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METODOLOGA

Procedimientos para realizar el cultivo de la bacteria escherichia coli en el


medio selectivo y diferencial agar Mac Conkey:
1. Suspender 50g del medio agar Mac Conkey en 1 litro de agua
destilada.
2. Calentar con agitacin suave hasta su completa disolucin y hervir
durante 1 minuto.
3. Esterilizar en autoclave a 121C durante 15 minutos.
4. Enfriar a una tempera 45-50 C.
5. Vaciar en placas Petri estriles.
6. Inocular las placas por estra o por hisopos, asegurndose que en
cualquiera de los dos mtodos se tenga colonias aisladas.
7. Incubar las placas Petri a 35C 0.2C durante 18 a 24 horas.
8. Si no hay desarrollo a las 24 horas, reincubar las placas por 24 horas
ms.

Preparacin de las lminas de cobre y acero para su posterior inoculacin:


1. Las lminas de cobre y acero inoxidable sern cortadas en tamaos
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de 1 cm .
2. Una lmina de cada metal se envolvern en papel.
3. Las dos lminas se esterilizarn en autoclave por 1 hora.
4. Se sumergirn en etanol al 95%.
5. Flamear al mechero por 2 segundos.
6. Transferir las dos lminas a placas Petri esterilizadas.
Proceso de inoculacin de las colonias de bacterias escherichia coli en las
lminas de cobre y acero:
1. Se Transferirn las colonias de bacterias escherichia coli a 2ml de
caldo nutritivo.
2. Incubar a 37C por 16 horas.
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3. Diluir con agua destilada estril hasta alcanzar 2 x 10 UFC/ml.
4. En cada lmina de cobre y acero inoxidable se inocul 10 l de las
suspensiones bacterianas.
5. Cada inoculo se distribuir sobre el metal con una punta estril de 10 l.
6. Incubar las lminas a temperatura ambiente en 72 minutos.
Proceso de extraccin de muestras de las lminas de cobre y acero:
1. Extraer la muestra de las lminas de cobre y acero con asa
bacteriolgica.
2. Introducir la muestra en condiciones de asepsia al medio de cultivo
agar Mac Conkey.
Anlisis y comparacin de las placas Petri de ambas