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BACTERIOFAGOS

50 x 106 bacterifagos /ml de agua de mar y


cantidad equivalente en suelos
Se estiman 1031 bacterifagos en la Tierra

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Bacterifagos con Genoma de DNA dc

LTICOS : T1 T7
Se multiplican en Bacterias y matan la clula por lisis al final de su
ciclo de vida
Virin complejo: cabeza icosadrica, cola y fibras
DNA dc linear : 40.000 170.000 pb

LISOGNICOS (Atemperados)

Alternativamente pueden multiplicarse va ciclo ltico o entrar en


un estado quiescente en la clula donde la mayor parte de los
genes no se expresan (lisognicos)

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Fagos Lticos
Fago T7

Virin
cabeza icosadrica, cola corta
DNAdc linear 40.000pb
Genoma 97% codificante

Expresin gnica
Genes inmediatos tempranos (RNA polimerasa del husped):
Protena inhibitoria del sistema de restriccin de la clula husped
RNA polimerasa T7
Inhibicin de RNA polimerasa de la clula husped

Genes tempranos y tardos (T7 RNA polimerasa)


Replicacin del genoma (T7 DNA polimerasa)
Protenas estructurales y ensamblado

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Fagos Lticos

Replicacin del Fago T7


Origen de replicacin nico
formacin de concatmeros
monmeros endonucleasa especfica

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Uso de algunas caractersticas del
fago T7 en Biologa Molecular

DNA polimerasa T7 Enzima Sequenase (secuenciacin de DNA)

RNA polimerasa T7 + promotor especfico Vectores de expresin procariota

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Fagos Lticos

FagoT4

Virin Complejo (43 protenas)


-Cabeza icosadrica
-vaina
-cuello
-placa basal
-fibras de la cola

-DNAdc linear 170.000pb

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Fagos Lticos

ENTRADA Fago T4

-Adhesin a lipopolisacridos de superficie


-Inyeccin del material gentico

Infeccin viral Degradacin


masiva del DNA de la clula huesped
(nucleasas)

Proteccin del DNA viral: base


modificada
5 hidroximetilcitosina , con grupos
hidroxilo glicosilados (DNA resistente a
endonucleasas)

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Fagos Lticos
Infeccin del fago T4

Expresin gnica en 3 fases (RNA pol de clula husped + protenas virales)


1er fase RNA pol celular
2nda fase RNA pol celular + protenas virales
3ra fase RNA pol celular + nuevo factor sigma

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Bacterifagos con Genoma a RNAsc (+)

Icosadricos
Pequeos 26nm
Infectan clulas F+ (pili)
Regulacin de la expresin por estructura secundaria del RNA

MS2 (E.coli) Genoma de RNA + : 3500nt

lisis
5` Prot de maduracin cubierta replicasa 3`

RNA genmico cad+ (RNAm)

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Mapa gentico y
proceso de
multiplicacin del
virus MS2

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Bacterifagos Icosadricos con Genoma a DNA sc

Fago X174
DNA sc circular
5300 nt
1er DNA secuenciado totalmente
25nm Icosadrico

DNAsc
Enz.celulares RF
DNAdc
Replicacin
(circulo rodante)
genoma
DNAsc
transcripcin

Protenas ensamblado
traduccin
virales

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Fagos Lticos

Terapia con Bacterifagos


Uso de Bacterifagos en reemplazo o junto con antibiticos

Ventajas
Multiplicacin dependiente de la presencia de bacteria blanco
No txicos
Especficos (rango estrecho de husped) no causan dao a la
flora normal
Seleccin de fagos con receptor involucrado en virulencia

Desventajas
Especficos hay que conocer previamente el agente infectivo

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Fagos Lisognicos

FAGOS LISOGNICOS (Atemperados)

Fago Lambda o lamboides


Insercin del genoma en sitios especficos del cromosoma del
husped

Fago Mu
Insercin del genoma en cualquier cromosoma del husped
Transposicin

Fago P1
Profago no integrado
Mantenimiento como plsmido

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Fagos Lisognicos

Fago lambda

Cabeza icosadrica
Cola
1 nica fibra
Genoma de ADNdc de 48.000pb
Extremos del genoma sc complementarios (extremos cos) Circularizacin del genoma al
ingresar a la clula y seales de empaquetamiento
Adsorcin por unin a receptor: transportador maltosa

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Fagos Lisognicos

Fago Lambda

Eventos que llevan a la Lisogenia:


-Circularizacin del genoma
-Recombinacin sitio especfica (sitios att)
-Represin de la expresin del genoma del fago
Expresin de Protena represora

Fin Lisogenia (Induccin del


profago):
-Destruccin de Protena represora
(Seal: condiciones adversas de crecimiento
de las bacterias)

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Fagos Lisognicos

Establecimiento de la Lisogenia o Ciclo Ltico

Genes inmediatos tempranos = N y Cro

Genes tempranos N, Cro, CII, CIII, CI

Genes tardos: Replicacin, protenas


estructurales y lisis

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Fagos Lisognicos

Usos en Biologa Molecular del fago Lambda

Bibliotecas Genmicas
Bibliotecas de Expresin
Csmidos

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Csmidos

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Fagos Lisognicos

Genotipo y Fenotipo de Bacterias Lisognicas

Diversificacin genmica (E.coli)

Transmisin horizontal de factores de virulencia


Transformacin de cepas no patgenas en patgenas

Factores de virulencia localizados en genomas de bacterifagos


lisognicos
codifican Protenas que proveen a la bacteria mecanismos de:

Invasin de clulas husped


Evitar defensas inmunes del husped
Dao a clulas del husped

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Ejemplos de toxinas codificadas en bacterifagos
lisognicos

Toxina colrica (ctxAB) CTX (Vibrio colera)

Toxina diftrica (tox) -phage (Corynebacterium diphteriae)

Shiga toxina (stx1, 2) H-19B (E.coli)

Induccin del profago Multiplicacin del virus (ciclo ltico)


Aumento del nmero de copias del gen
(Replicacin)

Regulacin positiva de la expresin

Aumento de produccin
de toxina

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Bacterifagos Filamentosos
DNA sc
M13, f1, fd (E.coli)
Simetra helicoidal
DNA sc circular
Infectan clulas F+
Liberacin de la clula sin lsis ensamblado a nivel de membrana citoplasmtica
acoplado a transporte

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RF
DNAdc
Replicacin
Enz. (circulo rodante)
celulares

genoma
DNAsc transcripcin

traduccin Copias del


Protenas
virales genoma
DNAsc

Ensamblado en la
membrana y
translocacin

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Usos en Biologa Molecular de los Fagos Filamentosos

Vectores de clonado y secuenciacin


Produccin de DNA simple cadena
Clulas infectadas mantenidas en cultivo
Espacio intergnico que puede reemplazarse por DNA
exgeno

Bibliotecas de Pptidos

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Usos de virus en Biologa Molecular

Vectores de clonado
Secuenciacin (M13)
Bibliotecas (fago lambda, csmidos)
Bibliotecas
Genmicas
Expresin
Pptidos (Fd)

Vectores de Expresin
Baculovirus
Vaccinia
Terapia Gnica

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Terapia Gnica
Virus como vectores para transferencia de genes

Blanco principal Enfermedades monognicas


reemplazo de genes alterados

Fibrosis qustica (CFTR)


Factores de coagulacin
Deficiencias en adenosin-desaminasa (inmuno-
incompetencia)

Aplicacin ex vivo o in vivo

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Virus usados en terapia gnica
Retrovirus
MLV (virus de leucemia murina)virus defectivos incompetentes en replicacin
Integracin en el genoma de la clula husped expresin a largo plazo
Infectividad limitada a clulas en divisin
Capacidad para gen exgeno limitada (8 Kb)
Inactivacin por complemento

Adenovirus
Sin integracin Expresin transiente
Virus delecionados incompetentes para replicacin
Capacidad 7.5 Kb
Receptores ubicuos

Virus asociados a adenovirus


Integracin en sitios especficos del genoma
Amplio rango de clulas blanco
No asociado a enfermedades

Herpesvirus, Vaccinia, Syndbis virus

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