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DETOXIFICACIN DE HERBICIDAS EN PLANTAS

INTRODUCCIN

El metabolismo de los herbicidas en las plantas es definido como el conjunto de reacciones


qumicas que sufren los herbicidas luego de su entrada a la planta y que derivan en la
modificacin de sus caractersticas fsico-qumicas iniciales. Estas reacciones pueden estar
mediadas por enzimas o no.

El metabolismo de compuestos txicos en los organismos tiene como funcin principal


disminuir la capacidad txica del compuesto y aislarlo o expulsarlo, para as evitar el dao
que el mismo pueda causar. A este proceso comnmente se le denomina detoxificacin.

1. DETOXIFICACIN DE HERBICIDAS EN PLANTAS

El proceso general de detoxificacin de compuestos electroflicos en las plantas


se completa en tres fases bsicas:

LA FASE I O FASE DE TRANSFORMACIN: Procesos de hidrlisis catalizados


por esterasas o amidasas u oxidaciones catalizadas por enzimas como
peroxidasas, lipooxigenasas o el conjunto enzimtico citocromo P450 mono-
oxigenasa, introducen grupos funcionales en la molcula original, generando
metabolitos ms polares.
FASE II O FASE DE CONJUGACIN: enzimas como la glucosil tranferasa, malonil
transferasa o la glutationa-S-transferasa utilizan el grupo funcional introducido en la
fase I como punto de anclaje para la conjugacin de molculas de glucosa,
malonil o glutationa con el metabolito, resultando un compuesto conjugado menos
txico y ms soluble en agua.
FASE III O FASE DE CONJUGACIN SECUNDARIA Y COMPARTAMENTA-
LIZACIN: Complejos proteicos especficos ubicados en la membrana plasmtica y
con funcin dependiente del ATP, reconocen y transfieren los conjugados formados
a travs de la membrana para su excrecin o inmovilizacin

Tanto en plantas como en animales, estos complejos proteicos, reconocen a los


compuestos txicos conjugados para su transferencia a travs de la membrana; en
animales este paso inicia los procesos de excrecin del cuerpo por la orina o heces, pero
en plantas, al no poseer sistemas tan eficientes de excrecin, los metabolitos conjugados
son secuestrados en la vacuola (en el caso de ser metabolitos solubles), o son transferidos
al apoplasto (si son metabolitos insolubles). A estos ltimos procesos se les ha
denominado de forma genrica como excrecin por almacenaje

Es posible agrupar las reacciones bsicas de detoxificacin de herbicidas en reacciones de


oxidacin/reduccin, hidrlisis y conjugacin. Estos procesos de degradacin pueden
suceder sin intervencin de enzimas, estar mediados por enzimas especficas que actan
sobre un herbicida en particular o por complejos de enzimas no especficas, las cuales
actan sobre un amplio nmero de molculas txicas, entre ellos los herbicidas.

Principales reacciones metablicas de detoxificacin de herbicidas en plantas


y algunos de los grupos qumicos afectados.
1.1 REACCIONES DE OXIDO-REDUCCIN EN LA DETOXIFICACIN DE HERBICIDAS:

De forma general la oxidacin de un herbicida puede suceder por la remocin de un protn


(H+) o la adicin de un oxgeno bajo la forma de in hidroxilo (OH-)
Existen tres tipos de oxidacin, dependiendo del punto de la cadena en que se produzca la
modificacin: alfa (), beta () y omega () oxidacin
La -oxidacin es un importante proceso de detoxificacin del herbicida 2,4-D, el cual se
degrada a 2,4-diclorofenol y CO2.
El citocromo P450 es uno de los principales protagonistas en la detoxificacin de
herbicidas, en especial en especies gramneas. Este conjunto de enzimas mono-
oxigenasas juegan un papel bsico en las fases iniciales de la biotransformacin de
herbicidas en muchas plantas.

EL CITOCROMO P450 Y EL METABOLISMO DE HERBICIDAS:

El citocromo P450 es un conjunto de enzimas que tienen la capacidad de promover la


degradacin de muchos herbicidas, funcionando de igual forma como una va importante
de metabolizacin de muchos otros compuestos en la clula. En la actualidad se considera
el sistema de enzimas ms importante en la fase I del metabolismo de compuestos txicos
en las plantas y su accin junto a la glutationa-S-transferasa (que acta en la fase II de
detoxificacin), completan los procesos de metabolizacin de una gran parte de los
qumicos que entran a la planta desde el exterior

El citocromo P450 y la selectividad de herbicidas

Existen evidencias de que la actividad de metabolizacin diferenciada de herbicidas por las


enzimas P450 puede producir que algunos cultivos sean ms tolerantes que otros cultivos
o especies malezas a ciertos herbicidas en particular. Esto quiere decir que de la accin de
las enzimas P450 puede quedar definida la selectividad del herbicida entre especies.
La accin general de la P450 sobre los herbicidas comienza por la formacin de un
metabolito hidroxilado de la molcula original. En la desmetilacin y desalquilacin de
herbicidas, el mecanismo de hidroxilacin antes descrito es seguido de una eliminacin del
grupo metil hidroxilado (alquil) como aldehido. En muchos casos luego de la
monoxigenacin el metabolito obtenido se conjuga con molculas hidrosolubles como la
glucosa o la glutationa, proceso que sucede durante la fase II de detoxificacin.

El inhibidor de P450 ms comnmente utilizado como sinergista a la accin de herbicidas


es el 1-aminobenzotriazol (ABT); este producto es un inhibidor irreversible de las enzimas
P450 y se comporta con poca selectividad entre las diferentes isoformas, en especial
cuando es utilizado en altas concentraciones (>100 mM). Otro ejemplo del uso de
sinergistas de herbicidas que inhiban las enzimas P450 son algunos insecticidas
organofosforados (como el malatin o el terbufos y sus metabolitos), cuya accin inhibidora
sobre el P450 disminuye la tolerancia de ciertas especies al herbicida

Los antdotos ejercen su efecto gracias a la interaccin que establecen con las enzimas
que son objeto de la accin del herbicida, ya que muchos de ellos se asemejan
estructuralmente a los herbicidas para los cuales protegen al cultivo. Otra forma en que los
antdotos cumplen su funcin es evitando que los herbicidas lleguen al sitio donde ejercen
su mecanismo de accin.
Los antdotos comerciales son utilizados para la proteccin de cultivos de gramneas como
maz, sorgo y arroz en aplicaciones presiembra incorporadas o preemergentes de
herbicidas de la familia de los tiocarbamatos y las cloroacetanilidas

Muchos antdotos parecen incrementar la tolerancia del cultivo al herbicida a travs de la


estimulacin de la detoxificacin de herbicidas por oxidacin, lo que sugiere un estimulo a
la accin de las enzimas P450.
El citocromo P450 y la resistencia de plantas a herbicidas:
La resistencia de plantas a herbicidas puede producirse por tres mecanismos bsicos:

(1) la modificacin de las enzimas que son inhibidas por los herbicidas en las plantas
resistentes,
(2) el aumento en la capacidad de detoxificacin de herbicidas en dichas plantas
(3) alteracin en la absorcin, translocacin o compartamentalizacin de los herbicidas

Los dos primeros mecanismos han sido ampliamente demostrados en plantas y las
enzimas P450 cumplen un importante papel en muchos casos de resistencia a herbicidas
por aumento en la capacidad detoxificadora en las plantas

1.2 REACCIONES DE HIDRLISIS EN LA DETOXIFICACIN DE HERBICIDAS:

La hidrlisis es comn en herbicidas que se formulan como steres del cido carboxlico,
como ster fosfato o como amidas; esto incluye muchos herbicidas del grupo de los
tiocarbamatos, triazinas, cidos piridincarboxlicos, nitrilos, cidos fenolalcanoicos y otros.
Un ejemplo clsico de herbicida muy susceptible a la degradacin por hidrlisis es el
propanil

La hidrlisis puede suceder por accin de enzimas especficas (hidrolasas) o puede ocurrir
sin la accin cataltica de las enzimas. Las enzimas carboxilesterasas juegan un papel
importante en la hidrlisis de herbicidas; ellas pueden actuar sobre los grupos metilster,
etilexil-ster, etoxibutil-ster o sobre los grupos de cido carboxlico de muchos herbicidas.
Como resultado de esta accin el herbicida puede ser inactivado (como en el caso de los
cidos fenoxicarboxlicos)

La hidrlisis de herbicidas sin la accin cataltica de enzimas puede suceder por efecto del
pH del medio acuoso donde se encuentre dicho herbicida. Debido a que este tipo de
hidrlisis puede suceder tanto dentro como fuera de la planta, este fenmeno tiene una
importancia desde el punto de vista prctico. En el interior de la planta la hidrlisis sin
accin enzimtica puede suceder en el xilema o en el citoplasma, de acuerdo a la
condicin de pH de estos sistemas, lo que puede producir la inactivacin o activacin del
herbicida, definiendo as en muchos casos la selectividad del herbicida para especies en
particular. De similar forma, este tipo de hidrlisis puede suceder fuera de la planta, en
especial durante la preparacin del caldo de aspersin del herbicida, de acuerdo a las
caractersticas qumicas del agua que se utilice para su preparacin. La hidrlisis alcalina
ha sido propuesta como un mecanismo importante de inactivacin de herbicidas en aguas
con valores de pH superiores a 7. Este proceso produce que, si no se toman las medidas
preventivas apropiadas, una parte del herbicida que se aplica se encuentre desactivado,

1.3 REACCIONES DE CONJUGACIN EN LA DETOXIFICACIN DE HERBICIDAS:

La conjugacin de los compuestos txicos con otras molculas produce una alteracin de
las caractersticas fsico-qumicas del mismo, transformndolo, en la mayora de los casos,
en un compuesto no txico, hidroflico y estructuralmente muy diverso de la molcula
original. Esta estrategia de modificacin de compuestos potencialmente peligrosos a las
clulas se lleva a cabo en la fase II del proceso de detoxificacin y es comn en las plantas
y animales. Normalmente la conjugacin se completa luego de la oxidacin o hidrlisis de
la molcula original

Los principales compuestos que se conjugan con los metabolitos primarios de los
herbicidas son azcares, diferentes aminocidos y pptidos. La conjugacin con lpidos
puede suceder, pero es muy poco comn.
1.3.1 Conjugacin glucosdica:

Muchos de los herbicidas que son hidroxilados en la fase I de la detoxificacin son


conjugados con glucosa para formar O-b-D glucsidos. El azcar ms comn en la
conjugacin es la glucosa, pero otros azcares pueden unirse a las molculas de
herbicidas, aunque en la mayora de los casos estos azcares se unen a una molcula de
glucosa previamente conjugada con el metabolito del herbicida, es decir, se unen con el
glicsido formado. Es necesario que la glucosa a conjugar est activada en forma de UDP-
Glucosa.
Las enzimas que intervienen en la incorporacin de la glucosa al metabolito del
herbicida son las glucosil-transferasas. Cualquier grupo hidroxil libre en
cualquier posicin de la cadena del herbicida o de uno de sus metabolitos es
susceptible de ser utilizado para la conjugacin con glucosa, aunque algunas
posiciones del grupo favorecen ms la unin que otras. El -D-glucopiransido
es uno de los glicsidos ms comnmente formado en la detoxificacin de
herbicidas; otros compuestos como los O-glucsidos pueden formarse, pero son
menos comunes.

Como ejemplo del proceso de conjugacin con glucosa que sufren los
herbicidas, en plantas tolerantes a metribuzina inicialmente se forma un N-
glucsido por la accin de la enzima N-glucosil transferasa; posterior-mente a
este glucsido se le agrega una molcula de malonil por accin de la enzima
arilamina N-glucosil transferasa, lo que hace el compuestos mucho ms soluble
para su compartamentalizacin. La molcula de glucosa fijada inicialmente sirve
de base para la unin de otras molculas, que en definitiva modificarn de tal
manera la molcula original hasta convertirla en un compuesto no txico.

1.3.2 Conjugacin con polipptidos

La conjugacin polipeptdica ms comn e importante que sucede en la


detoxificacin de herbicidas sucede con la glutationa.
Est presente en el citoplasma de las clulas de todos los organismos,
principalmente en su forma reducida (GSH).
Durante la fase II de la detoxificacin de compuestos txicos, el grupo SH de la
glutationa tiene la capacidad de reaccionar con una gran variedad de sustratos
hidrofbicos y electroflicos txicos a la clula, reduciendo as la toxicidad de los
mismos
La conjugacin de compuestos txicos con la glutationa es catalizada por un
grupo de enzimas denominadas glutationa transferasas o glutationa-S-
transferasas (GSTs), las cuales han sido encontradas en prcticamente todos los
organismos

Mecanismo de catlisis de las enzimas glutationa-S-transferasas:

Tal y como se ha comentado, las GSTs catalizan el ataque del tomo de sulfuro
de la
glutationa reducida (GSH) al centro electroflico de una ampla variedad de
sustratos. En cada una de las subunidades de la enzima, el sitio activo consiste
en un dominio de unin de la GSH (sitio G) localizado en la zona terminal N del
polipptido; en el caso de las GSTs de las plantas el residuo de serina estabiliza
el anin thiolato de la GSH durante la
reaccin. Por otra parte, en la zona terminal C de la subunidad se encuentra el
dominio del sitio de unin de los compuestos hidrofbicos (sitio H), que es lugar
donde se unen los herbicidas y otros txicos. La especificidad del sustrato para
el sitio G es alta, siendo exclusivo para la GSH o para molculas
estructuralmente relacionadas. En contraste, las GSTs poseen muy poca
especificidad para los sustratos del sitio H, de all su capacidad de catalizar la
unin de la glutationa a mltiples molcu-las. En el caso de herbicidas, se ha
comprobado que diferentes formas de GSTs actan en la conjugacin de
atrazina, metolacloro, fenoxaprop-etil y herbicidas de grupos qumicos como
tiocarbamatos, acetamidas y difenilteres con la glutationa, conformando ste
el mecanismo que permite reducir el potencial txico de estos herbicidas y
jugando as un papel determinante en la selectividad de los mismos

La glutationa-S-transferasa y la selectividad de herbicidas:


la GST posee un papel importante en muchos
de los procesos de detoxificacin de herbicidas en plantas; ese rol detoxificador
de estas enzimas puede definir la selectividad de herbicidas. Las diferentes
formas de GST no se distribuyen equitativamente entre las diferentes especies
de plantas, por lo cual aquellas que posean alta actividad de GST podrn
soportar mejor la exposicin a ciertos herbicidas que, por el contrario,
eliminarn las especies que posean baja actividad de GSTs. Como ejemplo se
puede mencionar el caso de la alta tolerancia que poseen el maz y el sorgo a la
atrazina, la cual est demostrada que sucede por los altos niveles de GST que
poseen estos cultivos. Estas GSTs catalizan la conjugacin atrazina-GSH, lo que
produce un metabolito no txico y soluble en agua. Cultivos sensibles a este
herbicida no poseen la alta actividad de la GST, lo que les imposibilita la
detoxifi-cacin de la atrazina, tornndolas susceptibles a la accin herbicida del
compuesto

La especie maleza Setaria faberi Herrm. Posee tolerancia a herbicidas cloro-


triazinas por efecto de las GSTs, pero la forma de estas enzimas en la maleza es
diferente a la encontrada en maz, lo que sugiere que la diversidad en las
formas de GSTs entre las plantas juega un papel importante en la respuesta
ante los herbicidas.

La glutationa-S-transferasa y la resistencia de plantas a herbicidas:

Algunas especies de malezas presentan resistencia a diferentes grupos de


herbicidas, lo cual se denomina de forma general como resistencia mltiple.
La mayora de los mecanismos de resistencia de malezas a un herbicida en
particular son originados por cambios en las enzimas sobre las que actan los
herbicidas.
Este tipo de resistencia se produce por un aumento en el metabolismo
detoxificador de los herbicidas, entre ellos la accin de las GSTs. En la especie
Alopecurus myosuroides Huds., existe fuerte evidencia de que la actividad de
las GSTs puede contribuir a la resistencia de esta especie a mltiples herbicidas
por detoxificacin por conjugacin con glutationa, jugando tambin un
importante papel en la tolerancia al estrs oxidativo. De similar forma, en
poblaciones de Abutilon theophrasti Medik.resistentes a atrazina se ha
demostrado que el aumento en la capacidad detoxificadora de las GSTs (de
hasta 4 veces con respecto a las poblaciones no resistentes) es la causa de la
resistencia a ese herbicida y es posible que intervenga en el desarrollo de
resistencia a otros grupos qumicos.

1.3.3 Conjugacin con aminocidos:


Algunos aminocidos como glutamato, asparagina, cistena, alanina, leucina,
prolina, etc. pueden unirse a los herbicidas o a sus metabolitos a travs de
enlaces alfa-amida.
Estas uniones normalmente suceden luego de conjugaciones primarias del
metabolito, en especial con glutationa. Tal como se ha descrito, tambin pueden
formarse metabolitos conjugados con aminocidos como consecuencia de la
accin de enzimas peptidasas que actan sobre conjugados de
glutationa:herbicida que normalmente forman compuestos con una unin
cistena-S-metabolito; sin embargo, estos compuestos se metabolizan
rpidamente por su unin con malonil. El 2,4-D es especialmente susceptible de
unirse a aminocidos.
BIBLIOGRAFA

Anzalone, Alvaro, 2008. Herbicidas: Modos y Mecanismos de accin en


Plantas. Fondo Editorial de la Universidad Centroccidental Lisandro
Alvarado. 144 pp.