PRUEBA DE CATALASA

La catalasa es una enzima hemoproteica, que se caracteriza por poseer una

estructura tetramrica, en la cual cada subunidad contiene un grupo Hem (Fe +3).
Est presente en la mayora de las bacterias aerobias estrictas, facultativas y
anaerobias aerotolerantes.

La catalasa manifiesta actividad de peroxidasa, cataliza la oxidacin de sustratos

acoplada a la reduccin de perxido de hidrgeno, para formar agua y oxgeno
molecular. En la prueba de catalasa la reaccin se efecta con dos molculas de
perxido de hidrgeno, una de las cuales acta como sustrato reducido y la otra
como donador de tomos de hidrgeno; esto resulta en la formacin de agua
(sustrato reducido) y oxgeno (donador oxidado).

El perxido de hidrgeno es muy txico para las bacterias. Generalmente los

microorganismos que carecen de citocromos, tambien carecen de catalasa, asi la
mayora de las bacterias anaerobias no la poseen.

La prueba de catalasa se hace generalmente en lmina (aunque tambien puede

hacerse en tubo) y se usa con frecuencia para diferenciar a Streptococcus (-) de
Streptococcus (+) y Micrococcus (+), asi como Bacillus (+) de Clostridium (-).

http://books.google.com.pe/books?
id=vwB0fgirgN0C&pg=PA217&lpg=PA217&dq=prueba+de+catalasa+en+bact
erias+aerobias+facultativas&source=bl&ots=xYodB0xaul&sig=aulbH84JT3Amd
Umbnugr_twktok&hl=es-
419&sa=X&ei=j3eLU4fpHNLgsAS0loDQDQ&ved=0CEsQ6AEwBA#v=onepage&
q=prueba%20de%20catalasa%20en%20bacterias%20aerobias
%20facultativas&f=false

(LIBRO: Bacteriologa General: Principios Y Prcticas de Laboratorio, AUTOR:

Evelyn Rodrguez Cavallini, Editorial Universidad de Costa Rica PAGINA 217)
 Prueba TSI (Triple Sugar Iron Triple Azcar Hierro)

El agar TSI es uno de los ms usados para ver la fermentacin de carbohidratos

en la familia Enterobacteriaceae. Se pueden tener varias posibilidades de
fermentacin de acuerdo a las caractersticas metablicas del microorganismo
como son:
Utilizacin de glucosa sola. Los microorganismos que fermentan solo la glucosa
provocan en este medio una reaccin alcalina en la superficie ( roja) sobre un
fondo cido (amarillo, k/a) debido a que realizan una degradacin aerbica de la
glucosa en la superficie, convirtiendo el piruvato en agua y dixido de carbono.
Despus de 18 a 24 horas de incubacin como la concentracin de glucosa es
baja (0.1%), los microorganismos empiezan a utilizar las peptonas que se
encuentran en el medio, causando la liberacin de amoniaco y produciendo un pH
alcalino ( rojo) gracias al rojo de fenol que tiene el medio como indicador de pH.
En el fondo, como no hay oxgeno, se realiza una degradacin anaerbica y el
piruvato se convierte en lactato con lo cual el pH disminuye quedando el pH cido
( amarillo).
Utilizacin de lactosa y/o sacarosa. Algunos microorganismos tienen la facultad de
fermentar la glucosa y la lactosa resultando una reaccin cida en la superficie
(amarilla) y cida en el fondo (amarilla, a/a). En este caso despus de 18 a 24 hrs
como la concentracin de lactosa es alta (1.0%), o sea 10 veces ms que la de la
glucosa presente, no se ha utilizado completamente y la acidez persiste tanto en el
fondo como en la superficie. En el caso de usar sacarosa la reaccin sera la
misma.
Sin utilizacin de ninguna de las anteriores. En el caso de no utilizar ninguno de
los carbohidratos presentes (glucosa, lactosa y sacarosa), lo que se usara seran
las peptonas, ya sea aerbicamente o anaerbicamente. Slo utilizndolas
aerbicamente dara una superficie alcalina (roja, k) sobre un fondo sin cambio
(sc) o sea k/sc). Si las usara aerbicamente dara una superficie alcalina (rojo)
sobre fondo alcalino (rojo) o sea k/k.
En este medio tambin es posible detectar la produccin de gas por la formacin
de burbujas dentro del medio, y la produccin de cido sulfhdrico, el cual
reaccionar con un indicador con base de fierro dando un color negro debido al
sulfuro de hierro formado.
http://microdonto.files.wordpress.com/2009/04/pruebas-
bioquimicas.pdf

Prueba de la LIA
Algunos microorganismos son capaces de provocar la descarboxilacidon de los
aminocidos por induccin de enzimas especficas, el resultado de esta
descarboxilacin es la produccidon de una amina ( o diamina) y dixido de
carbono. Tal es el caso de la produccidon de la enzima lisina descarboxilasa la
cual al actuar sobre la lisina produce una diamina llamada cadaverina.
En el medio LIA se puede detectar la produccn de la lisina descarboxilasa ya que
se produce una reaccin coloreada por un cambio en el pH del medio, que
contiene como indicador prpura de bromocresol. Un cambio del color original del
medio (morado) hacia amarillo en el fondo indica una reaccidon cida por la
fermentacin de una pequea cantidaad de glucosa en el medio. Si el
microorganismo produce lisina descarboxilasa, la accin de esta enzima sobre la
lisina dar lugar a la cadaverina, la cual provocar un cambio de pH hacia la
alcalinidad dando un color morado que sobrepasa la acidez debida a la glucosa.
As pues, un fondo amarillo indica que no se produce lisina descarboxilasa y un
color morado que si es producida.
http://microdonto.files.wordpress.com/2009/04/pruebas-
bioquimicas.pdf
PRUEBA DE LA SENSIBILIDAD A LA BACITRACINA

Prueba utilizada para la diferenciacin de estreptococos beta hemolticos del

grupo A de otros estreptococos beta hemolticos..

Fundamento
La bacitracina es un antibitico que inhibe la sntesis de pared celular bacteriana, y
a la concentracin que se encuentra en los discos (0.04 U) inhibe el crecimiento
de los estreptococos beta hemolticos del grupo A de Lancefield pero no inhibe el
desarrollo de otros estreptococos beta hemolticos.
Los micrococcus y los estomatococcus tambin son inhibidos, mientras que los
estafilococos coagulasa negativo son resistentes.
Un resultado sensible, es presuntivo de la presencia de estreptococo grupo A, y se
puede incrementar adems el valor diagnstico mediante la realizacin de la
prueba del PYR (PYR-A-Enterococos, cdigo B12-406-24

Siembra
1-Realizar una suspensin densa del microorganismo en estudio (de turbidez igual
a la del estandard 0.5 de la escala de Mac Farland).

2-Utilizando un hisopo estril, hisopar una placa de agar sangre.

3-Aplicar un disco de Bacitracina de 0.04 U sobre la superficie de la placa.

Incubacin
Incubar durante 24 horas, a 35-37 C, en atmsfera5-10% de CO2.

Resultados

Examinar la placa para observar cualquier zona de inhibicin del desarrollo

alrededor del disco de bacitracina.

Sensible: presencia de halo de inhibicin del desarrollo alrededor del disco.

Informar: estreptococos beta hemolticos presuntivamente del grupo A por la

prueba de bacitracina.

Resistente: ausencia de halo de inhibicin del desarrollo alrededor del disco.

Informar: estreptococos beta hemolticos que presuntivamente no pertenecen al

grupo A por la prueba de bacitracina.

Microorganismo
Bacitracina 0.04
U

Streptococcus pyogenes Sensible

ATCC 19615
Streptococcus agalactiae Resistente
ATCC 13813

Limitaciones
-Solo deben ser investigados los estreptococos hemolticos debido a que
muchos estreptococos alfa hemolticos (incluso S. pneumoniae) son sensibles a
concentraciones bajas de bacitracina.
-El crecimiento del inculo bacteriano debe ser confluente, un inculo demasiado
escaso producir que los estreptococos que no son del grupo A parezcan
sensibles a la bacitracina.

-Algunos estreptococos que no son del grupo A, por ejemplo los estreptococos del
grupo viridans tambin pueden ser inhibidos por la bacitracina.

-La prueba de Bacitracina, es bastante exacta como una prueba presuntiva pero
no es bastante especfica. Mas de 10 % de los estreptococos de los grupos C y G
y 5% de las cepas de estreptococos del grupo B tambin son sensibles a la
bacitracina.

Almacenamiento
Conservar a 2-8 C

Presentacin

X 50 Discos Cdigo: B12-404-27

http://www.britanialab.com.ar/espanol/BACITRACINA.htm

PRUEBA DE LA SENSIBILIDAD A LA OPTOQUINA

La prueba de la sensibilidad a la optoquina es un test sencillo ampliamente
utilizado para diferenciar el S.pneumoniae de los otros estreptococos basndose
en sus caractersticas fenotpicas.
Fundamento:
Se aplica sobre la superficie un disco de papel filtro con 5g de optoquina. Incubar
en presencia de CO25-10% a 35C. Examinar la placa para observar cualquier
zona de inhibicin alrededor del disco, medir el dimetro de inhibicin incluyendo
el dimetro de disco.
Interpretacin:
Una zona de inhibicin mayor o igual de 14 mm es presuntiva para Streptococcus
pneumoniae. Si no se observa zona de inhibicin es compatible con estreptococos
alfa hemolticos diferentes al Streptococcus pneumoniae (generalmente S.
viridans). Las zonas de inhibicin inferiores a 14 mm de dimetro son
cuestionables para Streptococcus pneumoniae y deben ser confirmadas por la
prueba de solubilidad en bilis.

Control de calidad:
Control positivo: Streptococcus pneumoniae
Control negativo: Streptococcus salivarius

Limitaciones:
Algunas cepas de S. pneumoniae no son inhibidas por la optoquina. Adems
algunas cepas de estreptococos viridans producen una pequea zona de
inhibicin. Seguir los resultados dudosos con una prueba de solubilidad en bilis.
Las colonias de Streptococcus pneumoniae se disuelven o lisan dentro de los 30
minutos en presencia de una solucin de desoxicolato de sodio al 10%. Para ello
suspender las colonias sospechosas en 1 ml de CINa 0.85% (turbiedad 1.0 escala
de Mac Farland) bien densa. Dividir en mitades y a una de ellas agregarle 3 a 4
gotas de la solucin de desoxicolato de sodio al10% y al otro tubo solucin
fisiolgica. Incubar 2 h a 35C y examinar luego para ver aclaramiento de la
turbiedad por lisis.
1. http://www.buenastareas.com/ensayos/Estraptococo-
Alfa/2632789.html
2. http://britanialab.com.ar/espanol/k08_03.html