UNIVERSIDAD DE LA SERENA LABORATORIO DE BIOQUMICA

FACULTAD DE CIENCIAS PEDAGOGA EN QUMICA Y

DEPARTAMENTO DE BIOLOGA CIENCIAS NATURALES

PROPIEDADES DE LAS PROTENAS

Javiera Iter Carvajal, Michael Latapiat Castro, Paulina Valdivia Chavarra.

e-mail contacto: javiera.belen.lml@gmail.com; michael.latapiat@gmail.com; pvaldivia3@alumnosuls.cl.

RESUMEN

Las protenas organizan la mayor parte de los procesos vitales a todos los niveles, estas a su vez de acuerdo a su composicin
y forma pueden desempear una gran variedad de funciones, por lo cual poseen algunas propiedades caractersticas.

En este prctico se realiz un anlisis de estas propiedades a travs de diferentes mtodos, como la cuantificacin de
protenas por el mtodo colorimtrico de biuret determinando la concentracin de una muestra problema. Adems, se analiz
la propiedad amortiguadora de pH de las protenas plasmticas, mediante titulacin con HCl, se realizaron titulaciones a: un
suero sanguneo, suero proteinizado y un control, determinando a su vez los gastos y miliequivalentes de titulante consumido.

Los grupos cidos o bsicos libres de las cadenas polipeptidicas se ionizan en funcin del pH del medio, por lo cual tambin
en este prctico determinamos el punto isoelctrico de la casena, a travs de diluciones consecutivas, ya que una protena en
su punto isoelctrico est en su mnima solubilidad. Las protenas pueden precipitar de las soluciones mediante agentes
precipitantes con la carga opuesta de la protena, por lo cual en la ltima actividad evaluamos la solubilidad de las protenas
frente a diferentes tipos de soluciones inica, de lo cual obtuvimos que la protena en presencia de cationes precipita en un
medio bsico, mientras que en presencia de aniones precipita en medio cido.

Por lo tanto, es importante destacar como este prctico contribuir al anlisis correspondiente de las propiedades de las
protenas y como estas actan en nuestro organismo, ya que, la identidad de un individuo viene determinada por el conjunto
de protenas.

PALABRAS CLAVE: Protenas, enlace peptdico, estructura, amortiguadora, pH, solubilidad, carga elctrica. Punto isoelctrico.

secundaria se refiere a disposiciones particularmente estables de los

INTRODUCCIN
Las protenas y los pptidos son polmeros de aminocidos en
los que los aminocidos individuales, llamados residuos, estn
unidos por enlaces amida, o enlaces peptdicos. Un grupo amino de
un residuo forma un enlace amida con el carboxilo de un segundo
residuo; el grupo amino del segundo forma un enlace amida con el
carboxilo de un tercero y as sucesivamente. [1]
aminocidos que dan lugar a patrones estructurales repetitivos,
encontramos dos tipos, alfa hlice y plegada. La estructura terciaria
describe todos los aspectos del plegamiento tridimensional de un
polipptido y cuando una protena posee dos o ms unidades
polipeptidicas, su disposicin en el espacio se denomina cuaternaria. [2]

En la gran mayora de los aminocidos naturales el grupo amino

se encuentra enlazado con el carbono, que lleva tambin el grupo
carboxilo. Este carbono se denomina alfa, el cual es asimtrico, ya
que posee cuatro constituyentes diferentes entre s: grupo carboxilo,
un radical y un grupo amino.

Figura 2. La estructura secundaria.

Las protenas tienen diferentes propiedades dependiendo de la

Figura 1. Cadena de Aminocidos
Se definen normalmente cuatro niveles de estructura de las
protenas. La Estructura primaria es una descripcin de todos los
enlaces covalente que unen los aminocidos de una cadena
polipeptidica, el elemento ms importante de la estructura primaria
es la secuencia de los residuos de aminocidos. La estructura
composicin y forma que posean, entre ellas se pueden destacar cuatro
propiedades. La primera constituye su especificidad y variabilidad, ya
que cada protena es especifica. Por otro lado, las protenas poseen un
poder de amortiguacin debido a que poseen un carcter anftero, de
esta forma pueden neutralizar las variaciones del pH que se produzcan
en el medio acuoso donde se encuentren. La solubilidad en tanto, se
presenta como otra propiedad debido a que estas macromolculas
tienen un elevado peso molecular y son solubles en muchas soluciones
salinas diluidas. Se destaca, adems, que los aminocidos polares con

PROPIEDADES DE LAS PROTENAS. 1

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carga confieren a las protenas, una carga elctrica que le permite
moverse en un campo elctrico, por lo cual este movimiento les
permite separarse de los distintos componentes proteicos de un
extracto por ejemplo mediante electroforesis.
La electroforesis de protenas en un gel de poliacrilamida,
permite la determinacin de propiedades cruciales de una protena
tales como su punto isoelctrico y su masa molecular aproximada,
el gel de poliacrilamida acta como un tamiz molecular, retrasando
la migracin de protenas en una forma aproximadamente
proporcional a su cociente carga/masa. En este proceso, la fuerza
que mueve la macromolcula es el potencial elctrico, E. La
movilidad electrofortica de la molcula , es el cociente entre la
velocidad de la partcula, V, y el potencial elctrico. El
desplazamiento de una protena en un gel durante una electroforesis
es por tanto funcin de su tamao y de su forma.
Figura 3. Electroforesis de protenas en un gel de
poliacrilamida.
La estabilidad de una protena est dada por la estructura final
de una protena, denominada estructura nativa, es su conformacin
ms estable en las condiciones llamadas fisiolgicas (temperatura
entre 20 y 37 C y pH prximo al neutro). Si las condiciones de
temperatura y pH cambian, elevando la temperatura por encima de
los 70 C o haciendo el medio muy acido o alcalino, los enlaces que
mantienen unida a la estructura se desestabiliza y se rompen, dando
lugar a lo que se conoce como desnaturalizacin.
Dentro de esta prctica de laboratorio tuvimos los siguientes
objetivos: (1) Construir una curva de calibracin de albumina por
medio de un mtodo colormetro de reconocimiento de protenas,
(2) graficar la expresin lineal de esta curva, generando la regresin
lineal del mtodo analtico y calcular la concentracin de una
muestra problema de solucin proteica por el mismo mtodo, (3)
evaluar la capacidad amortiguadora de las protenas, (4) determinar
el punto isoelctrico de la casena, (5) evaluar la solubilidad de
protenas frente a diferentes tipos de soluciones inicas.
PROPIEDADES DE LAS PROTENAS.
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PEDAGOGA EN QUMICA Y
CIENCIAS NATURALES
MATERIALES Y MTODOS
Determinacin de la longitud de onda ptima por el mtodo
biuret.
Se preparan 7 tubos con diferentes concentraciones del patrn de
albumina en una disolucin, a la que luego se le adiciona a cada tubo 3
mL de reactivo de Biuret. Posteriormente se coloca cada tubo en un
bao trmico a 37 C durante 10 minutos, cada muestra se coloca en
una celda fotomtrica junto con una solucin problema. Se realiza la
medicin a 540 nm de longitud de onda en cada muestra. A
continuacin, se registran los valores de absorbancia y se representa
grficamente. Se analizan los resultados y se determina una regresin
lineal. Se interpola a continuacin en la ecuacin de la recta para
determinar la concentracin de la muestra problema. [Revisar Anexo
1.]
Propiedad amortiguadora del pH de las protenas plasmticas.
Se prepararon tres disoluciones uno con suero sanguneo, otro con
suero desproteinizado y una disolucin control. Con el suero sanguneo
se deposit en un vaso de precipitado 2 mL de agua destilada y 1 mL
de suero sanguneo, se agit la solucin y se le aadieron 5 gotas de
Rojo de Metilo, posteriormente se titul con HCl 0,01 N hasta lograr
un cambio de coloracin, se registr el gasto de HCl utilizado y se
calcularon los miliequivalentes consumidos.
En el caso del suero desproteinizado, se depositaron 1 mL de suero
sanguneo en un tubo de ensayo y se llev a bao termorregulador
(100C) durante 10 minutos, hasta lograr un precipitado color amarillo.
Luego al tubo, se le adicionaron 2 mL de agua destilada, se moli el
precipitado con una varilla y se filtr. A continuacin, se aadieron 5
gotas de Rojo de Metilo, y se titularon con HCl 0,01 N hasta que se
not un cambio en la coloracin. Se registr el gasto de HCl utilizado
y se calcularon los miliequivales consumidos.
En el caso de la disolucin control, se titularon 3 mL de agua
destilada mezclada previamente con 1 gota de Rojo de Metilo. Se
titularon con HCl 0,01 N, se registr el gasto y se calcularon los
miliequivalentes consumidos.
Determinacin del punto isoelctrico de la casena.
Se realiz una dilucin secuenciada, se enumeraron 9 tubos de
ensayo, al tubo uno, se le aadieron 3,2 mL de HOAc 1 N y 6,8 mL de
agua destilada, se agit. Luego, a los 8 tubos posteriores se le
adicionaron 5 mL de agua destilada a cada uno. Se obtuvieron 5 mL del
primer tubo y se depositaron en el segundo tubo, se agit y se repiti el
procedimiento con los 7 tubos siguientes, hasta el ltimo tubo en donde
se desecharon los 5 mL. Luego a todos los tubos se le aadieron 1 mL
de solucin de casena y se registr el efecto inmediato, adems del que
se produjo pasado 30 minutos.
Precipitacin de protenas con cationes y aniones.
En este proceso se enumeraron 8 tubos de ensayo, a los cuatro
primeros se le adicionaron 1 mL de HCl 0,1 N, a cada uno. A los cuatro
tubos siguientes se le adicionaron 1 mL de NaOH 0,1 N, a cada uno. A
los tubos de ensayo con la solucin cida, se le aadieron, al primero 1
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mL de Acetato de Plomo, al segundo Sulfato de Zinc, al tercero Determinacin del punto isoelctrico de la casena.
Tungstato de Sodio y al 4 Ferrocianuro de Potasio. Se observ la Precipitacin de protenas con cationes y aniones.
presencia de precipitado en cada caso. Se realiz el mismo
procedimiento para los tubos con solucin bsica. Se registraron las A partir de los datos obtenidos se calcul la concentracin en
observaciones pertinentes. miliequivalentes de cido, base y el pH de cada tubo; luego, se
encontr que el cido actico tiene un pKa de 4,7. Los valores se
visualizan en la tabla 3.
RESULTADOS
Tabla 3. Expresin de los resultados.
Determinacin de la longitud de onda ptima para el
mtodo biuret. Observaciones Observaciones
N [cido] [Base] pH
Iniciales Finales
1 0,32000 0,0166 3,41 Soluble Soluble
Los valores de absorbancia obtenidos en funcin de la 2 0,16000 0,0166 3,72 Soluble Soluble
concentracin de albumina para cada tubo, se muestran a
3 0,08000 0,0166 4,02 Soluble Precipitado
continuacin.
4 0,04000 0,0166 4,32 Precipitado Precipitado*
5 0,02000 0,0166 4,62 Precipitado Precipitado
Tabla 1. Valores de absorbancia.
6 0,01000 0,0166 4,92 Precipitado Precipitado
7 0,00500 0,0166 5,22 Precipitado Precipitado
N Tubo Concentracin A
(mg/mL) 8 0,00250 0,0166 5,52 Soluble Soluble
1 0 0 9 0,00125 0,0166 5,82 Soluble Soluble
*Gran formacin de precipitado.
2 0,5 0,106
3 1 0,215
Precipitacin de protenas con cationes y aniones.
4 1,5 0,392
5 2,0 0,514
6 2,5 0,635 En la siguiente Tabla se muestra la presencia de precipitado
7 3,0 0,758 con un signo positivo o la ausencia de este con un signo negativo
de acuerdo a la precipitacin en medio acido o en medio alcalino.
Problema x 0,124
Tabla 4. Resultados de Precipitacin.
1 Iones HCl (Acido) NaOH (Base)
Acetato de Plomo 10 % - +
0,8 y = 0,2653x - 0,0275 Sulfato de Zinc 10% - +
R = 0,9961 Tungstato de Sodio 10% + -
Absorbancia

0,6 Ferrocianuro de Potasio 1,0% + -

0,4
0,2 DISCUSIN
0 Determinacin de la longitud de onda ptima para el mtodo
0 1 2 3 4 biuret.
Concentracin, (mg/L)
La curva de calibrado obtenida ha arrojado un valor de R2 igual a
Figura 4: grfico de Absorbancia versus concentracin de 0,9961, lo cual indica que existe una correlacin de los datos
albmina. aceptable. Luego, se midi la absorbancia de la muestra problema
obtenindose un valor de 0,124. Por lo tanto, debido a que el valor
Propiedad amortiguadora del pH de las protenas encontrado de absorbancia est comprendido entre los valores de
plasmticas. absorbancia de los tubos 2 y3, la concentracin de albmina debe
estar comprendida entre 0,5 ppm y 1 ppm. Efectivamente, se
Los valores de los gastos obtenidos a travs de las encontr un valor de 0,57 ppm al sustituir la absorbancia de la
titulaciones con HCl 0,01 N se muestran en la Tabla 2. muestra en la ecuacin de la recta, lo cual se corresponde con lo
esperado.
Tabla 2. Valores obtenidos del gasto y los miliequivalentes de
HCl. Propiedad amortiguadora del pH de las protenas plasmticas.
Gasto de HCl Miliequivalentes
Muestra
(mL) de HCl. Los tampones son disoluciones capaces de amortiguar los
Suero Sanguneo 2.4 0,024 cambios que presenta el pH del medio. Esta propiedad de
Suero desproteinizado 0.6 0,006 manifiesta en el suero proteinizado al compararlo con su homlogo
Control 0 0 desproteinizado; en el primer caso se requiere un volumen 4 veces
superior respecto del segundo caso, lo cual sugiere que el primer

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sistema se resiste ms al viraje del indicador, lo cual seala que
para generar variaciones importantes en el pH se requiere un
gran volumen de titulante cido. Por lo tanto, las protenas
contenidas en el suero a travs de los grupos que tienen en sus
restos aminoacdicos tendencia para cargarse elctricamente
tanto negativo con valores de pKa inferiores a 7 y grupos
positivos con pKa superiores a 7, otorgan al sistema la
capacidad de comportarse como amortiguadores ya que
simultneamente interactan el cido dbil y su base conjugada.
Situacin que no ocurre en el suero desproteinizado, ya que a
100C todas o la gran mayora de sus protenas han sido
desnaturalizadas de manera irreversible y por ende el escaso
gasto de solucin de HCl titulante consumida refleja que la
propiedad amortiguadora no est presente.
Determinacin del punto isoelctrico de la casena.
Precipitacin de protenas con cationes y aniones.
El punto isoelctrico (pI) indica el pH al cual una protena
prcticamente se insolubiliza del medio en donde est presente
por observacin directa de la cantidad de precipitado formado.
De este modo, se aprecia en la batera de disoluciones que en
los extremos (tubos 1-2 y tubos 3-4) no se observa formacin de
precipitado debido a que existen protenas (casena) con carga
neta y por lo tanto se mantienen disueltas en solucin. Por otro
lado, en los tubos posicionados en el centro de la batera se
observa formacin de precipitado en distinto grado debido a que
la carga neta generada comienza a desaparecer establecindose
un perfecto equilibrio entre el nmero total de cargas positivas
y negativas, hecho que se manifiesta con la cantidad de
precipitado formado y que nos lleva a inferir que en el tubo 4
(mayor cantidad de precipitado) est el pH (4,3) ms cercano al
pI de la casena, valor que se encuentra muy prximo al
sealado por la literatura (4,6).
El suero sanguneo contiene protenas (albminas) que son
responsables de la capacidad amortiguadora de pH del medio en el
cual se encuentran, propiedad que se anula cuando estas protenas
se desnaturalizan por efecto de las altas temperaturas.
El punto isoelctrico de una protena (casena en este caso
particular) se determina a partir del pH al cual la protena se
insolubiliza de su medio; valor equivalente a 4,3 y que fue
determinado experimentalmente.
Las protenas precipitan en solucin acuosa segn la carga neta
que presenten, el pH del medio de reaccin y el agente precipitante
con el que interacten. Protenas que se encuentren a pH cido
adquirirn carga neta positiva y precipitarn con aniones. Si el pH
del medio es alcalino, las protenas tendrn carga neta negativa y
precipitarn con cationes.
Finalmente, conocer las propiedades de las protenas y su
corroboracin experimental, permite desarrollar habilidades de
pensamiento cientfico que sern claves en el futuro prximo a la
hora de disear experiencias de laboratorio para nuestros
inminentes estudiantes. Esta forma prctica de ensear ciencia
creemos que contribuye de manera significativa al aprendizaje de
las ciencias y facilita la labor del docente en el sentido que lo
abstracto se torna concreto al tener contacto literalmente con el
fenmeno relatado en teora, lo cual se alinea en el mismo sentido
que queremos poner en prctica nuestra profesin.
REFERENCIAS
[1] Cox. M & Nelson, D. Principios de bioqumica (N 5 ed).
Estados Unidos: Editorial Omega. Cap. 3, pp. 76-81.
[2] Spencer, James N., Bodner, George M., Rickard, Lymantl.
Qumica, estructura y dinmica, CECSA, Mxico, 2000.

Precipitacin de protenas con cationes y aniones.

La precipitacin de protenas, en este caso particular, la

precipitacin de albmina depende tanto de la carga neta que ANEXOS
adopte y el agente precipitante que se utilice. Se puede inducir
la carga neta de la albmina ajustando el pH del medio, es decir, Anexo 1: Valores de la preparacin para la cuantificacin de
a pH<7 la albmina se encontrar cargada positivamente y a protenas por el mtodo colorimtrico de biuret.
pH>7 se encontrar negativamente cargada. Esto sugiere que
para poder precipitar albmina es necesario que se encuentre V (mL) V (mL) de
con el contrain correspondiente, es decir, albmina positiva V (mL)
N Tubo albumina reactivo de
con ion negativo y albmina negativa con ion positivo. En disolvente
patron. Biuret
sntesis, es de esperar que la albmina en un medio fuertemente 1 0 3 3
cido precipite con iones negativos (iones tungstato y 2 0,3 2,7 3
ferrocianuro) y a pH bsico lo haga con iones positivos (iones 3 0,6 2,4 3
acetato y sulfato) situacin que se ha corroborado en la 4 0,9 2,1 3
experiencia realizada. 5 1,2 1,8 3
6 1,5 1,5 3
CONCLUSIONES 7 1,8 1,2 3
Problema 3 0 3
A partir de la curva de calibrado de solucin de albmina,
se ha determinado por regresin lineal la concentracin de una
muestra problema que contiene al analito albmina,
obtenindose un valor de 0,57 ppm.

PROPIEDADES DE LAS PROTENAS. 4