme.

8.3 Orientacin para futuras investigaciones

Las futuras investigaciones podran llevarse a cabo considerando germoplasma


ms amplio en su diversidad y empleando lseres semiconductores o diodos
lseres. Debido a que como se ha reiterado en el desarrollo de este trabajo de
investigacin; la determinacin de la intensidad y el tiempo de irradiacin
adecuados para ayudar favorablemente al desempeo de algunos procesos
metablicos y bioqumicos son indispensables y van a variar de acuerdo a las
caractersticas de las semillas, tamao, color y peso, as como por la condicin
genotpica de la misma. Por lo tanto, es necesario correr aun mas experimentos,
por un lado para encontrar los parmetros adecuados para mejorar el
establecimiento de de los diversos cultivos en Mxico, as como tambin en las
diversas semillas que presentan alguna problemtica de bacterias y hongos,
buscando eliminar totalmente los distintos tipos de problemas que afectan a las
semillas.

124
As con la consciencia de que debemos contribuir e investigar siempre, no
olvidndonos de que se debe conservar la vida y el habitt humano este mtodo
junto con otros mtodos que se estn estudiando entusiastamente y
comprometidamente en el mundo y que han mostrado no daar ni los alimentos
que consumimos , ni el ambiente se presenta esta aportacin que se espera abra
camino a otro enfoque y forma de darle un uso adecuado a tantos avances
tecnolgicos que a partir de los aos 50s del siglo pasado han tenido un ascenso
impresionante.

125
IX BIBLIOGRAFA CITADA EN CAPTULO 1, 2, DISCUSIN GENERAL Y
ANEXOS.

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133
134
135
ANEXOS

136
ANEXO 1

A) Tablas de resultados del Experimento


reportado en el captulo 3

Efectos de la Radiacin Lser (Intensidad y tiempos) en dos Genotipos de Maz


para valles altos CL1 y CL1XCL4, con diferente vigor inicial.

Siembra: 16/XII/2002

Diseo experimental: Bloques completamente al azar.

Tratamientos con luz lser (lser: As Al Ga = 660 nm , P = 30 mW) a semillas


de maz con alto y bajo vigor

Repeticiones

No. Descripcin I II III IV


Trat.

1 CL1 I1 30 seg 10 66 94 149


2 CL1 I1 1 min 33 65 104 128
3 CL1 I1 2 min 3 76 109 130
4 CL1 I1 3 min 28 68 101 150
5 CL1 I1 5 min 19 75 95 143
6 CL1 I1 10 min 26 45 83 140
7 CL1 I3 30 seg 24 61 86 117
8 CL1 I3 1 min 1 71 78 139
9 CL1 I3 2 min 13 64 96 119
10 CL1 I3 3 min 5 74 98 137
11 CL1 I3 5 min 20 67 93 122
12 CL1 I3 10 min 16 70 113 146
13 CL1 I3 30 seg 4 40 112 134
14 CL1 I3 1 min 27 46 82 147
15 CL1 I3 2 min 22 59 89 133
16 CL1 I3 3 min 12 73 106 141
17 CL1 I3 5 min 9 54 111 144
18 CL1 I3 10 min 6 69 110 124
19 CL1 TESTIGO 15 41 90 152
20 CS1 (1x4) I1 30 seg 2 43 91 118
21 CS1 (1x4) I1 1 min 14 44 114 127
22 CS1 (1x4) I1 2 min 18 63 103 151
23 CS1 (1x4) I1 3 min 11 60 100 148

137
24 CS1 (1x4) I1 5 min 34 49 102 126
25 CS1 (1x4) I1 10 min 8 57 81 120
26 CS1 (1x4) I3 30 21 51 97 123
seg
27 CS1 (1x4) I3 1 min 38 53 108 145
28 CS1 (1x4) I3 2 min 30 58 88 129
29 CS1 (1x4) I3 3 min 37 39 47 115
30 CS1 (1x4) I3 5 min 7 72 80 132
31 CS1 (1x4) I3 10 min 35 56 107 135
32 CS1 (1x4) I4 30 seg 17 48 92 138
33 CS1 (1x4) I4 1 min 36 50 105 116
34 CS1 (1x4) I4 2 min 31 62 79 121
35 CS1 (1x4) I4 3 min 32 47 84 136
36 CS1 (1x4) I4 5 min 28 55 85 142
37 CS1 (1x4) I4 10 min 29 42 87 125
38 CS (1x4) testigo 25 52 99 131

Cama de semillas

152
152 115 114 77

REPETICION IV REPETICION III

REPETICION I REPETICION II

1 1 38 39 76

138
A.1 RESULTADOS

% DE PLANTULAS EMERGIDAS EL DIA 12


GEN REP TRATAM V.E. %G VE12 G12 PS12 EVALUACIONES 9 DIAS CONSECUTIVOS
9DIAS
DIA 10 DIA 11 DIA 12 DIA 13 DIA 14 DIA 15 DIA 16 DIA 17 DIA 18
GEN REP TRATAM VE G VE12 G12 PS12
2 1 20 1.754856255 84 1.48 68 1.05 1 7 17 19 19 20 20 20 21
2 2 20 1.81951382 88 1.3 60 0.94 0 7 15 18 22 22 22 22 22
2 3 20 1.527389277 72 1.22 56 0.71 0 7 14 18 18 18 18 18 18
2 4 20 1.932850483 88 1.71 76 1.15 2 14 19 21 22 22 22 22 22
2 1 21 1.923193473 88 1.69 76 1.11 2 12 19 22 22 22 22 22 22
2 2 21 1.639277389 80 1.61 76 0.98 0 4 19 20 20 20 20 20 20
2 3 21 1.888888889 84 1.77 76 1.3 6 17 19 19 19 20 20 20 21
2 4 21 2.031118881 88 1.88 80 1.28 9 17 20 22 22 22 22 22 22
2 1 22 1.622688423 76 1.27 56 0.6 3 10 14 17 17 18 18 18 19
2 2 22 1.547435897 76 1.25 60 0.84 0 0 15 18 18 19 19 19 19
2 3 22 1.620979021 76 1.24 56 0.63 1 8 14 19 19 19 19 19 19
2 4 22 1.554924242 68 1.49 64 0.9 5 15 16 16 16 16 17 17 17
2 1 23 1.634232434 76 1.26 56 0.82 2 10 14 17 19 19 19 19 19
2 2 23 1.443473193 72 1.26 60 0.73 0 1 15 18 18 18 18 18 18
2 3 23 1.531118881 72 1.31 60 0.71 0 8 15 17 17 18 18 18 18
2 4 23 1.59020979 72 1.44 64 0.75 3 10 16 18 18 18 18 18 18
2 1 24 1.561837182 76 1.05 48 0.58 1 5 12 17 18 18 18 19 19
2 2 24 1.222710623 64 1.17 56 0.51 0 0 14 11 12 16 16 16 16
2 3 24 1.771270396 84 1.49 68 0.59 0 10 17 19 19 19 21 21 21
2 4 24 1.527121898 72 1.16 52 0.63 1 9 13 17 17 17 17 18 18
2 1 25 1.785560273 84 1.34 60 0.76 2 10 15 19 20 20 21 21 21
2 2 25 1.567599068 76 1.11 52 0.57 0 3 13 19 19 19 19 19 19
2 3 25 1.524038462 76 1 48 0.47 0 0 12 18 18 18 19 19 19
2 4 25 1.756876457 76 1.6 68 0.82 8 15 17 19 19 19 19 19 19
2 1 26 1.929004329 88 1.86 84 0.85 1 13 21 21 22 22 22 22 22
2 2 26 1.631750602 80 1.05 48 0.54 0 6 12 17 19 19 19 20 20
2 3 26 1.565268065 72 1.26 56 0.73 0 12 14 18 18 18 18 18 18
2 4 26 1.837179487 84 1.68 76 0.99 1 12 19 21 21 21 21 21 21
2 1 27 1.563485534 76 1.2 56 0.66 0 4 14 18 18 18 18 19 19
2 2 27 1.460019148 72 0.95 44 0.58 0 4 11 15 17 17 18 18 18
2 3 27 1.475874126 68 1.17 52 0.55 1 10 13 17 17 17 17 17 17
2 4 27 2.192186 96 1.18 48 0.88 11 19 12 22 22 22 23 24 24
2 1 28 1.751556777 88 1.02 48 0.57 1 1 12 19 20 20 22 22 22
2 2 28 1.526751027 76 1.02 48 0.62 0 2 12 17 18 18 18 18 19
2 3 28 1.690205628 80 1.48 68 0.84 0 9 17 17 19 19 20 20 20
2 4 28 1.897186147 84 1.23 52 0.83 5 15 13 20 21 21 21 21 21
2 1 29 1.625235875 80 1.11 52 0.69 0 4 13 18 19 19 19 19 20
2 2 29 1.871195471 92 1.35 64 0.81 0 2 16 21 22 23 23 23 23
2 3 29 1.226440226 60 0.92 44 0.73 0 1 11 14 15 15 15 15 15

139
2 4 29 1.689160839 80 1.3 60 0.81 1 6 15 20 20 20 20 20 20
2 1 30 1.690024681 84 1.43 64 0.84 3 9 16 17 17 18 18 21 21
2 2 30 1.570512821 80 1.25 60 0.76 0 0 15 20 20 20 20 20 20
2 3 30 1.767191142 88 1.26 60 0.69 0 1 15 20 20 20 20 22 22
2 4 30 2.054574592 92 1.92 84 0.97 4 17 21 22 22 22 22 23 23
2 1 31 1.606942078 80 1.02 48 0.55 0 2 12 18 19 19 19 20 20
2 2 31 1.406043956 72 1.17 56 0.55 0 0 14 14 15 18 18 18 18
2 3 31 1.726498501 84 1.15 52 0.62 1 7 13 18 19 19 21 21 21
2 4 31 2.178088578 96 1.43 60 0.94 7 19 15 23 23 24 24 24 24
2 1 32 1.657692308 76 1.35 60 0.78 1 12 15 19 19 19 19 19 19
2 2 32 1.668976856 84 1.51 72 0.78 0 1 18 17 20 20 21 21 21
2 3 32 1.965617716 92 1.73 80 1.14 0 9 20 23 23 23 23 23 23
2 4 32 1.842424242 80 1.84 80 1.03 6 16 20 20 20 20 20 20 20
2 1 33 1.061421911 52 0.84 40 0.66 0 1 10 12 12 13 13 13 13
2 2 33 1.768825619 88 1.11 52 0.73 0 4 13 19 20 21 21 21 22
2 3 33 1.587262737 76 1.21 56 0.47 1 5 14 17 19 19 19 19 19
2 4 33 1.85236014 84 1.56 68 0.95 4 14 17 20 20 20 21 21 21
2 1 34 1.673150461 84 1.04 48 0.6 0 5 12 16 18 19 20 20 21
2 2 34 1.457692308 72 1.08 52 0.64 0 0 13 17 17 18 18 18 18
2 3 34 1.892948718 96 1.25 60 0.55 0 0 15 20 20 22 24 24 24
2 4 34 1.907886558 88 1.7 76 1.07 1 14 19 21 21 21 21 21 22
2 1 35 1.878554779 92 1.49 68 0.92 1 9 17 22 23 23 23 23 23
2 2 35 1.451964702 72 1.35 64 0.76 0 2 16 17 18 18 18 18 18
2 3 35 1.223484848 60 1.1 52 0.6 0 2 13 13 13 13 15 15 15
2 4 35 1.897785548 84 1.68 72 1.11 7 15 18 20 20 21 21 21 21
2 1 36 1.723380786 84 1.24 56 0.66 1 9 14 16 17 18 21 21 21
2 2 36 1.626440226 80 1.26 60 0.79 0 1 15 18 19 20 20 20 20
2 3 36 1.401126651 68 1.04 48 0.87 0 5 12 16 16 16 16 16 17
2 4 36 1.784848485 76 1.78 76 1.33 8 17 19 19 19 19 19 19 19
2 1 37 1.428824362 72 0.88 40 0.36 1 5 10 13 14 14 17 18 18
2 2 37 1.6126998 80 1.02 48 0.48 0 3 12 17 19 19 20 20 20
2 3 37 1.733488733 84 1.48 68 0.72 1 7 17 18 18 19 19 19 21
2 4 37 1.495134033 68 1.28 56 0.63 4 10 14 16 16 16 17 17 17
2 1 38 1.751122489 84 1.34 60 0.67 2 9 15 17 19 19 20 20 21
2 2 38 1.482112332 76 1 48 0.6 0 0 12 16 17 18 18 18 19
2 3 38 1.744366744 84 1.23 56 0.68 0 8 14 20 20 20 20 20 21
2 4 38 1.500660451 68 1.3 44 0.91 3 12 11 16 16 16 16 16 17

140
B) Experimento (Captulo 4)

Diseo Experimental

Ubicacin Emergencia de Plntulas

1 - 4to 2 - 5to 3 -6to 4 -7to


1 16 0 5 15 20
1 27 2 8 16 19
1 35 0 5 15 20
2 10 0 7 16 20
2 18 2 8 15 20
2 39 0 8 16 18
3 4 0 10 14 19
3 20 2 12 16 20
3 38 0 9 13 20
4 7 0 11 16 19
4 25 2 12 16 20
4 44 0 9 14 20
5 2 0 9 15 20
5 34 0 7 16 20
5 47 0 7 18 20
6 6 1 13 19 20
6 30 0 11 18 19
6 43 0 14 17 20
7 5 4 14 15 19
7 32 0 10 14 20
7 36 0 12 16 20
8 11 0 5 12 20
8 26 3 8 15 20
8 45 0 5 13 20
9 1 0 4 12 20
9 31 0 8 15 20
9 51 0 11 16 20
10 8 1 13 18 20
10 21 1 15 19 20
10 42 0 11 18 20
Ubicacin Emergencia de Plntulas

141
1 - 4to 2 - 5to 3 -6to 4 -7to
11 14 0 8 10 20
11 22 0 9 15 19
11 49 0 11 17 20
12 17 0 7 12 20
12 23 0 11 18 20
12 48 0 9 17 20
13 13 0 8 13 18
13 19 0 8 14 20
13 41 0 12 15 20
14 3 0 14 18 20
14 29 0 14 19 20
14 50 0 12 16 20
15 9 0 7 17 19
15 28 0 12 17 20
15 40 0 10 16 18
16 15 0 8 13 18
16 24 0 10 14 20
16 46 0 12 16 20
17 12 0 5 11 19
17 33 0 8 17 20
17 37 0 5 16 20

B.1 RESULTADOS

Diseo Rep Trat V. E. PESO % PE


SECO

16 1 1 2.66666667 1.11 75
27 2 1 3.03333333 1.12 80
35 3 1 2.66666667 1.11 75
10 1 2 2.9 1.17 80
18 2 2 2.86666667 1.16 75
39 3 2 2.93333333 1.17 80
4 1 3 2.66666667 1.18 70
20 2 3 3.16666667 1.26 80
38 3 3 2.46666667 1.16 65
7 1 4 3.03333333 1.19 80
25 2 4 3.16666667 1.12 80
44 3 4 2.63333333 1.02 70
2 1 5 2.8 1.08 75
34 2 5 2.9 1.12 80
47 3 5 3.23333333 1.2 90
6 1 6 3.65 1.25 95
30 2 6 3.36666667 1.3 90
43 3 6 3.3 1.29 85
5 1 7 3.16666667 1.25 75

142
32 2 7 2.66666667 1.2 70
36 3 7 3.06666667 1.21 80
11 1 8 2.16666667 0.8 60
26 2 8 2.91666667 1.09 75
45 3 8 2.33333333 1.07 65
1 1 9 2.13333333 0.96 60
31 2 9 2.76666667 1.25 75
51 3 9 3.03333333 1.29 80
8 1 10 3.48333333 1.31 90
21 2 10 3.71666667 1.3 95
42 3 10 3.36666667 1.27 90
14 1 11 1.93333333 1.15 50
22 2 11 2.8 1.21 75
49 3 11 3.2 1.23 85
17 1 12 2.23333333 1.12 60
23 2 12 3.36666667 1.19 90
48 3 12 3.13333333 1.18 85
13 1 13 2.43333333 1.24 65
19 2 13 2.6 1.23 70
41 3 13 2.9 1.23 75
3 1 14 3.46666667 1.26 90
29 2 14 3.63333333 1.27 95
50 3 14 3.06666667 1.23 80
9 1 15 3.06666667 1.01 85
28 2 15 3.23333333 1.23 85
40 3 15 3 1.2 80
15 1 16 2.43333333 0.88 65
24 2 16 2.66666667 1.14 70
46 3 16 3.06666667 1.38 80
12 1 17 2 1.01 55
33 2 17 3.1 1.23 85
37 3 17 2.83333333 1.15 80

143
C). Perfiles de absorcin
(Captulo 5)

2 Intensidades, 4 tiempos, un control (3 repeticiones de medicin de cada uno)

Grupo 1 de datos

1 14R1B 1C 2A 15 2B 2C 3A 16 3B 3C

600 1 1 1 1 1 1 1 1 1
601 0.99580138 1.011804636 0.979798124 0.994870478 1.002273587 1.000428633 1.010116038 1.02544312 1.015335939
602 0.995965989 1.021753659 0.970178319 0.992434112 1.01431361 0.996207746 1.003100542 1.03792414 1.021175797
603 1.01717518 1.033864944 1.000485416 0.986402696 1.016257209 0.99603433 1.009259942 1.046066419 1.051304922
604 1.015219004 1.037987655 0.992450352 0.97798815 1.022666243 0.996502227 0.993491107 1.05426282 1.055415543
605 1.013214611 1.035974787 0.990454435 0.976957862 1.03402207 0.993855175 1.0023727 1.054611603 1.057716986
606 1.014120942 1.035948577 0.992293306 0.977502756 1.035254227 1.005631121 1.020584774 1.064013711 1.055217796
607 1.012139248 1.035151817 0.989126679 0.977546598 1.03237213 1.014465534 0.994032981 1.066912218 1.068218633
608 1.031751545 1.038821109 1.024681981 0.97395468 1.019599473 1.00530392 0.981714179 1.070893155 1.074096358
609 1.009269097 1.027438441 0.991099753 0.965079793 1.027764407 1.00512396 0.975987636 1.067333163 1.0663211
610 1.0013628 1.025166101 0.977559499 0.962784347 1.018536851 1.025809576 0.968433473 1.073130177 1.074327764
611 1.001867392 1.02859951 0.975135274 0.966457686 1.023050724 1.024117949 0.963239184 1.074847032 1.069051696
612 0.998646525 1.026109633 0.971183416 0.960686191 1.026762333 1.027982187 0.957967943 1.092947668 1.083781771
613 0.992505346 1.018304525 0.966706166 0.962198742 1.033504382 1.022465587 0.951154447 1.076687163 1.086184191
614 0.990566422 1.019743412 0.961389432 0.963589162 1.026726004 1.024212837 0.951141621 1.078274727 1.0802686
615 0.987608958 1.013662871 0.961555045 0.958193456 1.01446498 1.028538428 0.951853431 1.08571042 1.061347964
616 0.983249426 1.008190384 0.958308468 0.96030727 1.01736827 1.031205112 0.942599902 1.082938196 1.054182777
617 0.979849855 1.007844422 0.951855289 0.954219486 1.022835778 1.035514343 0.936927867 1.074338891 1.057094292
618 0.973226505 0.993104352 0.953348657 0.946362361 1.019163526 1.038164667 0.930383704 1.06985282 1.058137725
619 0.971149721 0.996380506 0.945918936 0.94020255 1.011758473 1.046495192 0.923797859 1.066250733 1.05417857
620 0.967384179 0.988863699 0.945904659 0.941445786 1.012415422 1.048625267 0.917545474 1.069395794 1.050025875
621 0.961029215 0.983763383 0.938295047 0.950987699 1.009160952 1.045919319 0.917183156 1.071094607 1.046689415
622 0.958718311 0.986177253 0.931259369 0.942523048 1.006399952 1.059373804 0.90434172 1.065459958 1.054464673
623 0.955190134 0.979928973 0.930451294 0.950101463 1.005497782 1.056811824 0.905239498 1.068126945 1.042301106
624 0.952769347 0.978479603 0.927059092 0.945873835 0.997172396 1.054125508 0.894604032 1.063770164 1.04226324
625 0.95234428 0.974225845 0.930462716 0.940766234 0.998628582 1.049937341 0.885860312 1.06566141 1.054977974
626 0.94682802 0.970994247 0.922661793 0.935934212 0.990618046 1.041413768 0.888781298 1.064028745 1.038985682
627 0.947280997 0.974815553 0.919746441 0.941163944 0.986824698 1.044136076 0.884132089 1.064560939 1.036503322
628 0.94335582 0.964835078 0.921876562 0.94034034 0.988492802 1.048965556 0.88239104 1.053886976 1.040491928
629 0.937689062 0.961074054 0.91430407 0.947546097 0.985940693 1.056720208 0.872794431 1.052407655 1.045671226
630 0.93301902 0.952936089 0.913101952 0.93867121 0.981111969 1.049508708 0.870819319 1.058968384 1.05179298
631 0.925775108 0.945909395 0.905640821 0.938220263 0.981108941 1.048360235 0.866660681 1.049650465 1.049091835
632 0.930289814 0.951966347 0.90861328 0.938185815 0.974009657 1.04254261 0.862284012 1.051938602 1.040756994
633 0.932691253 0.953305639 0.912076867 0.93871192 0.976165176 1.055012221 0.860350582 1.053039073 1.048570118
634 0.920372273 0.949366392 0.891378153 0.943572126 0.977448799 1.057914489 0.860042773 1.052239277 1.039435873
635 0.924315094 0.94382314 0.904807047 0.950276831 0.967864009 1.054446164 0.858058041 1.04802682 1.04222958
636 0.930927829 0.949033535 0.912822124 0.94073805 0.968193997 1.065427013 0.857006358 1.056184133 1.055482861

144
637 0.921528435 0.939828854 0.903228017 0.945523099 0.96546327 1.05155044 0.850218513 1.059356255 1.04608355
638 0.923647574 0.939595592 0.907699556 0.950878094 0.962877859 1.05701796 0.854547087 1.053646436 1.059782814
639 0.923840421 0.943519113 0.904161729 0.95303575 0.968793424 1.066899415 0.847897115 1.055880452 1.055844697
640 0.928178858 0.947324693 0.909033023 0.957172562 0.971042792 1.077893352 0.850551973 1.055300149 1.067280385
641 0.930905702 0.945634198 0.916177205 0.961569296 0.972583746 1.075030348 0.857840009 1.060405611 1.072261935
642 0.930019482 0.947636583 0.912402381 0.972795997 0.972396046 1.080295004 0.861588234 1.065096141 1.072539623
643 0.920509386 0.941928213 0.899090559 0.978000676 0.963431876 1.082110967 0.862957346 1.057392847 1.069413532
644 0.921752273 0.940793353 0.902711192 0.976441151 0.969513949 1.083380505 0.851597244 1.062185607 1.080697754
645 0.921779874 0.935420462 0.908139286 0.983258593 0.972850158 1.092326167 0.856557469 1.064942797 1.078131245
646 0.926625579 0.941673983 0.911577174 0.976854519 0.975820051 1.093749489 0.848365242 1.066319888 1.087610497
647 0.930848075 0.938049247 0.923646903 0.98001428 0.977445771 1.103264479 0.853979563 1.070291805 1.092823454
648 0.928282786 0.940436908 0.916128664 0.989546798 0.982056522 1.109831394 0.860722519 1.064404588 1.108218296
649 0.933084823 0.946326121 0.919843525 0.99451661 0.983909299 1.127300629 0.873487003 1.072429604 1.103619618
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722 0.360508845 0.349243209 0.371774481 0.373221265 0.396615352 0.512425439 0.35719393 0.363473999 0.417137544
723 0.349502399 0.340122397 0.358882401 0.360647986 0.383682243 0.504778763 0.355911389 0.345298194 0.388157037
724 0.345686577 0.336793825 0.35457933 0.347676997 0.36919607 0.492508744 0.350874212 0.333442579 0.385897668
725 0.319714456 0.316769975 0.322658938 0.346183235 0.371063984 0.479839541 0.321875972 0.322756589 0.371197045

146
Grupo 2 de datos

4A 13R4B 4C 5A 13R5B 5C 6A 18R6B 6C

600 1 1 1 1 1 1 1 1 1
601 1.01549 1.00121 1.01148 0.99804 1.02565 1.02971 1.02016 1.00704 1.02799
602 1.02201 1.0053 1.03018 0.99402 1.03902 1.05225 1.02593 1.01073 1.05197
603 1.02661 1.00498 1.0311 1.00064 1.06099 1.08418 1.03333 1.01168 1.05289
604 1.03049 0.99711 1.03191 1.00659 1.07058 1.11545 1.03997 1.00867 1.0667
605 1.02925 1.0027 1.03848 0.99978 1.07938 1.14593 1.04844 0.99741 1.06355
606 1.03518 1.02197 1.05242 1.00106 1.09672 1.16819 1.06464 0.99578 1.07801
607 1.04262 1.0183 1.05065 1.00384 1.10768 1.19365 1.06417 0.99297 1.07219
608 1.05054 1.01293 1.05197 0.98959 1.11398 1.2085 1.05812 0.99562 1.09107
609 1.04681 1.01043 1.04751 0.99885 1.11289 1.22666 1.06199 0.99003 1.08649
610 1.03844 1.00655 1.05999 0.99694 1.12001 1.23893 1.06788 0.98535 1.08815
611 1.04439 0.99018 1.06093 1.00158 1.1208 1.25911 1.06681 0.97877 1.09109
612 1.04294 0.98793 1.05905 1.00193 1.12333 1.266 1.06982 0.97457 1.07822
613 1.04214 0.98992 1.06392 0.99066 1.12745 1.27254 1.0714 0.9742 1.08362
614 1.04851 0.98172 1.06278 0.99602 1.13158 1.28821 1.06089 0.96674 1.08508
615 1.04572 0.97507 1.06961 0.99058 1.11826 1.29816 1.05596 0.97165 1.07303
616 1.04794 0.97111 1.06105 0.9871 1.12784 1.30136 1.05381 0.96322 1.07616
617 1.05068 0.96316 1.06165 0.98889 1.12578 1.30719 1.04392 0.96051 1.06809
618 1.04557 0.95236 1.05852 0.9958 1.12603 1.30973 1.04904 0.95048 1.0705
619 1.04802 0.95731 1.06784 0.99039 1.11099 1.30717 1.03044 0.9481 1.06569
620 1.03725 0.94989 1.06267 0.99836 1.10838 1.31981 1.03252 0.9477 1.06073
621 1.04629 0.94193 1.06224 0.99563 1.10528 1.31499 1.02747 0.94112 1.06339
622 1.04266 0.93769 1.06483 0.99605 1.11497 1.31119 1.0277 0.93969 1.06389
623 1.04536 0.93528 1.06437 1.00131 1.10907 1.32089 1.02813 0.94623 1.05033
624 1.04328 0.92652 1.05822 0.99201 1.10536 1.31109 1.01989 0.93886 1.03961
625 1.0408 0.91622 1.06041 0.98753 1.10287 1.31664 1.01018 0.93474 1.04634
626 1.03631 0.91474 1.06608 0.99396 1.09736 1.31049 1.00733 0.92824 1.04595
627 1.03308 0.90205 1.05768 0.99441 1.09633 1.31479 1.00641 0.92763 1.05284
628 1.03627 0.89818 1.07061 0.99262 1.08843 1.30923 0.9931 0.92493 1.04671
629 1.02977 0.89478 1.06359 1.0028 1.08769 1.29948 0.98767 0.92293 1.04305
630 1.03105 0.88169 1.06447 0.99502 1.08121 1.30205 0.99401 0.9244 1.04053
631 1.03195 0.87264 1.05558 0.99482 1.07311 1.29818 0.97994 0.92621 1.0489
632 1.0366 0.87898 1.05011 1.00158 1.07414 1.30112 0.9774 0.92242 1.03694
633 1.02537 0.8702 1.07371 1.00705 1.07701 1.30026 0.96966 0.91661 1.04364
634 1.02157 0.86811 1.06394 1.01331 1.08835 1.29839 0.98116 0.91391 1.05169
635 1.03528 0.86989 1.06674 1.01944 1.0825 1.29563 0.97617 0.9077 1.04707
636 1.02929 0.86617 1.07831 1.02241 1.08266 1.30106 0.9792 0.91594 1.04407
637 1.03071 0.85653 1.06644 1.01811 1.06928 1.29379 0.97629 0.91554 1.03857
638 1.02977 0.86463 1.05888 1.00896 1.06578 1.29855 0.9753 0.90431 1.04583
639 1.02628 0.8642 1.07143 1.01793 1.07134 1.30901 0.98215 0.8909 1.04881
640 1.02882 0.85537 1.07266 1.03022 1.06741 1.30443 0.97673 0.8732 1.06127
641 1.0319 0.85829 1.08787 1.03254 1.07464 1.30629 0.97791 0.86252 1.06552
642 1.02496 0.85769 1.08611 1.04342 1.07122 1.30986 0.97527 0.84037 1.05901
643 1.02027 0.86026 1.08061 1.03649 1.06652 1.30719 0.97611 0.82891 1.06895
644 1.02083 0.86129 1.07457 1.04438 1.06117 1.29843 0.97943 0.82162 1.06414
645 1.02981 0.85787 1.09256 1.04917 1.06108 1.30294 0.97714 0.84974 1.07135
646 1.03293 0.85321 1.0923 1.06022 1.07082 1.31059 0.9777 0.86103 1.06531
647 1.02655 0.85812 1.08991 1.06562 1.0705 1.3054 0.98451 0.88648 1.06617
648 1.0315 0.86901 1.10185 1.07589 1.07658 1.30845 0.9753 0.89748 1.06593
649 1.03751 0.8686 1.11305 1.08283 1.07081 1.32569 0.98396 0.90004 1.08476

147
650 1.04276 0.87048 1.11678 1.09199 1.07216 1.3227 0.98237 0.91831 1.08714
651 1.03699 0.87282 1.13104 1.09655 1.07186 1.31575 0.98562 0.91127 1.09541
652 1.03219 0.8806 1.13256 1.10997 1.07318 1.3172 0.98936 0.90572 1.08178
653 1.03609 0.88435 1.13214 1.11599 1.06969 1.3184 0.99072 0.92821 1.0941
654 1.04511 0.87942 1.15012 1.11975 1.07715 1.31968 0.9939 0.9353 1.09925
655 1.05491 0.88924 1.15404 1.14173 1.08397 1.3097 0.98883 0.95439 1.09298
656 1.0504 0.88717 1.13909 1.13549 1.08667 1.32742 1.00017 0.95361 1.09364
657 1.0547 0.88902 1.15146 1.13888 1.0885 1.3248 1.00367 0.96484 1.0918
658 1.06101 0.89469 1.16609 1.14938 1.08727 1.32933 1.00421 0.96477 1.10022
659 1.05274 0.89988 1.17403 1.15918 1.08934 1.33381 1.00492 0.96931 1.1062
660 1.05928 0.89519 1.19013 1.17569 1.09404 1.34411 1.00868 0.98631 1.12672
661 1.05882 0.90088 1.17623 1.18506 1.08806 1.35318 1.01076 0.99343 1.1341
662 1.06371 0.90964 1.19072 1.18414 1.09929 1.34165 1.01166 0.99945 1.12736
663 1.06949 0.91204 1.20905 1.20508 1.09423 1.34916 1.01873 0.98628 1.12842
664 1.07492 0.92108 1.20842 1.21181 1.10195 1.35574 1.01668 1.00663 1.14013
665 1.0726 0.92365 1.22138 1.21862 1.10433 1.35846 1.02153 1.02269 1.14762
666 1.0732 0.93684 1.24152 1.2253 1.10915 1.36307 1.02582 1.03142 1.14587
667 1.08728 0.93328 1.23718 1.23092 1.10856 1.36851 1.0272 1.03236 1.15303
668 1.08218 0.93707 1.25124 1.25201 1.12318 1.37482 1.03178 1.04325 1.16355
669 1.08392 0.94162 1.25657 1.26791 1.12429 1.37887 1.02933 1.04062 1.16455
670 1.09808 0.94808 1.25874 1.27216 1.11792 1.3887 1.04547 1.05164 1.17804
671 1.09561 0.95708 1.27369 1.27687 1.13224 1.3974 1.03988 1.05428 1.18758
672 1.0978 0.96541 1.27503 1.28829 1.13243 1.40048 1.04001 1.06199 1.18315
673 1.09944 0.96499 1.28893 1.29213 1.13479 1.41136 1.04032 1.06288 1.18001
674 1.09779 0.9664 1.28655 1.2823 1.13049 1.42199 1.0385 1.05682 1.16478
675 1.09613 0.97101 1.28237 1.29109 1.13397 1.39955 1.04952 1.072 1.1799
676 1.10369 0.97503 1.29031 1.30473 1.12921 1.40276 1.04269 1.07556 1.18531
677 1.09819 0.96337 1.29263 1.29126 1.12914 1.39275 1.04375 1.06264 1.1808
678 1.09433 0.97549 1.29536 1.30812 1.12936 1.3947 1.0408 1.0619 1.18478
679 1.09935 0.98411 1.30273 1.3115 1.13345 1.39565 1.04473 1.07846 1.18381
680 1.09501 0.97517 1.30438 1.31012 1.1287 1.39384 1.03743 1.06112 1.1729
681 1.09648 0.96508 1.28677 1.30467 1.116 1.38651 1.03574 1.06805 1.17777
682 1.07651 0.96142 1.28326 1.28256 1.11289 1.36884 1.0265 1.05284 1.1611
683 1.06766 0.9564 1.27063 1.27436 1.10208 1.36483 1.01621 1.03505 1.14735
684 1.0681 0.9477 1.25455 1.26388 1.09903 1.35807 1.01125 1.04382 1.14146
685 1.07125 0.94691 1.2451 1.25293 1.09186 1.348 1.01016 1.02269 1.13221
686 1.05891 0.93103 1.22545 1.2437 1.08063 1.33893 1.00605 1.02519 1.12071
687 1.03709 0.93528 1.21777 1.22442 1.06893 1.31608 0.99799 1.00791 1.10583
688 1.03494 0.92065 1.19844 1.21438 1.05937 1.29742 0.96859 1.00973 1.08813
689 1.01737 0.90471 1.16747 1.19199 1.03879 1.28767 0.96561 1.0778 1.0651
690 1.01185 0.89517 1.15129 1.18147 1.03313 1.27446 0.96109 1.08812 1.0583
691 1.00418 0.88473 1.12547 1.1581 1.01473 1.25842 0.94852 1.05662 1.04206
692 0.98148 0.87957 1.09806 1.12584 0.99391 1.23996 0.92973 1.03922 1.02317
693 0.97279 0.8626 1.08875 1.11593 0.98769 1.22193 0.91412 1.02624 1.00152
694 0.95384 0.85157 1.05696 1.09095 0.97008 1.20064 0.91054 1.00491 0.98274
695 0.93309 0.82783 1.02272 1.06047 0.9513 1.17845 0.89805 0.98508 0.95958
696 0.91732 0.81592 0.99432 1.03911 0.93228 1.16623 0.87239 0.96066 0.94331
697 0.89077 0.79434 0.95672 1.00565 0.9204 1.12974 0.85662 0.93142 0.9225
698 0.87424 0.78167 0.92033 0.98081 0.89663 1.09775 0.84675 0.90256 0.89569
699 0.85641 0.76005 0.89162 0.95587 0.87628 1.08947 0.83064 0.88231 0.87335
700 0.82842 0.7357 0.86615 0.92032 0.85925 1.06324 0.81074 0.85314 0.85629
701 0.80898 0.71305 0.83105 0.89741 0.82269 1.03396 0.78437 0.82776 0.8227
702 0.77577 0.68079 0.81346 0.85417 0.81068 1.00411 0.75903 0.7958 0.79137
703 0.76077 0.66515 0.76455 0.83038 0.78506 0.96885 0.73829 0.761 0.76456
704 0.72941 0.63742 0.73695 0.7882 0.75785 0.94873 0.71487 0.73215 0.74473
705 0.71271 0.60782 0.69953 0.74745 0.73432 0.91541 0.70224 0.69903 0.71237

148
706 0.67798 0.58067 0.67144 0.71546 0.70545 0.8878 0.67856 0.66589 0.69574
707 0.65389 0.56361 0.66307 0.69025 0.68026 0.86954 0.65478 0.64338 0.66759
708 0.6388 0.53106 0.63973 0.66117 0.65797 0.83205 0.6344 0.61377 0.64457
709 0.60639 0.51322 0.59477 0.64125 0.63925 0.79568 0.59973 0.57788 0.62205
710 0.57926 0.49499 0.58683 0.60871 0.61263 0.77896 0.58411 0.54958 0.60316
711 0.56504 0.47891 0.5712 0.57541 0.58146 0.74266 0.5689 0.5297 0.57446
712 0.54485 0.45572 0.54682 0.5762 0.56367 0.71774 0.54246 0.5084 0.56259
713 0.52388 0.44239 0.54226 0.54927 0.54121 0.6984 0.53314 0.47895 0.54205
714 0.50353 0.41903 0.49696 0.52336 0.52581 0.66897 0.5167 0.44892 0.53035
715 0.48571 0.39768 0.47735 0.50894 0.51161 0.64879 0.48958 0.44203 0.49789
716 0.47967 0.38887 0.46604 0.4727 0.49622 0.6229 0.48124 0.41983 0.48982
717 0.46519 0.3751 0.44733 0.45831 0.47289 0.59878 0.46886 0.40608 0.46115
718 0.45129 0.35547 0.43959 0.46292 0.45144 0.58082 0.45172 0.39009 0.44617
719 0.43201 0.34321 0.41251 0.43221 0.43431 0.56342 0.43344 0.38462 0.43489
720 0.41961 0.33941 0.39404 0.40166 0.42485 0.5383 0.41378 0.37124 0.41918
721 0.39639 0.32639 0.38873 0.41166 0.40874 0.51363 0.40829 0.35521 0.40108
722 0.38281 0.31974 0.37123 0.38597 0.38927 0.49651 0.39683 0.34476 0.39249
723 0.372 0.30448 0.36948 0.38598 0.37152 0.47715 0.39228 0.33137 0.37471
724 0.36924 0.29378 0.35886 0.36364 0.36528 0.46411 0.36283 0.31743 0.35984
725 0.35277 0.29158 0.33422 0.35892 0.34597 0.43964 0.35824 0.31336 0.34762

149
Grupo 3 de datos

7 11R7B 7C 8 8B 8C 9A 17R9B 9C

600 1 1 1 1 1 1 1 1 1
601 1.04444 1.00971 1.00741 1.0126 1.02582 1.03904 1.00696 1.00768 1.01809
602 1.0558 1.01436 1.01368 1.02301 1.0502 1.07739 1.04012 1.0054 1.03588
603 1.08707 1.02036 1.02261 1.03523 1.07649 1.11775 1.0528 1.00489 1.04209
604 1.10074 1.02232 1.02072 1.04988 1.09875 1.14761 1.05584 0.99964 1.03538
605 1.11842 1.02277 1.02899 1.05673 1.11812 1.1795 1.06879 1.00216 1.03482
606 1.14143 1.0261 1.03123 1.06093 1.12964 1.19834 1.07353 0.99474 1.02798
607 1.15908 1.03097 1.02964 1.08442 1.14974 1.21506 1.09303 0.99163 1.01979
608 1.17481 1.03131 1.03057 1.09484 1.1606 1.22637 1.09367 0.99528 1.03116
609 1.17525 1.02346 1.02872 1.10672 1.17124 1.23576 1.08798 0.99174 1.03193
610 1.18413 1.01844 1.02875 1.11392 1.18416 1.25441 1.10461 0.98055 1.03407
611 1.19768 1.03146 1.02306 1.1251 1.19445 1.2638 1.11447 0.97835 1.02957
612 1.20316 1.02134 1.02891 1.11895 1.19933 1.27971 1.11995 0.97767 1.02691
613 1.21303 1.02409 1.01923 1.13331 1.20801 1.28271 1.09929 0.98492 1.03443
614 1.23011 1.01707 1.01929 1.14651 1.21798 1.28944 1.09814 0.98715 1.03429
615 1.22722 1.01429 1.01995 1.14253 1.22051 1.29848 1.1227 0.98029 1.03513
616 1.22598 1.01543 1.02068 1.1447 1.22134 1.29799 1.10946 0.97526 1.04398
617 1.22376 1.00913 1.01152 1.14758 1.22226 1.29693 1.10998 0.969 1.03896
618 1.22257 1.01132 1.00814 1.15837 1.23245 1.30653 1.11439 0.971 1.04029
619 1.21962 0.99425 1.00709 1.16888 1.23522 1.30155 1.11243 0.97414 1.04182
620 1.21875 1.00388 1.01944 1.15588 1.22549 1.2951 1.1157 0.96446 1.04308
621 1.21134 1.00021 1.01888 1.16122 1.23168 1.30215 1.1255 0.97141 1.05076
622 1.21235 0.99356 1.0136 1.16412 1.22954 1.29497 1.11185 0.96846 1.06044
623 1.20349 0.98475 1.01903 1.1543 1.22766 1.30102 1.1143 0.96109 1.07342
624 1.20068 0.98414 1.01457 1.15648 1.22852 1.30055 1.10736 0.95894 1.06149
625 1.19728 0.98617 1.0124 1.16462 1.23271 1.30079 1.11398 0.95156 1.0653
626 1.19998 0.98438 1.00775 1.16167 1.23137 1.30107 1.11551 0.95491 1.07414
627 1.18914 0.98344 1.0083 1.15203 1.22497 1.2979 1.11553 0.95798 1.07897
628 1.19198 0.98518 1.01932 1.15283 1.22839 1.30394 1.12029 0.95891 1.0861
629 1.1826 0.98786 1.02087 1.15271 1.23035 1.30799 1.11669 0.96263 1.07662
630 1.16382 0.9838 1.01874 1.1436 1.22198 1.30035 1.12865 0.94825 1.07623
631 1.17133 0.97157 1.01328 1.13963 1.22057 1.3015 1.12397 0.94498 1.0809
632 1.16904 0.97905 1.00345 1.14209 1.22239 1.3027 1.12004 0.95087 1.07791
633 1.17325 0.97596 1.01254 1.14152 1.22648 1.31143 1.11614 0.95366 1.0918
634 1.16583 0.98213 1.01694 1.14002 1.22881 1.3176 1.12513 0.94541 1.10785
635 1.16749 0.98609 1.02447 1.13076 1.22237 1.31397 1.12967 0.95501 1.10112
636 1.16053 0.98974 1.02598 1.12815 1.21957 1.31099 1.11878 0.95251 1.09254
637 1.16698 0.98726 1.0273 1.13189 1.22737 1.32286 1.12292 0.96077 1.09991
638 1.1634 0.99001 1.03587 1.13162 1.22615 1.32068 1.12029 0.95764 1.11694
639 1.16509 0.99795 1.03943 1.12795 1.22462 1.32129 1.12029 0.96352 1.11516
640 1.17404 1.00054 1.04119 1.13564 1.23021 1.32478 1.11457 0.96661 1.12932
641 1.1607 0.99419 1.04501 1.12462 1.22936 1.3341 1.11271 0.96703 1.13205
642 1.165 1.00187 1.04912 1.11553 1.22404 1.33256 1.11869 0.96821 1.12942
643 1.16086 1.00061 1.0497 1.10191 1.21824 1.33457 1.11482 0.97315 1.13602
644 1.16218 1.00678 1.05131 1.10876 1.22182 1.33487 1.12029 0.97838 1.13281
645 1.16238 1.00345 1.06539 1.10176 1.22288 1.34401 1.14464 0.97729 1.14909
646 1.16192 1.01582 1.06481 1.09611 1.22272 1.34933 1.12224 0.97999 1.16095
647 1.16662 1.02423 1.06427 1.10275 1.22221 1.34168 1.13475 0.9855 1.16693
648 1.15442 1.02283 1.07382 1.0996 1.22255 1.34551 1.14993 0.99522 1.17761
649 1.16703 1.03522 1.07661 1.09447 1.22135 1.34822 1.1471 1.01159 1.19412
650 1.16549 1.04023 1.08458 1.09533 1.22927 1.36321 1.15122 1.0063 1.19595
651 1.17341 1.0293 1.08599 1.10251 1.23388 1.36526 1.15404 1.01409 1.19006

150
652 1.16992 1.04184 1.1057 1.10133 1.23357 1.3658 1.16546 1.01869 1.19749
653 1.17356 1.05286 1.1054 1.09624 1.23265 1.36906 1.19765 1.0182 1.20361
654 1.17115 1.06343 1.11075 1.08487 1.23124 1.3776 1.20715 1.01761 1.2106
655 1.19427 1.06693 1.11372 1.08368 1.23276 1.38184 1.2177 1.02611 1.23301
656 1.18652 1.06905 1.1199 1.0805 1.22762 1.37474 1.21448 1.04153 1.22811
657 1.19013 1.06974 1.13481 1.08783 1.2329 1.37798 1.21101 1.04499 1.23641
658 1.18672 1.09185 1.14429 1.08029 1.23608 1.39187 1.22085 1.05104 1.25564
659 1.19831 1.09368 1.14375 1.0675 1.23249 1.39747 1.23487 1.06238 1.25247
660 1.2029 1.1036 1.168 1.08556 1.2479 1.41024 1.23419 1.05523 1.27489
661 1.21451 1.09832 1.16349 1.08305 1.25094 1.41883 1.23495 1.06818 1.29809
662 1.21624 1.11492 1.16808 1.09194 1.25595 1.41996 1.23569 1.07605 1.29354
663 1.22407 1.12469 1.18079 1.08892 1.25698 1.42504 1.24314 1.0829 1.30048
664 1.23257 1.14144 1.19046 1.0717 1.24966 1.42761 1.25326 1.08898 1.31187
665 1.2332 1.1466 1.19166 1.07058 1.25851 1.44644 1.2661 1.10229 1.32061
666 1.23355 1.15314 1.19525 1.07208 1.26008 1.44808 1.26251 1.10324 1.33069
667 1.23787 1.1591 1.21876 1.0817 1.27061 1.45953 1.27368 1.11411 1.32711
668 1.245 1.17 1.23291 1.08375 1.27127 1.45879 1.29248 1.13228 1.34145
669 1.25054 1.17883 1.23842 1.08279 1.27719 1.47159 1.2992 1.12966 1.34972
670 1.25523 1.18908 1.24965 1.08469 1.27826 1.47182 1.29199 1.1418 1.34787
671 1.2726 1.18932 1.26105 1.08431 1.28191 1.4795 1.29233 1.1373 1.37639
672 1.26766 1.19938 1.2719 1.08822 1.28688 1.48554 1.31135 1.15228 1.37257
673 1.27494 1.2029 1.27023 1.0893 1.29606 1.50281 1.31029 1.15626 1.37441
674 1.26693 1.19508 1.27181 1.09062 1.29541 1.50019 1.31012 1.15346 1.37532
675 1.2766 1.20632 1.28256 1.0767 1.28603 1.49535 1.30018 1.16351 1.39851
676 1.27421 1.20866 1.28343 1.07076 1.28694 1.50312 1.29678 1.15543 1.40507
677 1.27482 1.20389 1.28585 1.07026 1.28211 1.49397 1.303 1.15095 1.38992
678 1.27223 1.20626 1.28898 1.07325 1.28719 1.50112 1.31193 1.15909 1.39993
679 1.28701 1.21093 1.2929 1.0773 1.28884 1.50039 1.29755 1.1645 1.39026
680 1.26222 1.2046 1.28546 1.06542 1.28232 1.49923 1.28697 1.15059 1.38652
681 1.2643 1.191 1.28335 1.06143 1.2752 1.48896 1.29346 1.15144 1.37806
682 1.25122 1.17669 1.27296 1.05546 1.26808 1.48069 1.26731 1.13734 1.35862
683 1.23646 1.16724 1.26197 1.04988 1.26151 1.47313 1.25934 1.13037 1.3546
684 1.23944 1.16637 1.24594 1.04466 1.25463 1.46459 1.25716 1.11714 1.34925
685 1.2342 1.15508 1.2319 1.05345 1.25243 1.45141 1.24581 1.11917 1.33319
686 1.21384 1.13644 1.2152 1.04382 1.23692 1.43002 1.22769 1.10485 1.32065
687 1.20975 1.1255 1.19151 1.02348 1.21745 1.41142 1.20812 1.08127 1.30251
688 1.20487 1.11778 1.17401 1.01528 1.20678 1.39828 1.19192 1.07523 1.28626
689 1.18159 1.09193 1.16612 1.00999 1.19296 1.37592 1.17815 1.05031 1.27271
690 1.16878 1.07071 1.14874 1.00549 1.18226 1.35903 1.16213 1.03365 1.25394
691 1.15284 1.05036 1.11744 0.98306 1.15927 1.33547 1.12406 1.0168 1.21834
692 1.14166 1.0377 1.09313 0.98089 1.14851 1.31613 1.1165 0.99933 1.18804
693 1.1227 1.02609 1.07109 0.97465 1.13789 1.30112 1.09079 0.98398 1.17682
694 1.09767 0.9993 1.03895 0.96096 1.1237 1.28643 1.06378 0.95602 1.14691
695 1.08439 0.97427 1.00962 0.93652 1.094 1.25147 1.0189 0.93807 1.10465
696 1.06614 0.95797 0.98543 0.93464 1.07763 1.22063 0.99819 0.91401 1.08486
697 1.03945 0.92647 0.95992 0.92003 1.05727 1.19451 0.98051 0.89994 1.05413
698 1.0188 0.91245 0.93143 0.90107 1.03546 1.16985 0.95139 0.86759 1.02968
699 0.99432 0.86614 0.90032 0.89024 1.01281 1.13538 0.90634 0.84851 1.00349
700 0.96397 0.85198 0.8712 0.86665 0.98604 1.10543 0.88275 0.8148 0.95603
701 0.94019 0.82322 0.84346 0.85328 0.9648 1.07632 0.8453 0.80462 0.92843
702 0.91392 0.80205 0.80722 0.83885 0.94155 1.04426 0.79721 0.7803 0.90291
703 0.88216 0.77157 0.77974 0.80375 0.90892 1.01409 0.7581 0.7432 0.86474
704 0.85096 0.74108 0.7443 0.77324 0.87923 0.98523 0.7311 0.71438 0.83528
705 0.82685 0.71314 0.70988 0.75822 0.85364 0.94907 0.70813 0.69888 0.80738
706 0.79816 0.67818 0.67731 0.74115 0.8314 0.92166 0.65624 0.66235 0.77712
707 0.76273 0.64246 0.65228 0.71063 0.79574 0.88085 0.62758 0.63606 0.76341
708 0.73631 0.61189 0.64143 0.68019 0.76899 0.8578 0.60476 0.60143 0.7442

151
709 0.71261 0.59553 0.61507 0.65938 0.74995 0.84053 0.57822 0.58231 0.71938
710 0.6855 0.5664 0.58525 0.64342 0.7302 0.81698 0.54212 0.56259 0.70263
711 0.66362 0.5373 0.56889 0.62104 0.7058 0.79055 0.52454 0.53661 0.66951
712 0.64237 0.51984 0.55021 0.60072 0.67962 0.75852 0.49946 0.51378 0.63539
713 0.62011 0.49474 0.51793 0.57359 0.65728 0.74097 0.46413 0.49542 0.6259
714 0.59633 0.48433 0.5022 0.55386 0.62945 0.70504 0.45633 0.47872 0.61338
715 0.57684 0.46449 0.48509 0.5512 0.61831 0.68542 0.44055 0.45336 0.5849
716 0.56361 0.44174 0.46509 0.54084 0.60291 0.66498 0.42362 0.42559 0.56115
717 0.5324 0.42393 0.45838 0.52287 0.58211 0.64136 0.39836 0.41223 0.54784
718 0.52249 0.40353 0.4366 0.50459 0.5653 0.62601 0.36505 0.40762 0.54573
719 0.51286 0.38697 0.41854 0.47815 0.54512 0.61208 0.36541 0.37935 0.52144
720 0.49495 0.37395 0.40697 0.47158 0.53028 0.58897 0.33879 0.36788 0.49946
721 0.48103 0.36016 0.37949 0.45033 0.50627 0.56222 0.31027 0.35232 0.4928
722 0.45318 0.35016 0.36977 0.45307 0.4951 0.53713 0.29464 0.33559 0.48035
723 0.44397 0.33863 0.35284 0.4267 0.47095 0.51521 0.29252 0.32829 0.47541
724 0.43024 0.32718 0.33167 0.417 0.45504 0.49309 0.27874 0.31072 0.44819
725 0.43042 0.31459 0.32714 0.40785 0.44451 0.48116 0.26104 0.29209 0.42635

152
D). PATGENOS

Tiempo
Total Fusariu Aspergill Penicilliu Alternari
m sp us m a sp
(s) % % % % %
Control R1 0 1 1000 80 60 0 0 0
R2 0 2 1000 40 40 0 0 0
R3 0 3 1000 80 80 0 0 0
R4 0 4 1000 80 80 0 0 0
R5 0 5 1000 80 60 60 0 0
I ,30s R1 30 1 1 60 40 20 20 0
1

R2 30 2 1 60 40 20 0 0
R3 30 3 1 60 40 20 0 0
R4 30 4 1 20 20 0 0 0
R5 30 5 1 40 40 0 0 0

I1,1min R1 60 1 2 60 80 0 0 20
R2 60 2 2 40 40 0 0 60
R3 60 3 2 60 0 0 0 60
R4 60 4 2 20 20 0 0 60
R5 60 5 2 20 20 0 0 60

I1,3min R1 180 1 3 40 40 20 0 0
R2 180 2 3 80 80 40 0 0
R3 180 3 3 40 40 0 0 0
R4 180 4 3 40 40 0 0 0
R5 180 5 3 40 40 20 0 0

I1, R1 300 1 4 40 20 0 20 0
5min
R2 300 2 4 40 40 0 0 0
R3 300 3 4 20 20 0 0 0
R4 300 4 4 20 20 0 0 0
R5 300 5 4 20 20 0 0 0

I1, 10 R1 600 1 5 40 40 0 0 0
min
R2 600 2 5 40 40 0 0 0
R3 600 3 5 40 40 0 0 0
R4 600 4 5 40 40 0 0 0

153
R5 600 5 5 40 20 20 0 0

I2,30s R1 30 1 11 40 40 0 0 0
R2 30 2 11 60 60 0 0 0
R3 30 3 11 40 40 0 0 0
R4 30 4 11 80 60 0 0 20
R5 30 5 11 80 80 20 0 0

I2,1min R1 60 1 22 60 60 0 0 20
R2 60 2 22 40 40 0 0 0
R3 60 3 22 80 80 0 0 0
R4 60 4 22 40 40 0 0 0
R5 60 5 22 20 20 0 0 0

I2,3min R1 180 1 33 80 80 0 0 0
R2 180 2 33 20 20 0 0 0
R3 180 3 33 20 20 0 0 0
R4 180 4 33 80 80 0 0 0
R5 180 5 33 60 60 0 0 0

I2, R1 300 1 44 40 20 20 0 0
5min
R2 300 2 44 20 20 0 0 0
R3 300 3 44 20 20 0 0 0
R4 300 4 44 40 40 20 0 0
R5 300 5 44 20 20 0 0 0

I2, 10 R1 600 1 55 60 40 0 20 0
min
R2 600 2 55 40 40 0 0 0
R3 600 3 55 20 20 0 0 0
R4 600 4 55 60 60 20 0 0
R5 600 5 55 60 40 20 0 0

154
ND: No Desinfestada

Tiempo No Desinfest
Total Fusarium sp Aspergillus Penicillium Alternaria sp
(s) % % % % %
Control R1 0 1 1000 100 100 0 40 0
R2 0 2 1000 100 100 0 0 20
R3 0 3 1000 100 100 0 20 0
R4 0 4 1000 100 100 0 20 0
R5 0 5 1000 100 100 0 20 0
I ,30s R1 30 1 1 100 100 0 0 0
1

R2 30 2 1 100 100 0 0 20
R3 30 3 1 100 100 0 20 0
R4 30 4 1 100 100 0 0 0
R5 30 5 1 100 100 0 20 20

I1,1min R1 60 1 2 100 100 0 20 0


R2 60 2 2 100 100 0 0 0
R3 60 3 2 100 100 0 20 0
R4 60 4 2 100 100 0 20 0
R5 60 5 2 100 100 0 20 40

I1,3min R1 180 1 3 100 100 0 40 0


R2 180 2 3 100 100 0 20 0
R3 180 3 3 100 100 0 40 20
R4 180 4 3 100 100 0 40 0
R5 180 5 3 100 100 0 40 20

I1, R1 300 1 4 100 100 0 40 0


5min
R2 300 2 4 100 100 0 0 0
R3 300 3 4 100 100 0 20 0
R4 300 4 4 100 100 0 40 0
R5 300 5 4 100 100 0 80 20

I1, 10 R1 600 1 5 100 100 0 20 20


min
R2 600 2 5 100 100 0 0 0
R3 600 3 5 100 100 0 40 60
R4 600 4 5 100 100 0 20 40
R5 600 5 5 100 100 0 20 20

155
I2,30s R1 30 1 11 100 100 0 40 0
R2 30 2 11 100 100 0 20 0
R3 30 3 11 100 100 0 20 0
R4 30 4 11 100 100 0 20 0
R5 30 5 11 100 100 0 60 0

I2,1min R1 60 1 22 100 100 0 80 0


R2 60 2 22 100 100 0 60 0
R3 60 3 22 100 100 0 20 40
R4 60 4 22 100 100 0 20 0
R5 60 5 22 100 100 0 60 20

I2,3min R1 180 1 33 100 100 0 60 0


R2 180 2 33 100 100 0 20 0
R3 180 3 33 100 100 0 20 0
R4 180 4 33 100 100 0 20 40
R5 180 5 33 100 100 0 20 20

I2, R1 300 1 44 60 60 0 40 0
5min
R2 300 2 44 100 100 0 40 0
R3 300 3 44 100 100 0 40 0
R4 300 4 44 60 60 0 20 0
R5 300 5 44 100 100 0 0 40

I2, 10 R1 600 1 55 100 100 0 20 0


min
R2 600 2 55 100 100 0 20 0
R3 600 3 55 100 100 0 20 0
R4 600 4 55 100 100 0 0 0
R5 600 5 55 100 100 0 20 20

156
Figura (d.1) Montaje experimental para la irradiacin

Figura (d.2) Cajas patolgicas empleadas en los experimentos

157
(a)

(b)

Figura (d.3). Comparacin visual entre la semilla con el mejor tratamiento para
disminuir la cantidad de semilla infestada. a) Muestras de control, b) Muestras
irradiadas durante 5 minutos (el mejor tratamiento).

158
ANEXO 2

E). Anlisis de Varianza en el Diseo de los experimentos


manejados

El Diseo experimental de Bloques Completos al Azar se utiliza para comparar t


tratamientos y cada tratamiento debe estar presente una y slo una vez en cada
uno de los bloques, es decir que si se tienen b bloques , cada uno de ellos est
integrado exactamente por los t tratamientos. En consecuencia el nmero total de
unidades experimentales es bt, y adems cada tratamiento tiene el mismo nmero
(b) de repeticiones . La asignacin de los tratamientos a las unidades
experimentales se realiza como sigue: en un bloque cualquiera , digamos el
primero , se numeran las t unidades que lo integran y se colocan en una urna t
fichas idnticas, excepto por estar marcadas por nmeros entre 1 y t. En otra urna
se colocan t fichas que identifican a los tratamientos. De cada urna se extrae una
ficha para asignar un tratamiento a la primera unidad experimental extrada. En
seguida, sin regresar las fichas a las urnas respectivas, se repiten las extracciones
hasta haber asignado los t tratamientos a las unidades en ese bloque. Una vez
terminada la aleatorizacin para ese bloque, se repite todo el proceso de nuevo con
un segundo bloque, y as sucesivamente hasta terminar con los b bloques. De
ninguna manera es posible aleatorizar un bloque y usarla en los dems. La forma
en que se aleatoriza el diseo es lo que le da el nombre. Dentro de cada bloque la
aleatorizacin es irrestricta para una repeticin de cada tratamiento , pero la
aleatorizacin no es irrestricta para las bt unidades experimentales, ya que en
cada bloque slo puede aparecer un tratamiento a la vez.

En el modelo lineal supuesto empleado para este diseo interviene un efecto


atribuible al bloque en que se encuentra cada unidad experimental.

El modelo se describe como sigue:


Yij = + j + j + ij ;

159
j = 1, ..... , b
i = 1, ... t

Donde:

Las componentes de la ecuacin representan:

Yij : Respuesta de la j-sima unidad experimental con el tratamiento i-simo


: Media General
j : Efecto del i - simo
j : Efecto del j - simo bloque
ij : Error en la j-sima repeticin del i simo tratamiento

Tabla (e.1). Estructura de los datos en un diseo en Bloques Completos al Azar

Tratamientos

Bloques 1 2 T Total Medias


bloque bloque

1 Y11 Y21 Yt1 Y.1 Y.1

2 Y12 Y22 Yt2 Y.2 Y.2


. . . . . .
. . . . . .
. . . . . .

B Y1b Y2b Ytb Y.b Y.b

Total tratamiento Y1. Y2. Yt. Y..


Medias
Y1. Y2. Yt.
tratamiento

Prueba F

Esta prueba se emplea para probar la hiptesis

160
Ho = 1 = 2 = ...... = t, en oposicin a
Ha: al menos un tratamiento es diferente

con nivel de significancia; por lo que la conclusin es rechazar la hiptesis Ho

con 0.01 0.05 . Y significa que al menos un tratamiento es diferente.

La condicin a cumplir para demostrar que al menos un tratamiento es diferente es:

Fcalculada Ftablas

Donde:
C.M .Tratamiento
Fcalculada =
C.M .Error

S .C.Tratamiento
C.M .Tratamiento =
t 1

t Yi.2
S .C.Tratamiento = F .C.
i =1 b

Y..2
F .C. =
bt

Donde:

C.M .Tratamiento : Cuadrado medio de tratamiento


S .C.Tratamiento : Suma de Cuadrado de tratamiento
F .C. : Factor de correccin
b : No de Bloques
t : No de tratamientos

161
Cuando la prueba F rechaza la hiptesis Ho, la conclusin alternativa es de que

no todas las j son iguales. En la prctica de la experimentacin agrcola, es


comn el empleo de la prueba de Diferencias Mnimas Significativas (DMS) para
comparaciones entre medias de los tratamientos. Para la aplicacin de la prueba
se calcula el dato de DMS; para este clculo se hace uso de la distribucin t
student, calculando la cantidad:

2s 2
DMS = t ;
r

t ; : es la t Student
= (r - 1)(t - 1) grados de libertad
s 2 : es el cuadrado medio del error.
r : es el nmero de repeticiones de cada tratamiento

A travs de los procedimientos del SAS se realizaron estas pruebas, anlisis de


varianza y comparaciones de medias. Para lo cual se aplico el siguiente
programa en el SAS, versin 98, con la distribucin de datos que se indican
tambin.

Programa SAS
DATA A;
INPUT GEN REP TRAT VE PESOSECO PE;
CARDS;

1 1 1 2.666 1.11 75
1 2 1 3.033 1.12 80
1 3 1 2.666 1.11 75

.
.
.

1 1 17 2 1.01 55
1 2 17 3.1 1.23 85
1 3 17 2.83 1.15 80
;
/*DISEO BLOQUES AL AZAR*/
PROC GLM;

162
CLASS REP TRAT;
MODEL VE PESOSECO PE = REP TRAT;
MEANS TRAT/LSD LINES;
RUN;
ANEXO 3
F). MODELO DE JERARQUIZACIN ANALTICA

Tabla 2.1 Escala empleada para la comparacin de alternativas, correspondiente


al modelo de Jerarquizacin Analtica.

Intensidad de Definicin Explicacin


importancia

1 Igual importancia Dos actividades contribuyen


igualmente a un objetivo
3 Ligera importancia de Hay evidencia que favorece una
una sobre la otra actividad sobre la otra, pero no es
concluyente
5 Esencial o fuerte Existe evidencia concluyente para
Importancia mostrar la importancia de una
actividad sobre la otra.
7 Importancia demostrada Existe evidencia concluyente
para mostrar la importancia de una
actividad sobre la otra
9 Importancia absoluta La evidencia en favor de una
actividad sobre la otra es del orden
de afirmacin ms alto posible.
2,4,6,8 Valores intermedios entre dos Existe compromiso entre los
calificaciones adyacentes valores.

Recprocos de los Si la actividad i tiene alguno


Valores anteriores de los valores no nulos asignado
Diferentes de cero a ella cuando es comparada
con la actividad j, entonces j
tiene el valor recproco cuando
es comparada con i

Siguiendo el algoritmo que se indica resumidamente a continuacin se obtienen


las relevancias relativas de cada una de las alternativas.

163
Establecer la estructura Jerrquica

2 1
Comparaciones
1
A1 A2 A3 A4
ALGORITMO

1 2 3
Tabla de comparaciones
A1 A2 A3 A4 A1 vs A2 A1 vs A2 A1 vs A2
3 A1
A2
A1 vs A3
A1 vs A4
A1 vs A3 A1 vs A3
A1 vs A4 A1 vs A4
A3
A4
N objetivos o atributos

Matrices de comparacin Conocer las relevancias


4 relativas de las alternativas
con respecto a los objetivos
.. de la sig. manera

Multiplicar entre s los


5 elementos por renglones

a11 a12 a13 a14


a11 x a12 x a13 x a14
a21 a22 a23 a24
a21 x a22 x a23 x a24
a31 a32 a33 a34
a31 x a32 x a33 x a34
a41 a42 a43 a44
a41 x a42 x a43 x a44

Obtenemos la raz n
Matriz Unitaria de los elementos. n= numero de alternativas

b11 6 (b11)1/n
b21 (b31) 1/n
b31 (b31 ) 1/n
b41 (b41 )1/n

164
Normalizamos

7
(c11) (c11 / ) 100
(c31) (c31 / ) 100
(c31 )
(c41 ) (c31 / ) 100
(c41 / ) 100

Relevancias relativas de cada una de las alternativas


Con respecto a los objetivos

165
1.2

0.8

0.6
Pr
Pfr
0.4

0.2

0
350 375 400 425 450 475 500 525 550 575 600 625 650 675 700 725 750 775 800

-0.2 Longitud de onda (nm)

166
1.2

0.8

0.6

0.4
Pr
0.2 Pfr
0 Serie3
350 375 400 425 450 475 500 525 550 575 600 625 650 675 700 725 750 775 800
-0.2

-0.4

-0.6

-0.8

167

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