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8.5.5 ANLISIS HISTOLGICO.

Para el anlisis histolgico, los segmentos de tejido nervioso (incluyendo la matriz de submucosa de

intestino de cerdo segn el grupo estudiado) fueron fijados con formalina al 10% durante 72 horas,

deshidratadas y embebidas en parafina. Se realizaron secciones de 5 micras de los especmenes

embebidos utilizando microtomo manual y siguiendo el eje longitudinal de los nervios citicos. Se

procesaron los tejidos mediante la tcnica histolgica.

A continuacin las secciones histolgicas fueron teidas con Hematoxilina y Eosina (HE) y

tricrmico de Masson por 10 minutos y despus lavadas con agua desionizada. Algunas secciones

histolgicas seleccionadas se sometieron a impregnacin argntica siguiendo la tcnica de simple y

doble impregnacin de Ro-Hortega.

La evaluacin semicuantitativa cuantifcada con cruces (+, leve; ++, moderada; +++, severa) tom

en cuenta las clulas inflamatorias, axones y fibras nerviosas daadas, clulas espumosas, cantidad

de fibras de colgena indicativas de fibrosis y vasos sanguneos endoneurales preservados. (Tabla

1).

Determinacin de fibrosis: Valorada mediante el contenido de colgena. Utilizando microscopia

ptica tras la tincin con hematoxilina y eosina y tricrmico de Masson se determinar el

predominio de fibras de colgena mediante la evaluacin semicuantitativa consensuada de dos

observadores. El resultado de la evaluacin se expres en cruces. [Mazzer, et. al. 2000].

Determinacin de desmielinizacin. Mediante microscopia ptica tras la tincin con hematoxilina y

eosina y tricrmico de Masson se determinar el grado de desmielinizacin mediante la evaluacin

semicuantitativa consensuada de dos observadores. El resultado de la evaluacin se expres en

cruces. [Mazzer, et. al. 2000].

Determinacin de infiltrado inflamatorio. Mediante microscopia ptica tras la tincin de

hematoxilina y eosina y tricrmico de Masson se determinar la presencia o ausencia de infiltrado

inflamatorio mediante la evaluacin semicuantitativa consensuada de dos observadores. El

resultado de la evaluacin se expres en cruces. [Mazzer, et. al. 2000].


Se revisaron 6 laminillas de cada especmen (2 de hematoxilina y eosina, 2

tricrmico de Masson y 2 impregnadas con plata) con corte completo

longitudinal, realizando anlisis histopatolgico exhaustivo de las laminillas con

aumentos de 20X, 40X y 100X.

9.2 RESULTADOS DEL ANLISIS HISTOLGICO.

Tras la evaluacin ciega de las muestras de tejido se pudieron observar algunos hallazgos

consistentes en conglomerados de colgena perineural en orientacin paralela al eje longitudinal; en

algunos casos de fibrosis ms severa los conglomerados de colgena se introducen al espacio de la

fibra nerviosa conformando remolinos. En la mayora de los cortes se aprecia material de sutura

adyacente al perineuro; algunas veces el material de sutura se observ rodeado de granulomas.

Asimismo de manera excepcional hay evidencia de la submucosa de cerdo en el tejido. Se

alcanzaron a apreciar tambin casquetes de fibrosis recubriendo los extremos del nervio seccionado

en algunas de las muestras y en otras no exista continuidad del tronco nervioso y manifestaban en

cambio desorganizacin de la mielina con prdida de su arquitectura con huecos conformados por

vacuolas que sugieren edema. Las clulas inflamatorias identificables de manera ms clara

constituan mastocitos en cantidades variables.

Haciendo una evaluacin ciega semicuantitativa de cada laminilla por separado y posteriormente

asignndola al grupo correspondiente se pueden establecer las siguientes observaciones: en cuanto a

los grupos evaluados a las 6 semanas tanto en los que se coloc submucosa de intestino de cerdo en

el sitio de reparacin como en los que no se coloc se aprecia en la zona de lesin cerca de los

puntos de sutura infiltrado inflamatorio, con presencia de linfocitos, neutrfilos, macrfagos y

numerosos mastocitos.

Existe un incremento de la clulas de Schwann, irregularidades en vainas de mielina con

degeneracin tipo Walleriana, fibras nerviosas daadas, edema intersticial, as como un incremento

de vasos capilares, de fibroblastos y colgena. En los grupos evaluados a las 14 semanas tanto en

los que se coloc submucosa de intestino de cerdo en el sitio de reparacin como en los que no se
coloc hay presencia de algunos mastocitos y ocasionales linfocitos; existe un incremento de

lasclulas de Schwann, desmielinizacin y destruccin de fibras nerviosas, presencia de fibrosis en

la zona de lesin as como de granulomas alrededor de los puntos de sutura. (Figura 6. Figura 6.-

Fotomicrofgrafas de nervio citico de rata. Muestra representativa de animales de grupo de 14

semanas. Control nervio sano no lesionado (A), con nervio seccionado con OASIS (B,C,D); con

nervio seccionado sin OASIS (E,F,G). Se observan fibras de colgena en color azul, infiltrado

inflamatorio y restos de sutura. Tricrmico de Masson. A, B, C, D, E, F 200X y G 400X.

Estas observaciones se resumen en la siguiente tabla:

Tabla 4

Infiltrado Fibrosis Desmielinizacin


inflamatorio

6 Control -- -- --
semanas
c/OASIS +++ + ++

s/OASIS +++ - ++

14 Control -- -- --
semanas
c/OASIS + ++++ +++

s/OASIS + ++++ +++

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