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ndice

Presentacin....01

PRCTICA N 01
Determinacin de colorantes azoicos en alimentos y bebidas..02

PRCTICA N 02
Intoxicacin de Rattus rattus var. albinus con monxido de carbono...09

PRCTICA N 03
Efecto del cido sulfhdrico sobre Rattus rattus var. albinus y Buffus spinolosus..18

PRCTICA N 04
Desintegracin de la Materia Orgnica.....26

PRCTICA N 05
Cuantificacin de Mercurio en Msculo de Pescado...33

PRACTICA N 06
Cuantificacin de plomo en muestras biolgicas............42

PRCTICA N 07
Intoxicacin de Rattus rattus var. albinus con tetracloruro de carbono50

PRCTICA N 08
Identificacin de benzodiacepinas y clorpromazina por CCF....57

PRCTICA N 09
Determinacin de salicilatos en Muestras Biolgicas.....67

PRCTICA N 10
Cuantificacin de etanol en sangre....74

PRCTICA N 11
Extraccin de alcaloides e identificacin por CCF...81

PRCTICA N 12
Extraccin de glndulas de Loxosceles laeta y su efecto sobre Oryctolagus
cuniculus.89
TOXICOLOGIA FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUIMICA

PRESENTACIN

La presente gua de trabajo en su contenido trata de unir las


experiencias sobre el manejo de xenobiticos y procesamiento de
muestras biolgicas orientadas al mejor diagnstico clnico.
Lo ms importante para la Salud pblica es la prevencin ante la
exposicin de xenobiticos y a la vez prevenir intoxicaciones, por
ello se hace necesario conocer los mtodos y tcnicas utilizadas
para la identificacin y cuantificacin correcta de los compuestos
responsables de intoxicaciones y envenenamientos.
Es la primera vez que se edita una gua en esta asignatura,
esperando con ello brindar un aporte al mejor aprendizaje de
nuestros alumnos y al logro de sus propsitos.

Los autores

Mg. LIZARDO CRUZADO RAZCO / Q.F. CARMEN ROSA SILVA CORREA 1


TOXICOLOGIA FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUIMICA

PRCTICA N 01

I. TTULO

Determinacin de colorantes azoicos en alimentos y


bebidas.
II. INTRODUCCIN

En la actualidad los colorantes naturales, han sido reemplazados casi en su


totalidad por colorantes sintticos, debido a que estos ltimos presentan
algunas ventajas.
Los ms utilizados en la industria alimenticia y casera son las del tipo AZO,
trifenilmetano, xantnicos, trifenilmetnicos y colorantes de Alquitrn de la
Hulla
Entre los colorantes de sntesis o artificiales, se incluyen los azoicos, que
se han relacionado con reacciones alrgicas. Los colorantes son utilizados
con una finalidad econmica para que el producto resulte atractivo para el
consumidor, sin embargo no informan, sobre las posibles consecuencias
que pueden tener.
Por eso la industria alimentara solo debera usar aquellos que han sido
aprobados, tras haber pasado por largos, detallados y exhaustivos
estudios.

III. MATERIAL Y MTODOS

Ensayo cualitativo preliminar para colorantes artificiales (Mtodo de


Arata-Posseto):
Preparacin de las muestras:
Las muestras adquiridas sern previamente trituradas luego se les
agregar cantidad suficiente de agua destilada, y a las que fueran
necesarias se les someter a calor hasta completa disolucin y se
filtrar hasta obtener la solucin coloreada.

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Se coloca unos 50ml. de muestra en un vaso de precipitacin en 5ml


de HCL al 10%.
Se introduce tres tiras de lana de oveja, aproximadamente de 20cm
previamente lavadas con detergentes y desengrasadas con hexano.
Se deja hervir por 10min.
Se lava las tiras de lana en chorro de agua fra y luego a chorro con
agua destilada a modo de enjuague.
Luego se coloca estas fibras coloradas en una solucin de hidrxido
de amonio al 2% en un vaso de precipitacin, y se lleva a hervir
aproximadamente por 10min hasta que ya no ceda color a la
solucin.
Se aade nuevas tiras de lana, a las que se le someti nuevamente
a una solucin de hidrxido de Amonio al 2% para extraer el
colorante, se colocaran nuevas tiras de lana, llegando a teirse del
color caracterstico del colorante si se trataba de un colorante
artificial.

IV. RESULTADOS

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V. DISCUCIN

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VI. CONCLUSIONES

VII. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

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VIII. ANEXOS

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PRCTICA N 02

I. TTULO

Intoxicacin de Rattus rattus var. albinus con


monxido de carbono
II. INTRODUCCIN

La combustin incompleta de la materia orgnica deja como uno de


los residuos al oxido de carbono (monxido de carbono) naturalmente,
cada compuesto orgnico sometido a proceso de combustin libera al
CO, en cantidad proporcional a la cantidad de carbohidratos que
contenga. El mayor problema en las ciudades es el parque automotor,
sobre todo cuando la conservacin de las unidades es mala, de all que
es la recomendacin de las instituciones internacionales, que las
autoridades locales, autoridades de salud, deben dictar medidas que
protejan al medio ambiente de la polucin ambiental.

El CO, es un gas que se concentra en el aire ambiente sobre todo


cerrado, la concentracin del mismo est en estrecha relacin con el
nmero de unidades mviles, centros industriales, que utilizan como
combustible al petrleo, gas metano, hulla o lea. Como gas, tiene 300
veces mayor afinidad, por la hemoglobina que el oxgeno, con pequeos
volmenes satura rpidamente a la hemoglobina, convirtindola en una
macromolcula muy estable y resistente a la actividad de sustancias
qumicas y a estmulos fsicos.

III. MATERIAL Y MTODOS

3.1. MATERIAL

3.1.1 Material biolgico.

2 Rattus rattus var albinus por mesa de trabajo

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3.1.2 Material de Laboratorio.


2 jeringas descartables de 5ml
Agujas N 21.
4 Tubos de ensayo.
Tubos heparinizados
Lunas de reloj
Equipo de diseccin.
Material de vidrio de uso comn en laboratorio

3.1.3 Reactivos:

Solucin de acetato de sodio 3N


Solucin de cido actico glacial 28% V/V
Solucin salina isotnica 0.89 % P/V
Agua bidestilada 10 ml

3.1.4 Equipos de Laboratorio

Centrifuga
Bao Mara
Espectrofotmetro

3.2. MTODOS:

3.2.1. Medicin de la carboxihemoglobina en la sangre (Whitehed y


Worthington)

Fundamento del Mtodo:

En una muestra de sangre (muestra clnica) que contiene


oxihemoglobina y carboxihemoglobina. La primera precipita
totalmente mediante proceso de calentamiento a temperatura de
57 C a 57,5C mientras que la segunda se mantiene disuelta en
el filtrado.

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Procedimiento:

Los especmenes sern expuestos a los gases que son


eliminados por el tubo de escape de un automvil, cuando el gas
ingrese al depsito de vidrio en el que se encuentra el Rattus
rattus var. albinus, se medir el tiempo de exposicin y anotar
las manifestaciones que presenta el ejemplar. El especmen
estar en exposicin unos minutos y se retirar antes de llegar a
muerte.

Mediante jeringas descartables se toma la muestra de sangre


del especmen mediante puncin cardiaca y se deposita en un
tubo heparinizado. De este tubo se toma un ml de sangre y se
transvasa a otro tubo seco, se agrega 9ml de suero fisiolgico y
se centrifuga a 3000 durante 10 minutos, se elimina el
sobrenadante y se agrega 1,5 ml. De agua bidestilada y se
mezcla.

Se agrega al tubo 0.75 ml. de solucin de cido actico y al


mismo tiempo se agrega 3.0 ml. de solucin de acetato de sodio.
El tubo que contiene la mezcla se lleva a calentamiento hasta los
57 C durante 8 minutos exactamente el tubo se enfra con agua
de cao, se filtra el contenido en papel Watman N 01.

La solucin obtenida se diluye en 10 veces su volumen y se


hace la lectura a 556 nm. Usando como control agua bidestilada.
La absorbancia obtenida de la lectura se compara con la curva
de calibracin realizada previamente.

3.2.2. Ensayo de dilucin al 10%

Se realiza con muestras sanguneas tanto del especmen


testigo, como problema.

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A 1 ml de sangre entera, se aade 10 ml de agua destilada.


Observar el cambio de color.

3.2.3. Reaccin de Cloruro de Zinc

En una luna de reloj, se colocar II gotas de solucin de


Cloruro de Zinc 10% y se aadir IV gotas de sangre entera,
del especmen problema. De la misma manera se proceder
con la sangre del especmen testigo. El color rojo-cereza indica
una reaccin positiva.

IV. RESULTADOS

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V. DISCUCIN

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VI. CONCLUSIONES

VII. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

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VIII. ANEXOS

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PRCTICA N 03
I. TTULO

Efecto del cido sulfhdrico sobre Rattus rattus var.


albinus y Buffus spinolosus

II. INTRODUCCIN

El sulfuro de hidrogeno, llamado tambin cido sulfhdrico se forma


en procesos de ANEROBIOSIS, es decir en ausencia del sistema REDOX.
Es una sustancia gaseosa que se puede liberar de la putrefaccin de la
materia orgnica en curtiembre, en camales en fbrica de embutidos, en
que serias. Tambin se puede liberar en procesos industriales en los que
se emplea el sulfuro de carbono como insumo y uno los que haya vapor de
agua.

Es un contaminante ambiental que afecta a todo ser viviente que


tenga respiracin aerbica. Es nuestra ciudad se han producido vctimas
como consecuencia de exponerse en buzones de los desages en casos
de obstruccin de los mismos. Su actividad biolgica es tan severa que
rpidamente desencadena la muerte por interferencia con la cadena
respiratoria a nivel mitocondrial celular.

III. MATERIAL Y MTODOS

3.1. MATERIAL

3.1.1 Material biolgico.

2 Rattus rattus var albinus por mesa de trabajo


2 Buffus spinolosus por mesa de trabajo

3.1.2 Material de Laboratorio.


2 jeringas descartables de 5ml

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Agujas N 21.
Tubos de ensayo.
Equipo de diseccin.
Material de vidrio de uso comn en laboratorio

3.1.3 Reactivos:

Solucin de HCL cc
Sulfuro de hierro.
Bicarbonato de sodio
Solucin de arsenito de sodio 0,1N.

3.1.4 Equipos de Laboratorio

Espectrofotmetro

3.2. MTODOS

El procedimiento ms empleado en la actualidad para la valoracin del


H2S, consiste en utilizar solucin de arsenito de sodio 0,1 N.
El fundamento de la tcnica es el siguiente:

As2O3 + 3 H2S Medio cido As2S3 + 3 H2O

En una cmara de desecacin se coloca FeS y se agrega HCL


concentrado separado por una malla se coloca los especmenes y se
cierra hermticamente. Se toma el tiempo de exposicin, se observa y
se registran las manifestaciones que presenta cada ejemplar.

Una vez que entran en shock, se les extrae y por separado a cada
especie se le extrae 1 ml de sangre por puncin cardiaca y se deposita
en un matraz de 50 ml, limpio. Se aade 5 ml de agua bidestilada y se
lleva a destilacin, el destilado se recoge en un matraz de 50 ml que
contiene 5 ml de solucin de arsenito de sodio 0.1 N, se agrega

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HCL(q.p.) para que la solucin tenga pH cido. Se forma un precipitado


amarillo de sulfuro arsenioso y la solucin queda incolora. Se agrega
un volumen igual al del problema de agua bidestilada. Se agita para
homogenizarla y se filtra en papel filtro.
Se toma 10 ml del filtrado, se neutraliza con bicarbonato de sodio, se
titula con I2 al 0.1N, empleando como indicador almidn. La titulacin
llega al punto final cuando aparece una coloracin azul persistente. As,
se determina el exceso de solucin de arsenito de sodio y se resta de
los 5 ml agregados.

Calculo de la concentracin del H2S en la muestra:

1ml de As2O3 N = 0,02556 g de H2S

IV. RESULTADOS

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V. DISCUCIN

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VI. CONCLUSIONES

VII. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

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VIII. ANEXOS

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PRCTICA N 04

I. TTULO

Desintegracin de la Materia Orgnica


II. INTRODUCCIN
En la investigacin de metales o metaloides en muestra clnicas se hace
necesario, proceder a mineralizar la muestra, como tambin se conoce
como desintegracin de la materia orgnica. Se conoce dos mtodos:

A) MTODO FSICO: Mediante el cual se desintegra la muestra


sometindola a altas temperaturas. Con este mtodo no puede
aplicarse, en casos que el metal o metaloide se sublime.
B) MTODO QUMICO: Este mtodo consiste en tratar la muestra
homogeneizada (papilla) con cido fuerte y un donador de oxgeno, en
algunos de dichos procedimientos debe calentar suavemente para
mejorar la actividad del sistema aplicado.

III. MATERIAL Y MTODOS

3.1. MATERIAL

Muestra biolgica para la determinacin de metales


Solucin de K2SO4 al 10%
H2SO4 q.p
HNO3
KMNO4
Material de vidrio de uso comn en Laboratorio
Equipo de destilacin

3.2. MTODOS

I. METODO DE LA MEZCLA SULFONTRICA: La muestra debe


pesarse, exactamente en una cantidad, homogenizarla mediante
tijeras, si la muestra fuese liquida, medir 100 ml y despus pesar

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ese volumen, concentrar por evaporacin a 10 o 20 ml despus


agregar 0.5 gr. De K2SO4 0.5 ml de solucin al 10% despus
agregar 5 ml de H2SO4 q.p. si es, necesario calentar hasta total
carbonizacin. Dejar enfriar, despus agregar 5ml de HNO 3 y
calentar hasta sequedad (mancha oscura). Agregar 1 ml de HNO 3 y
calentar. Este procedimiento se puede repetir varias veces.
Calentar hasta eliminar los vapores nitrosos de color rojo, hasta
que se eliminen vapores blanquecinos.
II. METODO DE DENIGES: Se basa en la actividad deshidratante
severa del cido sulfrico en presencia de un donador de oxigeno
(permanganato de potasio). La muestra se pesa en una capsula de
porcelana, se homogeniza y se agrega la mezcla oxidante, se
calienta lentamente hasta que aparezca un color blanquecino, si
esto no sucede, se sigue agregando permanganato de potasio, en
cantidad de 2gr. Por vez. Peso de la muestra 25 gramos + 20 ml
de H2SO4 + KMNO4 (2 gr. Por vez).
III. METODO DE KAHNE: En este mtodo se usa el cido sulfrico
q.p. (25 ml) + 10 ml de KClO4. Se calienta hasta completa
mineralizacin de la muestra.
IV. METODO DEL CLORO NACIENTE: En este procedimiento se
utiliza un frasco de HCl q.p. y se calienta para desprender cloro,
produciendo la aparicin de un precipitado blanquecino.

III. RESULTADOS

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IV. DISCUCIN

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V. CONCLUSIONES

VI. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

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VII. ANEXOS

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PRCTICA N 05

I. TTULO

Cuantificacin de Mercurio en Msculo de Pescado


II. INTRODUCCIN
El mercurio como metal o como compuestos es utilizado en
diversas industrias, las que dejan en sus aguas residuales contaminantes
del medio ambiente; entre estas tenemos: Electrnica, industria del papel,
medicina, agricultura, industria de los termmetros, en la minera y la
erosin natural. En el fondo marino, de lagos y ros, los compuestos
inorgnicos insolubles de mercurio pueden ser convertidos en solubles, por
accin de Pseudomonas sp y Clostridium cochlearum en anaerobiosis y
Microsperum crasse en aerobiosis. De all el mercurio llega a la mesa del
hombre mediante el consumo de productos hidrobiolgicos como mariscos,
crustceos, algas, pescado.

A partir de intoxicaciones masivas, organismos internacionales


aprobaron una comisin de expertos para que revise toda la literatura sobre
la actividad biolgica del mercurio, dando como resultado la recomendacin
que la dieta para una semana ,para una persona no debe contener ms de
0.3 mg, dentro de esta cantidad, como mximo 0.2 mg, como
metilmercurio. Este ltimo compuesto tiene actividad cancergena.

III. MATERIAL Y MTODOS


3.1. MATERIAL

3.1.1 Material biolgico

Msculo de pescado fresco, seco, salado; conservas, msculo de


crustceos, maricos o muestras de algas.

3.1.2. Reactivos:

cido clorhdrico 1N ; 0.1N

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Amoniaco concentrado
cido sulfrico qp.
Permanganato de potasio
Azul de timol
Solucin buffer de Macllaine
Solucin de bromuro de potasio al 40%
Solucin de hidroxilamina al 20%
Ditizona extractora
Ditizona estndar
Cloroformo purificado

3.2. MTODOS

MTODO DE LA DITIZONA

Preparacin del buffer de macllaine:


Se pesa 150g. de fosfato disdico y se disuelve en agua bidestilada, se
agrega 37.5 gr de K2CO3. (C.s.p 1000ml agua bidestilada).
Se debe comprobar su actividad de la siguiente manera:
Se mide 25 ml HCl 0.1 N + 5 ml de bromuro de potasio el 40%, aadir II
gotas de rojo de fenol y se titula con el buffer a probar. Debe parecer un
color amarillo cereza tenue (ph 604). Si el indicador vira al rosado el
punto final ha sido sobre pasado. El consumo debe ser de 4.75 en caso
contrario debe diluirse la solucin buffer con agua bidestilada, como se
indica.
5
Volumen buffer x . = ml de agua destilada a

aadirse.

Solucin de bromuro de potasio: Disolver 40 gramos de bromuro de


potasio en 100 ml de agua bidestilada.

Solucin de hidroxilamina: Disolver 20gr de hidroxilamina en 100 ml


de agua bidestilada.

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Solucin de solucin extractora: Se pesa 15 mg de ditizona en un litro


de cloroformo q.p, se agregara 5ml de etanol absoluto.

Solucin ditizona estndar: Se pesa8 mg de ditizona q.p se agrega a


un frasco que contenga 1 litro de cloroformo q.p.

Preparacin de la solucin de mercurio :

i. Solucin Patrn de mercurio:


Se diluye 0.1354 g de bicloruro de mercurio q.p en HCl 1 N y se
completa a 100 mL con el mismo cido. Esta solucin equivale a 1 mg
de mercurio por mL y es bastante estable.

ii. Solucin Estndar I de mercurio:


Se transfiere 10 mL de la solucin patrn a una fiola de 1 L y se
completa el volumen con agua bidestilada. Esta solucin contiene 10
ug de mercurio por mL.

iii. Solucin Estndar II de mercurio:


Se coloca 25 mL de la solucin St. I en una fiola de 250 mL y se
completa con agua bidestilada. Esta solucin contiene 1 ug de
mercurio por mL.
Curva de calibracin

Se toma 2.5, 5, 7.5 y 10 ml de la solucin estndar II y se realiza la


lectura en espectrofotmetro a 490 nm.

Preparacin de la muestra para anlisis:


Se pesa 25 gramos de musculo de carne de pescado, se homogeneiza
con tijeras y se convierte en papilla, se agrega 25 ml de H2SO4 se agrega
KMNO4, de 2 gr por vez, hasta que la muestra se torne blanca cremosa.
Una vez obtenida ese color se agrega 2 ml de hidroxilamina, para eliminar

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todo el bixido de manganeso que hubiese en exceso, se filtra sobre


algodn de vidrio.

Se transvasa a un embudo de separacin, se agrega 2 ml de


hidroxilamina al 1%. Se lava al depsito con solucin de HCl 0.1 N con
amoniaco qp. Se lleva el ph 2 y azul de timol como indicador IV gotas, el
punto final, estar alcanzando cuando aparece un color ligeramente
rosado. Se aade 5ml de solucin de ditizona extractora se agita durante
15 minutos, se deja en reposo y se presenta dos capas. Se deja separar
la fase clorofrmica, y se realiza una segunda extraccin. Las soluciones
clorofrmicas se juntan y se analizan 25 ml de HCl 0.1 N, se agita y se
separan las soluciones clorofrmicas.

Separacin de los metales contaminantes de la muestra:


Al extracto clorofrmico se aade 5 ml de solucin de bromuro de potasio
se agita, el mercurio pasa a la capa acuosa en forma de tetrabromo-
mercurio de potasio, mientras que los otros iones metlico quedan en la
fase clorofrmica.

Extraccin del mercurio con Ditizona estndar: La fase acuosa se


aade 5ml de solucin de ditizona estndar, se agita por 10 minutos, se
aade 5 ml de buffer Macllaine para romper el complejo. Se separa la
fase clorofrmica que es que se lleva a la lectura espectrofotomtrica a
490 nm esa lectura se compara con la curva de calibracin para
determinar la concentracin del mercurio. Despus se procede a convertir
los mg en ppm, de la siguiente forma:

25 gr de muestra 6.3 ug
100 gr x

PPM. 100 gr 25.2 ug de Hg


1 gr x

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IV. RESULTADOS

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V. DISCUCIN

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VI. CONCLUSIONES

VII. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

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VIII. ANEXOS

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PRACTICA N 06

I. TTULO

Cuantificacin de plomo en muestras biolgicas


II. INTRODUCCIN
El plomo es un metal que tiene mucha demanda en diversas actividades del
hombre, desde las industrias extractivas, industrias de transformacin, en las
que se necesita el plomo y sus compuestos. La multiciplidad de usos, hace
que sea uno de los metales con significativa incidencia en la contaminacin
del medio ambiente; por esta razn los entes biolgicos expuesto a
concentracin cada da mayores corren el riesgo de sufrir efectos txicos
severos e irreversibles, en diversos rganos de la economa, como tejido
seo, SNC, tejido liso, glndulas como la tiroides, tejido renal, grandes vasos,
etc.

III. MATERIAL Y MTODOS

3.1. MATERIAL

3.1. 1. Material Biolgico:

Muestra de sangre y/o orina de una persona expuesta a plomo

3.1. 2. Material de laboratorio

Tubos de ensayo
Rejilla
Probeta
Bao Mara

3.1. 3. Reactivos

cido sulfrico concentrado


Yoduro de potasio

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Sol. ditizona extractora


Cloroformo
Sol. buffer de McIlaine
Papel tornasol
NaOH 0.5N
1mL EDTA

3.1.4. Equipos

Centrifuga
Espectrofotmetro

3.2. MTODOS:

REACCIONES CUALITATIVA DE IDENTIFICACIN:

Se debe proceder a mineralizar la muestra de orina y luego filtrar con


algodn de vidrio. En alcuotas de filtrado se realiza las reacciones de
identificacin cualitativa:

a) Tubo problema:

1 mL del filtrado
2 gotas de H2SO4
0.20 mL de yoduro de potasio

b) Tubo testigo:

1 mL de agua destilada
2 gotas de H2SO4
0.20 mL de yoduro de potasio

REACCIONES DE DIFERENCIACIN CON TALIO:

i. Tubo problema:

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TOXICOLOGIA FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUIMICA

1 mL del filtrado
1mL de EDTA
0.20 mL de yoduro de potasio

METODO DE CUANTIFICACION DE PLOMO:


Llevar la muestra a pH 10.5. Extraer el plomo con ditizona. Hacer la
lectura en espectrofotmetro de 510 nm. Comparar la curva de calibracin
con el resultado de la lectura.

IDENTIFICACION DE LA IMPREGNACION DE PLOMO EN TEJIDO


OSEO:
Se realiza mediante la tcnica de Von Kossa que se fundamenta en la
formacin de complejo de plata con aniones de carbonato y fosfato de
calcio, tratados con energa lumnica para la reaccin y la precipitacin de
plata metlica de color negro.

IV. RESULTADOS

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V. DISCUCIN

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VI. CONCLUSIONES

VII. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

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VIII. ANEXOS

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PRCTICA N 07

I. TTULO

Intoxicacin de Rattus rattus var. albinus con


tetracloruro de carbono
II. INTRODUCCIN
En la actualidad, el Cloroformo, formol, tetracloruro de carbono que
anteriormente fueron utilizados como frmacos, ya no se usan como tal,
pero por sus propiedades qumicas, se constituyen como insumos en la
industria como sucede con cloroformo, tetracloruro de carbono, cuya
aplicacin est muy ampliamente en desarrollo. El cloroformo y el
tetracloruro de carbono, estn directamente vinculados como agentes de
neoplasias, por esta propiedad es que no se administra como frmaco,
para el hombre, pero en medicina veterinaria an se sigue administrando
como antiparasitario.

Cuando el hombre manipula esta sustancia sin tener en cuenta las


normas de la seguridad e higiene industrial, el expuesto sufre las
consecuencias, que generalmente se presenta despus de largos periodos
de exposicin. Se conoce que tiene tropismo hacia el hgado y tejido renal,
de all que la actividad la ejerce sobre dichos rganos.

El efecto de esta y otras drogas con tropismo heptico se puede


evaluar desde el punto de vista funcional o fisiolgico. Iniciando
determinaciones bioqumicas de las transaminasas, como tambin puede
evaluarse mediante lecturas histopatolgicas. En el hombre forma un
metabolito endgeno, con alta actividad peroxidante, que oxida en forma
sostenida a las lipoprotenas dentro del hepatocito, alterado en forma grave
al sistema microsomal sobre todo al citocromo P450, tanto en la fraccin
rugoso, como en la fraccin lisa, alternando el metabolito heptico tanto el
catablico, como anablico, de formando a la estructura del hepatocito y
desviando al ncleo hacia un polo, lo que modifica a la funcin heptica en
forma severa. Produciendo la sntesis y acumulacin de tejido adiposo en

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el parnquima heptico, presentando despus una hepatitis qumica y que


posteriormente da origen a la sntesis de tejido fibroso en toda el rea
donde se presenta el proceso inflamatorio o hepatitis qumica, para
despus perder su funcin como consecuencia del tejido fibroso que se
forma.

III. MATERIAL Y MTODOS

3.1. MATERIAL
3.1.1. Material biolgico
Dos Cavia porcellus adultos aparentemente sanos.

3.1.2. Material de laboratorio

Pipetas de 1ml, 5 ml, 10 ml.


Tubos de 16 * 150 mm
Placas Petri

3.1.3. Reactivos:

Solucin oleosa de tetracloruro de carbono al 1%

3.2. MTODOS
A un espcimen adminstrale 0.5 ml cada 24 horas hasta las 72 horas a otro
espcimen administrarle 1.0 ml de la solucin oleosa 24 horas antes del
sacrificio.
Tomar muestras de sangre y tomar el tiempo de coagulacin.
Sacrificar a los animales y observar minuciosamente el tejido heptico, explicar
cada elemento que diferencia al tejido heptico del espcimen problema con el
espcimen testigo. Si hay posibilidad hacer determinacin de transaminasas.

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IV. RESULTADOS

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V. DISCUCIN

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VI. CONCLUSIONES

VII. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

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VIII. ANEXOS

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PRCTICA N 08

I. TTULO

Identificacin de benzodiacepinas y clorpromazina


por cromatografa en capa fina.
II. INTRODUCCIN
Las benzodiacepinas son medicamentos de amplio uso con propiedades
ansiolticas, hipnticas y sedantes. Su potencia, duracin y metabolismo
son variables. Las muertes debido a benzodiacepinas por va oral son
extremadamente raras, a no ser que se ingieran al tiempo con otros
frmacos como barbitricos, etanol y antidepresivos.
Estos frmacos son generalmente de bajo orden de toxicidad, a menos que

sean ingeridas conjuntamente con otros depresores del SNC como

antidepresivos, etanol o barbitricos. Pero la toxicidad se debe a que las

benzodiacepinas potencian la accin inhibitoria del neurotransmisor cido

gaba amino butrico (GABA), favoreciendo el ingreso de iones de cloro a la

clula, lo cual genera hiperpolarizacin celular y disminuye la excitabilidad

neuronal.

Los sntomas de depresin del sistema nervioso central (SNC) suelen

iniciarse rpidamente por va venosa, o a los 30120 minutos por va oral,

dependiendo del compuesto. Los sntomas ms comunes son sedacin,

ataxia, somnolencia, disartria, nistagmus y pupilas miticas o intermedias.

Puede haber adems hiporreflexia, hipotermia e hipotensin con taquicardia

compensatoria. La nusea y el vmito son ms comunes en los nios. La

aparicin de coma debe hacer sospechar la coingestin de otros depresores.

Ocasionalmente pueden observarse algunos efectos paradjicos como

agresin, excitacin, psicosis o deterioro neurolgico importante, siendo

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ancianos y nios ms susceptibles a este tipo de manifestaciones. La

inmovilidad prolongada por inconciencia puede generar rabdomilisis o

escaras. Muy ocasionalmente el compromiso respiratorio desencadena

hipoxia y acidemia secundaria4.

III. MATERIAL Y MTODOS


A. MATERIALES:

a) Materiales de uso comn

Vasos de precipitacin

Piseta

Pipetas

Pera de decantacin

Placa cromatografa

b) Reactivos

Bencina

Amoniaco

Cloroformo

Revelador Draggendorf

cido actico

Metanol

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B. METODO:

Cromatografa en capa fina ascendente: Muestra: Se disuelve


una ampolla de diazepam en 100 mL de orina.

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CROMATOPLACAS:

Activar a 100C x 30 min. Para evaporar agua u otros gases.

Fase estacionaria: slica gel

Fase mvil: -metanol/CHCl3 (8:2)

-metanol/ac. Actico (5:3)

Revelador: Dranggendorf

ANLISIS DE MUESTRA CLNICA PARA CLORPROMAZINA:

- Muestra: Se disuelve la muestra (clorpromazina) en 100 mL de

orina.

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SOLUCION ESTANDAR: Se prepara 100 mg en 5 ml de metanol

CROMATOPLACAS:

Activar a 100C por 30 min. Para evaporar agua y otros gases.

Fase estacionaria: slica gel

Fase mvil: metanol/cloroformo (8:2)

Revelador: FPN

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IV. RESULTADOS

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V. DISCUCIN

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VI. CONCLUSIONES

VII. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

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VIII. ANEXOS

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PRCTICA N 09

I. TTULO

Determinacin de salicilatos en Muestras Biolgicas


II. INTRODUCCIN

Los salicilatos, son los frmacos que mayor uso tiene y por amplio
ndice teraputico, se venden sin receta mdica. En pases pobres como el
Per, no se registran alta incidencia de intoxicaciones intencionales con
salicilatos, como sucede en los pases industrializados como Estados
Unidos, Inglaterra, pases en los la incidencia actual de intentos de suicido
con aspirina sobre pasan los dos millones, cifra impresionante. En nuestro
medio los escasos casos que suceden son por negligencia y sucede con
nios que ingieren los preparados que encuentran a su alcance.

III. MATERIAL Y MTODOS

IDENTIFICACIN CUALITATIVA DE SALICILATOS EN ORINA.

Tubo problema 1
Tubo problema 2
Tubo control (agua destilada)
Cloruro frrico III gotas a cada tubo
Mezclar: observar y explicar.

DOSAJE DE SALICILATOS EN MUESTRAS BIOLGICAS:

1.- REACTIVO DE TRINDER:

Disolver 10 gr. de cloruro mercurio en 200ml de agua destilada caliente.


Cuando la disolucin este completa se enfria y se agrega 1ml de HCl qp.

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o 30ml de solucin de HCl 1N despus se agrega 10gr. de nitrato frrico.


IO hidratado.

Se agita hasta disolucin completa, se completa el volumen a 250 ml

2.- SOLUCIN DE CIDO CLORHDRICO 1N:

En una fiola colocar 3ml de HCl qp. aforar a 100 ml con agua destilada.

3.- SOLUCIN ESTOCK DE SALICILATOS:

Pesar 580mg de salicilato de sodio en un matraz de 500ml. Se disuelve


en agua destilada tibia, se deja enfriar y se completa el volumen a 500 ml.
Se aade X gotas de cloroformo como conservante 1ml de esta solucin
contiene 1.0 mg de salicilato

4.- CLORURO FRRICO AL 2%:

Pesar 2 gramos de cloruro frrico y disolverlo en 100 ml de agua


destilada.

SISTEMA A UTILIZAR

TUBOS DE ENSAYO
I II III IV V BLANCO
PROBLEMA I 1ml
PROBLEMA II 1ml
STNDAR I 1ml
ESTNDAR II 1ml
CONTROL (agua 1ml
destilada)
REACTIVO DE TRINDER 5ml 5ml 5ml 5ml 5ml

Agitar y dejar en reposo 5 minutos.


Leer en espectrofotmetro 500nm.

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CLCULOS:

Factor x lectura problema .. mg de salicilatos

IV. RESULTADOS

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VI. CONCLUSIONES

VII. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

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VIII. ANEXOS

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PRCTICA N 10

I. TTULO

Cuantificacin de etanol en sangre


II. INTRODUCCIN
El alcohol etlico tambin conocido como etanol, alcohol vnico y alcohol de
melazas, es un lquido incoloro y voltil de olor agradable, que puede ser
obtenido por dos mtodos principales: la fermentacin de las azcares y un
mtodo sinttico a partir del etileno. La fermentacin de las azcares, es el
proceso ms comn para su obtencin a partir de macerados de granos,
jugos de frutas, miel, leche, papas o melazas, utilizando levaduras que
contienen enzimas catalizadoras que transforman los azcares complejos a
sencillos y a continuacin en alcohol y dixido de carbono.
El consumo de bebidas alcohlicas es casi tan antiguo como la humanidad.
A partir de la Edad Media, el alcohol lleg a ser considerado como un
remedio para prcticamente todas las enfermedades pero, actualmente, el
valor teraputico de las bebidas alcohlicas parece haber quedado limitado
a la ingesta de muy pequeas cantidades de vino (< 20-40 g/da), al mismo
tiempo que la ingesta crnica excesiva de etanol (> 80 g/da) est unida a
problemas de salud y, con frecuencia, a repercusiones familiares, laborales
y sociales de primera magnitud. En el hombre puede producir formas
clnicas del estado de inconciencia o disminucin de reflejos.
Los fenmenos de tolerancia son muy importantes con el etanol, lo que
explica las frecuentes discrepancias entre las concentraciones de alcohol
en sangre y el estado clnico del paciente, en funcin de que se trate de un
consumidor espordico o habitual.El alcohol se puede hallar mediante
exmenes en la sangre, en el aliento, en la orina y en la saliva.

III. MATERIAL Y MTODOS


3.1. MATERIAL
3.1.1. Material biolgico:
- Muestras de sangre.

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3.1.2. Reactivos
Examen Cualitativo

- REACTIVO 1

1. KMnO4 q.p.

2. H20 desti. Csp

- REACTIVO 2

H2SO4 q.p.

H2O desti. Csp.

Dosaje Etlico

- REACTIVOS

Mezcla sulfocrmica

Agua dest. Csp.

cido sulfrico.

3.2. MTODO
- EXAMEN CUALITATIVO.

Colocar el reactivo para el examen cualitativo en un frasco. Se har

soplar al paciente a travs de un sorbete durante un minuto.

Observar el cambio de color.

- DOSAJE ETLICO

MTODO DE SHEFFTEL MODIFICADO.

Fundamento. La mezcla oxidante bicromato-cido

sulfrico acta sobre el alcohol etlico transformndolo en

cido actico, a la vez que se forma sulfato cromoso con

una coloracin que vara del amarillo al verde en forma

proporcional a la concentracin de etanol existente en la

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muestra, susceptible de ser medido por

espectrofotometra.

IV. RESULTADOS

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VI. CONCLUSIONES

VII. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

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VIII. ANEXOS

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PRCTICA N 11
I. TTULO

Extraccin de alcaloides e identificacin por


cromatografa en capa fina.
II. INTRODUCCIN

En las ultimas dcadas de este siglo el consumo de alcaloides en pases


del continente americano se ha incremento en forma alarmante;
incentivada por el trfico ilcito de dichas sustancias, con excepcin del
opio que tuvo su reinado en la china, auspiciado por pases europeos, las
ganancias que dejaba esta ilcita actividad, desat la guerra del opio, entre
las compaas que comercializa dicho estupefaciente en la poblacin china.

En la actualidad se consumen diverso tipo de alcaloides, como la cocana


mezcalina o peyotina, la marihuana, el LSD, acetona benceno (terokal), etc.

III. MATERIAL Y MTODOS

3.1. Reacciones para la Identificacin de Morfina, Codena, Herona


(Test del cido Ntrico)
Una vez extrado el posible alcaloide en disolvente orgnico, se toma una
pequea porcin y se lleva sobre porta objeto y se agrega I gota de Ac.
Ntrico qp., se mezcla con vagueta. Si presenta color amarillo, que vira
lentamente al color verde lo que indica la presencia de herona.

En otro porta objeto se deposita II gotas del extracto se agrega I gota de


Ac. Ntrico q.p se mezcla con vagueta y se conservar color naranja, vira
rpidamente al rojo y despus al amarillo indica la presencia de morfina.

Procedindose de forma similar a lo anteriormente descrito, se aade I


gota de Ac. Ntrico q.p. se mezcla con vagueta y se observa la presencia

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de color naranja que en forma lenta vira al color amarillo lo que indica
presencia de codena.

3.2. Reacciones para Identificacin de Cocana Especifica:

Las muestras pueden ser de pasta bsica o clorhidrato de cocana:


En una capsula de porcelana se coloca pequea cantidad de la muestra
y se agrega la solucin de tiocianato de cobalto se mezcla con vagueta y
hasta que aparece un color azul estable.
Con los reactivos generales de alcaloides, las reacciones son generales y
por tanto, deben realizarse otras reacciones especificas si no hubiera
reactivos especficos se debe realizar la prueba con etanol, para
comprobar si el precipitado se debe a presencia de alcaloide.

3.3. Reacciones para el reconocimiento de Metodona (Demerol).

Test De cido Ntrico cido Sulfrico:

En capsulas de porcelana se pone II gotas de extracto etreo se aade I


gota de reactivo Ac. Sulfrico, se mezcla con la vagueta, se presentar
color naranja, que lentamente vira al rojo.

3.4. Reacciones para la Identificacin de Cannabis:

El extracto en ter o cloroformo en medio amoniacal se agrega II gotas


de vainillina, aparece color violeta.

3.5. Reacciones para el reconocimiento de Anfetaminas. Test De


MARQUIS:
En capsula de porcelana se deposita pequea cantidad del extracto
etreo, se aade II gotas de reactivo de MARQUIS, mezclar con vagueta,
aparece color naranja que despus vira al marrn.

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3.6. Reacciones para la Identificacin de LSD:

Reactivo:

1 gramos de dimetilamina benzaldehdo en 10 ml de metanol,


aadir 10 ml de cido ortofosfrico (se puede reemplazar por para
dimetilamina benzaldehdo)

En capsula de porcelana se coloca pequeo volumen del extracto


clorofrmico o etreo, agregar II gotas de reactivo de Ehrlich, mezclar
si aparece coloracin violeta en corto tiempo. Indica la presencia de
LSD.

3.7. Reaccin De Duquenois Negm para determinacin de marihuana


Reactivo:
400mg de vainilla se disuelven en 20 ml de etanol con 5 gotas de
aldehdo actico.

Triturar pequea cantidad de la muestra en un mortero al cual se le


aade 4 ml de reactivo Duquenois- Negm procurando impregnar bien la
muestra para realizar la extraccin de la resina. Se le filtra recogiendo el
filtrado en tubo de ensayo, al cual se le aade igual cantidad de HCl cc,
la reaccin da (+) cuando aparece color violeta antes de 10 minutos. Si
la coloracin no es visible agregarle cloroformo, si es (+) la reaccin
aparece color violeta en capa clorofrmica.

3.8. Determinacin de marihuana por Cromatografa en Capa Fina:

Fase Estacionaria: Silicagel GF 254

Fase Mvil: Benceno Cloroformo (3:7)

Reactivo Revelador: Reactivo de Duquenois

Resultados: Manchas violceas

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IV. RESULTADOS

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V. DISCUCIN

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VI. CONCLUSIONES

VII. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

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VIII. ANEXOS

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PRCTICA N 12

I. TTULO

Extraccin de glndulas de Loxosceles laeta y su efecto


sobre Oryctolagus cuniculus
II. INTRODUCCIN
Entre los accidentes producidos por artrpodos destacan las
mordeduras de araas. Estos accidentes constituyen graves problemas
clnicos cutneos y sistmicos que producen gran preocupacin, en especial,
porque son causa de numerosas muertes. El trmino Loxosceles proviene del
griego loxos: curvas y kelos: patas, caracterstica que les da un aspecto
circular o curvo. Sin embargo el criterio morfolgico ms prctico para
diferenciarla de otras araas domsticas es el nmero y distribucin de los
ojos, ya que poseen 6 ojos, a diferencia de la mayora de las araas que se
suelen encontrar en o cerca de los hogares, que poseen 4 pares de ojos.
El gnero Loxosceles, que cuenta con ms de 70 especies, es el
ms importante. En Amrica Latina la especie ms difundida es la
Loxosceles laeta, aunque tambin se encuentran otras como L. rufipes, L.
gaucho, L. intermedia, L. arizonica y L. rufenses. En el Per, entre las araas
venenosas ms frecuentes que producen accidentes en el ser humano, las
ms peligrosas son dos: la Loxosceles laeta (araa casera) y la Latrodectus
mactans (viuda negra o willca).
El loxoscelismo es el envenenamiento causado por la araa del
gnero Loxosceles, y constituye un serio problema de salud por su
ocurrencia frecuente, en especial, en la poca de calor. Este accidente puede
producir lesiones cutneas severas, deformantes, destructivas y, a veces,
invalidantes. Pero, lo ms peligroso es el cuadro cutneo-sistmico o
visceral, que es potencialmente mortal y requiere una atencin mdica
inmediata.
Las especies L. laeta y L. rufipes se encuentran fundamentalmente
a lo largo de la costa y sierra peruana. Son ms abundantes en las reas

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urbanas marginales y en las zonas rurales, en las que se les encuentra en


lugares secos sombreados y pedregosos, debajo de piedras, troncos de
rboles y cortezas. Estas araas son tmidas, solitarias, activas de noche,
usualmente son habitantes de la casa, por lo que se les conoce tambin
como araas caseras o del rincn. Se encuentran, sobre todo, en los
rincones oscuros de las habitaciones, bodegas, detrs de los cuadros y
muebles, en los entretechos y los guardarropas, en los que pueden
esconderse en las ropas, para despus morder al hombre accidentalmente
mientras se viste.
Las glndulas de Loxosceles producen un veneno poderoso que
tiene cuatro propiedades biolgicas bien definidas: cutneo necrotizante,
hemoltica, vascultica y coagulante; se han identificado tambin varias
enzimas (hialuronidasa, ATPasa y proteasas) y dos componentes peptdicos
sin actividad enzimtica responsable de la necrosis (esfingomielinasa D) y
con actividad coagulante in vitro.

III. MATERIAL Y MTODOS


3.1. MATERIAL
3.1.1. Material Biolgico
Araas Loxosceles laeta, capturadas en zonas urbanas o rurales
de la ciudad de Trujillo.
1 ejemplar de Oryctolagus cuniculus albinus.

3.1.2. Material Estril

Jeringas descartables de 1mL y 5 mL


Algodn
Viales
Guantes
Recipientes de boca ancha
Placas petri
Pinzas
Estiletes
Bolsas de polietileno

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3.1.3. Reactivos

Agua estril, solucin para inyeccin


Alcohol yodado

3.1.4. Equipos

Refrigeradora
Estereoscopio

3.2. MTODOS
3.2.1. Captura de especmenes Loxosceles laeta
Se realizar la bsqueda de los especmenes en lugares secos,
abrigados y oscuros. En la captura se utilizar recipientes de boca
ancha con la ayuda de una esptula, luego se trasvasar a bolsas
de polietileno y se llevar a guardar a refrigeracin.
3.2.2. Identificacin taxonmica de especmenes Loxosceles laeta
Se realizar la identificacin utilizando un estereoscopio, a fin de
observar el aspecto morfolgico de este gnero de araas que
presentan seis ojos dispuestos en tres pares, uno al lado izquierdo
de la probscide, otro par al lado derecho y un tercer par hacia
adelante. Este especmen presenta la forma de un violn invertido,
su abdomen es ovalado de color pardo oscuro y el cefalotrax de
color anaranjado, presenta 4 pares de patas largas y consistentes.
3.2.3. Extraccin del veneno

a. Extraccin de glndulas: se utilizar pinzas y estiletes para


retirar las patas, y antenas, y con la ayuda del estilete se
separa el abdomen del cefalotrax.
b. Se realizar presin con el estilete sobre el segmento de unin
del cefalotrax y con una pinza pequea se cogieron los
quelceros mediante torsiones leves hacia la derecha e
izquierda y ligera traccin, para obtener el par de glndulas.
c. Las glndulas extradas se colocaran en viales limpios y se
agregar 0. 2 mL de agua estril o solucin salina fisiolgica a
cada uno.

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d. Se preparar un homogeneizado de las glndulas extradas


utilizando un vagueta y se guardar en un vial.

3.2.4. Administracin del veneno en Oryctolagus cuniculus.

Se administrar 0.2 mL del veneno loxosclico va intradrmica en


el rea del pabelln de la oreja de Oryctolagus cuniculus, previa
asepsia con alcohol yodado. Se monitorizar hasta observacin del
efecto del veneno.

IV. RESULTADOS

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V. DISCUCIN

Mg. LIZARDO CRUZADO RAZCO / Q.F. CARMEN ROSA SILVA CORREA 94


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Mg. LIZARDO CRUZADO RAZCO / Q.F. CARMEN ROSA SILVA CORREA 95


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VI. CONCLUSIONES

VII. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

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VIII. ANEXOS

Mg. LIZARDO CRUZADO RAZCO / Q.F. CARMEN ROSA SILVA CORREA 97

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