Instituto Politecnico Nacional

Escuela Nacional de Ciencias Biolgicas

Bioqumica General
Prctica # 5 Cintica Enzimatica
Introduccin Clculos
Los experimentos de cintica examinan la relacin que
existe entre la cantidad de producto formado en la 0.005 M Glucosa
unidad de tiempo, de acuerdo a las condiciones 0.005 M Fructosa
experimentales bajo las cuales se realiza la reaccin. 0.010 M (A.R)
La base de la mayora de las determinaciones cinticas
es la observacin de como la velocidad (v), de una Tubo 1
reaccin vara directamente con la concentracin de (0.1mL) x (0.01M) / 1000mL =
cada una de las sustancias que actan como reactivos (0.000001mol) x (1000000mol) = 1 mol
para producir el producto. Tubo 2:
Las enzimas (protenas) son catalizadores de las (0.2mL) x (0.01M) / 1000mL =
reacciones biolgicas, aumentan la velocidad en la que (0.000002mol) x (1000000mol) = 2 mol
se alcanzara el equilibrio sin afectar el equilibrio final Tubo 3:
de la reaccin. Estas son de alta especialidad y su (0.4mL) x (0.01M) / 1000mL=
actividad puede verse modificada por factores como: (0.000004mol) x (1000000mol) = 4 mol
temperatura, pH, concentracin de enzima,
Tubo 4:
concentracin de sustrato
(0.8mL) x (0.01M) / 1000mL=
Azucares.Reductores (0.000008mol) x (1000000mol) = 8 mol
Los azcares que contienen un grupo carbonilo libre se
Tubo 5:
conocen como azcares reductores. Todos los
(1.0mL) x (0.01M) / 1000mL=
monosacridos son azcares reductores. Estos
(0.00001mol) x (1000000mol) =10 mol
azcares producen un color marrn a los productos
horneados cuando se combinan con grupos
aminocidos libres de las protenas (Reaccin de
Maillard) Grfica de absorbencia contra
Curva.Tipo concentracin de azcar reductor en
Una curva tipo es lo mismo que una curva estndar o moles/2.0 mL (Anexo)
una curva patrn, es una referencia para determinar el
comportamiento de un muestra incgnita mediante
interpolacin. Esta referencia se obtiene determinando
Reaccin qumica llevada a cabo.
el comportamiento de dos componentes de valores
conocidos.

Objetivo Glucosa
Analizar algunos factores que modifican la
velocidad de la reaccin catalizada por la
invertasa y caracterizara de sta manera dicha
enzima.
Invertas
a
Resultados
H 2O
Tubo N Bla Problemas
nco
T 1 2 3 4 5
Glucosa 0 0.1 0.2 0.4 0.8 1.0
0.005
Fructosa
0.005
Sacarosa 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
0.2 M (mL)
Fructos
Regulador 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
de acetatos a
0.05 M pH
4.7
Agua (mL) 1.0 0.9 0.8 0.6 0.2 0
3,5 DNS 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
(mL)
Desarrollo 5 min a 92 C (en bao mara)
de Color
Dilucin Colocar en bao con hielo y diluir con 2mL
de H2O destilada
Leer en un espectrofotmetro a 540 nm
Absorbenci 0 0.07 0.18 0.19 0.44 0.93
a 4 2 1 5 0
Azcar R. 0 1 2 4 8 10
moles/ 2.0 mol mol mol mol mol
mL
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Prctica # 5 Cintica Enzimatica
que posteriormente se llegaran a usar.
Discusin
Conclusiones
La sacarosa es un dipptido que no presenta
poder reductor; porque la unin glucosdica se La enzima Sacarasa (-fructofuranosidasa o
establece entre el carbono 1 de la glucosa y el invertasa), cataliza la sacarosa dando cmo
carbono 2 de la fructosa, con lo cual se productos 2 azcares reductores Glucosa y
estabilizan las estructuras cclicas, pues se Fructosa.
constituye un acetal y no queda ningn
hemiacetal capaz de dar una cadena abierta por
hidrlisis. En la reaccin entre la invertasa y la Sacarosa, la
Sin embargo la sacarosa puede dar lugar a dos azcares recta que se obtiene grficamente representa
reductores, como la Glucosa y la Fructosa, mediante la que: A mayor concentracin de azcar reductor,
intervencin de la enzima Sacarasa (-fructofuranosidasa mayor ser la absorbencia
o invertasa), en esta prctica se llev a cabo la realizacin
del tubo testigo para obtener una grfica estndar o tipo
que servir como una gua para poder comparar en base
a esta los distintos experimentos que se llevaran a cabo
posteriormente. Esta grafica se realiz en base a los
valores ledos de absorcin en el espectrofotmetro a una
longitud de onda de 540 nm, para posteriormente poder Bibliografa
leer ste parmetro en los dems experimentos, que se
realizaran en comparacin a la curva tipo y as saber
Boyer R. Conceptos de Bioqumica. Editorial
cuanta concentracin de azcar reductor tenemos en
Thompson. 1999. Capitulo 6. Pp 147-158
realidad.
Disacridos
Al realizar la grfica (Anexo 1) se esperaba obtener una
http://tuylaquimica.files.wordpress.com/2011/0
recta (tericamente), que indicara que la concentracin 3/d-i-s-a-c-c3a1-r-i-d-o-s.pdf
de azcares reductores es proporcional a la concentracin http://docencia.izt.uam.mx/japg/RedVirtualJAP/
de absorcin, sin embargo experimentalmente se obtuvo CursoDRosado/3_EnzimologiayBioenergetica/2C
con pequeas desviaciones, por probables errores ineticaEnzimatica.pdf
durante la preparacin del tubo testigo, por ejemplo: no http://www.upo.es/depa/webdex/quimfis/quimbi
controlar bien los volmenes de A. reductores que se otec_termo_files/Temas%20y%20programa
deban adicionar, el tiempo en el bao mara, etc. %20de%20Termo/Tema%207%20ByN.pdf
Es importante mencionar que para la realizacin http://www.uco.es/master_nutricion/nb/Vaclavik
de sta curva tipo se adicionaron diversas /carbohidratos.pdf
sustancias, fueron agregadas para eliminar todos
los errores posibles pues son stas sustancias las