Cromatografa

Keulemans ha definido la cromatografa como un mtodo fsico de separacin en el

cual los componentes a separar se distribuyen entre dos fases, una de las cuales
constituye la fase estacionaria, de gran rea superficial, y la otra es un fluido (fase
mvil) que pasa a travs o a lo largo de la fase estacionaria.
La fase estacionaria puede ser un slido o un lquido dispuesto sobre un slido que
acta como soporte, de gran rea superficial. La fase mvil es un fluido (puede ser
gas, lquido o fluido supercrtico) que se usa como portador de la mezcla.
En la cromatografa ocurren dos fenmenos muy importantes y que son prcticamente
los rectores del proceso de separacin: la adsorcin y la absorcin.
La adsorcin es la retencin de una especie qumica en los sitios activos de la
superficie de un slido, quedando delimitado el fenmeno a la superficie que separa
las fases o superficie interfacial.
Esta retencin superficial puede ser fsica o qumica. La adsorcin depende de la
naturaleza de la substancia adsorbida, de la temperatura, de la naturaleza y estado de
subdivisin del adsorbente, y de la concentracin.
La absorcin es la retencin de una especie qumica por parte de una masa y
depende de la tendencia que tiene sta a formar mezcla o reaccionar qumicamente
con la misma.
Existen muchas maneras de clasificar los mtodos cromatogrficos.
Segn, Giddings, se puede clasificar la Cromatografa por sus variantes:

Fase Mvil (puede ser gaseosa, lquida fluido supercrtico)

Fase Estacionaria
Mecanismo de Retencin (tipos de equilibrios implicados en la transferencia de
los solutos entre las fases).
Forma de Contacto entre las fases (columna superficie plana)
Dimensionalidad
Escala Fsica
Gradientes

Teoras del proceso Cromatogrfico

El proceso cromatogrfico, aparentemente simple en prctica, es en realidad una

compleja unin de fenmenos tales como hidrodinmica, cintica, termodinmica,
qumica de superficie y difusin.
Hasta la fecha se han propuesto muchas teoras, que incluyen complejos modelos
matemticos para poder explicar el comportamiento de los solutos en las columnas
cromatogrficas. Las ms estudiadas son: La Teora de los Platos Tericos (Martin y
Synge), la Teora Cintica (Van Deemter, Zuiderweg, Klinkenberg y Sjenitzer) y la
Teora Desarrollada (Golay) para Columnas Capilares.
Segn la Teora de los Platos, una columna cromatogrfica est constituda por una
serie de platos que contiene una fase estacionaria. Supone que el volmen de fase
estacionaria en cada plato es constante; que el volmen de fase mvil es constante de
plato a plato; que en cada plato las dos fases estn en equilibrio, y que el valor del
Coeficiente de Distribucin es constante e independiente de la concentracin del
soluto.
La principal desventaja de la Teora de los Platos Tericos es la falta de conexin entre
la eficiencia de la columna cromatogrfica, el tamao de la partcula, la difusin, la
velocidad de flujo y la temperatura. La otra desventaja es que utiliza un modelo basado
en muchas suposiciones.
La Ecuacin que rige esta teora es:

N = 16(tr/w)2

La Teora Cintica considera el proceso cromatogrfico en funcin de los factores

cinticos que intevienen en l.
Siendo estos factores:

Las mltiples trayectorias (diferentes rutas) que toma un soluto durante su

movimiento (migracin) a travs del empaque de la columna, provocando
variaciones en la velocidad del flujo.
La Difusin Axial o Longitudinal del soluto en la fase mvil.
La cintica de la resistencia a la transferencia de masa entre las fases mvil y
estacionaria.
La Ecuacin de Van Deemter,

HETP H = A + B/u + Cu

Donde
u= L(cm)/ traire(seg)

Soporte

La funcin bsica del soporte es la de "mantener" (sostener, retener) la fase

estacionaria. Idealmente debera ser un material inerte que "mantiene" la fase
estacionaria sobre su superficie como una pelcula delgada.
La mayora de los soportes cromatogrficos est hecha de diatomita. Qumicamente
es casi todo slice, con algunas impurezas. Tambin se conoce como Tierras
Diatomceas Kiselguhr (palabra alemana). Domina el campo de los soportes debido
a su estructura, superficie y disponibilidad.

Hay que tener en cuenta dos cosas a la hora de escoger un soporte:

La Estructura, Caractersticas Fsicas (contribuye a la eficiencia de la

columna cromatogrfica):
o Tamao de partcula
o Dimetro del poro
o Densidad
o rea Superficial

La Qumica de Superficie Caractersticas Superficiales (gobierna la

participacin del soporte en los resultados de la separacin).
o Grupos silanoles activos
o Iones metlicos

Adems de las caractersticas anteriores, la seleccin del soporte va a depender

tambin de:

la naturaleza de la muestra
la naturaleza de la Fase Lquida
el uso que se le va a dar a la columna:
o General
o Especfico
Precio

Podemos resumir que un buen soporte debe reunir las siguientes caractersticas:

Elevada Superficie por unidad de volmen

Estabilidad Trmica
Dureza mecnica suficiente para que pueda resistir los procedimientos de
revestimientos y relleno
Inactividad qumica o de adsorcin
Baja resistencia al paso de la fase mvil

La eliminacin reduccin de los sitios activos de adsorcin (tambin conocido como

Desactivacin de la Supeficie) de un soporte cromatogrfico puede efectuarse de
varias maneras:

Remocin por lavado con cido (NAW AW)

Eliminacin Remocin por reaccin del Grupo Silanol
Saturacin de la superficie con una fase lquida
Impregnando recubriendo con material slido inerte
Fase Estacionaria Lquida

Al hablar de fase estacionaria lquida entramos en contacto con dos palabras

trminos: Polaridad y Selectividad.
Las fases lquidas podemos clasificarlas segn sus polaridades cromatogrficas, nos
valemos de unas constantes que determinan dicha polaridad. Existen dos sistemas:

Constante de Rohrchneider
Constante de McReynolds

Existen muchas discusiones sobre este tema para poder definir y describir el
parmetro polaridad en cromatografa, podemos decir que la polaridad de una fase
estacionaria lquida se refiere a las interacciones intermoleculares que involucra
dipolos permanentes.
Selectividad es definida como las diferentes atracciones intermoleculares
Varias cualidades han de reunir un lquido para servir como fase estacionaria:

Viscosidad
Tensin Superficial
Tensin de Vapor
Selectividad respecto a los componentes de la fase mvil
Reversibilidad del Reparto
Estabilidad Trmica

Gas Portador

El gas portador cumple bsicamente dos propsitos: Transportar los componentes de

la muestra, y crear una matriz adecuada para el detector.
Un gas portador debe reunir ciertas condiciones:

Debe ser inerte para evitar interacciones (tanto con la muestra como con la
fase estacionaria)
Debe ser capaz de minimizar la difusin gaseosa
Fcilmente disponible y puro
Econmico
Adecuado al detector a utilizar

Detectores

Un detector es un dispositivo para revelar la presencia de las sustancias eludas a la

salida de la columna cromatogrfica. Podemos expresar que el detector son los "ojos"
de un cromatgrafo.
El Detector es un dispositivo capaz de convertir una propiedad fsica, no medible
directamente, en una seal elaborable y ofrecernos informacin sobre la naturaleza y
magnitud de la propiedad fsica.
En cromatografa un detector funciona comparando una propiedad fsica entre el gas
portador puro y el mismo gas portador llevando cada uno de los componentes que
previamente se han separado en la columna, esta accin se traduce en una seal tipo
elctrica, que posteriormente se amplificar mediante un registrador grfico
integrador permitiendo indicar el momento que salen de la columna los componentes.
Clasificacin de los detectores
Estos pueden ser clasificados:

Detectores segn su Grado de Selectividad :

o Universales. Responde a la mayora de los solutos que pasan por l.
o Especficos Selectivos. Exhibe una gran respuesta a un grupo
particular de substancias con un mnimo de respuesta a otras.
Detectores Destructivos y No destructivos. Esta clasificacin, obviamente, es
en referencia a si la muestra es destruda o no.
Detectores segn su Modo de Respuesta:
o Dependientes del Flujo Msico. Producen una seal que es
proporcional a la cantidad de soluto que pasa a travs de l en la
unidad de tiempo pero es independiente del volmen de gas portador
requerido para la elucin.
o Dependiente de la Concentracin. Dan una seal proporcional a la
cantidad de soluto por unidad de volmen de gas portador que pasa a
travs de l.
Detectores segn el proceso de deteccin Ionizacin, ptico-espectroscpico,
Electroqumico, etc.
Caractersticas de los Detectores
Sensibilidad. Medida de la efectividad de un detector para convertir la muestra en una
seal elctrica medible.
Linealidad. Rango de masa concentracin de muestra sobre el cual el detector
mantiene una sensibilidad constante sin una desviacin arbitraria. El significado
prctico de la linealidad del detector es el que le indica al analista la concentracin
para la cual el detector es confiable. Hay dos lmites en la curva de linealidad:

El lmite de concentracin inferior, que es dado por el lmite de deteccin y,

El lmite Superior, definido por un porcentaje de desviacin arbitrario de la
curva de linealidad, normalmente se toma un 5% de desviscin.
Rango Dinmico Lineal.Rango sobre el cual la sensibilidad del detector es constante.
Ruido. Es cuantificado por el promedio de la amplitud pico-pico de la seal. El
significado de conocer el nivel de ruido de un detector es un factor determinante en la
determinacin de la cantidad mnima detectable y el lmite inferior del rango lineal.
Lmite de Deteccin. Est definido como la mnima cantidad de substancia que puede
producir una seal que sea el doble del nivel de ruido.
Corriente de Fondo. Seal constante de salida generada por el proceso en el que un
detector est operativo sin que alguna substancia pasa a travs de l. Esta seal es
muy importante, ya que permite diagnosticar el buen o mal funcionamiento del
detector.
Detectores ms usados en Cromatografa de Gases
Detector de Conductividad Trmica. Mide la conductividad trmica del gas portador,
ocasionada por la presencia de substancias eludas.
Detector de Ionizacin a la Llama. Basado en la medida de las variaciones de la
corriente de ionizacin en una llama oxgeno-hidrgeno debido a la presencia de
substancias eludas.
Detector de Captura Electrnica. Basado en la electronegatividad de las substancias
eludas, y su habilidad para formar iones negativos por captura de electrones.
Detector de Fotometra a la Llama. Basada en la medida de la intensidad de la
emisin molecular de la fluorescencia de heterotomos en las molculas orgnicas.
Detector de Ionizacin de Llama Alcalina
Detector de Espectrometra de Masas

Cromatograma y su Interpretacin
Los siguientes trminos son los utilizados en un cromatograma tpico y recomendados
por la IUPAC:

Line Base
Pico Cromatogrfico
Base del Pico
rea del Pico
Altura del Pico
Ancho del Pico
Ancho del Pico a la mitad de la Altura

Medida de la Altura rea de Pico

Altura del Pico: Medida que se efectua, para cada pico de inters, desde la lnea
base hasta el mximo del pico.
Los errores de malas mediciones se pueden atribuir a:

Insuficiente Resolucin
Variaciones en la lnea base
Picos extremadamente pequeos

Las desviaciones en la lnea base se pueden compensar por interpolacin de sta

entre el prinpio y el final del pico.
rea del Pico.
Existen varias tcnicas para la determinacin del rea de un Pico Cromatogrfico:

Integracin Manual
o Mtodos Geomtricos
Triangulacin: En esta tcnica se trazan lneas tangentes a cada lado del pico. La
altura se mide desde la lnea base hasta la interseccin de las dos tangentes. El ancho
se mide tomando la interseccin de las dos lneas tangentes con la lnea base. Luego
se utiliza la frmula A=1/2*Altura del Pico* Base del Pico. Las limitaciones de esta
tcnica estan en el trazado de las lneas tangentes, un pequeo error al trazar las
tangentes puede afectar la medida de la altura.
Altura por ancho a la mitad de la Altura:
o Mtodos Mecnicos

Planimtricos
Corte y Pesada: Esta tcnica requiere recortar el pico del cromatograma, luego
pesarlo en una balanza analtica. El recorte y pesada depende mucho de la habilidad
del operdor. Pueden introducirse errores por cambios en la humedad del papel, la
grasa de las manos del operador, homogeneidad del papel. Generalmente se
recomienda utilizar una fotocopia del cromatograma para no destruir el original.

Integracin Automtica
o Electromecnica
o Electrnica

Anlisis Cualitativo

Los procedimientos para identificacin de los picos cromatogrficos podemos dividirlos

en dos categoras:

Identificacin Cromatogrfica
Por Datos de Retencin
Por Serie Homlogas (Indices de Retencin de Kovacs)
Identificacin No Cromatogrfica
Anlisis Clsicos
Identificacin por:
Adicin de Estndar
Formacin de Derivados
Sustraccin de un Componente
Identificacin con Tcnicas Auxiliares: UV, IR, MS, RMN

Anlisis Cuantitativo

Existen varios mtodos para cuantificar un pico cromatogrfico:

Normalizacin de rea
Normalizacin de rea con Factores de Respuesta
Estandarizacin Externa
Estandarizacin Interna