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G Model

EIMC-1061; No. of Pages 6 ARTICLE IN PRESS


Enferm Infecc Microbiol Clin. 2014;xxx(xx):xxxxxx

www.elsevier.es/eimc

Revisin

Validacin y vericacin analtica de los mtodos microbiolgicos


Mara Luisa Camar-Sala a , Rosana Martnez-Garca b , Piedad Olmos-Martnez a ,
Vicente Catal-Cuenca c , Mara Dolores Ocete-Mochn d y Concepcin Gimeno-Cardona e,
a
Laboratorio de Salud Pblica, Centro Superior de Investigacin en Salud Pblica (CSISP), Valencia, Espa
na
b
rea de Calidad y Consultora, Instrumentos Cientcos SA (ICSA), Valencia, Espana
c
Departamento de I+D+i de Labaqua S.A., Alicante, Espana
d
Servicio de Microbiologa, Consorcio Hospital General Universitario de Valencia, Universidad Catlica de Valencia, Valencia, Espa
na
e
Servicio de Microbiologa, Consorcio Hospital General Universitario de Valencia, Universidad de Valencia, Facultad de Medicina, Valencia, Espa
na

informacin del artculo r e s u m e n

Historia del artculo: Los microbilogos clnicos deben asegurar, al mximo nivel permitido por el desarrollo cientco y tcnico,
Recibido el 13 de noviembre de 2013 la abilidad de los resultados. Esto implica que, adems de reunir los criterios tcnicos que aseguren su
Aceptado el 21 de noviembre de 2013 validez, deben ser realizados con una serie de garantas, que permitan obtener resultados comparables,
On-line el xxx
con independencia del laboratorio que los ejecute. En este sentido, el empleo de mtodos de referencia,
reconocidos y aceptados, es la herramienta ms ecaz para obtener estas garantas.
Palabras clave: Las actividades relacionadas con la vericacin y validacin de mtodos analticos ha cobrado gran
Validacin
importancia, debido por un lado al continuo desarrollo y actualizacin de tcnicas y equipos analticos
Vericacin
Control de mtodos
cada vez ms complejos, y por otro lado, al inters de los profesionales en garantizar la calidad de sus
procesos y resultados.
Se describen las deniciones de validacin y vericacin, las diferentes modalidades de valida-
cin/vericacin, as como los tipos de mtodos y el nivel de validacin necesario segn sea el grado
de normalizacin. Se comentan las situaciones en las que es obligatoria y/o recomendable la valida-
cin/vericacin, as como las particularidades que la validacin tiene en microbiologa.
Se incide en la importancia de potenciar el uso de las cepas de referencia como control en microbio-
loga y del uso de controles normalizados, as como en la importancia de la participacin en programas
de evaluacin externa de la calidad para poder demostrar competencia tcnica. Se hace hincapi en la
forma de calcular algunos de los parmetros imprescindibles para la validacin/vericacin, como son
la exactitud y la precisin.
El desarrollo completo de estos conceptos se puede consultar en el procedimiento microbio-
lgico SEIMC nmero 48: Validacin y vericacin de mtodos microbiolgicos disponible en:
www.seimc.org/protocolos/microbiologia.
2013 Elsevier Espaa, S.L. y Sociedad Espaola de Enfermedades Infecciosas y Microbiologa Clnica.
Todos los derechos reservados.

Validation and vercation of microbiology methods

a b s t r a c t

Keywords: Clinical microbiologists should ensure, to the maximum level allowed by the scientic and technical
Validation development, the reliability of the results. This implies that, in addition to meeting the technical criteria to
Verication ensure their validity, they must be performed with a number of conditions that allows comparable results
Control of methods
to be obtained, regardless of the laboratory that performs the test. In this sense, the use of recognized
and accepted reference methodsis the most effective tool for these guarantees.
The activities related to verication and validation of analytical methods has become very important,
as there is continuous development, as well as updating techniques and increasingly complex analytical
equipment, and an interest of professionals to ensure quality processes and results.
The denitions of validation and verication are described, along with the different types of valida-
tion/verication, and the types of methods, and the level of validation necessary depending on the degree
of standardization. The situations in which validation/verication is mandatory and/or recommended is
discussed, including those particularly related to validation in Microbiology.
Autor para correspondencia.
Correo electrnico: concepcion.gimeno@uv.es (C. Gimeno-Cardona).

0213-005X/$ see front matter 2013 Elsevier Espaa, S.L. y Sociedad Espaola de Enfermedades Infecciosas y Microbiologa Clnica. Todos los derechos reservados.
http://dx.doi.org/10.1016/j.eimc.2013.11.010

Cmo citar este artculo: Camar-Sala ML, et al. Validacin y vericacin analtica de los mtodos microbiolgicos. Enferm Infecc
Microbiol Clin. 2014. http://dx.doi.org/10.1016/j.eimc.2013.11.010
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It stresses the importance of promoting the use of reference strains as controls in Microbiology and the use
of standard controls, as well as the importance of participation in External Quality Assessment programs to
demonstrate technical competence. The emphasis is on how to calculate some of the parameters required
for validation/verication, such as the accuracy and precision.
The development of these concepts can be found in the microbiological process SEIMC number 48:
Validation and verication of microbiological methods www.seimc.org/protocols/microbiology.
2013 Elsevier Espaa, S.L. and Sociedad Espaola de Enfermedades Infecciosas y Microbiologa Clnica.
All rights reserved.

Objetivos e importancia de la validacin y vericacin de Modalidades o tipos de validacin


mtodos microbiolgicos
Existen 2 modalidades o tipos de validacin en funcin de que
El desarrollo y realizacin de anlisis de control microbiolgico se realice sobre un tipo de mtodo u otro. En funcin del mtodo
es una herramienta que tiene una repercusin decisiva en el mbito que se emplee los requisitos de validacin varan. As, se denen la
del diagnstico clnico, de la salud pblica, de la tecnologa alimen- validacin primaria y la secundaria o vericacin.
taria y del medio ambiente. En los ltimos anos las actividades La validacin primaria es un proceso exploratorio que tiene
relacionadas con la vericacin y validacin de mtodos analti- como meta establecer los lmites operacionales y las caractersticas
cos ha cobrado gran importancia debido por un lado al continuo de desempeno de un mtodo nuevo, modicado o caracterizado en
desarrollo y actualizacin de tcnicas y equipos analticos cada vez forma inadecuada. Debe dar origen a especicaciones numricas y
ms complejos, y por otro lado al inters de los profesionales en descriptivas para el desempeno e incluir una descripcin detallada
garantizar la calidad de sus procesos y resultados. y precisa del objeto de inters. La validacin primaria va prece-
La validacin puede denirse como el conjunto de procesos des- dida de la elaboracin de un esquema de ensayo especialmente
arrollados para la conrmacin mediante examen y la aportacin
disenado. Corresponde con la validacin inicial que deben llevar a
de evidencias objetivas que demuestren el cumplimiento de cier- cabo los laboratorios y casas comerciales que disenan un equipo
tos requisitos para el uso especco previsto de los procedimientos diagnstico, una prueba nueva o la unin en un solo protocolo de
analticos1 . varios mtodos normalizados o no. Tambin corresponde con la
De esta denicin se pueden destacar algunos puntos funda- caracterizacin que debe realizarse a una tcnica que se desarrolla
mentales: en un laboratorio para su propio uso (in house).
La validacin secundaria, revalidacin, validacin parcial o veri-
cacin se realiza cuando un laboratorio procede a implementar
1) La validacin se aplica exclusivamente a procedimientos. Aun- un mtodo desarrollado en otra parte. Esta validacin se centra en
que se ha utilizado esta palabra para equipos, en general se est la reunin de evidencias acerca de que el laboratorio est capaci-
sustituyendo esta palabra por la de cualicacin o calicacin. tado para cumplir las especicaciones establecidas en la validacin
2) Las palabras fundamentales desde el mbito de la documenta- primaria. Algunos organismos lo denominan vericacin y es la
cin son: conrmacin, mediante el aporte de pruebas objetivas, de que se
a) Se reere a un procedimiento de medida. cumplen los requisitos establecidos en las condiciones de uso de
b) Exige que existan unos requisitos preestablecidos y un uso ese laboratorio. Se trata de la validacin que hay que llevar a cabo
previsto. cuando se introduce un equipo diagnstico, mtodo o prueba en
c) Produce evidencias que deben quedar documentadas. un laboratorio clnico y que ya est validada primariamente por
organizaciones internacionales.
Normalmente la validacin secundaria emplea formas selec-
cionadas y simplicadas de los procedimientos empleados en
De la denicin dada queda claramente establecido que el obje- la validacin primaria, aunque posiblemente extendidas por un
tivo es conrmar la adecuacin del proceso de medida para el uso tiempo mayor. Las muestras naturales constituyen el material de
previsto. ensayo ptimo, y el trabajo solo requiere tratar el procedimiento
En general, la validacin de procedimientos se realiza cuando dentro de los lmites operacionales establecidos por la validacin
se pone en marcha una tcnica analtica. Su objetivo es garanti- primaria. En EE. UU. la FDA y el Clinical Laboratory Improvement
zar que los mtodos cumplen determinados criterios, en trminos Ammendments (CLIA 88) considera este proceso como la verica-
de precisin, exactitud, etc. El proceso de validacin es variable en cin y lo dene como la demostracin y documentacin realizada
funcin de diferentes criterios, como si se trata de un mtodo nor- una sola vez de que las caractersticas de una prueba son compa-
malizado o no y el tipo de mtodo segn sea un mtodo cualitativo rables a las establecidas por el fabricante antes de ser usado en
o cuantitativo. el diagnstico. Las caractersticas incluyen: precisin, exactitud,
La validacin es un proceso basado en estudios sistemticos de sensibilidad, especicidad y rango de resultados, lmite de detec-
laboratorio, mediante la cual se pone de maniesto que un pro- cin y/o cuanticacin y cuando sea apropiado, valor predictivo. La
cedimiento analtico determinado posee unas caractersticas de validacin parcial o vericacin tambin puede denominarse como
funcionamiento adecuadas a la aplicacin que se le quiere dar. Por prueba inicial de desempeno,
comprobacin del mtodo2 .
tanto, una validacin de un mtodo de anlisis incluye 2 aspectos
fundamentales: por una parte, la evaluacin de los parmetros de
calidad del mtodo y del proceso, y por otra la adecuacin de los Tipos de mtodos y grado de validacin segn el grado de
mismos a unos requerimientos analticos concretos determinados normalizacin
de antemano.
En funcin del mtodo que se emplee el laboratorio deber ele- En el caso de los laboratorios clnicos los profesionales estn
gir un tipo de validacin. Por ello es necesario las modalidades de muy acostumbrados a tener muy clara la diferenciacin entre
validacin y los diferentes tipos de mtodos existentes, segn sean mtodo comercial con marcado CE, aplicado exactamente como
normalizados o no. indica el fabricante, con alguna modicacin (por ejemplo, cambio

Cmo citar este artculo: Camar-Sala ML, et al. Validacin y vericacin analtica de los mtodos microbiolgicos. Enferm Infecc
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del mtodo de extraccin de los cidos nucleicos en el caso de una En el caso de los mtodos (tipo iv) la validacin deber
tcnica de PCR o aplicados a muestras que no aparecen validadas en completarse estudiando las diferentes variables que pudieran
el insert) y mtodos desarrollados por el propio laboratorio usando verse afectadas por las modicaciones propuestas de entre los
reactivos comerciales que s estn bien caracterizados, pero que parmetros: especicidad, sensibilidad, exactitud relativa, desvia-
no est validado el proceso completo para el que el laboratorio cin positiva, desviacin negativa, repetibilidad, reproducibilidad,
clnico lo va a utilizar. linealidad, incertidumbre y el lmite de cuanticacin dentro de una
Es importante comentar la denicin de tipos de mtodos segn variabilidad establecida y, en caso necesario, determinar cuantita-
las directrices denidas por la Entidad Nacional de Acreditacin tivamente estos parmetros. Las diferencias debidas a las matrices
(ENAC), y que los clasica en mtodos tipo i, ii, iii y iv, con exigencias (tipos de muestra) deben tenerse en cuenta al analizar diferen-
de validacin distintas3 : tes tipos de muestras, y los resultados deben evaluarse utilizando
mtodos estadsticos apropiados.
Mtodos normalizados (tipo i)

Son mtodos desarrollados por un organismo de normalizacin Situaciones y obligaciones en la validacin/vericacin


o por otras organizaciones bien establecidas, cuyos mtodos son
generalmente aceptados por el sector tcnico en cuestin. Estos Antes de incorporar una nueva tcnica a la rutina del laboratorio,
mtodos normalizados son considerados como de referencia, ya los mtodos y procedimientos analticos seleccionados se deben
que pueden ser utilizados para evaluar otros mtodos desarrollados evaluar y demostrar que aportan resultados satisfactorios antes de
para la misma determinacin. No requieren una validacin com- comenzar a utilizarlos. Estas situaciones son:
pleta, pero s la conrmacin de su correcta aplicacin. Se trata
de mtodos que el laboratorio aplica como ya est descrito en las
1) Cuando se incorpora un cambio en una tcnica analtica que se
normas.
encuentra en uso en el laboratorio, como por ejemplo cambio
de un equipo para extraccin, modicacin de los controles uti-
Mtodos alternativos al mtodo de referencia (tipo ii)
lizados, cambios en las condiciones instrumentales del mtodo
(tiempos, temperaturas, etc.).
Son mtodos que han sido validados por comparacin con el
2) Cuando se desea comparar el desempeno entre diferentes tc-
mtodo de referencia que corresponda, de acuerdo a un estndar
nicas analticas.
aceptado y que sean reconocidos formalmente como equivalentes
al mtodo de referencia por una organizacin tcnica competente e
independiente de acuerdo a unos datos experimentales obtenidos Cuando se valida un procedimiento analtico es necesario cum-
por ejemplo en ejercicios de intercomparacin. En esta categora plir 3 normas bsicas:
suelen incluirse los mtodos desarrollados por los fabricantes de
equipos. El laboratorio deber poseer evidencias de la validacin
a) Debe validarse todo el procedimiento analtico; en algunos tipos
del mtodo. Se tratarn a efectos de validacin como los mtodos
de procedimientos puede entenderse que nicamente es nece-
de referencia.
sario validar la etapa de medida instrumental (por ejemplo,
secuenciacin); esto es un error, ya que esta suele ser la que
Mtodos normalizados con modicaciones o basados en mtodos
introduce un error menor. Se ha de tener en consideracin que
de referencia (tipo iii)
el componente humano es el que incorpora una mayor contri-
bucin a la incertidumbre de la medida.
Son mtodos descritos en procedimientos internos del labo-
b) Debe validarse todo el intervalo de aplicacin del procedimiento
ratorio, que estn basados claramente en mtodos de referencia,
analtico (niveles mximo, mnimo y medio del rango de trabajo).
y que no suponen una modicacin tcnica respecto del mtodo
c) Debe validarse teniendo en cuenta la variedad de muestras (por
de referencia, entendiendo como modicacin tcnica aquella
ejemplo, sangre, plasma, orina, etc.).
que ponga en cuestin la validez tcnica del mtodo (por ejem-
plo, cambios relevantes en los controles utilizados, cambios en las
condiciones instrumentales, otras muestras, otros medios de cul- Asimismo, debe quedar constancia de los registros del proceso
tivo, diferentes tiempos/temperaturas de incubacin, equipos con de validacin, generalmente en los propios registros de anlisis del
distintas tolerancias a las especicadas, combinacin de partes del laboratorio, as como tambin de las conclusiones de la validacin,
mtodo normalizado con partes de una referencia bibliogrca, contrastando si se cumplen los criterios de aceptacin/rechazo de-
etc.). Estos mtodos deben mantenerse actualizados en relacin nidos a priori; estas conclusiones pueden registrarse en el informe
con el mtodo de referencia en que se fundamentan. No precisan de validacin. La extensin y amplitud de la validacin depender
de una validacin completa, pero s la comprobacin de su correcto pues del mtodo y de su aplicacin. En la tabla 1 se resumen estos
funcionamiento. aspectos.

Otros mtodos (tipo iv)


Tabla 1
Son aquellos mtodos desarrollados por el propio laboratorio o Validacin segn el tipo de mtodo
por cualquier otra parte, por ejemplo un fabricante o proveedor,
Tipo de mtodo Validacin
y que no disponen del reconocimiento de los mtodos de referen-
cia o alternativos. La validacin de estos mtodos deber ser tan No normalizado S
amplia como sea necesario para satisfacer las necesidades del tipo Normalizado con modicacin en su S
alcance
de aplicacin o del campo de aplicacin dados. Normalizado con valores de Se debe comprobar que se cumplen
Las caractersticas de funcionamiento que al menos se deben reproducibilidad, repetibilidad, los parmetros, pero se puede
conrmar en el caso de mtodos de referencia, alternativos y basa- exactitud realizar mediante la evaluacin de
dos en mtodos de referencia (tipos i, ii y iii), son la exactitud y la la calidad de los ensayos
Mtodos normalizados sin informacin Obtener los parmetros que faltan
precisin.

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Particularidades de los mtodos microbiolgicos. esta denicin coincide con la existente para material de refe-
Caractersticas de la medicin microbiolgica rencia, y por tanto deberan ser consideradas tambin materiales
de referencia. Sin embargo, tambin se entiende por material de
El proceso analtico microbiolgico obliga a tener en cuenta una referencia aquellas muestras suministradas por certicadores que
serie de caractersticas propias de los mtodos microbiolgicos que tienen un valor conocido y certicado de un nmero concreto
van a inuir en su forma de validacin, as como en el resultado nal de microorganismos de un determinado tipo, obtenido mediante
obtenido. la aplicacin de un determinado mtodo6,7 . Este caso incluira
A diferencia de las ciencias fsicas y qumicas, en microbiolo- tambin las cepas que se han usado en ensayos de intercompa-
ga se trabaja con microorganismos que se multiplican por divisin racin.
binaria y crecen exponencialmente.
Adems, el nmero de colonias observadas es solamente una
aproximacin del nmero de partculas vivas, y la viabilidad se Etapas del proceso de validacin/vericacin
dene como crecimiento por el propio mtodo, que depender del
medio de cultivo empelado, tiempo y temperatura de incubacin. El proceso de validacin/vericacin de un mtodo debe estar
Hay una falta de referencias comunes internacionales, y en conse- cuidadosamente planicado, por ello deben contemplarse los
cuencia la tasa de recuperacin absoluta no puede ser denida y siguientes pasos:
la trazabilidad es imposible, presentndose los recuentos obteni-
dos como recuperaciones relativas. Dado que se trabaja con seres
vivos, en muchas ocasiones impredecibles, los procesos de estabi- 1) Conocer el problema analtico a resolver. Los procedimientos y
lizacin de las muestras para disponer de un valor de referencia el alcance de la validacin no son siempre los mismos. Deben
o para poder realizar ensayos de reproducibilidad son complica- ser establecidos de acuerdo a las caractersticas del mtodo de
dos, siendo difcil, en muchos casos, asegurar completamente la ensayo utilizado por el laboratorio y tener en cuenta las necesi-
estabilidad. dades del solicitante de la prueba.
Siguiendo las recomendaciones de la gua de validacin G-04 2) Planicar las acciones a seguir. Esto implica especicar los requi-
de ENAC3 , la validacin de los mtodos de ensayo debe reejar sitos y condiciones a cumplir, determinar los parmetros de
las condiciones reales de ensayo. Esto puede conseguirse utili- desempeno del mtodo, establecer el diseno experimental y el
zando muestras contaminadas naturalmente o inoculadas con un mtodo de anlisis de resultados. El diseno experimental y
nivel conocido de microorganismos contaminantes. El microbi- el anlisis de resultado tienen que ser estadsticamente vlidos.
logo debe ser consciente de que la inoculacin de una matriz En esta etapa es fundamental denir el alcance de la validacin
(muestra) con microorganismos contaminantes imita tan solo de de acuerdo al mtodo a emplear, especicar la muestra en la
una manera supercial la presencia de contaminantes naturales. que se va a aplicar; establecer condiciones tales como tempera-
No obstante, a menudo es la mejor y la nica solucin disponible. tura y tiempo de incubacin, lmites de operacin; realizar una
En general, en el campo de la medida microbiolgica no se dis- clara descripcin del/los microorganismos de inters; y estable-
pone de patrones como ocurre en el campo fsico. Sin embargo, cer otras limitaciones y especicaciones. Si los parmetros de
como consecuencia del avance de las necesidades de comparabili- realizacin no estn ya especicados, el laboratorio debe decidir
dad entre laboratorios ha sido necesario desarrollar herramientas cules deben ser caracterizados con el n de validar el mtodo,
similares. A estas muestras que tienen como objetivo ser una base lo cual deber estar fundamentado de manera able y cientca.
comn y able para todos los laboratorios se les ha denominado Se planicar todo en funcin del protocolo de validacin.
materiales de referencia. 3) Llevar a cabo la validacin y evaluar los resultados obtenidos,
Se dene como material de referencia al material o sustancia por comparacin con los parmetros establecidos. Conrmar
de la que uno o ms de los valores cuyas propiedades son sucien- la validez del procedimiento utilizado de acuerdo al propsito
temente homogneas y claramente establecidas como para poder establecido, y si se han satisfecho los requisitos.
ser utilizadas en la calibracin de un aparato, la valoracin de un 4) Realizar el informe de validacin.
mtodo de medicin o la asignacin de valores a materiales4,5 .
Para obtener los valores de la propiedad se ha empleado un
mtodo de referencia, que se dene como un mtodo investigado As pues, se puede denir que los criterios generales de vali-
a fondo que describe, con claridad y exactitud, las condiciones y dacin consisten en el proceso de evaluacin de las caractersticas
los procedimientos para la medicin de los valores de una o ms de un procedimiento de medida y la comprobacin de que dichas
propiedades, cuando se ha demostrado que tiene una exactitud y caractersticas cumplen una serie de requisitos preestablecidos.
una precisin adecuadas para la nalidad pretendida y, por consi- Una validacin requiere una serie de actividades o criterios
guiente, puede utilizarse para evaluar la precisin de otros mtodos generales de validacin1 :
para la misma medicin, permitiendo especialmente la caracteri-
zacin de un material de referencia.
Sin embargo, en el campo microbiolgico se producen hechos 1) Denicin de requisitos: ser en funcin del tipo de mtodo y
diferenciadores importantes respecto de otros campos: denir rangos para los parmetros.
2) Denicin del mtodo.
1) Pueden producirse mutaciones. 3) Obtencin de muestras o cepas con valor de referencia para
2) Los mtodos no son denitivos y diferentes microorganismos poder realizar comparaciones.
pueden actuar de la misma manera. 4) Aplicacin del mtodo a las muestras en las condiciones esta-
blecidas.
Por ello, adems, en microbiologa existen otro tipo de mate- 5) Obtencin de valores de los parmetros.
riales que se utilizan tanto para comprobar la validez de los 6) Comprobacin del cumplimiento de requisitos y declaracin de
mtodos como para controlar los medios de cultivo utilizados en validez del mtodo.
los anlisis microbiolgicos. Son las denominadas cepas de refe-
rencia. Se entiende coloquialmente por cepa de referencia un
cultivo procedente de una coleccin reconocida. Evidentemente En la gura 1 se muestran las fases del proceso de validacin.

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Diseo y Comparacin
Mtodo a Datos de Anlisis Mtodo
ejecucin de con
validar validacin estadstico validado
ensayos requisitos

Figura 1. Fases del proceso de validacin.

Parmetros de validacin/vericacin de un mtodo. objetivo pretendido y que la cuanticacin de la diana no se debe


Deniciones ver afectada por la reactividad cruzada de otros analitos relaciona-
dos o potencialmente interferentes. Los 2 aspectos de especicidad
Los parmetros de un mtodo son las caractersticas del mismo, analtica son pues la reactividad cruzada y la interferencia. Ambos se
que le hacen apto para un uso previsto. La Gua de Validacin ENAC determinan mediante la realizacin de estudios de interferencia.
ya indica una serie de parmetros a tener en cuenta. Los parmetros de validacin de mtodos cualitativos (sen-
Los parmetros de validacin de un determinado mtodo deben sibilidad, especicidad, falsos positivos, falsos negativos, eciencia)
estudiarse para cada microorganismo diana y para cada muestra. pretenden demostrar la no inuencia de microbiota acompanante
La seleccin de las muestras a validar se realizar en funcin del en el resultado del ensayo, por lo que se debern preparar mues-
alcance de acreditacin y del uso clnico del mtodo a validar. tras que contengan el microorganismo objetivo y otros similares al
Algunos de estos parmetros son: objeto del estudio.
Desviacin positiva o falso positivo: una desviacin positiva
Lmite de deteccin del mtodo ocurre cuando un mtodo da un resultado positivo sin conrmacin
y el mtodo de referencia da un resultado negativo. Esta desviacin
Es la menor magnitud que puede examinarse de un analito (por se convierte en un resultado falso positivo cuando puede demos-
ejemplo, microorganismo, etc.), que puede determinarse con un trarse que el resultado verdadero es negativo.
nivel aceptable de exactitud y precisin. Es la concentracin real Desviacin negativa o falso negativo: una desviacin negativa
ms baja de analito en una muestra que puede ser detectado consis- ocurre cuando un mtodo da un resultado negativo sin conr-
tentemente (por ejemplo, en el 95% de los especmenes probados) macin y el mtodo de referencia da un resultado positivo. Esta
con una precisin aceptable, pero no necesariamente cuanticado, desviacin se convierte en un resultado falso negativo cuando
en condiciones de laboratorio de rutina y en un tipo de muestra puede demostrarse que el resultado verdadero es positivo.
denida. En el caso de los cultivos microbiolgicos es el nmero Sensibilidad analtica: es la fraccin del total de positivos correc-
mnimo de organismos que pueden ser detectados en una can- tamente asignados en los recuentos presuntivos.
tidad de muestra con una probabilidad dada, pero en cantidades Especicidad analtica: es la fraccin del total de negativos
que no pueden ser claramente cuanticadas. Se establece determi- correctamente asignados en los recuentos presuntivos.
nando o una muestra o material de referencia apropiado. Se aplica
generalmente a mtodos cualitativos. Exactitud

Lmite de cuanticacin Es el grado de concordancia entre el resultado de una medicin


y el valor de referencia aceptado. Su estudio implica disponer de un
Es la concentracin mnima de un analito (por ejemplo, micro- material de referencia frente al que comprobar si existen diferen-
organismo, etc.) que puede determinarse con un nivel aceptable de cias estadsticamente signicativas entre los valores obtenidos por
exactitud y precisin. Se aplica a mtodos cuantitativos. aplicacin del mtodo del laboratorio y el valor de referencia.

Selectividad/especicidad Precisin

Grado en que un mtodo puede determinar un analito parti- Es el grado de concordancia entre los resultados obtenidos al
cular en una muestra, sin ser interferido por otros componentes. aplicar el procedimiento analtico repetidas veces bajo condiciones
La especicidad analtica (proporcin de muestras que no contie- establecidas. La precisin depende solo de la distribucin de errores
nen el microorganismo investigado y responden negativamente al aleatorios y no tiene ninguna relacin con el valor verdadero o el
mtodo). Es la fraccin total del nmero de resultados negativos valor especicado. Se expresa como coeciente de variacin.
asignados correctamente con el mtodo utilizado. La especicidad En el caso de que las condiciones establecidas sean mismo ope-
analtica se reere a la capacidad de un ensayo para detectar solo el rador, laboratorio, aparato, en corto intervalo de tiempo y sobre la

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misma muestra y la diferencia entre 2 resultados de ensayo pueda no se puede disponer de muestras de valor de referencia estable,
esperarse dentro de una determinada probabilidad (95%) a este o cuando sindolo no se disponga de cantidad suciente. Esta
valor se le llama repetibilidad. sistemtica se basa en la utilizacin de resultados de intercom-
En el caso de que las condiciones establecidas permitan cam- paraciones en las que haya participado el laboratorio, y utilizar
biar (operador, laboratorio, aparato, etc.) y la diferencia entre 2 estos datos como valores de referencia.
resultados de ensayo pueda esperarse dentro de una determinada
probabilidad (95%), a este valor se le llama reproducibilidad8,9 . La participacin en intercomparaciones permite una evaluacin
del sesgo de forma que el laboratorio pueda demostrar que se man-
Tcnicas para la validacin tiene dentro de los criterios de aceptacin denidos por normas,
reglamentos, por el cliente o por el laboratorio.
El desarrollo de estos conceptos se puede consultar en el
Para la validacin es conveniente utilizar una o varias de las
procedimiento microbiolgico SEIMC nmero 48: Validacin
tcnicas siguientes para la determinacin del desempeno de un
y vericacin de mtodos microbiolgicos disponible en:
mtodo:
www.seimc.org/protocolos/microbiologia11 .
1) Contaminacin de muestras articialmente. La validacin de
Conicto de intereses
mtodos microbiolgicos debe ser reejo de las condiciones
de ensayo reales. Esto se puede conseguir utilizando muestras
Los autores declaran no tener ningn conicto de intereses.
contaminadas naturalmente o muestras contaminadas o forti-
cadas a un determinado nivel. En general, el proceso consiste
en la preparacin de una muestra agregando el material inter- Bibliografa
ferente a una muestra real que contenga el material a ensayar.
1. Qualitative and quantitative, microbiology. Guidelines for methods, validation.
Una segunda alcuota de la muestra original se diluye con un sol- J AOAC Int. 1999:132.
vente, y ambas se analizan determinndose la diferencia entre 2. Directiva 98/79/CE del Parlamento Europeo y del Consejo, de 27 de octubre 1998
en diagnstico in vitro mdicos; 1998.
ambas.
3. Gua para la acreditacin de laboratorios microbiolgicos. Gua G-ENAC-04 Rev.
2) Uso de materiales de referencia o materiales de referencia cer- 3 noviembre 2002. p. 117.
ticados. Esta alternativa tiene algunos inconvenientes como el 4. Trminos y deniciones utilizados en relacin con los materiales de referencia.
elevado coste econmico, la posibilidad y facilidad de encontrar Gua ISO 30. 1992:123.
5. Rabenau HF, Kessler HH, Kortenbusc M, Steinhorst A, Berger A. Guidelines for
un material de referencia sucientemente representativo de la the methodical validation and verication of virus diagnostic laboratory tests. J
muestra a validar. Clin Virol. 2007;40:938.
3) Comparacin de resultados obtenidos con otros mtodos alter- 6. Criterios generales para la acreditacin de laboratorios de ensayo y calibracin
segn norma UNE-EN ISO/IEC 17025. CGA-ENAC-LEC Rev. 5 octubre 2009. p. 1-7.
nativos. Se analizan muestras de pacientes por el mtodo en 7. ENAC. Anlisis microbiolgico. Documento aclaratorio. Nota tcnica NT-32. Rev.
estudio y otro mtodo de comparacin, luego se estima el 3 abril 2012. p. 17.
error sistemtico basndose en las diferencias observadas entre 8. Jacobson RH. Validacin de pruebas serolgicas para el diagnstico de enferme-
dades infecciosas. Rev Sci Tech Off Int Epiz. 1998;17:50726.
ambos mtodos. El mtodo de comparacin debera ser, en la 9. Gua para la expresin de la incertidumbre de los resultados, cuantitativos. Gua
medida de lo posible, el de referencia (gold standard). G-ENAC 9. 2005:121.
4) Comparaciones interlaboratorios10 (validacin por pares de 10. Poltica de ENAC sobre intercomparaciones. NT-03 Rev. 5 septiembre 2012. p.
112.
valores). La validacin por pares de valores es aplicable cuando
11. Validacin y vericacin de mtodos microbiolgicos. Procedimientos micro-
no es posible utilizar ninguno de los mtodos anteriores, es decir, biolgicos. SEIMC. 2013; 48:1-35 [consultado 18 Sep 2013]. Disponible en:
no es posible realizar contaminacin articial de las muestras, http://www.seimc.org/protocolos/microbiologia

Cmo citar este artculo: Camar-Sala ML, et al. Validacin y vericacin analtica de los mtodos microbiolgicos. Enferm Infecc
Microbiol Clin. 2014. http://dx.doi.org/10.1016/j.eimc.2013.11.010

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