Q UMICA BIOLGICA

GUA DE TRABAJOS
PRCTICOS

ESCUELA TCNICA ORT

5 QUMICA 2017

Profesor: Lautaro Kremenchuzky

 NDICE

CONTENIDOS DE LA ASIGNATURA PGINA 03

TP N 1: EXTRACTO SECO PGINA 04
TP N 2: SMOSIS PGINA 05
TP N 3: DILISIS PGINA 06
TP N 4: LPIDOS PGINA 07
TP N 5: HIDRATOS DE CARBONO PGINA 10
TP N 6: PROTENAS PGINA 14
TP N 7: ENZIMAS PGINA 18
TP N 8: FERMENTACIN ALCOHLICA PGINA 22
TP N 9: FERMENTACIN LCTICA PGINA 24
TP N 10: SANGRE PGINA 26
TP N 11: ORINA PGINA 28

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 CONTENIDOS DE LA ASIGNATURA
QUMICA BIOLGICA 5 QUMICA

UNIDAD 1: PROPIEDADES DEL AGUA Y SOLUCIONES

Agua: caractersticas y propiedades. Propiedades coligativas. smosis. Difusin. Dilisis.
Ejercicios de aplicacin. Laboratorio.

UNIDAD 2: LPIDOS
Caractersticas generales. Funciones. cidos grasos. Nomenclatura omega. cidos grasos
esenciales. Lpidos con cidos grasos. Lpidos sin cidos grasos. Ejercicios de aplicacin.
Laboratorio.

UNIDAD 3: HIDRATOS DE CARBONO

Isomera ptica: trabajo con modelos moleculares. Clasificacin de los azcares. Funciones.
Estructuras qumicas. Monosacridos. Disacridos. Polisacridos. Digestin y absorcin de
azcares. Regulacin hormonal de la glucemia. Ejercicios de aplicacin. Laboratorio.

UNIDAD 4: PROTENAS
Aminocidos. Clasificacin. Punto isoelctrico. Titulacin cido-base. Unin peptdica.
Estructuras primaria, secundaria, terciaria y cuaternaria. Grupo prosttico. Desnaturalizacin de
protenas. Hemoglobina y mioglobina. Transporte de oxgeno. Membrana, Transporte de
membrana. Ejercicios de aplicacin. Laboratorio.

UNIDAD 5: ENZIMAS
Catlisis. Reacciones qumicas. Caractersticas. Zimgenos. Coenzimas. Vitaminas.
Moduladores alostricos. Cintica enzimtica. Inhibicin enzimtica: competitiva y no
competitiva. Curvas. Ejercicios de aplicacin. Laboratorio.

UNIDAD 6: METABOLISMO
Reacciones catablicas y anablicas. Poder reductor. Rol del ATP. Gluclisis. Destinos del
piruvato. Ciclo de Krebs. Fosforilacin oxidativa. Cadena de transporte de electrones. Beta-
oxidacin. Gluconeognesis. Glucogenolisis. Glucogenognesis. Ejercicios de aplicacin.
Laboratorio.

UNIDAD 7: SANGRE
Hematopoyesis. Elementos de la sangre. Hemograma. ndices hematimtricos. Grupo y factor
sanguneo. Inmunoglobulinas. Ejercicios de aplicacin. Laboratorio.

UNIDAD 8: NUTRICIN
Energa. Biomolculas como nutrientes. Protenas. Fibra alimentaria. Calidad proteica.
Ejercicios de aplicacin.

UNIDAD 9: HORMONAS
Sistema endcrino, parcrino y autcrino. Ejes hormonales. Hipotlamo. Hipfisis. rgano
efector: tiroides, corteza adrenal, gnadas. Ciclo sexual. Anticonceptivos orales. Tests rpidos
de embarazo y ovulacin. Prostaglandinas. Ejercicios de aplicacin.

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 TRABAJO PRCTICO N 1
EXTRACTO SECO

Materiales:
Trpode
Tela metlica
Mechero
Mortero
Cuchillo
Balanza
Estufa a 100 105 C
Cristalizador
Alimentos (verdura, pescado, carne, etc.)

Procedimiento:
- Pesar el cristalizador limpio y seco.
- Agregar las porciones de alimentos separadamente, previamente triturados o cortados
y pesar nuevamente.
- Calentar separadamente cada alimento sobre tela metlica en el mechero.
- Terminar el proceso con la estufa a 104 C (hasta sequedad).
- Enfriar la cpsula en desecador y volver a pesar. Repetir hasta constancia de peso.
- Calcular los % de agua en cada alimento.

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 TRABAJO PRCTICO N 2
SMOSIS

Materiales y reactivos:
Sal de mesa
Huevos crudos
Solucin de HCl 1:1
Vasos de precipitados

Procedimiento:
- Sumergir los huevos en la solucin de HCl 1:1 para extraer la cscara sin daar el
resto. Dejar actuar hasta que se desprenda la cscara.
- Una vez que queda la membrana sin cscara, colocar un huevo en un vaso que
contenga agua destilada de manera que lo cubra totalmente.
- Realizar lo mismo con otro huevo en un vaso que contenga salmuera.
- Dejarlo hasta el final de la clase y observar.

CaCO3 2 HCl CaCl 2 CO2 H 2 O

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 TRABAJO PRCTICO N 3
DILISIS

Objetivo: separar una solucin de NaCl y otra de almidn a travs de una dilisis.

Materiales y reactivos:
Membrana de dilisis
Agitador magntico
Vaso de precipitados de 1 litro
Solucin de NaCl
Solucin de almidn
Solucin de lugol
Solucin de AgNO3
Agua destilada

Procedimiento:
o Colocar en un tubo, 1 mL de solucin de NaCl + 1 mL de solucin de AgNO3.
Observar y registrar.
o Colocar en otro tubo, 1 mL de solucin de lugol + 1 mL de solucin de almidn.
Observar y registrar.
o Preparar un dializador con una membrana de dilisis o bolsa de celofn.
o Introducir dentro de la membrana la solucin de NaCl y la solucin de almidn.
o Cerrar la bolsa perfectamente en forma tal de anular toda prdida.
o Introducir el dispositivo sostenido por un soporte dentro del vaso de precipitados
conteniendo agua destilada.
o Colocar 2 porciones del agua del vaso en dos tubos y ensayar con AgNO3 y lugol.
Registrar.
o Dializar durante 1 hora (encender el agitador magntico).
o Colocar 2 porciones del agua del vaso en dos tubos y ensayar con AgNO3 y lugol.
Registrar.

Observaciones:

Control previo: Pre dilisis Post dilisis

NaCl + AgNO3: Tubo + AgNO3

Almidn + lugol: Tubo + lugol

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 TRABAJO PRCTICO N 4
LPIDOS

PARTE A: SOLUBILIDAD

Reactivos:

- H2O
- Aceite
- Detergente
- NaOH 10 %
- Etanol
- Butanol

Mtodo:

Tomar 5 tubos de ensayo (en todos los tubos debe haber aproximadamente 1 mL de aceite):
al tubo 1 aadir 1 mL de agua; al tubo 2 aadir 1 mL solucin de detergente; al tubo 3, 1 mL de
NaOH 10%; al tubo 4, 1 mL de etanol; al tubo 5, 1 mL de butanol. Mezclar bien todos los tubos
y observar solubilidad.

PARTE B: AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN DE COLESTEROL:

Se parte de 3 g de cerebro desmenuzado y se mezclan con 6 g de yeso en un mortero hasta
formar una pasta uniforme. Se pasa a una placa de vidrio y se espera a que se seque (si es
necesario se lleva a estufa a 37 C). En forma cuidadosa, si es posible asegurndose con un
embudo, se pasa el material obtenido a un tubo de ensayos y se adicionan 6 mL de cloroformo
mezclando con vortex para luego filtrar por algodn. Sobre el filtrado se realizan las siguientes
reacciones:

3.1 Reaccin de Schiff:

Tomar 1 mL del extracto obtenido y agregar 1 mL de H2SO4 (c) por la pared del tubo.
Observar en la interfase la formacin de un anillo rojo.

3.2 Reaccin de Liebermann - Burkhardt:

A 2 mL del extracto agregar 10 gotas de anhdrido actico y 2 gotas de H2SO4 (c). Mezclar y
observar la variacin de colores: rojo violeta azul verde

PARTE C. CROMATOGRAFA DE LPIDOS

Muestras a utilizar:
Seso bovino: colesterol.
Porotos de soja: lecitina.

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Patrones:
Colesterol: disolver la medida de una punta de esptula en 2 mL de cloroformo o
acetona.
Lecitina: disolver la medida de una punta de esptula en 5 mL de ter etlico. Dejar
decantar y tomar el sobrenandante.
Fase mvil: ter de petrleo.
Revelador: vapores de yodo.

Preparacin de las muestras:

- Colesterol: moler o licuar 25 g de seso bovino con 100 mL de acetona hasta obtener
una pasta bien homognea. Filtrar el homogenato con embudo Buchner a presin
reducida (trompa de vaco). Concentrar el filtrado y colocarlo en un recipiente rotulado.
TENER EN CUENTA QUE LA ACETONA ATACA AL PLSTICO.
- Lecitina: dejar macerar durante 24 hs. 5 g de porotos de soja en 10 mL de HCl 0,1 M;
en heladera para evitar fermentacin y tapado para evitar evaporacin. Molero o licuar
los porotos ya escurridos hasta obtener una pasta bien homognea. Colocar la pasta
en una ampolla chica y extraer con 2 porciones de 10 mL de ter etlico. Reunir las
porciones en un mismo recipiente rotulado.

Cromatografa:
- Introducir la fase mvil en una cuba cromatogrfica.
- Sembrar en placa delgada las muestras realizando varios toques con capilares,
dejando secar entre toque y toque.
- Sembrar los testigos de colesterol y lecitina.
- Realizar la corrida, hasta que la fase mvil haya alcanzado el 90% de la altura de la
placa.
- Retirar la placa de la cuba y dejar evaporar la fase mvil.
- Revelar introduciendo la placa en una cuba conteniendo I2 (s) y calentar suavemente.
- Comparar los Rf de las muestras con los testigos.

Rf = distancia recorrida por la muestra / distancia

recorrida por la fase mvil.

En el ejemplo del dibujo, para la mancha N 4, el Rf

ser b / a.

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PARTE D. SAPONIFICACIN DE LPIDOS
Introduccin: los triglicridos reaccionan en caliente con el NaOH o KOH descomponindose
en las molculas que los forman: glicerol y cidos grasos. stos se combinan con los iones Na+
o K+ para dar jabones.

Reacciones involucradas:
CH3-(CH2)n-COO-CH2 CH3-(CH2)n-COO-Na+ CH2OH
| |
CH3-(CH2)n-COO-CH + 3 NaOH CH3-(CH2)n-COO-Na+ + CHOH
| |
CH3-(CH2)n-COO-CH2 CH3-(CH2)n-COO-Na+ CH2OH
TRIGLICRIDO JABONES SDICOS
GLICEROL

Procedimiento:
- Colocar en un tubo de ensayo 2 mL de aceite vegetal y 2 mL de una solucin de NaOH
20%.
- Agitar enrgicamente y colocar el tubo a bao mara por 20 a 30 minutos.
- Transcurrido ese tiempo, se puede observar en el tubo 3 fases:
I) La inferior clara que contiene la solucin de NaOH sobrante, junto con el glicerol
formado.
II) La superior amarilla de aceite no utilizado.
III) La intermedia de aspecto grumoso, que es el jabn formado.

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 TRABAJO PRCTICO N 5
HIDRATOS DE CARBONO

PARTE A. REACCIONES DE RECONOCIMIENTO

1. Prueba de Fehling
Reactivos:
- NaOH 10%.
- CuSO4 1%.
- Azcares 1%: glucosa, fructosa, lixosa, maltosa, sacarosa, almidn.

Mtodo:
En un tubo de ensayo se vierten 2 mL de la solucin de azcar e igual volumen de NaOH 10%.
Luego de agitar, se agregan 10 gotas de la solucin de CuSO4. Se calienta a ebullicin, siendo
la reaccin positiva cuando se observa la aparicin de un precipitado amarillo (CuOH) y luego
rojo (Cu2O).

2. Prueba de Benedict:

Reactivos:
- Reactivo de Benedict.
- Azcares 1%: galactosa, arabinosa, ribosa, xilosa, lactosa.
Mtodo:
Agregue cinco gotas de la solucin problema a 2 mL del reactivo de Benedict y coloque en un
bao de agua hirviendo por 5 minutos.

3. Prueba de Bial para las pentosas:

Cuando se calientan pentosas con HCl (c) se forma furfural que se condensa con orcinol en
presencia de iones frricos para dar un color verde azul. La reaccin no es absolutamente
especfica para las pentosas, ya que el calentamiento prolongado de algunas hexosas produce
hidroximetil furfural que tambin reacciona con orcinol dando complejos coloreados.

Reactivos:
- Reactivo de Bial.
- Azcares 1%: glucosa, arabinosa, ribosa, xilosa, lixosa.

Mtodo:
En un tubo de ensayo agregue aproximadamente 1 mL de la muestra a 2,5 mL de reactivo y
caliente hasta que empiece a hervir. La aparicin de una coloracin azul verdosa indica
resultados positivos.

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4. Prueba de Seliwanoff para las cetosas:
Las cetosas se deshidratan ms rpidamente que las aldosas dando derivados de furfural que
se condensan con resorcinol para formar un complejo rojo; por lo tanto, debe evitarse un
calentamiento prolongado de la muestra que se esta estudiando.

Reactivos:
- Reactivo de Seliwanoff:
- Azcares 1%: glucosa, fructosa, sacarosa.

Mtodo:
A 2 mL del reactivo de Seliwanoff agregue dos gotas de solucin de carbohidrato y caliente
durante 1 minuto en un bao de agua hirviendo. Observe la aparicin de un color rojo intenso.

5. Prueba para sacarosas:

Reactivos:
- HCl (c).
- NaOH 5 M.
- Azcares 1%: sacarosa, glucosa.
- Reactivo de Seliwanoff.

Mtodo:
A 5 mL de solucin de sacarosa agregue cinco gotas de HCl (c), caliente durante 5 minutos en
un bao de agua hirviendo, enfre y agregue 10 gotas de NaOH hasta que la solucin sea
neutra o dbilmente alcalina. Con la solucin hidrolizada realice las pruebas de Fehling y de
Seliwanoff.

6. Prueba del yodo:

Reactivos:
- Solucin de lugol.
- Azcares 1%: almidn, glucosa, maltosa.

Mtodo:
A 1 mL de solucin agregue dos gotas de lugol y compare los colores obtenidos con los de
lugol en agua.

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 AZCAR FEHLING BENEDICT BIAL SELLIWANOFF LUGOL
GLUCOSA ---------
FRUCTOSA --------- --------- ---------
GALACTOSA --------- --------- --------- ---------
ARABINOSA --------- --------- ---------
RIBOSA --------- --------- ---------
XILOSA --------- --------- ---------
LIXOSA --------- --------- ---------
MALTOSA --------- --------- ---------
SACAROSA --------- --------- ---------
LACTOSA --------- --------- --------- ---------
ALMIDN --------- --------- ---------

ANEXO: PREPARACIN DE LAS SOLUCIONES

Reactivo de Benedict: Disuelva 173 g de citrato de sodio y 100 g de carbonato de
sodio en aproximadamente 800 mL de agua caliente. Filtre a travs de papel de filtro
en una probeta de 1000 mL y complete con agua hasta 850 mL. Mientras tanto,
disuelva 17,3 g de sulfato de cobre en aproximadamente 100 mL de agua y complete
hasta 150 mL. Vierta la primera solucin en un vaso de precipitados de 2 litros y aada
lentamente la solucin de sulfato de cobre agitando continuamente.
Reactivo de Bial: Disuelva 1,5 g de orcinol en 500 mL de HCl (c) y aada 20 gotas de
solucin de FeCl3 100 g/L.
Reactivo de Seliwanoff: Prepare una solucin de Resorcinol 0,5 g/L en HCl 3 M.

PARTE B. CROMATOGRAFA DE AZCARES

Procedimiento:
1) Preparacin de la cuba cromatogrfica:
- Poner solvente de elucin en la cuba hasta que alcance la altura de 1 cm.
- Dejarla tapada durante 30 minutos antes de efectuar la cromatografa.
2) Preparacin de la cromatoplaca de slica gel:
- Recortar una porcin de cromatoplaca de slica gel.
- Trazar una lnea con lpiz a 1 cm de uno de los extremos de la placa.
- Marcar puntos distanciados 1 cm sobre la lnea identificndolos con el nombre de la
muestra o patrn a sembrar escrito en lpiz.
3) Sembrado de las muestras:
- Con un tubo capilar tomar la muestra que se va a sembrar.

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 - Tocando con el capilar depositar una pequea gota de lquido sobre una de las
marcas numeradas de la placa, cuidando que el dimetro de las manchas no supere
los 4-5 mm. (Practicar antes con un papel de filtro). Secar con secador de pelo.
- Repetir 3 veces la operacin de siembra y secado sobre el mismo punto de la placa.
- En cada punto de la placa se sembrar una muestra diferente usando un capilar
limpio para cada siembra.
4) Corrida cromatogrfica:
- Introducir la placa en la cuba rpidamente de modo que queden las siembras del
lado de la fase mvil.
Solvente de elucin: n-propanol:acetato de etilo:agua (7:2:1)
5) Revelado:
- Pulverizar, cubriendo todo el cromatograma con la niebla del revelador.
Revelador: 1 mL de anilina y 1 g de clorhidrato de difenilamina en 50 mL de acetona con
10% de cido fosfrico (usar recientemente preparado).

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 TRABAJO PRCTICO N 6
PROTENAS

PARTE A. RECONOCIMIENTO DE PROTENAS EN ALIMENTOS

Materiales y reactivos:
Tela de algodn.
Harina de trigo.
Tubos de ensayo.
Gelatina sin sabor.
Varilla de vidrio.
Huevo.
Solucin de biuret.

A1: HARINA
Tcnica:
Pesar aproximadamente 20 g de harina y colocarla en el centro de un trozo de tela de
algodn.
Tomar el lienzo por las puntas, encerrando la harina y mojarlo con agua de la canilla
para arrastrar el almidn contenido en la harina.
Abrir la bolsita y juntar el residuo de gluten (protena) con ayuda de una esptula.
Pasar el residuo a un tubo de ensayo y agregar agua hasta 1 cm de altura.
Agregar 1 mL de agua destilada y 1 mL de solucin de Biuret.

A2: GELATINA
Tcnica:
Preparar gelatina sin sabor (seguir las instrucciones del envase).
Dejar enfriar.
Una vez solidificada pasar una porcin de la gelatina a un tubo de ensayo.
Agregar agua hasta cubrirla y deshacerlo con una varilla.
Agregar 1 mL de solucin de Biuret.

A3: HUEVO
Tcnica:
Abrir un huevo y separar la clara de la yema.
Diluir la clara con 50 mL de agua destilada.
Transferir 1 mL de solucin de clara a un tubo de ensayo.
Agregar 1 mL de solucin de Biuret.

Observaciones:

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Alimento Protena principal Coloracin con Biuret
Harina
Gelatina
Clara de huevo
Agua

Complejo azul violceo

PARTE B. COAGULACIN DE LAS PROTENAS

Procedimiento:
Romper un huevo de gallina y descartar la yema.
Tomar 1 mL de clara y realizar los siguientes ensayos, observando lo que ocurre:
a) Agregar 1 mL de HCl concentrado.
b) Agregar 1 mL de alcohol etlico.
c) Agregar 1 mL de NaOH 40%.
d) Agregar 1 mL de solucin de urea 0,25 M.
e) Agregar 1 mL de detergente.
f) Calentar a bao mara a 100C.

Tomar 3 mL de leche y realizar los siguientes ensayos, observando lo que ocurre:

a) Agregar 1 mL de HCl concentrado.
b) Agregar 3 mL de alcohol etlico.
c) Agregar 1 mL de NaOH 40%.
d) Agregar 1 mL de solucin de urea 0,25 M.
e) Agregar 1 mL de detergente.
f) Calentar a bao mara a 100C.

Alimento Protena HCl Alcohol NaOH Urea Detergente Calor

Huevo
Leche

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PARTE C. CROMATOGRAFA DE AMINOCIDOS
Patrones: aminocidos (Asp, Asn, Glu, Gln, Ser, Pro, Ala, Arg) en concentracin 0,25% en
isopropanol : agua (10:90).
Solvente de corrida: n-butanol:cido actico glacial:agua (3:1:1).
Revelador: ninhidrina 0,2% en acetona, recientemente preparada.

Materiales:
Cromatofolios recubiertos con slica gel.
Cuba cromatogrfica.
Tubos capilares.
Papel de filtro.
Embudo.
Erlenmeyer.
Varillas de vidrio.

Procedimiento:
- Sembrar los patrones de aminocidos realizando 5 a 10 toques.
- Exprimir una naranja y tomar 5 mL.
- Filtrar y agregar 15 mL de alcohol para precipitar las protenas. Volver a filtrar.
- Sembrar en el cromatofolio con 3 a 4 toques.
- Siempre que se trabaje con aminocidos hay que evitar tocar con los dedos la
superficie de las placas o del papel, puesto que la transpiracin contiene aminocidos.
- Realizar la corrida cromatogrfica utilizando la fase mvil indicada.
- Revelado: pulverizar abundantemente con ninhidrina y colocar en estufa 5 minutos.

PARTE D. REACCIN XANTOPROTEICA

Introduccin: es una reaccin coloreada basada en la formacin de un compuesto aromtico
nitrado de color amarillo, cuando las protenas son tratadas con HNO3 concentrado. La prueba
da resultado positivo en aquellas protenas con aminocidos portadores de grupos bencnicos,
especialmente en presencia de tirosina. Si una vez realizada la prueba se neutraliza con un
lcali, vira a un color anaranjado oscuro.

Procedimiento:
- Introducir en un tubo de ensayo 3 mL de clara de huevo.
- Aadir 1 mL de HNO3 concentrado.
- Calentar a bao mara a 100 C.
- Enfriar en un vaso con agua fra.
- Aadir gota a gota una solucin de NaOH 40%.

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PARTE E. REACCIN DE AMINOCIDOS AZUFRADOS
Introduccin: se pone de manifiesto por la formacin de un precipitado negruzco de sulfuro de
plomo. Esta reaccin se basa en la separacin mediante una base, del azufre de los
aminocidos, el cual al reaccionar con una solucin de acetato de plomo, forma el PbS.

Procedimiento:
- Introducir en un tubo de ensayo 3 mL de clara de huevo.
- Aadir 2 mL de solucin de NaOH 20%.
- Aadir 10 gotas de solucin de acetato de plomo 5%.
- Calentar el tubo hasta ebullicin.
- El precipitado negro indica que se form PbS, utilizndose el azufre de los
aminocidos.

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 TRABAJO PRCTICO N 7
ENZIMAS

PARTE A. DESCOMPOSICIN DE H 2O 2 CON CATALIZADOR

INORGNICO

Procedimiento:
- Agregar a un tubo de ensayo 1 mL de agua oxigenada comercial.
- Agregar al tubo unos cristales de dixido de manganeso.
- Realizar un blanco en otro tubo agregando 1 mL de agua destilada.

OBSERVACIONES
H2O2
H2O

PARTE B. DESCOMPOSICIN DE H2O2 CON ENZIMAS. MODIFICACIN

DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA POR LA TEMPERATURA

Procedimiento:
- Cortar daditos pequeos de papa (de unos 0,5 cm de lado).
- Hervir algunos de ellos (NO TODOS!!!).
- En un tubo de ensayo agregar 1 mL de H2O2 y un dadito de papa cruda.
- En otro tubo de ensayo agregar 1 mL de H 2O2 y un dadito de papa hervida.

OBSERVACIONES
PAPA CRUDA
PAPA HERVIDA

PARTE C. MODIFICACIN DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA SEGN LA

ACIDEZ DEL MEDIO

Procedimiento:
- Triturar un trocito de zanahoria junto con 5 mL de solucin reguladora de pH 7 para
extraer la enzima del tejido vegetal.
- Filtrar y recoger el lquido obtenido.
- Tomar 3 tubos de ensayo y colocar:

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TUBO
1 1 mL de filtrado + 1 mL de NaOH 0,1 M
2 1 mL de filtrado + 1 mL de HCl 0,1 M
3 2 mL de filtrado

- Luego agregar a cada uno de los tubos 3 mL de H2O2.

TUBO OBSERVACIONES
1
2
3

Solucin reguladora pH 7:
50 mL de KH2PO4 0,1 M (13 g/L) + 29 mL de NaOH 0,1 M

PARTE D. ACCIN DEGRADADORA

Procedimiento:
- Introducir saliva en tres tubos de ensayo.
- Hervir uno de los tubos con saliva a bao mara.
- Agregar a uno de los tubos 1 mL de solucin de HCl.
- Agregar 3 mL de solucin de almidn 1% a los tres tubos de ensayo.
TUBO
1 3 mL de solucin de almidn + saliva
2 3 mL de solucin de almidn + saliva hervida
3 3 mL de solucin de almidn + saliva + HCl

- Agregar a cada tubo 3 gotas de reactivo de lugol e incubar a 37 C en oscuridad.

- Observar el aspecto de los tubos cada 30 minutos y registrar las diferencias de color y
justificar.

PARTE E. ENZIMAS EN EL JABN PARA LAVAR LA ROPA

E1: Gelatina
Proteasas Tcnica:
- Preparar gelatina como indica el fabricante. Dejar que solidifique.
- Tomar una porcin de la misma y agregar 10 mL de agua.
- Agregar 5 g de jabn en polvo.
- Incubar 1 hora a 37 C.

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PARTE F. INHIBICIN ENZIMTICA
Introduccin:
Los vegetales contienen compuestos fenlicos tales como el aminocido tirosina. Estos fenoles
pueden transformarse en catecoles por accin de la enzima fenol hidroxilasa, en presencia de
O2. A su vez, los catecoles pueden oxidarse por accin de otra enzima, la polifenol oxidasa, a
orto quinonas. Por su parte, estas ltimas polimerizan y dan lugar a compuestos de color
oscuro llamados melaninas. Ambas enzimas utilizan al Cu2+ como cofactor.

FENOL CATECOL ORTO QUINONA MELANINAS

L-Tyr L-Dopa Dopaquinona

Los vegetales a utilizar pueden ser: manzana, banana, pepino.

Tcnica:
- Pelar un vegetal y cortar fetas.
- Tomar 2 fetas y colocarlas: una en estufa a 37C y la otra en heladera a 4C.
- Tomar 2 fetas y rociarlas con jugo de limn. Colocar una muestra en estufa a 37C y la
otra en heladera a 4C.
- Tomar 2 fetas y calentarlas a 100C durante 5 minutos. Luego colocar una feta en
estufa a 37C y la otra en heladera a 4 C.

4C 37C Limn Limn Hervida Hervida

Vegetal
4C 37C 4 C 37C

PARTE G. ENZIMAS PRESENTES EN MICROORGANISMOS

1) Catalasa Tcnica:
- Tomar con un palillo una colonia de Staphylococcus aureus y depositarla en un
portaobjetos.
- Realizar lo mismo con una colonia de Escherichia coli, depositndola en el
mismo portaobjetos.
- Agregar a cada una de las colonias una gota de H2O2. Observar.

2) Oxidasa: prueba utilizada para la deteccin de la enzima citocromo-c-oxidasa,

presente en los gneros Pseudomonas, Neisseria, Moraxella, Vibrio, Aeromonas, entre
otros.

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 Tcnica:
- Sobre un portaobjetos colocar un disco de oxidasa y humedecer con una gota
de agua. Observar el color inicial.
- Luego colocar una colonia de Pseudomonas aeruginosa tomada de una placa
de petri con un palillo. Observar el color.

IMPORTANTE: LOS PALILLOS Y PORTAOBJETOS DEBERN

DESCARTARSE EN UN FRASCO CONTENIENDO SOLUCIN DE
HIPOCLORITO DE SODIO.

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 TRABAJO PRCTICO N 8
FERMENTACIN ALCOHLICA

Introduccin:
La sidra es una bebida elaborada y consumida desde hace cientos de aos. Se obtiene a partir
de un jugo de manzana azucarado, el cual es fermentado por una levadura, Saccaromyces
cereviaciae. Este microorganismo fermenta los azcares presentes en el jugo de manzana y
otros agregados artificialmente y como productos se obtiene etanol y CO 2. Es por esto que las
levaduras realizan fermentacin alcohlica.

Objetivos:
- Fabricar sidra a partir de un jugo de manzana en presencia de levaduras.
- Evaluar las mejores condiciones para la obtencin de sidra, en funcin de la cantidad
de alcohol producido.

Tcnica:
- Medir 250 mL de jugo de manzana y colocarlo en una botella.
- Pesar 1 g de levadura de cerveza y colocarlo en la botella.
- Agregar un sobrecito de azcar (6 g).
- Cerrar la botella e incubar durante 5 das a 25 C.
- Otros grupos de trabajo debern seguir el presente esquema:
Grupo Temperatura de Tiempo de Jugo de Azcar Levaduras
incubacin (C) incubacin (das) manzana
1 28 5 S S S
2 37 2 S S S
3 4 7 S S S
4 28 5 S No S
5 28 5 S No No

Determinacin de la graduacin alcohlica:

Este mtodo consiste en determinar el ndice de refraccin del destilado alcohlico mediante el
uso del refractmetro de Abbe y posterior transformacin a Gay Lussac mediante el uso de
tablas. Tambin se puede determinar el grado alcohlico mediante el uso de aremetros
graduados en grados y dcimas de grados Gay Lussac.

Tcnica:
- Medir 100 mL de sidra en matraz aforado previamente enjuagado con la muestra.
- Verter el contenido del matraz en un tubo Kjeldahl, lavando el matraz con pequeas
porciones de agua destilada.
- Neutralizar con NaOH 30% verificando con papel de pH.

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 - Destilar hasta recoger 75 mL, sobre 5 mL de agua destilada. Llevar a volumen final de
100 mL. Homogeneizar perfectamente.

Refractometra:
- Cargar el refractmetro con unas gotas del destilado.
- Leer el ndice de refraccin.
- Transformar el parmetro en Gay Lussac.

Anexo I: Cdigo Alimentario Argentino.

Artculo 1085. - (Res Conj. SPRyRS y SAGPyA 87 y 566/04)
Sidra Base es la bebida que resulta exclusivamente de la fermentacin alcohlica normal del
jugo recin obtenido de manzanas sanas y limpias, de uso industrial, con o sin la adicin de
hasta un 10% de jugo de peras obtenido en idnticas condiciones que el jugo de manzana y
fermentado en forma conjunta o separada. Su graduacin alcohlica mnima ser de 4,5% en
Vol. 0,3 a 20C."
Artculo 1085 bis (Res Conj. SPRyRS y SAGPyA 87 y 566/04)
Sidra es la sidra base, endulzada y gasificada. Su graduacin alcohlica mnima ser de 4,0%
en Vol. 0,3 a 20C.

Anexo II: tabla de conversin de ndice de refraccin a % v/v de alcohol.

n % v/v n % v/v n % v/v n % v/v
alcohol alcohol alcohol alcohol
1,3333 0,7 1,3381 11,7 1,3484 31,0 1,3621 71,0
1,3336 1,5 1,3384 12,4 1,3498 33,7 1,3626 73,6
1,3339 2,3 1,3388 13,1 1,3511 36,4 1,3630 76,1
1,3342 3,0 1,3392 13,8 1,3524 39,1 1,3634 78,7
1,3345 3,7 1,3395 14,5 1,3535 41,8 1,3638 81,2
1,3348 4,5 1,3403 15,9 1,3546 44,5 1,3641 83,6
1,3351 5,2 1,3410 17,3 1,3557 47,2 1,3644 86,1
1,3354 5,9 1,3417 18,7 1,3566 49,9 1,3647 88,5
1,3357 6,7 1,3425 20,0 1,3575 52,6 1,3650 90,9
1,3360 7,4 1,3432 21,4 1,3583 55,3 1,3652 93,3
1,3364 8,1 1,3440 22,8 1,3590 57,9 1,3654 95,7
1,3367 8,8 1,3447 24,2 1,3598 60,6 1,3655 98,0
1,3370 9,5 1,3455 25,5 1,3604 63,2 1,3657 100,3
1,3374 10,2 1,3462 26,9 1,3610 65,9
1,3377 11,0 1,3469 28,2 1,3616 68,5

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 TRABAJO PRCTICO N 9
FERMENTACIN LCTICA

Introduccin:
El yogur es un producto lcteo obtenido mediante la fermentacin bacteriana de la leche. Si
bien se puede emplear cualquier tipo de leche, la produccin actual usa predominantemente
leche de vaca. La fermentacin de la lactosa (el azcar de la leche) en cido lctico es lo que
da al yogur su textura y sabor tan distintivo. A menudo se le aade fruta, vainilla, chocolate y
otros saborizantes, pero tambin puede elaborarse sin aadidos. Las bacterias lcticas que se
deben utilizar segn el Cdigo Alimentario Argentino son: Lactobacillus delbrueckii subsp.
bulgaricus y Streptococcus salivarius subsp. termophilus.

Tcnica:
- Tomar una pequea muestra de yogur comercial y realizar un extendido para
coloracin de Gram.
- Medir 100 mL de leche fluida y calentar a 80C durante 10 minutos. Este proceso se
denomina tyndalizacin y se realiza si se parte de leche cruda o si el envase no
est cerrado.
- Enfriar la leche a 37C.
- Agregar 4 g de leche en polvo.
- Agregar 6 g de azcar y 10 g de yogur.
- Incubar a 44C durante 3-4 horas.

Determinaciones de acidez:
- Tomar 10 mL de leche, agregar 2-3 gotas de fenolftalena y titular con NaOH 0,1 N
hasta coloracin rosada plida que se mantenga ms de 30 segundos. Corresponde a
la casilla Leche fluda.
- Tomar 10 mL de leche + 0,4 g de leche en polvo y proceder de igual forma.
Corresponde a la casilla Leche f+p.
- Tomar 10 mL de yogur comercial y proceder de igual forma. Corresponde a la casilla
Yogur.
- Una vez que se puso a incubar la leche, se deben tomar 10 mL de muestra cada 30
minutos y proceder de igual forma. Corresponde a las casillas M1, M2, etc.

Clculo: V x N)NaOH = mEq cido lctico

PEq cido lctico = 90,08
1 Dornic = 0,01 % m/v cido lctico

Microscopa:
Realizar sobre el extendido preparado una tincin de Gram. Los pasos son:

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 Fijar por calor Violeta de genciana
Lugol Lavar c/ H2O
2
1

Lavar c/ H2O Safranina Lavar c/ H2O Decolorante

1

Temp. Leche Leche Yogur M1 M2 M3 M4 M5

Incubacin fluida f+p
30 60 90 120 150

4 C

28 C

37 C

44 C

Nota: expresar los valores de acidez en Dornic.

En total, la divisin deber traer para la realizacin del TP:

2 litros de leche.
100 gramos de leche en polvo.
100 gramos de azcar.
2 yogures de 200 mL enteros, firmes de vainilla o sabor natural.

Anexo I: Cdigo Alimentario Argentino.

Artculo 576 - (Res Conj. SPyRS y SAGPA N 33/2006 y N 563/2006)
Se entiende por Yogur o Yoghurt o Iogurte, en adelante Yogur, el producto incluido en la
definicin 1) cuya fermentacin se realiza con cultivos protosimbiticos de Lactobacillus
delbrueckii subsp. bulgaricus y Streptococcus salivarius subsp. thermophilus a los que en forma
complementaria pueden acompaar otras bacterias acidolcticas que, por su actividad,
contribuyen a la determinacin de las caractersticas del producto terminado.

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 TRABAJO PRCTICO N 10
SANGRE

PARTE A: ANLISIS DE GRUPO Y FACTOR SANGUNEO

Procedimiento:
- Esterilizar la yema de un dedo, preferentemente de la mano que no se utiliza para
escribir, mojndolo con un algodn embebido en alcohol.
- Con una lanceta estril, realizar un pinchazo en la yema del dedo previamente
desinfectado.
- Apretar la yema del dedo de modo que gotee sangre, dejando caer tres gotas, cada
una sobre un diferente portaobjetos.
- En el primer portaobjetos agregar una gota del reactivo Anti A, en el segundo agregar
una gota del reactivo Anti B y en el tercero agregar una gota del reactivo Anti D o
Anti Rh.
- Observar los cambios producidos, interpretando como positivo cuando se observa
aglutinacin.
- Realizar una estadstica del curso y comparar con los valores mundiales.

PARTE B: TENSIN ARTERIAL

Procedimiento:
- Colocar uno de los brazos a la altura del corazn, apoyndolo en una mesa o el brazo
del silln.
- Colocar la manga alrededor del brazo desnudo, entre el hombro y el codo.
- Colocar la campana del estetoscopio en la flexura del codo, justo por debajo del
manguito del esfigmomanmetro.
- Bombear la pera con rapidez hasta que la presin alcance 30 mm Hg ms de la
mxima esperada.
- Desinflar el manguito lentamente, haciendo que la presin disminuya 2 a 3 mm Hg por
segundo. Escuchar el sonido del pulso a medida que cae la presin. Cuando el latido
se hace audible, anotar la presin, que es la presin mxima o sistlica. Seguir
desinflando. Cuando el latido deja de orse, anotar de nuevo la presin, que es la
presin mnima o diastlica.
- Repetir el proceso al menos una vez ms para comprobar las lecturas.

PARTE C: PULSO RADIAL

Procedimiento:

QUMICA BIOLGICA GUA DE TRABAJOS PRCTICOS 2017 26

 - Colocar las puntas de los dedos ndice y medio en la parte interna de la mueca por
debajo de la base del pulgar.
- Presionar ligeramente. Se sentir la sangre pulsando por debajo de los dedos.
- Usar un reloj y contar los latidos sentidos durante 10 segundos.
- Multiplicar este nmero por 6 para obtener la cantidad de veces que el corazn est
latiendo en un minuto.

APNDICE 1: DISTRIBUCIN DE LOS GRUPOS SANGUNEOS

% 0+ A+ B+ AB+ 0- A- B- AB-
MUNDIAL 36,44 28,27 20,59 5,06 4,33 3,52 1,39 0,45
ESPAA 35 36 8 2,5 9 7 2 0,5
ITALIA 40 36 7,5 2,5 7 6 1,5 0,5
POLONIA 31 32 15 7 6 6 2 1
ALEMANIA 35 37 9 4 6 6 2 1

APNDICE 2: VALORES DE REFERENCIA TENSIN ARTERIAL

Sistlica: 120 mm Hg.

Diastlica: 80 mm Hg.

Fuente: OMS.

APNDICE 3: VALORES DE REFERENCIA FRECUENCIA CARDACA

Nios mayores de 10 aos y adultos (en reposo): 60 a 100 pulsaciones por minuto.

Fuente: National Institute of Health EEUU.

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 TRABAJO PRCTICO N 11

ORINA

IMPORTANTE: EL ANLISIS DE ORINA COMPLETA SE DEBE REALIZAR CON LA

PRIMERA ORINA DE LA MAANA

Objetivo: realizar el anlisis fisicoqumico y microscpico de la orina.

PARTE A: ANLISIS FISICOQUMICO

Procedimiento:
- Introducir la tira reactiva en el frasco de modo que se moje completamente con la
muestra de orina.
- Leer los parmetros medidos en los tiempos indicados.

PARTE B. ANLISIS MICROSCPICO

Procedimiento:
- Cargar cuidadosamente un tubo cnico para centrfuga con la muestra de orina.
- Introducir los tubos en la centrfuga de modo de que queden equilibrados (muy
importante).
- Encender el aparato y centrifugar las orinas durante 15 minutos a 2500-3000 rpm.
- Descartar el sobrenadante dejando unas gotas de lquido.
- Sobre un portaobjetos, volcar el contenido del tubo previamente homogeneizado y
cubrir con cubreobjetos.
- Mirar en el microscopio a 400x y 1000x.

PARMETRO VALOR PARMETRO VALOR

Color Bilirrubina
Aspecto Urobilingeno
Densidad Leucocitos
pH Hemoglobina
Protenas Nitritos
Glucosa Acetona

EXAMEN MICROSCPICO DEL SEDIMENTO

Clulas: Leucocitos:
Piocitos: Hemates:
Cristales: Cilindros:
Filamentos mucosos:

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 Cristales:

Clulas:

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