LABORATORIO DE FRILTACION POR MEMBRANA

JENNIFFER YULIETH BONILLA MANRIQUE

1610364

YESSICA GERALDINE QUINTERO DURAN

1610775

PAULA BENITEZ

1610571

JENNY ZULEY ARAQUE

1610790

MOISES DAVID DUARTE

1610999

UNIVERSIDAD FRANCISCO DE PAULA SANTANDER

DEPARTAMENTO DE MEDIO AMBIENTE

BIOTECNOLOGIA AMBIENTAL

SAN JOSE DE CUCUTA

2017
 Laboratorio : Filtracin por Membrana

Objetivos

Comprender el funcionamiento de la tcnica de filtracin por membrana para la

deccion de coliformes totales y E.coli en las muestras de agua.
Determinar la cantidad de coliformes totales y E.coli en una muestra de agua
mediante el mtodo de filtracin por mendrana

Marco Teorico

La filtracin por membrana es el mecanismo mediante el cual se atrapan en la superficie de

la membrana microorganismos cuyo tamao es mayor que el tamao del poro 0.45 um, esto
gracias a que una bomba elctrica ejerce una presin diferencial sobre la muestra de agua
haciendo que se filtre. Los contaminantes de tamao menor que el especfico del poro
atraviesan la membrana o se quedan retenidos en su interior, las bacterias quedan en la
superficie de la membrana y luego est es llevada a un medio de enriquecimiento selectivo,
en el IDEAM se utiliza el medio de cultivo Chromocult el cual promueve el crecimiento y
la identificacin.(IDEAM,2007).

Coliformes Totales: Bacterias gram negativas, no esporoformadoras, oxidasa

negativa, con capacidad de crecimiento aerbico y facultativamente anaerbico en
presencia de sales biliares, que a temperatura especificada de 35C +/- 2C causan
fermentacin de lactosa con produccin de gas. Poseen la enzima B-galactosidasa.
E. coli: Escherichia coli (Coliformes fecales): Bacilo gram negativo, capaz de
desarrollarse en presencia de sales biliares u otros agentes (tensoactivos) que tengan
propiedades similares e inhibitorias del crecimiento y que son capaces de fermentar
la lactosa a temperaturas de 35C +/- 2C, con produccin de cido, gas y aldehdo
en un lapso de 18 a 48 horas. Oxidasa negativa, no esporgena y reduce el nitrato a
nitrito. Tambin es capaz de producir indol a partir de triptofano a una temperatura
de 44c +-05 en un tiempo de 21+/- 3 horas. Poseen la enzima B-glucoronidasa, la
cual es detectada por medios cromgenos o fluorgenos.(IDEAM,2007).
 Preparacin del Material:

Preparacion del medio de ciltivo CHROMOCULT:

Agar:Lavar con agua y jabon las cajas de
petri pequeas,enjuague en solucion agua
mas cloro durante 10 minutos,por ultimo con
agua destilda, escurrir y secar.Envolver en
papel kraft meter en una bolsa plastica y
esterilizar el auto clave
Se autoclava el agua destilada requerida en
un erlenmeyer sellado con aluminio y cinta
tirro,depues de autoclavar se adicionan los
gramos chromocult y se pone a calentar en
la estufa hasta ebullicion.Se deja reposar el
medio y se sirve en las cajas dentro de una
cabina de flujo laminar.Envolver bien con
envoplast cada caja,marcar con cinta tirro y
aguardar hasta su uso en la nevera.(Son
26.5 gr de medio chromocult por litro de
agua destilada.

Frasco para tomar muestra microbiologica: Lavar

con agua y jabon el frasco,enjuague en
solucion agua mas cloro durante 10
minutos,por ultimo con agua
destilada,escurrir y secar,rotular y envolver
en papel kraft.Estelizar en el horno por 4
horas a 125 C
 Pipetas:Lavar con una solucion
jabonosa pipetas de 10
Agua Peptona:Lavar con agua y
ml.Enjuague en solucion agua
jabon frascos de vidrio.Enjuague
mas cloro durante 10 minutos,
con solucion de agua mas cloro
por ultimo con agua
durante 10 minutos,por ultimo
destilada,escurrir y
con agua destilada, ecurrir y
secar.Envolver en papel
secar.
kraft.Estelizar en el horno por 4
horas a 125C

Preparacion del Agua Peptona: En un Agua destilada esteril: Lavar con

erlenmeyer adicionar 1 gr de
peptona con 1000 ml de agua
destilada, homogenizar muy
bien.Luego servir 225 ml de agua
peptona en cada frasco de
vidro,sellar con aluminio y cinta
tirro.Autoclavar,refigerarse hasta
su uso.
agua y jabon un frasco de
vidrio ,enjuague con solucion de
agua mas cloro durante 10
minutos,escurrir y secar.
Adicionar 400 ml de agua
destilada,serrar con aluminio y
cinta tirro.Autoclavar y dejar
reposar.Refigerar hasta su uso

Pao esteril:Envolver en papel kraft

dos paos de lim pieza,sellar con
cinta tirro, marcar y estelizar en
el horno por 4 horas a 125C.

Materiales en general:

Frascos de vidrio estelires.

Peptona

Agua destilada

Probeta de 250 ml

Erlenmeyer de 2000 ml

Cajas petris pequeas

Pipetas de 10 ml

Agar Chromocult

Estuja
Autoclave

Equipo de Filtracin por memdrana

Bomba de Filtracin

Membrana de Nitrocelulosa

Pinzas.

Toma y preservacin de la muestra.

La muestra debe recogerse en frasco de vidrio previamente esterilizado en el horno por 3

horas. La muestra se debe analizar lo ms rpido posible, en caso de demorarse varias horas
sin analizar conservarse a baja temperatura.

Procedimiento:
 1.Una vez se tiene lista la muestra a
analizar, se procede a entrar a cuarto de
siembra y realizar las respectivas diluciones
en los frascos de agua peptona previamente
preparada con la ayuda de las pipetas de 10
ml estriles.

2.Luego de realizar las respectivas

diluciones se procede a realizar la filtracin:
Bajo condiciones de esterilidad con los
mecheros encendidos, armar el equipo de
filtracin y colocar un filtro de nitrocelulosa
en la unidad de filtracin.

Verificar que la llave de salida del aire se

encuentre cerrada y la bomba de vaco
apagada; para evitar el derrame de la
muestra antes de tiempo.

Con una pinza estril, sujetar el filtro de

membrana por uno de los bordes y colocarlo
sobre la superficie de una caja petri con
Agar chromocult (siembra en superficie).
Fjese que haga contacto el agar con el filtro.
Se debe cerrar la caja petri, rotularla y
envolverla.

Incubar a 36C por 24 horas.Realizar conteo

de colonias y reportar UFC/ 100 ml
Resultados:

Salmonella:0

Coliformes Fecales:0

Coliormes Totales:
Caja 1: 130 ufc/100 ml
Caja 2: 71 ufc/100 ml
Caja 1. Caja 2
Promedio:
130
=1,83
71

REPORTE:
71 UFC/100ml
Analisis de Resultados.

La muestra llevada al laboratorio no contiene Coliformes Fecales E.coli. No hay

contaminacin de origen Fecal
La muestra de agua llevada al laboratorio obtuvo presencia de Coliformes
totales,esto significa que nuesra agua no es apta para el consumo humano,La
presencia de coliformes totales debe interpretarse de acuerdo con el tipo de aguas:
deben estar ausentes en 85% de las muestras de aguas potables tratadas. En caso de
estar presentes, su nmero no puede ser superior a 2-3 coliformes. Esta
contaminacin a pesar de ser baja, no puede ocurrir en tres muestras recolectas en
das consecutivos.

Conclusiones.

Bibliografia.

Instituto de Hidrologa, Meteorologa y Estudios Ambientales,2007. Determinacin

de escherichia coli y coliformes totales en agua por el mtodo de filtracin por
membrana en agar chromocult. Extraido el 3 de mayo de 2017.Disponible en .
http://www.ideam.gov.co/documents/14691/38155/Coliformes+totales+y+E.
+coli+en+Agua+Filtraci%C3%B3n+por+Membrana.pdf/5414795c-370e-48ef-
9818-ec54a0f01174.
Red Iberoamericana de Potabilizacin y Depuracin del Agua. Indicadores de
contaminacion fecal en aguas.Extraido el 3 de mayo de 2017.Disponible en
http://tierra.rediris.es/hidrored/ebooks/ripda/pdfs/Capitulo_20.pdf.