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Espectroscopa infrarrojo

cercano

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Diagrama de Morse

Molecula diatmica: A-B

R0: distancia interatmica normal

c) Ionization

La energa est cuantizada

A A* Tipo de excitacin: depende de la energa entregada

-Rotacional (solo se observa en gases)
-Vibracional E = h = hc/
-electrnica

El comportamiento de la molcula
diatmica se puede describir en
base al oscilador armnico cuntico:

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F = -k r Ley de Hook
F=mxa 1 ley de Newton
-k r = m x a
-k r = m x d2 r Ec. diferencial. Ec. del movimiento del
d2t2 oscilador armnico lineal

Solucin (una de las posibles)

r = a sen (k/m x t ) El incremento de la distancia (r)
respecto de la distancia de equilibrio es
funcin peridica del tiempo, t, de forma
sinusoidal

Tambin se puede escribir r = a sen (2put)

r 2put = k/m t
a u= 1 (k/m) u: frecuencia
2p
u= 1 (k/m) u: nmero de onda
t 2pc
-a u= 1 (k/m) m: masa reducida m = M1 M2/M1 + M2
2pc

m Momento dipolar: m = q x d (carga por distancia)

Si la distancia tiene una dependencia sinusoidal del tiempo, el
momento dipolar tambin. Cuando una molcula diatmica
heteronuclear vibra, se genera un momento elctrico dipolar
t oscilante, que emite radiacin electromagntica de la misma
frecuencia que la de la vibracin. Anlogamente, una molcula
expuesta a una radiacin electromagntica puede absorber energa
de la frecuencia coincidente con la de la vibracin y vibrar con un
aumento de la amplitud!

FH, CO, NO Molculas diatmicas heteronucleares

Tienen me 0, mayor o menor segn la diferencia de electronegatividad
entre los 2 tomos. Entonces al vibrar me vara y emiten radiacin
electromagntica. Tambin absorben en presencia de la radiacin de la energa apropiadada.
Dan lugar a una banda de absorcin en el espectro infra-rojo, de una u dada . Adems
aparecen otras bandas mas dbiles situadas a 2 u, 3 u, etc., llamadas armnicos o sobretonos,
y que se deben a que las vibraciones moleculares no son estrictamente armnicas.

H2, O2, N2, F2 Molculas diatmicas homonucleares

No tienen momento dipolar permanente (me = 0) pues la distribucin
electrnica del enlace es simtrica respecto del centro del enlace. Al vibrar la malcula su m
sigue siendo = 0 , por lo tanto no hay absorcin de radiacin electromagntica, porque no hay
dipolo oscilante. No presenta bandas en el IR

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u= 1 (k/m) m: masa reducida m = M1 M2/M1 + M2

2pc k: constante de fuerza

Si k aumenta, el resorte es mas fuerte aumenta u

Ej: C-C 800-1200 cm-1

C=C 1600-1680 cm-1

CC 2100-2250 cm-1

Si m disminuye, aumenta u (efecto isotpico)

Ej: CH3OH m = 16 x 1 /16+1 = 0.94

CH3OD m = 16 x 2 /16+2 = 1.77 La frecuencia de la vibracin
es menor

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Ej: C=O, molcula lineal 3N-5= 1 streching

O=C=O, 3N-5= 4 tensin simtrica

tensin asimtrica
flexin en el plano
flexin fuera del plano

Las vibraciones de flexin son degeneradas.

Las vibraciones de tensin aparecen a frecuencias mayores

Ej: H2O 3N-6= 3

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Una molcula puede ser modelada como un sistema de osciladores

acoplados, descriptos aproximadamente por un movimiento armnico
cuntico. Por compleja que sea una molcula su modelo vibracional es
una combinacin de sus modos normales de vibracin. Cada modo
normal tiene su propia curva de energa potencial.

H H H
H
C C C
H H C H H
H H H
H
modo asimtrico modo simtrico modo simtrico
los tres se estiran modo asimtrico
dos se estiran y uno 1375 cm-1
y contraen en fase 1450 cm-1
se contrae
2962 cm-1 2872 cm-1

H H
C C
H H

modo asimtrico modo simtrico

1350 cm-1 1150 cm-1

modos fuera del plano

Espectroscopia vibratoria

Una molcula compuesta por n tomos tiene 3n grados de libertad, seis de los
cuales son traslaciones y rotaciones de la molcula por s misma. Esto deja 3n-
6 grados de libertad vibracional (3n-5 si la molcula es lineal). A los modelos
vibracionale usualmente tienen nombres caractersticos como "stretching",
"bending", "scissoring", "rocking" y "twisting". La molcula de 4 tomos de
formaldehido, cuyo espectro en fase gaseosa se muestra, provee un ejemplo
de estos trminos.

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La frecuencia exacta a la que ocurre una vibracin, es funcin de la fuerza de los enlaces en
cuestin y la masa de los tomos. En la prctica, el espectro infrarrojo no muestra
normalmente seales de absorcin separadas para cada uno de los 3n-6 modos de vibracin
de una molcula. El nmero de absorciones se puede incrementar por una suma y substraccin
de interacciones que resultan en una combinacin de tonos de las frecuencias fundamentales
de vibracin.

Adems el nmero de absorciones observadas puede ser menor por simetra molecular,
limitaciones del espectrmetro y reglas de seleccin espectroscpicas.

Una regla de seleccin que influencia la intensidad de las absorciones infrarrojas, es que un
cambio del momento en un dipolo debe ocurrir para una vibracin y absorber la energa
infrarroja. Las bandas de absorcin asociadas al enlace C=O "stretching" son usualmente muy
fuertes porque un cambio muy grande del dipolo sucede en ese modo. Para el etileno, en
cambio, las bandas se observan en la misma frecuencia (fuerza de enlace comparable), pero
son bandas de poca intensidad.

Regiones tpicas de un espectro IR

La frecuencia exacta de una transicin para un enlace determinado va a depender entre
otras cosas de la fuerza del enlace y de la masa de los tomos en los extremos del enlace

Notar que las regiones coloreadas de azul por arriba de la linea punteada se refiere a
"stretching vibrations", y la banda verde coloreada debajo de la lnea punteada se refiere a
las vibraciones "bending". La complejidad del espectro infrarrojo en la regin de 1450 a 600
hace difcil asignar todas las bandas de absorcin, y dados los patrones nicos encontrados
aqu, es comunmente llamada la regin fingerprint (huella digital en espaol). Las bandas de
absorcin que estn en la regin de los 4000 a 1450 son usualmente debidas a vibraciones
"stretching" de unidades diatmicas, y a veces es llamada la regin frecuencia de grupo.

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ZONAS CARACTERISTICAS DE ABSORCION INFRARROJA

Todos los enlaces de una molcula van a sufrir transiciones vibracionales, cada
una con una frecuencia determinada y caracterstica, y cada una de estas
transiciones va a provocar una banda de absorcin
El espectro IR va a registrar todas estas bandas

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Espectro IR del ciclobutanol

Espectro IR de la butanona

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Espectro IR del isobutiraldehido

Son importantes: Intensidad de la banda, forma y la u

Para cuantificar vario componentes, se elige una para cada uno

Si a una contribuyen varios componentes,
Atotal= eici d y se arman n ecuaciones con n incgnitas.

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Una de las grandes ventajas de la espectroscopa por infrarrojo es que virtualmente,

cualquier muestra en cualquier estado puede ser estudiada. Lquidos, soluciones,
pastas, polvos, pelculas, fibras, gases y superficies, pueden ser examinadas eligiendo
un buen modo de muestreo.

Los espectrometros han estado comercialmente disponibles desde 1940. En ese

tiempo, los instrumentos utilizaban un prisma como elemento de dispersin, pero a
mediados de 1950, las rejillas de difraccin, se introdujeron en los 1nstrumentos de
dispersin. Los avances mas significativos en la tcnica, llegaron como resultado de la
introduccin de la Transformada de Fourier en la espectrometra. ste tipo de
instrumentos utiliza un interfermetro (inventado por Albert Abraham Michelson), y
explota el proceso matemtico de la Transformada de Fourier. La espectrometra por
infrarrojo por transformada de fourier, increment dramticamente la calidad de los
espectros infrarrojos y minimiz el tiempo para adquirir la informacin.

Espectrofotmetros IR Dispersivos: utilizan redes o prismas y se mide punto a

punto la energa emergente de la muestra (luz ransmitida
en funcin de .

No dispersivos: utilizan interfermetro ((luz transmitida

en funcin de t) Transformada de Fourier
Rapidez
Precisin
Sensibilidad (repeticin de experimentos y suma
de espectros)

El proceso de muestreo depende en gran medida del tipo de muestra que ser
examinada, si se encuentra en estado slido, lquido o gaseoso.

FT IR

Los componentes bsicos de un espectrmetro FT IR, se muestran en la figura. La radiacin surge de la

fuente y es pasada a travs de un interfermetro a la muestra antes de alcanzar el detector. Se hace
una amplificacin de la seal, en donde se eliminan las contribuciones de alta frecuencia por un filtro, la
informacin se convierte en forma digital -ceros y unos-, por un convertidor analgico digital y pasado a
la computadora para aplicar la Transformada de Fourier.

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FUENTE: debe ser de intensidad elevada y constante

La fuente de radiacin IR puede ser una cermica contaminada con xidos de

Zirconio, Torio y Cesio, conocida como filamento de Nerst. Esta cermica es
calentada al rojo elctricamente hasta 1000-1800 C y entonces emite en el rango
de energas del IR
Otra fuente de radiacin es el Globar, que es una pequea esfera de carburo de
silicio, que al ser calentada al igual que la anterior, emite una radiacin de amplio
espectro que va desde los 5500 cm-1 hasta los 600 cm-1. El Nerst en cambio,
muestra un espectro de energa o frecuencia que va desde 7100 cm-1 hasta los 550
cm-1. Estos rangos de frecuencia son ms que suficiente para los espectroscopistas
orgnicos. Ellos necesitan el rango que va desde los 4000 cm-1 hasta los 650 cm-1
aproximadamente. Sin embargo en los 2 caso la intensidad disminuye al aumentar
, y llega a ser muy pequea a 10 mm.

Adems los equipos modernos pueden presentar un lser (He-Ne) que permite la
medicin muy precisa de la longitud de onda, a travs de la medicin de la posicin
del espejo mvil.

LA DETECCION: se basa en detectar el calor producido, ya que la luz involucrada

es de baja energa, y esto dificulta su medicin precisa. Se utilizan termocuplas:
formada por una junta de 2 materiales diferentes. Cuando la energa radiante se
enfoca en esa junta, debido a la diferentes caractersticas de los 2 metales, un
lado de la junta se calienta ms que el otro. Esta diferencia de energa trmica
provoca una corriente de e- y da como resultado un pequeo V, proporcional al
calor incidente.

Interfermetro de Michelson
El interfermetro mas usado en la espectrometra FT IR, es el de Michelson, que consiste en dos espejos
colocados perpendicularmente, uno de los cuales puede moverse en direccin perpendicular al plano. Una
pelcula semi-reflectante, el beamsplitter, "parte" a la luz en dos y bisecta el plano en el que se encuentran
los otros dos espejos. El material del beamsplitter se elige de acuerdo a la regin del espectro que se
quiere examinar. Materiales como el germanio u xido de hierro se cubren con una capa de substrato
"transparente al infrarrojo" como el bromuro de potasio yoduro de cesio para producir beamsplitters
para la regin media y cercana al infrarrojo. Delgadas pelculas como el poly(ethyleneterephthalate), se
usan en para el lejano-infrarrojo.

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ste mtodo se basa en la idea de causar una interferencia entre dos rayos de luz
infrarroja, para hacer un "interferograma". Lo ltimo es una seal producida como
funcin del cambio de las distancias recorridas entre los dos rayos. Los dominios de
distancia y frecuencia, son interconvertibles a travs de la transformada de Fourier.

Ventajas de IR-TF:
Todas las se miden al mismo tiempo (estabilidad fuente,
rapidez, suma o acumulacin de espectro)

La cantidad de energa que alcanza el detector es mayor

por el fenmeno de interferencia: sensibilidad, anlisis de
Transformada de Fourier
trazas, microespectroscopa

Precisin en la medicin de las frecuencias: Cada

corresponde a una posicin del espejo mvil, y se mide con
el lser

Posibilidad de acoplar a CG o HPLC

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La celda o porta-muestra, puede ser segn el propsito, para analizar gases, lquidos y
slidos. En gases, las celdas disponibles tienen entre 10 y 40 cm de longitud y los
espectros en estos casos son el resultado del paso, a travs de la celda con mltiples
reflexiones, de manera que, en realidad la luz ha recorrido muchas veces la longitud de la
celda antes de llegar al detector. De los lquidos pueden ser obtenidos los espectros en ya
sea compuestos puros o en soluciones diluidas de aquellos. Los lquidos puros se colocan
entre dos placas de bromuro de sodio (se pueden lograr espesores de hasta 0,01 mm o
menores). Las soluciones diluidas son colocadas entre dos ventanas de cloruro de sodio o
bromuro de sodio, rodeadas de anillos espaciadores que delimitan las celdas
espectroscpicas a algunas fracciones de milmetro de espesor. En estos casos deben ser
muy bien seleccionados los solventes a utilizar. El CCl4 y el CS2 son complementarios en
estas tareas. Ambos solventes son invisibles en regiones sobre los 1333 cm-1 para el CCl4 y
bajo los 1333 cm-1 para el CS2. Pueden hacerse muchas combinaciones de solventes que
cubran diferentes ventanas entre los 4000 cm-1 y los 600 cm-1. (Ventana es aquella porcin
del espectro IR, en el cual el solvente tiene una muy baja absorcin de radiacin, es decir,
es trasparente a la radiacin infrarroja). En todos los casos las paredes del contenedor de
la muestra deben ser transparentes a todo el rango de la radiacin (4000-600 cm-1). Esto
se consigue con ventanas hechas de cristales de Bromuro o Cloruro de sodio.

SOLVENTE Regin no til cm -1 Regin no til cm-1

CHCl3 600-820 1175-1250

C2Cl4 750-950
C6H6 benceno 600-750 3000-3100
CH2Cl2 600-820 1200-1300
ACETONA 1100-1850 2800-3000
DMSO 900-1100
TOLUENO 600-750 2800-3200

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Preparacin de una muestra slida en disolucin de KBr

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IR cercano: sobretonos y combinaciones lineales de modos vibraciones fundamentales, 0.8-2.5 mm

IR medio: vibraciones fundamentales, 2.5-25 mm
IR lejano: movimientos rotacionales, 25-1000 mm

Espectroscopa infrarrojo cercano (NIR)

La Ciencia de los Alimentos ha utilizado mas frecuentemente la espectroscopa de IR cercano,

pues histricamente fue la primera en poder aplicarse a materiales heterogneos, como es el
caso de los alimentos. Posteriormente, con el advenimiento de la TF, el IR medio (mas
sensible, mayor resolucin, mayor facilidad para la asignacin) mostr el potencial de esta
tcnica para materiales heterogneos.

Los alimentos generalmente tienen un gran contenido de agua, que absorbe intensamente en el
IR medio, resultando una transmisin pobre, y mucha dispersin: deteccin pobre, tiempos
largos de adquisicin. El advenimiento del IR TF dio la posibilidad de proveer mas energa a la
muestra y al hacer barridos rpidos, poder sumarlos, y as obtener una relacin seal-ruido
aceptable, y eliminar la absorcin del agua por sustraccin espectral (supresin). Solucionados
estos problemas el IR medio posibilita mejores asignaciones y resoluciones que el IR cercano.

En el IR lejano puede obtenerse informacin por ej. del grado de vibracin rotacional del agua
y evaluar en base a esto la humedad de una muestra. Tambin se estudian los movimientos de
molculas, como polmeros, y se relaciona con el peso molecular

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Bases del Infrarrojo Cercano

Durante ms de 30 aos la Espectroscopia en el Infrarrojo Cercano (NIR) ha sido usada como

una tcnica analtica rpida para alimentos, granos y otros productos agrcolas. El NIR permite
anlisis rpidos y no destructivos sin necesidad de reactivos o metodologas complejas. Incluso
es tan sencillo como para ser operado por personal no tcnico.

En el sentido ms simple, los anlisis NIR se realizan iluminando una muestra con luz en la regin
espectral del infrarrojo cercano y analizando la luz con la que ha interaccionado. La luz de una
longitud de onda determinada interacciona con los componentes qumicos especficos presentes
en la muestra. Por ejemplo, midiendo la absorcin en aquellas longitudes de onda que
interaccionan con las protenas es posible determinar el porcentaje de protena presente en una
muestra.

Determinaciones usuales: H2O, protenas, lpidos, hidratos de carbono

Los instrumentos NIR precisan de calibraciones para analizar muestras. Estos instrumentos se
han concebido para recoger datos de los espectros de muestras de composicin conocida y
aplicando entonces tcnicas quimiomtricas que relacionan los datos de los espectros con la
composicin qumica. Se dispone de calibraciones estndar para muchos productos disponiendo de
un programa opcional para desarrollar nuevas calibraciones.

Los espectros NIR contienen informacin abundante. las bandas

de absorsin se deben a la combinacin lineal y sobretonos (n)
de bandas fundamentales de absorsin de las uniones C-H, O-
H and N-H de las molculas qumicas del material a analizar.
Los espectros son complejos, y la superposicin de bandas hace
que se vean como un continuo.
La interpretacin es dificil, pero una vez identificada una
banda es muy sencillo cuantificar en base a la intensidad de la
misma.

El NIR es parte de la regin del espectro electromagntico comprendido entre los 700 a 2500
nanmetros, y es la porcin del espectro en el cual las muestras observan una baja absorcin
comparado con otras regiones del infrarrojo. La baja absorcin permite que la radiacin
infrarroja penetre muestras sin preparacin, modificacin o dilucin. La radiacin incidente
provoca la vibracin de los enlaces covalentes de las uniones Carbono Hidrgeno, Oxgeno
Hidrgeno y Nitrgeno Hidrgeno.

El NIRS se caracteriza por ser un mtodo no destructivo, no contaminante y rpido para

el anlisis de pasturas, raciones, silo, y otros productos agrcolas.

Figura 1. Espectro NIRS de materias primas

recogidos en el equipo Foss NIRSystem
6500 con diferentes contenidos en Aflatoxina
B1: 1. no contaminada; 2. contenido entre 20
y 50 ppb, 3. contenido superior a 50 ppb.
AA= aminocidos

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Figure 4. Sulfamethazine
absorbance scans showing
spectral shift with tablet
crushing strength for tablets
with crushing strengths
ranging from 10.1 kP to 15.6
kP

Figure 5. Second
derivative scans for
neat sulfamethazine,
corn starch, and
magnesium stearate
powders as received
from supplier.

Figura 3. Espectro infrarrojo de muestras de ensilaje de maz (lnea punteada) y

desviacin estndar de los espectros (lnea entera).

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Reflectancia NIR vs. Transmisin NIR

En la prctica, la muestra a ser analizada es bombardeada con rayos NIR de diferentes longitudes
de onda. Por cada longitud de onda, algunos de los rayos sern entonces absorbidos por uniones
qumicas especficas. Al mismo tiempo, otros rayos sern diseminados y reflejados por otras
uniones qumicas. Este proceso es comnmente descrito como Reflectancia NIR. En contraste,
algunos de los rayos pasarn a travs de la muestra, lo cual es denominado Transmisin NIR (a
menudo referida como NIT).

La Transmisin NIR, donde el detector est ubicado detrs de la muestra, es ideal para lquidos
transparentes y algunos productos que no son demasiado densos pticamente. Productos tales
como muestras de girasol, canola y tierra, que son pticamente tan densos que permiten que slo
una porcin de rayos pasen a travs de la muestra, que mediciones confiables son muy difciles de
obtener por NIT. De manera subsiguiente, para mediciones NIT de estos productos, la muestra
debe ser vertida en clulas de muestreo con un tamao de slo 6mm. Vastenhoudt (1995) report
que se acepta generalmente que el anlisis de granos intactos por Reflectancia NIR es ms exacto
que por NIT. Williams y Norris (2001) adicionalmente indicaron que el anlisis NIR de grano entero
por reflectancia, elimin el largo de trayectoria como un error de fuente, lo cual sugiere por lo tanto
que la Reflectancia NIR antes que la NIT debe ser el principio de medicin recomendado para tales
productos densos y mezclas que los contengan.

En la prctica, cuando se realiza un anlisis en un instrumento NIR, el operador slo tiene que
colocar la muestra en el recipiente para la misma, y presionar un botn para comenzar el anlisis.
El anlisis completo se imprime normalmente en menos de un minuto. Si esto es tan fcil, por qu
entonces hay diferencia de opiniones sobre el campo de aplicacin y precisin de los resultados
NIR? Ciertamente, no es una caja mgica que puede analizar cualquier elemento que se introduzca,
pero con el correcto desarrollo y mantenimiento de las calibraciones, esta tcnica est siendo
rpidamente implementada como el mayor mtodo de anlisis rpidos del futuro.

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Optimizado para Grano, Harina, Alimentos y Piensos

DA 7200 es ideal para: Trigo - Almidn - Pescado -

Harinas - Fibra - Pienso para Vacuno o Porcino - Maz -
Centeno - Grano - Avena - Sorgo - Leguminosas -
Lquidos - Cereales - Caf - Mostaza - Malta - Colza -
Girasol - Snacks - Alfalfa - Tapioca - Pienso Avcola -
Cebada - Soja - Pienso - Triticale - Arroz - Guisante -
Harina de Soja - Caa de Azcar - T - Mantequilla -
Lpulo - Leche en Polvo - Queso - Carne - Ensilaje de
Hierba - Harina - Heno - Pasta - Smola - Piensos para
mascotas - Aleurona - Mijo - Helado - Fertilizantes - Suero
- Pellets - Semillas de algodn - Alimentos - Cacao -
Chocolate

Mediciones: Protena - Humedad - Aceite y Grasa -

Dureza - Fibra cruda - Sal - Gluten - Almidn - Almidn
daado - Azcar - Energa metablica - Sedimentacin -
Digestibilidad - Lactosa - Fibra diettica - -Glucano -
Extracto VZ - Valor de Kolbach - NDF - ADF - Polaridad

Balanza de humedad

Equipo a constante

Equipos para barrido de

Con y sin TF

Figura 2. Espectro NIRS de dietas completas,

recogidos en el equipo Foss NIRSystem 6500 con
diferentes contenidos en Zearalenona: 1. no
contaminada; 2. contenido superior a 50 ppb,

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Espectro NIR de sacarosa cristalina:

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