Incertidumbre en mediciones 1. Elementales, por ejemplo, el anlisis de una aleacin (C, Cr, Ni).

2. De constituyentes, determinacin de las molculas o formas inicas presentes,

que emplean la tcnica de por ejemplo, anlisis del agua (CN-, CO32-).

El anlisis qumico forma parte de los ensayos que permiten garantizar la calidad de
espectrofotometra de UV- un producto. Est implicado en diferentes campos relacionados con la fabricacin de

Visible productos, el control de calidad de reactivos, su fabricacin, control de residuos

industriales, investigacin. El laboratorio encargado debe tomar numerosas medidas
para garantizar la confiabilidad, trazabilidad de sus resultados en un tiempo de
respuesta mnimo. Para alcanzar estos objetivos el laboratorio debe contar con los
1. OBJETIVOS
medios adecuados en gestin de calidad.

Objetivo General Un anlisis qumico puede realizarse a travs de las siguientes tcnicas: mtodos
qumicos clsicos, la muestra se somete a una reaccin nica; mtodos
Asegurar la confiabilidad del resultado en la determinacin de la concentracin de
fisicoqumicos, la muestra se somete a una reaccin qumica y previamente a un
Cobre (II) en disolucin.
mtodo fsico de dosificacin; y mtodos fsicos, la dosificacin se realiza sin
Objetivos Particulares reaccin qumica.

1. Estimar la incertidumbre. Estos mtodos tambin pueden clasificarse en funcin de los modos de calibracin
2. Demostrar esquemticamente la trazabilidad. a utilizar, o de su trazabilidad a los patrones primarios. De esta forma es posible
distinguir: mtodos absolutos, la magnitud medida depende directamente de la
3. Llevar a cabo la confirmacin metrolgica.
metrologa fundamental sea una medida de una masa o de un volumen; mtodos
4. Calificar equipos. relativos, la magnitud de medida se determina a continuacin de una calibracin
5. Aplicar las buenas prcticas de laboratorio en espectrofotometra previamente efectuada con la ayuda de disoluciones patrones sintticas, obtenidas a
ultravioleta-visible. partir de medidas que dependen directamente de la metrologa fundamental; y
mtodos comparativos, estos utilizan instrumentos que deben ser calibrados con la
ayuda de materiales de referencia cuya composicin qumica es similar a la de la
2. ANTECEDENTES
muestra a analizar.

El anlisis qumico permite caracterizar un producto cualquiera desde el punto de
vista cualitativo y cuantitativo. Cualitativo, de forma que define el o los elementos
qumicos contenidos. Cuantitativo, de forma que determina la proporcin de un
elemento particular en un producto. Segn los productos, los anlisis pueden ser:
Los mtodos fisicoqumicos generalmente estn basados en la medicin de
magnitudes fisicoqumicas cuya amplitud suministra una seal fsica proporcional a
la concentracin del constituyente medido. Estos mtodos forman parte de los
mtodos relativos. Por ejemplo la espectrometra de absorcin molecular (UV-Vis), la
espectrometra de absorcin atmica, la polarimetra, espectrometra de emisin de

15
plasma inductivo acoplado. Estos instrumentos se calibran con la ayuda de
disoluciones de referencia cuya preparacin est estrechamente relacionada con la
masa pesada. Sin embargo, la experiencia ha demostrado que es aconsejable
verificar la calibracin de estos instrumentos con la ayuda de materiales de
referencia certificados.
Un laboratorio que realice anlisis qumico debe responder a los problemas
planteados por este tipo particular de metrologa. Debe disponer de un perfecto
conocimiento de la metrologa fundamental, de un riguroso dominio de las tcnicas
de anlisis y de materiales de referencia certificados (MRC).
La curva de calibracin inicial debe incluir el blanco reactivo, y por lo menos, ocho
estndares que cubran toda la escala de concentraciones que se usarn en los
anlisis rutinarios y que permita medir el mtodo analtico.
El instrumento debe ponerse en cero con el medio de reaccin. A este punto se le
denomina lnea base del blanco. Cuando se traza la curva de calibracin, no se
resta el blanco reactivo de las otras lecturas, sino que se trata como un punto
correspondiente a la concentracin cero (C=0), las curvas de calibracin pueden ser
lineales o no lineales. En la mayora de los casos cuando son lineales se aplica la
ley de Lambert-Beer-Bouguer.

Todas las medidas, sobre todo en anlisis qumicos deben recurrir a lo MRC para: Para definir la lnea que mejor representa la relacin entre la absorbancia y la
concentracin de la disolucin, se ajusta la mejor curva que pasa por todos los
1. Calibrar los instrumentos de medida.
puntos, usando la metodologa de cuadrados mnimos, considerando para ello que:
2. Verificar el tiempo de la deriva de un instrumento de medida.
Y = b + mX (1)
3. Verificar la confiabilidad de un mtodo de medida.
4. Verificar la correcta realizacin de una medida. donde:

5. Estimar los intervalos de confianza en un mtodo de medida. Y = es la absorbancia (A).

6. Estimar los lmites de deteccin de un mtodo de medida. X = la concentracin de la disolucin (C).

2.1 Calibracin de un espectrofotmetro UV-Vis m = es la pendiente de la curva de calibracin (factor de calibracin).

b = ordenada al origen de la curva.
Los espectrofotmetros UV-Vis se calibran en sus dos escalas, fotomtrica y de
longitud de onda. Usando materiales de referencia certificados (MRC) para la escala La pendiente (m) y la ordenada al origen (b) estn dadas por las siguientes
de longitud de onda , y para la escala fotomtrica se usan filtros de densidad ptica ecuaciones:
neutra y filtros de material de cuarzo, adicionalmente se evala ruido fotomtrico, luz
n XY X Y
extraviada, estabilidad fotomtrica, linealidad y lnea base. El mensurando de la m=
n X 2 ( X )
2

calibracin de un espectrofotmetro UV-vis es el error de medicin o diferencia de (2)

indicacin del instrumento para la escala fotomtrica y para cada longitud de onda.

2.2 Medicin con curva de calibracin en un espectrofotmetro b=

( X )(Y ) ( XY )( X )
2

n X 2 ( X )
2

(3)
La medicin de un analito en un espectrofotmetro UV-vis puede ser a travs de
donde n es el nmero de observaciones (lotes de valores de C y de A).
una curva de calibracin.

16
El mensurando que se mide en el instrumento (Co), generalmente se obtiene de la MRC$ Muestra$
interpolacin de un valor de absorbancia en esa curva de calibracin,
Diluciones$ Tratamiento$de$la$muestra$
A0 = B0 + B1Co (4)

donde: Curva$de$calibracin$ Medicin$en$el$

espectrofotmetro$
UV;vis$
A0 = absorbancia del problema.
B0 = interseccin de la curva de calibracin ajustada.
Resultados$
B1 = pendiente de la curva de calibracin ajustada.
Fig. 1. Diagrama de bloques para una medicin realizada con un espectrofotmetro UV-vis.
Por lo que,
2.3 Estimacin de la Incertidumbre

C0
( A B0 )
= 0
B1 (5) De acuerdo a la Ec. 6, la concentracin del analito de inters dado en mg/L, tiene
principalmente tres fuentes de incertidumbre (Ec. 7): la de C0 obtenida como
Por otra parte, la medicin de la concentracin de cualquier elemento qumico por respuesta del instrumento, u(C0); la del factor de dilucin, u(fd); y la del factor de
espectrofotometra de UV-vis, est dada por la siguiente ecuacin: correccin, u(fc).

C = C0 fd fc (6) 2 2 2
C C C
uC = uC0 + u fd + u fc
donde: C0 fd fc (7)

C = mensurando (concentracin del analito).
C0 = mensurando que se mide en el instrumento.
fd = factor de dilucin.
fc = factor de correccin.
En algunas ocasiones tanto los factores de correccin como el de dilucin pueden
no estar presentes. En otras ocasiones el material a ser analizado requiere
tratamientos previos como digestin, separacin, extraccin entre otros. Todas estas
operaciones tienen una consecuencia en el resultado del mensurando o en la
incertidumbre o en ambas (Fig. 1).
2.3.1 Incertidumbre como respuesta del instrumento de medicin, u(C0)
Son consideradas tres las fuentes de incertidumbre debido al instrumento de
medicin: la de la interpolacin (curva de calibracin), u(i); la del MRC usado para la
curva de calibracin, u(MRC); y la incertidumbre del blanco, u(B).
uC0 = ui2 + uMRC
2
+ uB2
(8)
Incertidumbre de la curva de calibracin, u(i)
El diseo de la curva de calibracin tiene un fuerte impacto en el resultado de la
incertidumbre de medicin. El procedimiento de ajuste lineal por cuadrados mnimos

17
empleado asume que la incertidumbre de las abscisas es menor en comparacin donde:
con las incertidumbres de las ordenas. Por lo que u(C0) refleja la incertidumbre
Aj = medidas de absorbancia de cada una de las concentraciones de la curva de
debido a la variacin aleatoria en la absorbancia y no en la incertidumbre de las
calibracin.
concentraciones de los estndares, ni en las inevitables correlaciones inducidas por
las diluciones a partir del MRC. Se asume que la incertidumbre del estndar de B0 = ordenada al origen.
calibracin (MRC) es lo suficientemente pequea como para ser despreciable. B1 = pendiente de la curva de calibracin.

Debido a que el mensurando que se mide en el instrumento (C0) es el resultado de Ci = cada una de las concentraciones correspondientes a las absorbancias de la
una interpolacin, la incertidumbre est dada por el mejor estimado de la dispersin curva de calibracin.
de esa interpolacin y el mejor estimado es el intervalo de confianza de la ej = error residual.
interpolacin, el cual es estimado de la siguiente forma:
Los valores de S y SXX corresponden a:

( )
2
S 1 1 C0 C
ui = + +
A ( B )
n
+ B1 C j
2
B1 P n Sxx j 0

(9)
S= j=1

n2 (11)
donde:

( )
N
Sxx = C j C P
2
u(i) = incertidumbre de C0, obtenida de la curva de calibracin.
j=1 (12)
S = desviacin estndar residual.
B1 = pendiente de la curva calibrada. Incertidumbre del MRC, u(MRC)

P = nmero de repeticiones para obtener C0.
n = nmero de medidas en la curva de calibracin.
C0 = mensurando obtenido del instrumento a travs de la curva de calibracin.
C = valor medio de los diferentes valores de la curva de calibracin.
SXX = suma de las diferencias entre el valor medio de la curva de calibracin y cada
uno de los valores de los puntos de la curva.
Partiendo de la curva ajustada como:
A j = B0 + B1C + e j
(10)
Para asegurar la trazabilidad de la curva patrn, las soluciones se preparan con un
material de referencia certificado. El valor del certificado del material de referencia
tiene una incertidumbre asociada. La incertidumbre informada en el certificado esta
expandida normalmente a un nivel de cobertura de k (U), si este material de
referencia certificado fuera diluido es necesario incluir la dilucin y se tendra
entonces una incertidumbre combinada, considerando las incertidumbres aportadas
por las diluciones.
U
uMRC =
k (13)
Incertidumbre del blanco, u(B)

Solo si el mtodo aplica la correccin del blanco en la ecuacin del resultado final,
de lo contrario este componente no es tomado en cuenta. Una vez tomada la serie
18
de lecturas del blanco en la magnitud a medir, la incertidumbre corresponder a una 2 2
f f
incertidumbre de tipo A. u fd = d uV1 + d uV2
V1 V2 (16)
s(x)
uB =
n (14) Incertidumbre del volumen

donde: La incertidumbre del volumen tanto de V2 como de V1, tendrn las mismas fuentes
de incertidumbre, solo que contribuyen dos veces porque se est expuesto a tener
uB = incertidumbre del blanco. dispersin en las dos medidas. La incertidumbre del volumen depender del
u(x) = desviacin estndar del blanco. instrumento que se use para medir dichos volmenes: la incertidumbre del informe
de calibracin, u(IC); la del defecto por temperatura, u(T); la incertidumbre de la
n = nmero de repeticiones del blanco.
resolucin, u(resolucin); y la de la repetibilidad del analista, u(R).
2.3.2 Incertidumbre del factor de dilucin, u(fd)
El informe de calibracin con frecuencia entrega una incertidumbre con un nivel de

El factor de dilucin normalmente se emplea cuando se miden elementos qumicos confianza de k = 2, ademas el tipo de distribucin que se considera en una medida

en muestras con una concentracin mayor al intervalo de trabajo del mtodo, este de volumen es triangular, por estas dos caractersticas:

se obtiene a partir de un proceso de dilucin y pueden llevarse a cabo n diluciones

uV = uIC
2
+ uR2 + uresolucin
2
+ uT2
de la muestra. El modelo matemtico de una dilucin esta dado por: (17)

V2 donde:
fd =
V1 (15) U
uIC =
k , incertidumbre por la calibracin. U es la incertidumbre expandida del
donde,
informe de calibracin y k el factor de cobertura.
fd = Factor de dilucin.
s(x)
V2 = Volumen de aforo. uR =
n , incertidumbre por repetibilidad. Es obtenida por repeticiones del analista
V1 = Volumen de alcuota. en la medicin de volumen con el instrumento que se usa para la medicin.
En el proceso de una dilucin se identifican dos fuentes de incertidumbre, el V2 de Se estima la desviacin estndar de las repeticiones y la incertidumbre
aforo y el V1 de la alcuota de la muestra. La estimacin de incertidumbre del factor corresponde a una incertidumbre tipo A.
de dilucin, se realiza combinando las incertidumbres de ambas mediciones: dm
uresolucin =
volumen de la alcuota de muestra y volumen de aforo, de acuerdo a la siguiente 2 6 , incertidumbre por resolucin. dm = divisin mnima.
ecuacin,

19
 (T T20 ) V donde:
uT =
k , incertidumbre de la temperatura. El instrumento volumtrico es fc 1
calibrado a una temperatura de 20 C (T20). Registrar la =
CMRC C exp
temperatura ambiental del laboratorio (T) donde se hace la fc C
medida, y la incertidumbre depender de esa diferencia de = MRC
C exp C
2
exp
temperaturas. es el coeficiente de expansin del volumen de
agua por (0.00021 mL/). V es el volumen de la pipeta. uCMRC
, incertidumbre del material de referencia certificado.
2.3.3 Incertidumbre por el factor de correccin, u(fc)
s(x)
u =
C exp n
El factor de correccin se aplica nicamente cuando el mtodo lo indica, y su
incertidumbre debe ser incluida. 2.4 Confirmacin Metrolgica
El factor de correccin indica la prdida del mensurando por el tratamiento de
muestra o interferencias al mensurando, por lo que se mide a travs de una muestra La confirmacin metrolgica es un proceso que debe ser llevado a cabo en
control o empleando el mtodo de adicin de MRC y se calcula empleando el diferentes situaciones. Cuando el instrumento se va seleccionar de los catlogos del
siguiente modelo matemtico general, proveedor, cuando se compra, cuando se lleva a calibrar, despus de una
verificacin intermedia y cuando se hacen calificaciones. El proceso de confirmacin
CMRC metrolgica se inicia con la identificacin de los requisitos metrolgicos para el uso
fc =
C exp (18) especfico del instrumento. Estos requisitos son denominados requisitos
metrolgicos del cliente (RMC). Despus se lleva a cabo cualquiera de los procesos
donde: descritos de los cuales se tienen caractersticas metrolgicas del equipo de
fc = factor de correccin. medicin (CMEM). Estas caractersticas deben coincidir con los requisitos
metrolgicos, si es as se puede decir que el equipo esta confirmado
CMRC metrolgicamente hablando.
= concentracin del MRC.

C exp = promedio de valores obtenidos de forma experimental con el MRC. 2.5 Trazabilidad de las Mediciones

La incertidumbre esta dada como una incertidumbre combinada cuyas fuentes son Los aspectos relacionados con la trazabilidad de las medidas tienen que ser acordes
del valor del MRC y del promedio de los valores obtenidos experimentalmente. con lo dispuesto en la poltica vigente de la ema (entidad mexicana de acreditacin).
2 2
La trazabilidad de los materiales de referencia y equipos de medicin debe ser
fc f respecto a laboratorios acreditados por la ema, institutos nacionales de metrologa,
u fc = uCMRC + c u
CMRC
C exp C exp
signatarios del acuerdo de reconocimiento mutuo del CIPM o laboratorios
(19)
extranjeros acreditados por entidades firmantes de los ARM de ILAC.

20
2.6 Validacin del Mtodo de Medicin
En el documento criterios de aplicacin de la norma NMX-EC-17025-IMNC-2006 de
la ema, se establece que para los procedimientos de calibracin ya sean
normalizados o desarrollados por el laboratorio, ste debe aplicar uno o varios de
los incisos siguientes, tomando en cuenta que el fin es demostrar que el mtodo se
encuentra validado y que se identificaron y validaron los aspectos que puedan influir
sobre la trazabilidad y la incertidumbre de las mediciones:
La concentracin de una disolucin problema de Cu[NH3]42+, se puede determinar
midiendo la absorbancia de la misma. Una vez localizada la absorbancia en la
grfica, se encuentra en el correspondiente eje la concentracin de la disolucin
(Fig. 1). La concentracin de la disolucin de concentracin desconocida, puede
determinarse usando la pendiente de la recta generada a partir de la ley de
Lambert-Beer-Bouguer

Comparacin de resultados alcanzados con otros mtodos.

Comparaciones entre laboratorios. Cuando se comparan los resultados obtenidos
por uno o ms laboratorios externos (preferentemente acreditados) utilizando un
mtodo, y se analizan por medio de normas o documentos tcnicamente vlidos.
Evaluacin sistemtica de los factores que tienen influencia en los resultados.

3. PARTE EXPERIMENTAL

Figura 1. Curva de calibracin espectrofotomtrica.

Un espectrofotmetro UV-Vis permite determinar la longitud de onda apropiada
basada en la absorbancia espectral de la disolucin. Una alta concentracin de la 3.1 Material y Equipo
muestra en disolucin absorbe ms radiacin (y transmite menos), que una
disolucin con una baja concentracin. Una disolucin de Cu[NH3]42+ presenta una 1. Laptop (Mac OS, Windows).
coloracin azul, misma que es capaz de experimentar un estado excitado cuando es
2. Espectrofotmetro UV-Vis (Vernier SpectroVis Plus Spectrophotometer).
sometida a radiacin electromagntica en la regin del visible.
3. Programa Logger Pro-Demo (versin 3.10.2 en adelante).
Se deben preparar cinco disoluciones de Cu[NH3]42+, de concentracin molar
4. 7 celdas (cubetas) de plstico con tapa.
conocida (disoluciones estndar). Cada disolucin es transferida a una celda de
5. 6 matraces volumtricos de 10 mL (con informe de calibracin).
paredes planas y colocada en el espectrofotmetro de UV-Vis. La cantidad de luz
que penetra en la disolucin es usada para calcular la absorbancia de cada 6. 3 matraces volumtrico de 25 mL (con informe de calibracin).
disolucin. La grfica de absorbancia en funcin de la concentracin para las 7. 5 pipetas volumtricas (con informe de calibracin), de 1, 2, 3, 4 y 5 mL.
soluciones estndar, puede generar una relacin lineal. La relacin lineal entre la
8. Tela, preferentemente libre de grasa y que no deje pelusa.
absorbancia y la concentracin de la disolucin, es conocida cmo la ley de Lambert
y Beer. 9. CuSO45H2O.
10.NH4OH.

21
11.Disolucin de concentracin desconocida de Cu[NH3]42+.
4. RESULTADOS
12.Agua destilada.
Registrar en la Tabla 1 los valores de absorbancia para cada disolucin de la curva
3.2 Equipos auxiliares
de calibracin y muestra problema, en la longitud de onda mxima de absorcin.

El termmetro para medir la temperatura de las condiciones ambientales debe Tabla 1. Resultados del ensayo.
contar con calibracin vigente por un laboratorio acreditado, y resolucin de 1 C o
C [Cu (II)] Absorbancia Absorbancia Absorbancia
mejor. Ensayo
mol L-1 (ascendente) (descendente) (ascendente)
El higrmetro debe contar con calibracin vigente por un laboratorio acreditado, con 1 0.004
una resolucin del 1 % o mejor.
2 0.008
3.3 Desarrollo Experimental 3 0.012

4 0.016
1. Preparar 25 mL de una disolucin de sulfato de cobre (II) 0.04 mol L-1.
5 0.020
2. Preparar 25 mL de una disolucin 1:1 de NH4OH.
Desconocida /
3. Para la preparacin del blanco, tomar 1.0 mL de la disolucin 1:1 de NH4OH y 6
Problema
colocarla en un matraz volumtrico de 25 mL y aforar con H2O destilada.
4. Para la preparacin de las disoluciones de la curva de calibracin, colocar 1.0 mL
de la disolucin 1:1 de NH4OH a 5 matraces volumtricos de 10 mL; 5. CUESTIONARIO
posteriormente agregar 1.0, 2.0, 3.0, 4.0 y 5.0 mL de la disolucin de sulfato de
cobre (II) preparada en cada uno de los matraces volumtricos, respectivamente; 1. Cul es la concentracin (mol L-1) de la disolucin desconocida de Sulfato de
y por ltimo aforar con H2O destilada cada matraz volumtrico. Cobre (II) y su incertidumbre expandida (k = 2)?
5. Para la preparacin de la muestra problema, colocar colocar 1.0 mL de la 2. Cul es el esquema de la trazabilidad de la determinacin y de cada uno de los
disolucin 1:1 de NH4OH en un matraz volumtrico de 10 mL; posteriormente instrumentos usados?
agregar 2.5 mL de la disolucin de sulfato de cobre (II) en el matraz volumtrico y
3. Qu resultados de la prueba saldrn alterados si se dejan huellas en los lados
aforar con H2O destilada.
laterales de la cubeta que estn en lnea con la trayectoria de la luz del
6. Una vez encendido y conectado el espectrofotmetro a la PC va USB, realizar la espectrofotmetro?
calibracin correspondiente con el blanco o medio de reaccin.
4. Llevar a cabo las pruebas de calificacin del equipo.
7. Trazar los espectros de absorcin de ultravioleta y visible para las disoluciones de
5. Llevar a cabo el proceso de confirmacin metrolgica para la balanza,
la curva de calibracin y la muestra problema, cuidando la posicin vertical de la
espectrofotmetro y material volumtrico.
celda con respecto al haz incidente. Cada medicin se realiza por triplicado,
aplicando la siguiente secuencia: ascendente-descendente-ascendente.

22
6. REFERENCIAS

1. Determining the concentration of a solution: BeerLaw. Computer 17, pp

(17-1)-(17-4). Vernier.com.
2. Vernier Spectro Vis-plus Spectrophotometer. Manual de operacin. Vernier.com. 6
pp. 2015.
3. Gua Tcnica e incertidumbre en los servicios de calibracin de
espectrofotmetros UV_VIS. CENAM, Abril 2014. Pp 1-21.
4. Gua Tcnica sobre trazabilidad e incertidumbre en las mediciones analticas que
emplean la tcnica de espectrofotometra de ultravioleta visible. CENAM. Abril
2008. Pp1-68.
5. Gua sobre trazabilidad e incertidumbre en las mediciones analticas que emplean
la tcnica de espectrofotometra ultravioleta-visible. EMA-CENAM abril 2008.
6. Metrologa: Prctica de la medida en la industria. AENOR. Espaa 1999, pp.
395-402.
7. Fred H. Lohman J. Chem. Education 32 (3) 155.

8. EURACHEM / CITAC Guide. Quantifying Uncertainty in Analytical Measurement.

Second Edition.

23