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Microbiologa y taxonoma
microbiana
U1 Taxonoma microbiana
ndice
Presentacin.............................................................................................................................. 2
Propsitos ................................................................................................................................. 3
Competencia especfica ........................................................................................................... 3
Ruta de aprendizaje .................................................................................................................. 4
1.1. Microbiologa ...................................................................................................................... 5
1.1.1. Campo de estudio de la microbiologa ............................................................................ 6
1.1.2. Taxonoma ...................................................................................................................... 7
1.1.3. Concepto de especie ..................................................................................................... 17
1.2. Nomenclatura de microorganismos ................................................................................. 18
1.2.1. Caracterizacin fentica ................................................................................................ 19
1.2.2. Pruebas bioqumicas y tinciones ................................................................................... 20
1.2.3. Caracterizacin genotpica ............................................................................................ 26
1.2.4. Filogenia microbiana ..................................................................................................... 28
1.2.5. rboles filogenticos ..................................................................................................... 29
1.3. Virus ................................................................................................................................. 31
1.3.1. Caractersticas y estructura de los virus ....................................................................... 34
1.3.2. Replicacin viral ............................................................................................................ 36
1.3.3. Cultivo de virus .............................................................................................................. 39
Actividades .............................................................................................................................. 42
Autorreflexiones....................................................................................................................... 42
Cierre de la unidad .................................................................................................................. 42
Para saber ms ....................................................................................................................... 44
Fuentes de consulta ................................................................................................................ 45
Presentacin
Propsitos
Competencia especfica
1.1. Microbiologa
Antes de sumergirnos en el contenido de la asignatura, revisa la infografa que se muestra
en la pgina anterior y que te permitir tener un panorama completo de los contenidos que
revisaremos en esta unidad, en caso de que tengas alguna pregunta o inquietud, consltalo
con tu docente en lnea.
Microbiologa
Tomado de http://www.vwmin.org/hooke-about-robert-hooke-hooke-laboratories.html y
http://www.history-of-the-microscope.org/anton-van-leeuwenhoek-microscope-history.php
Microorganismos
1.1.2. Taxonoma
Para poder comprender la gran diversidad de organismos existentes es preciso agruparlos
y organizarlos en una estructura jerrquica. De ello se encarga la taxonoma, la cual se
compone de tres partes independientes pero interrelacionadas:
Taxonoma
Clasificacin
Es el agrupamiento ordenado de unidades en grupos dentro de unidades
mayores.
Nomenclatura
Es la denominacin de las unidades definidas por la clasificacin.
Identificacin
Hace uso de los criterios establecidos por la clasificacin y nomenclatura
mencionados, los microorganismos se identifican comparando las
caractersticas de las unidades desconocidas y las conocidas.
Para llevar a cabo la clasificacin de las bacterias los taxnomos bacterianos se vieron
forzados a buscar adems de las caractersticas estructurales, diferentes tipos de
propiedades como las bioqumicas, fisiolgicas, ecolgicas. Dicha clasificacin se basa en
atributos funcionales, la mayor parte de las bacterias slo pueden identificarse por lo que
hacen y no simplemente por su apariencia. Esto representa un problema adicional para el
taxnomo bacteriano, el estudio de estas propiedades funcionales conlleva a la realizacin
de experimentos.
Sin embargo, est tomando auge una nueva alternativa biotecnolgica que podra resolver
pronto el problema, son las tcnicas moleculares para la caracterizacin genotpica
bacteriana, que proporcionan una posible base objetiva para la definicin de especie
bacteriana (Trtora, 2008).
En el siglo XVII Carlos Linneo desarrollo un sistema de clasificacin para nombrar a los
microorganismos como una forma de facilitar la comunicacin eficaz entre los
microbilogos, a Linneo se le conoce como el Padre de la Taxonoma (Solomon et al.,
2008).
Tomado de:
http://es.wikipedia.org/wiki/Archivo:C
arl_von_Linn%C3%A9.jpg
Tipos de clasificaciones
Fentica
Las agrupaciones se realizan en funcin de la semejanza en sus
caractersticas fenotpicas. Se toman en cuenta propiedades bioqumicas,
fisiolgicas, ecolgicas y estructurales de los microorganismos.
Genotpica
Compara las semejanzas genticas entre los organismos, ya sea de genes
individuales o de genomas completos y existen mltiples tcnicas por las
que pueden ser evaluados.
Filogentica
Los agrupamientos se basan en las relaciones evolutivas que actualmente
pueden determinarse por la similitud entre la secuencia del DNA, RNA y
protenas.
Numrica
El agrupamiento se realiza empleando mtodos numricos de unidades
taxonmicas basadas en la semejanza general determinada por
comparacin de numerosas caractersticas, recibiendo cada una de las
cuales el mismo valor. Despus de realizado el anlisis de caracteres se
calcula un coeficiente de variacin entre cada par de cepas del grupo, que
determina la concordancia de los caracteres que presentan ambas
bacterias.
farmacutica debemos identificar cules son los posibles contaminantes presentes en los
productos para poder realizar acciones correctivas y preventivas.
A lo largo de los aos han existido distintas clasificaciones de los seres vivos, en el sistema
de clasificacin actual basado en la relacin evolutiva de la secuencia 16S del rDNA se ha
reconocido una clasificacin con tres dominios mayores, de los cuales dos comprenden a
las bacterias y arqueas (procariotes) y el tercer dominio a eucariotes (Sarethy y Danquah,
2014) como se muestra en la figura 4:
- Plsmidos Si S Raro
- Sensibilidad de ribosomas a la toxina No S S
diftrica S No No
- Sensibilidad a cloranfenicol,
estreptomicina y kanamicina
- Metanognesis No S No
- Reduccin desasimilativa de S S No
sulfatos y frrico S No No
- Nitrificacin S S No
- Desnitrificacin
- Fijacin de nitrgeno S S No
- Fotosntesis oxignica S No S (en
- Quimiolitotrofa S S cloroplastos)
- Vesculas de gas S S No
- Sntesis de grnulos de reserva de S S No
carbono (-hidroxialcanoatos) S S No
- Crecimiento por encima de 80 No
Todos los procariotas pertenecen al domino Bacteria o Archaea. Dentro de cada dominio,
cada microorganismo est asignado (en orden descendente) a un phylum, clase, orden,
familia, gnero y especie. Algunos procariotas tambin tienen una denominacin de
subespecie. Los grupos microbianos de cada nivel tienen un sufijo indicativo especfico de
ese rango o nivel.
Para poder realizar una identificacin microbiana es necesario analizar sus caracteres
morfolgicos, fisiolgicos, serolgicos y qumicos, que son los que nos van a dar pauta para
poder diferenciar entre una especie y otra, o bien identificarlos. El estudio de tales
propiedades conlleva a la realizacin de experimentos, pruebas y tcnicas para identificar
a las bacterias.
Mtodo de
Taxonoma Nombre Propiedades
confirmacin
Dominio Bacteria Clulas bacterianas; Microscopa;
secuencias de RNA anlisis de la
ribosmico tpicas de secuencia de
bacterias RNA
ribosmico
16S; presencia
de
biomarcadores
nicos, por
ejemplo el
peptidoglicano
Filum Proteobacteria Secuencias de RNA Anlisis de la
ribosmico tpicas de secuencia del
Proteobacterias RNA
ribosmico
16S
Clase Gammaproteobacteria Bacterias gram Tincin de
negativas; secuencias Gram,
de ARN ribosmico microscopia
tpicas de
Gammaproteobacteria
Orden Chromatiales Bacterias fottrofas Pigmentos
purpura caractersticos
Gnero Allochromatium Bacterias prpura del Microscopia
azufre con forma de
bastn
Especie warmingii Clulas de 3,5-4,0 m Medida de las
X 5-11 m; almacenan clulas en el
azufre principalmente microscopio
en los polos de la usando un
clula micrmetro;
determinando
la posicin de
los glbulos de
S0 dentro de la
clula
Universidad Abierta y a Distancia de Mxico 15
U1 Microbiologa y taxonoma microbiana
Taxonoma microbiana
Tomado de:
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Taxonomy/taxonomyhome.html/index.cgi?chapter=resources
Especie y cepa
Especie
Es la unidad fundamental de la diversidad biolgica que tomando en cuenta
datos fenotpicos, genotpicos y de filogenia conforma una coleccin de
cepas que presentan un alto grado de similitud en una serie de rasgos
independientes.
Cepa
Se define como una poblacin de organismos que desciende de un nico
organismo o de un aislamiento en cultivo puro.
A) Biovariedades
Variantes de cepas bacterianas caracterizadas por diferencias bioqumicas y
fisiolgicas.
B) Morfovariedades
Se diferencian desde el punto de vista morfolgico.
C) Serovariedades
Presentan propiedades antignicas diferentes.
D) Patovariedad
Se diferencan por el proceso y grado de patogenicidad.
E) Fagovariedad.
Presentan diferente especificidad por los fagos.
F) Ecotipo.
Se han adaptado a ocupar un mismo nicho ecolgico.
Las caractersticas morfolgicas son importantes debido a que son fciles de estudiar y
analizar, adems, las caractersticas estructurales dependen de la expresin de muchos
genes y suelen ser estables desde el punto de vista gentico. Este tipo de caractersticas
normalmente no varan de forma sustancial con los cambios ambientales, por lo tanto, la
semejanza morfolgica a menudo es un buen indicador del parentesco filogentico.
Para la tincin de las preparaciones se emplean colorantes, los cuales son compuestos
orgnicos que tiene afinidad por determinados componentes celulares. Algunos colorantes
presentan molculas cargadas positivamente, es decir son bsicos o catinicos.
Para poder realizar una tincin es necesario primero realizar un frotis (Figura 7) en un
portaobjetos y fijarlo para posteriormente teirlo con el proceso especfico de cada tincin
y observarlo al microscopio.
Modificado de http://estudiantesenlaboratoristaquimico.blogspot.mx/2014/12/tincion-de-
gram.html
Tomado de:
http://www.auxiliaresenfermeria.net/201
1/07/la-tincion-para-micobacterias.html
Tincin de cpsula: las capsulas de las bacterias son frgiles, por lo que no se tien
con los mtodos comunes. Se utiliza una solucin de colorante cristal violeta que se
calienta y despus se realiza un lavado con sulfato de cobre. La capsula bacteriana se
tie de color azul plido, mientras que la clula y su interior aparecen teidas de color
azul obscuro.
Tomado de http://bacillus8.blogspot.com/
Tincin de flagelos: los flagelos de las bacterias son invisibles en las preparaciones
comunes, por lo que solo pueden visualizarse con tinciones especiales. Los flagelos se
observan en cultivos bacterianos recientes (12-18 horas) en caldo nutritivo. Se colocan 2 o
3 gotas de la muestra sin extenderlas, se fijan y se deja secar al aire, posteriormente se
agrega una mezcla de agua destilada, fucsina bsica, alcohol etlico, cido tnico y cloruro
de sodio, durante 5 a 15 minutos hasta observar un precipitado y se lava para finalmente
Tomado de http://salmonellathypi.blogspot.mx/
Para realizar estas pruebas es necesario conocer detalladamente qu cambios sufren las
bacterias durante los procesos metablicos, cmo es que se llevan a cabo las reacciones
bioqumicas, qu enzimas intervienen y cules son los productos intermedios que se
generan.
Cuando la secuencia del gen 16S del rDNA tiene una similitud entre organismos 98.7%
los miembros son de diferentes especies. Los microorganismos no cultivables no pueden
ser asignados a una especie definitiva puesto que su fenotipo no se conoce, pero pueden
ser asignados a una designacin Candidata provista de la secuencia del gen 16S,
dependiendo de la similitud que presente con otras especies conocidas (Sarethy y
Danquah, 2014).
La taxonoma microbiana est cambiando con rapidez. Esto se debe a los conocimientos
crecientes sobre la biologa de los microorganismos, a los avances notables realizados en
el mundo de la informtica y al uso de las caractersticas moleculares para determinar
relaciones filogenticas entre microorganismos (Willey et al., 2009).
Algunas de las tcnicas que se emplean para estudiar la filogenia microbiana son:
rbol filogentico
Los rboles filogenticos pueden tener raz o estar desprovistos de ella, como se observa
en la siguiente imagen:
Figura 13. Ejemplos de rboles filogenticos. A) rbol sin raz que une cuatro
unidades taxonmicas. B) rbol con raz.
Una vez que se han alineado las molculas, se determina el nmero de posiciones que
varan en las secuencias. Estos datos se utilizan para calcular una medida de la diferencia
entre las mismas, la cual la podemos expresar en forma de distancia evolutiva (Willey et al.,
2009).
Enlace
1.3. Virus
Los virus son los microorganismos ms numerosos de nuestro planeta y sin embargo
todava no pueden ser introducidos en la clasificacin del gran rbol de la vida, debido a
que existe el gran dilema de si clasificarlos como seres vivos o no. Es por ello que vamos
a analizar diferentes caractersticas de ellos para intentar responder esta gran interrogante.
Los virus infectan todo tipo de organismos celulares, adems de que son herramientas
importantes en el rea de la gentica microbiana y la ingeniera gentica. Estos organismos
son estudiados por la virologa.
Virus
Los virus son parsitos intracelulares obligados que tienen que introducirse en una clula
viva adecuada para llevar a cabo su ciclo de replicacin, sin embargo, los virus poseen su
propia informacin gentica y una forma extracelular denominada partcula vrica que les
permite existir fuera del hospedador durante largos periodos y que facilita la transmisin
entre una clula y otra (Madigan et al., 2009).
Transfeccin
Proceso mediante el cual los virus entran en una clula hospedera para
poder replicarse.
Los virus se pueden clasificar con base en los hospedadores que infectan: en virus
bacterianos (bacterifagos), animales o vegetales; aunque tambin pueden clasificarse por
el genoma que presentan: si estn formados por DNA o RNA, de una o dos cadenas o si
su estructura es lineal o circular (Tabla 6 y figura 15).
Ejemplos
Descripcin del genoma y
Clase Virus
estrategia de replicacin Virus animales
bacterianos
I Genoma de DNA bicatenario Labda, T4 Herpesvirus,
viruela
II Genoma de DNA monocatenario X174 Virus de anemia
aviar
III Genoma de RNA bicatenario 6 Reovirus
IV Genoma de RNA monocatenario MS2 Poliovirus
positivo
V Genoma de RNA monocatenario Virus de la gripe,
negativo virus de la rabia
VI Genoma de RNA monocatenario Retrovirus
que se replica con un
intermediario de DNA
VII Genoma de DNA monocatenario Virus de la
que se replica con un hepatitis B
intermediario de RNA
Modificado de Madigan et al., 2009.
Cuando los virus se encuentra en su forma extracelular se llaman viriones y son una
partcula microscpica que contiene cido nucleico rodeado por protenas y otras
macromolculas, pero no realizan ninguna actividad metablica.
Los viriones pueden tener muchos tamaos y formas diferentes. La mayora de ellos
presentan un tamao entre los 20 y 300 nm. El cido nucleico del virin siempre est
localizado en el interior de la partcula, rodeado por una cubierta proteica llamada cpside
(Figura 16).
Esta cubierta est compuesta por una serie de molculas proteicas individuales llamadas
capsmeros, que siguen un patrn preciso y altamente repetitivo alrededor del cido
nucleico. Los capsmeros son las unidades morfolgicas ms pequeas que se pueden ver
en un microscopio ptico.
Algunos virus estn desnudos, mientras que otros poseen una membrana alrededor de la
nucleocpside, que forman lo que se conoce como envoltura. Esta envoltura consiste en
una bicapa lipdica con protenas, normalmente glicoprotenas, integradas en ella. Los
lpidos de la membrana vrica son derivados de las membranas de la clula hospedadora,
pero las protenas estn codificadas por genes del virus (Madigan et al., 2009).
Figura 17. Principales familias de virus que infectan vertebrados. Del lado
izquierdo se muestran virus sin envoltura con diferente estructura de cpside y DNA
o RNA, del lado derecho se observan virus con envoltura con diferente forma y DNA
o RNA.
Tomado de
http://datateca.unad.edu.co/contenidos/203016/Modulo_EXE/leccin_2_clasificacin_de_los_vir
us.html
Para que un virus pueda replicarse, debe inducir a una clula hospedadora a sintetizar
todos los componentes esenciales necesarios para producir ms viriones. Luego, estos
componentes debern ensamblarse en nuevos viriones que escaparn de la clula. La
replicacin vrica se divide en cinco etapas (Figura 18):
Replicacin viral
1. Unin (adsorcin)
Es la etapa inicial donde el virin se une a la clula hospedadora susceptible
a travs de receptores.
3. Sntesis
Se sintetizan los cidos nucleicos y las protenas del virus por el metabolismo
celular redirigido por el virus.
4. Ensamblaje
Se unen las cpsides y los componentes de la membrana del virus (en caso
de que sea envuelto) y se empaquetan junto con el genoma vrico formando
nuevos viriones.
5. Liberacin
En esta ltima fase los viriones maduros son liberados de la clula hospedera.
Tomado de https://eduardosetti.wordpress.com/2014/04/04/sobre-virus-malos-y-buenos/
Todos los cidos nucleicos virales, sin importar cul sea su condicin deben ser
transformados a mRNA para poder ser traducidos por la maquinaria celular, y en algunos
casos este proceso es nico de los virus, como la retrotranscripcin o la transcripcin
inversa, donde el RNA monocatenario pasa a DNA por medio de una enzima llamada
transcriptasa inversa o retrotranscriptasa (Ej. Retrovirus).
B) Infeccin latente, donde existe una demora entre la infeccin por el virus y los
sucesos de lisis. La etapa latente en la infeccin vrica de una clula animal se debe
a que los virus existen en un estado relativamente inactivo en el interior de las
clulas, donde sigue producindose la transcripcin a un bajo nivel pero el DNA viral
no se replica.
Tomado de
http://biologocalentano.blogspot.mx/2
012/06/91-mecanismos-de-
transferencia-natural.html
Algunos virus son parsitos de otros virus, conocidos como virus auxiliares. Algunos de
estos virus llamados defectivos dependen de virus intactos del mismo tipo para que les
proporcionen las funciones necesarias. Otro tipo de virus auxiliares son los satlite que
dependen de virus que no estn emparentados con ellos para que acten como auxiliares.
Existen otras estructuras muy similares a los virus como los viroides que ocasionan
muchos problemas en plantas y los priones que ocasionan enfermedades en animales
(encefalopata espongiforme bovina o enfermedad de las vacas locas) y en humano
(enfermedad de Creutzfeldt-Jakob) (Madigan et al., 2009).
Viroides y priones
Viroides
Se definen como molculas infecciosas de RNA que se diferencian de los
virus en que carecen de cubierta proteica.
Priones
Son partculas cuya forma extracelular diferenciada est formada
nicamente por protenas y que no contienen material gentico.
Como los virus se replican nicamente en el interior de las clulas vivas, su cultivo requiere
el uso de hospederos adecuados. Para el estudio de los bacterifagos se utilizan cultivos
puros en medios lquidos o semislidos. La mayora de los virus animales y algunos
vegetales pueden crecer en cultivos tisulares o celulares, lo que ha facilitado la
investigacin sobre ellos. Los virus vegetales, son los ms difciles de trabajar, porque su
estudio requiere el uso de la planta completa en muchas ocasiones, lo que lo hace un
proceso lento.
Durante muchos aos, los investigadores han cultivado virus de animales inoculando
huspedes animales adecuados o huevos embrionados. Para ello se emplean huevos de
gallina fertilizados incubados durante aproximadamente 6 a 8 das despus de la puesta y
posteriormente se sigue el procedimiento que se muestra a continuacin (Willey et al., 2009)
(Figura 20):
Tomado de:
http://www.actualidadavipecuaria.com/alfabiol/productos/servicios/analisisdelaborato
rio/diagnostico-virologico.html
Tomado de http://ticotal.cr/boletin-informativo/ticotal-boletin-informativo-n19-
setiembre-2014.html
Las clulas en la capa de agar superior crecern formando una capa continua, opaca, o
csped. En el lugar donde caiga un virin se producir la lisis de las clulas y por lo tanto
una placa o zona clara en el csped en el agar debido a la infeccin de las clulas por el
virus (Willey et al., 2009).
Actividades
Autorreflexiones
Cierre de la unidad
En esta primera unidad vimos una introduccin al mundo de la microbiologa, con el estudio
de la taxonoma, filogenia. Conociste en qu se basan y cules son las grandes
clasificaciones de los seres vivos, adems de conocer los fundamentos de la nomenclatura
microbiana, que es tan importante para el biotecnlogo.
Para saber ms
Fuentes de consulta