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Instituto Politcnico Nacional

Escuela nacional de Ciencias Biolgicas


Laboratorio de Mtodos de Anlisis

Determinacin de Riboflavina por fluorometra.

Profesor: Marco Antonio Ramrez Quezada


Alumna:

Rosalba

Grupo: 4IM1 Semestre: 15/2 Seccin: 3


OBJETOVOS:

Conocer el manejo del fluormetro de filtros.


Determinar el efecto del pH del disolvente sobre la intensidad de
fluorescencia.

FUNDAMENTO:

Una vez que una molcula llega al nivel vibracional ms bajo de un estado
excitado singlete S1 (0) puede sufrir un proceso que es motivo de nuestro
inters. ste es, que regrese a uno de varios niveles de energa
vibracionales/rotacionales del estado S0 por la emisin de un fotn de luz que
corresponde a la diferencia de energa entre el estado excitado S1, nivel
vibracional 0, y un nivel vibracional particular de S0. En este proceso radiactivo
llamado fluorescencia, el electrn en el orbital antienlazante (*) hace un salto
cuntico de regreso al orbital enlazante () medio lleno, emitiendo el fotn de
luz.

El mecanismo puede definirse: F* _ F + hv siendo F* la molcula fluorescente


en estado excitado S1 (0), y F su estado despus de la emisin del fotn, hv.

El tiempo de vida de un estado singlete excitado es aproximadamente de 10-9


a 10-7 s y por lo tanto el tiempo de cada de la fluorescencia es del mismo
orden de magnitud. La constante de velocidad que se asocia con el proceso
radiactivo de fluorescencia se define como kR.

RESULTADOS:

Tabla 1. Resultados de la curva de calibracin de riboflavina en diferentes


medios.

Riboflavi Intensidad Intensidad Intensidad Intensidad


na de de de de
(ppm) fluorescenci fluorescenci fluorescenci fluorescenci
a en H2O a en HCl a en a en NaOH
0.1M CH3COOH 0.1M
0.9M
0 4.75 4.96 4.95 4.98
1 5.84 5.06 5.66 4.94
2 6.74 5.15 6.34 4.99
3 7.61 5.24 7.05 5
4 8.4 5.33 7.61 5.02
5 9.07 5.4 8.22 5.03
10 12.16 5.75 10.73 5.05
50 17.3 6.5 14.45 5.03
pH 7 1 9 13
Curva de calibracin de la riboflavina en diferentes medios

9.5
f(x) = 0.86x + 4.91
agua
8.5
Linear (agua)
f(x) = 0.65x + 5
pH1
7.5
Linear (pH1)
URF pH4
6.5 Linear (pH4)
pH13
5.5 Linear (pH13)
f(x) = 0.09x + 4.97
f(x) = 0.01x + 4.96
4.5
0 1 2 3 4 5 6

ppm

Preguntas extra:

Por qu se deben conocer las longitudes de onda de mxima excitacin


y mxima emisin?
Diga cuales son las formas coenzimaticas de la riboflavina y cul es su
papel en el metabolismo celular.
Cmo afecta el ph a la estructura de la riboflavina?

DISCUSIN:

CONCLUSION:

BIBLIOGRAFIA: