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Tema 3: Enzimas.

ENZIMAS; MECANISMO, ESTRUCTURA Y REGULACIN.


Oscar Daz Peralta.
Estudiante de Enfermera UA.
ENZIMAS.
Los enzimas son biomolculas especializadas en la catlisis de las reacciones
qumicas que tienen lugar en la clula. Son muy eficaces como catalizadores ya que son
capaces de aumentar la velocidad de las reacciones qumicas mucho ms que cualquier
catalizador artificial conocido, y adems son altamente especficos ya que cada uno de ellos
induce la transformacin de un slo tipo de sustancia y no de otras que se puedan
encontrar en el medio de reaccin.

CATLISIS QUMICA.
Antes de comenzar a analizar la naturaleza y funcin de los enzimas, resulta
conveniente enunciar algunos conceptos bsicos acerca de la velocidad de las reacciones
qumicas y el fenmeno de la catlisis.

La teora cintica qumica establece que las reacciones qumicas transcurren


molcula a molcula de modo que una reaccin tal como
R (reactivos) P (productos)
tiene lugar porque una determinada fraccin de la poblacin de molculas R, en un instante
dado, posee energa suficiente como para alcanzar un estado activado llamado estado de
transicin, en el que es muy fcil que se rompan o se formen uno o ms enlaces qumicos
para formar los productos P. Es frecuente confundir el estado de transicin con un
intermediario de reaccin; sin embargo este estado no es ninguna especie qumica
concreta, sino que podra definirse con ms exactitud como un "momento molecular fugaz",
altamente inestable, en el que uno o ms enlaces qumicos estn muy prximos a romperse
o a formarse.

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La velocidad de una reaccin qumica es proporcional al nmero de molculas por


unidad de tiempo con energa suficiente para alcanzar el estado de transicin. Este estado
de transicin posee una energa superior a la de los reactivos y a la de los productos
constituyendo entre ellos una barrera energtica que debe superarse para que la reaccin
tenga lugar. La diferencia entre la energa de los reactivos y la del estado de transicin
recibe el nombre de energa libre de activacin (ver Figura 14.1).

Existen dos mtodos generales mediante los cuales puede acelerarse la velocidad
de una reaccin qumica. Uno de ellos consiste en la elevacin de la temperatura de modo
que al incrementarse el movimiento trmico de las molculas reaccionantes aumenta la
fraccin de molculas que poseen energa suficiente para alcanzar el estado de transicin.
El otro mtodo consiste en usar un catalizador, sustancia que se combina de un modo
transitorio con los reaccionantes de manera que stos alcanzan un estado de transicin de
menor energa de activacin; cuando se forman los productos se regenera el catalizador
libre. As, un catalizador es una sustancia que, sin consumirse en el proceso, aumenta la
velocidad de una reaccin qumica rebajando la barrera de energa de activacin (ver Figura
14.1). Es conveniente resaltar el hecho de que los catalizadores no alteran los equilibrios de
las reacciones qumicas, slo consiguen que dichos equilibrios se alcancen ms
rpidamente de lo que lo haran en ausencia de catalizador.

ESTRUCTURA DE LOS ENZIMAS: EL CENTRO ACTIVO.

Los enzimas, en
cuanto que protenas,
presentan todos los rasgos
estructurales y propiedades
qumicas que caracterizan a
esta notable clase de
biomolculas. En efecto, se
ha podido comprobar que los
enzimas pierden su actividad
cataltica cuando sufren
desnaturalizacin por efecto
de los mismos agentes que
afectan a las dems
protenas; la conformacin
tridimensional nativa intacta
de la protena enzimtica
resulta

indispensable para que sta desempee su funcin. Adems, los enzimas, al igual que otras
muchas clases de protenas, presentan un centro activo a travs del cual interactan con
la(s) molcula(s) de ligando, que en este caso recibe(n) el nombre de sustrato(s),
mediante un acoplamiento espacial (las superficies moleculares de ambos tienen formas
complementarias) y qumico (grupos funcionales complementarios del enzima y el (los)
sustrato(s) establecen diferentes tipos de interacciones dbiles entre s). Tanto la actividad
cataltica como el elevado grado de especificidad qumica que presentan los enzimas
residen en esta interaccin especfica entre el enzima y su sustrato.

El centro activo es una cavidad existente en la superficie del enzima que est
forrada interiormente por una serie de restos de aminocidos (Figura 14.2). Por regla
general los aminocidos que forman parte del centro activo no se encuentran contiguos en

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la cadena polipeptdica, sino ocupando posiciones a veces muy alejadas en la misma. El


hecho de que estos aminocidos coincidan prximos entre s sobre el centro activo no es
ms que una consecuencia del plegamiento caracterstico de la cadena polipeptdica, es
decir, de la conformacin tridimensional nativa de la protena enzimtica. Puede resultar til,
aunque no siempre posible, distinguir entre los aminocidos que forman parte del centro
activo dos categoras:

a) Aminocidos catalticos: Son uno o ms aminocidos cuyas cadenas laterales R


poseen unas peculiaridades qumicas tales que los facultan para desarrollar una funcin
cataltica. Constituyen el verdadero centro cataltico del enzima.
b) Aminocidos de unin: Son una serie de aminocidos cuyas cadenas laterales R
poseen grupos funcionales que pueden establecer interacciones
dbiles (puentes de hidrgeno, interacciones inicas, etc.) con grupos
funcionales complementarios de la molcula de sustrato. Su funcin
consiste en fijar la molcula de sustrato al centro activo en la posicin
adecuada para que los aminocidos catalticos puedan actuar (ver
Figura 14.2).

En cuanto al resto de los aminocidos de la cadena polipeptdica del enzima, los que
no forman parte del centro activo, podra pensarse en principio que no desempean
ninguna funcin, pero esto no es cierto; tienen la importante misin de mantener la
conformacin tridimensional catalticamente activa del enzima; sin ella no existira centro
activo y el enzima no podra interactuar con su sustrato.

4.-CINTICA ENZIMTICA: EL COMPLEJO ENZIMA-SUSTRATO.

Los enzimas actan de acuerdo con los mismos principios generales que los dems
catalizadores: aumentan la velocidad de las reacciones qumicas combinndose
transitoriamente con los reactivos de manera que estos alcanzan un estado de transicin
con una energa de activacin menor que el de la reaccin no catalizada. Hay que destacar
sin embargo que los enzimas son mucho ms eficaces que cualquier catalizador artificial
conocido. Se ha podido comprobar que los aumentos de velocidad que producen son de
entre 107 y 1014 veces la velocidad de la reaccin no catalizada. La actividad molecular
(nmero de molculas de sustrato transformadas por una sola molcula de enzima por
minuto) de distintos enzimas oscila entre unos pocos miles y varios millones de molculas
de sustrato por minuto. Cabe preguntarse pues, cmo consiguen los enzimas aumentos tan
espectaculares en la velocidad de las reacciones qumicas que catalizan.

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Los mtodos experimentales para conocer la actividad cataltica de los enzimas son cada
vez ms complejos y sofisticados. Sin embargo, el mtodo ms antiguo utilizado en
enzimologa, desarrollado por Leonor Michaelis y Maud Menten (Figura 14.3), y que en la
actualidad sigue siendo de gran utilidad, consiste en analizar como vara la velocidad de las
reacciones catalizadas enzimticamente en funcin de algunos parmetros experimentales
como la concentracin del sustrato o la del propio enzima, lo que globalmente se conoce
con el nombre de cintica enzimtica.

La cintica de las reacciones catalizadas por enzimas muestra un rasgo


caracterstico que no se observa en las reacciones no enzimticas: la saturacin del
enzima por el sustrato (ver Figura 14.4). Cuando se mide la velocidad inicial de una reaccin
catalizada enzimticamente se observa que para concentraciones de sustrato bajas la
velocidad de reaccin es proporcional a dicha concentracin, como ocurre con carcter
general para las reacciones no enzimticas. A medida que la concentracin de sustrato
aumenta la velocidad de reaccin deja de ser proporcional a sta. Con un aumento posterior
la velocidad de reaccin llega a ser totalmente independiente de la concentracin del
sustrato y se aproxima asimptticamente a un valor mximo que es caracterstico de cada
enzima y que se conoce como velocidad mxima. Se dice entonces que el enzima se halla
saturado por el sustrato. La concentracin de sustrato a la cual la reaccin alcanza la mitad
de su velocidad mxima se conoce con el nombre de KM (constante de Michaelis-Menten).
KM es un valor caracterstico de cada enzima y constituye una medida de la afinidad del
enzima por el sustrato: valores bajos de KM indican una alta afinidad mientras que valores
altos representan una baja afinidad.

El efecto de saturacin del enzima por el sustrato condujo a los primeros


investigadores de la cintica enzimtica, incluso antes de que se conociera la naturaleza
proteica de los enzimas, a formular la hiptesis, hoy corroborada, de que el enzima y el
sustrato se combinan de modo transitorio para formar un complejo enzima-sustrato
(Figura 14.5) en el que se alcanza el estado de transicin con mayor probabilidad que en la
reaccin no catalizada. Una vez alcanzado dicho estado el complejo enzima-sustrato se

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descompone para dar lugar a los productos y el enzima libre segn se refleja en la siguiente
ecuacin:
E + S ES E+P

El enzima, una vez liberado, puede combinarse con una nueva molcula de sustrato para
formar un nuevo complejo enzima-sustrato cerrndose as el ciclo cataltico del enzima.
De este modo, una sola molcula de enzima puede transformar en producto, en sucesivos
ciclos catalticos, a un elevado nmero de molculas de sustrato, lo que contribuira a
explicar la gran eficacia cataltica que exhiben estas biomolculas.

La hiptesis del complejo enzima-sustrato explica de modo satisfactorio el efecto de


saturacin del enzima por el sustrato observado en los estudios de cintica enzimtica:
cuando la concentracin de sustrato es muy superior a la concentracin del enzima en el
medio de reaccin, todos los centros activos de las molculas de enzima se hallan
ocupados en un momento dado por molculas de sustrato, con lo que aumentos posteriores
de la concentracin de ste no se traducen en aumentos en la velocidad de reaccin.

ENZIMAS REGULADORES.
La clula es una mquina qumica que debe ser capaz de autoajustarse o regular su
propio funcionamiento para no desperdiciar tiempo ni energa en realizar procesos que no le
son tiles en un momento dado, siguiendo as un principio de mxima economa molecular.
Este autoajuste se lleva a cabo a varios niveles entre los que destaca la regulacin de la
propia actividad enzimtica.

Todos los enzimas presentan propiedades que los hacen candidatos a constituir
elementos reguladores del metabolismo. Estas propiedades son su sensibilidad a los
cambios de pH, a la concentracin del sustrato o a la concentracin de otras sustancias
accesorias que denominaremos cofactores. Sin embargo, existen una serie de enzimas que,
adems de estas propiedades comunes a todos ellos, poseen otras que les confieren un
papel especficamente regulador del metabolismo: son los enzimas reguladores. Existen
dos tipos principales de enzimas reguladores: los enzimas alostricos y los enzimas
modulados covalentemente. Ambos tipos son responsables de alteraciones en el estado
metablico de las clulas en intervalos cortos de tiempo (los enzimas alostricos en
cuestin de segundos, los modulados covalentemente en cuestin de minutos).

ENZIMAS ALOSTRICAS.
Los enzimas alostricas son aquellos que, adems del centro activo mediante el cual
interactan con el sustrato, poseen otro centro de unin llamado centro alostrico
mediante el cual interactan con otra molcula denominada efector o modulador (la
palabra "alostricas" hace referencia a la existencia de ese "otro lugar"). La interaccin del

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modulador con el centro alostrico es tan especfica como lo es la interaccin del sustrato
con el centro activo y tambin est basada en la complementariedad estructural (Figura
14.13). Los enzimas alostricos presentan pesos moleculares en general superiores a los
de otros enzimas y en la mayor parte de los casos son protenas oligomricas, es decir
estn formados por varias subunidades (normalmente en nmero par).

Los moduladores alostricos pueden ser de dos tipos: unos estimulan la actividad
del enzima al unirse al centro alostrico, reciben el nombre de moduladores positivos o
activadores; otros la inhiben y se llaman moduladores negativos o inhibidores. Los
inhibidores alostricos no responden a ninguno de los modelos de inhibicin enzimtica
estudiados en el apartado anterior.

Los enzimas alostricos presentan siempre dos formas, una activa y otra inactiva,
interconvertibles por efecto del modulador (Figura 14.10). Existen dos tipos de control
alostrico: el control heterotrpico que se da cuando el modulador es una molcula
diferente del sustrato, y el control homotrpico que se da cuando el modulador es el
propio sustrato. En ambos casos el modulador puede ser positivo o negativo. Los enzimas
con control homotrpico poseen dos o ms centros de unin para el sustrato; en ellos la
interconversin entre las formas activa e inactiva depende de cuntos sean los centros de
unin que estn ocupados por molculas de sustrato.

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Un caso muy comn de regulacin del metabolismo mediante enzimas alostricos es


la inhibicin por el producto final, tambin llamada retroinhibicin o control feed-back.
En ella, el producto final de una ruta metablica inhibe alostricamente al enzima que
cataliza la primera reaccin de dicha ruta, interrumpiendo as su propia sntesis cuando sta
ya no es necesaria. Este tipo de control es muy rentable para la clula, ya que no se
interrumpe solamente la sntesis del producto final sino la de todos los intermediarios. Se
trata de un control heterotrpico mediante un modulador negativo.

Otro caso es el del sustrato de la primera reaccin de una ruta metablica que acta
como activador del enzima que cataliza dicha reaccin. Se tratara aqu de un control
homotrpico mediante modulador positivo.

Aunque existen enzimas alostricos monovalentes, que responden a un slo


modulador, la inmensa mayora son enzimas polivalentes, que poseen varios centros
alostricos mediante los cuales interactan con distintos moduladores positivos y/o
negativos, presentando un tipo de control mixto homotrpico-heterotrpico.

ENZIMAS MODULADOS COVALENTEMENTE.

Los enzimas modulados covalentemente tambin presentan dos formas, una


activa y otra inactiva, que son interconvertibles por modificacin covalente de sus
estructuras catalizada por otros enzimas, denominados enzimas moduladores. Tal
modificacin suele consistir en la adicin o eliminacin de un grupo qumico esencial para la
catlisis (generalmente un grupo fosfato, metilo, adenilato u otros) de manera que el enzima
modulado se activa cuando est unido a dicho grupo y se inactiva cuando ste se elimina.
En la mayor parte de los casos son necesarios dos enzimas moduladores diferentes, uno
que activa el enzima modulado y otro que lo inactiva. Un ejemplo clsico de modulacin
covalente lo constituye el enzima glucgeno-fosforilasa, que acta en el metabolismo de los
glcidos liberando unidades de glucosa-1-fosfato a partir de las cadenas polisacardicas del
glucgeno. La glucgeno-fosforilasa es activada por un enzima modulador, la fosforilasa-
quinasa, que une covalentemente un grupo fosfato a un resto especfico de serina en cada

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una de las dos subunidades del enzima modulado. Otro enzima modulador, la fosforilasa-
fosfatasa, escinde hidrolticamente dichos grupos fosfato desactivando as el enzima (Figura
14.14).

La modulacin covalente tiene la ventaja de que puede utilizarse para amplificar una
seal qumica, ya que una sola molcula del enzima modulador puede activar o desactivar a
muchas molculas del enzima modulado, que a su vez podrn actuar o no sobre un elevado
nmero de molculas de sustrato, producindose as lo que se conoce como efecto
cascada. En muchos casos, los enzimas moduladores a su vez pueden activarse o
desactivarse como respuesta a una seal hormonal. Por ejemplo, la hormona denominada
adrenalina acta sobre receptores especficos de la membrana de las clulas musculares
desencadenando un proceso en el que estn implicados varios enzimas moduladores que a
su vez resultan modulados covalentemente por otros enzimas moduladores de un nivel
superior. El resultado final de dicho proceso es una degradacin masiva de glucgeno a
glucosa-1-fosfato destinada a la produccin de energa para las clulas musculares. De este
modo, una dbil seal qumica, consistente en unas pocas molculas de hormona, es
amplificada en varios escalones para producir un efecto metablico de grandes
proporciones.

Un caso particular de este tipo de regulacin es la activacin covalente de los


zimgenos. Algunos enzimas se sintetizan dentro de las clulas en formas inactivas
denominadas zimgenos. Una vez secretados al exterior de la clula son activados
mediante la escisin hidroltica catalizada enzimticamente de algunos pptidos de su
cadena polipeptdica. Este tipo de activacin es irreversible. El ejemplo clsico de este tipo
de regulacin es el de los enzimas digestivos pepsina, tripsina y quimotripsina que, con
el objeto de que evitar que lleven a cabo su actividad degradativa en el interior de las
clulas, se sintetizan en forma de sus respectivos zimgenos inactivos y slo se activan una
vez han sido secretados al tracto digestivo.

COFACTORES ENZIMTICOS.
Algunos enzimas necesitan para llevar a cabo su actividad cataltica de la
concurrencia de una o ms sustancias de naturaleza no proteica que reciben el nombre de
cofactores. No debe entenderse que los cofactores son sustancias que meramente
potencian la actividad enzimtica sino que, en determinados enzimas, son absolutamente
imprescindibles para que sta se realice. En ausencia de cofactor el enzima resulta
catalticamente inactivo y recibe el nombre de apoenzima; la combinacin de apoenzima y
cofactor da el holoenzima catalticamente activo. Existen dos tipos de cofactores
enzimticos: los iones metlicos y los coenzimas.

Los iones metlicos que actan como cofactores enzimticos son generalmente
cationes mono o divalentes. Pueden actuar de varias maneras: 1) En algunos enzimas el ion
metlico constituye el verdadero centro cataltico; en estos casos el ion suele presentar por
s solo una cierta actividad cataltica, que se ve incrementada cuando forma parte del
enzima. 2) En otros enzimas el ion metlico constituye un grupo puente para unir el sustrato
al centro activo. 3) A veces el ion metlico no forma parte del centro activo sino que se
encuentra en un lugar del enzima muy alejado del mismo, actuando como agente
estabilizador de la conformacin nativa del enzima.

Cuando el cofactor es una sustancia orgnica de naturaleza no proteica recibe el


nombre de coenzima. Los coenzimas actan generalmente como transportadores
intermediarios de grupos funcionales, de determinados tomos o de electrones, los cuales
son transferidos de una sustancia a otra en la reaccin enzimtica global. A veces los
coenzimas se hallan ntimamente unidos a la molcula proteica constituyendo un verdadero

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grupo prosttico. En otros casos la unin es dbil y el coenzima acta en realidad como si
de un sustrato ms del enzima se tratase.

Cuando se analiza la estructura qumica de muchos coenzimas se comprueba que


tienen formando parte de ella a alguna de las sustancias conocidas como vitaminas. Existe
pues una clara relacin entre vitaminas y coenzimas.

VITAMINAS.
Las vitaminas son una serie de sustancias de naturaleza qumica variada que, en
cantidades mnimas, son necesarias para el normal desarrollo y funcionamiento de muchos
organismos. Su importancia biolgica se manifest debido a que algunos organismos no las
pueden sintetizar y deben adquirirlas por tanto de procedencia exgena.

Desde muy antiguo se saba que determinados alimentos tenan propiedades


curativas o preventivas para determinadas enfermedades. El fraccionamiento qumico de
estos alimentos condujo al aislamiento y purificacin de las sustancias responsables de este
efecto preventivo, las cuales recibieron el nombre de vitaminas debido a que la primera que
se identific era una amina (de "vital amina"). Pudo constatarse entonces su variada
naturaleza qumica, siendo clasificadas en hidrosolubles y liposolubles segn su mayor o
menor afinidad por el agua o por las sustancias lipdicas.

En la actualidad est perfectamente establecida la funcin coenzimtica de la


mayora de las vitaminas hidrosolubles: a excepcin de la vitamina C todas forman parte de
alguno de los coenzimas conocidos. Es conveniente resaltar que, aunque existe una clara
relacin entre las vitaminas hidrosolubles y los diferentes coenzimas que actan en el
metabolismo, vitaminas y coenzimas no son exactamente la misma cosa; un ejemplo nos
ayudar a aclararlo: el cido nicotnico es una vitamina hidrosoluble que no puede ser
sintetizada por las clulas humanas. Ahora bien, dichas clulas s pueden transformar el
cido nicotnico en nicotinamida, la cual, unida a otros componentes celulares, forma parte
de los coenzimas NAD y NADP, que actan en el metabolismo como transportadores de
electrones. Por otra parte, las vitaminas liposolubles parecen presentar funciones de
naturaleza hormonal o reguladora del metabolismo que en algunos casos an no son bien
comprendidas.

Las necesidades exgenas de vitaminas difieren ampliamente de unas especies a


otras segn stas sean capaces o no de sintetizarlas. Por ejemplo el hombre necesita 14
vitaminas de procedencia exgena, mientras que la especie bacteriana Escherichia coli slo
necesita una (la biotina) pudiendo sintetizar todas las dems. Por otra parte, slo los
animales superiores parecen necesitar vitaminas liposolubles de procedencia exgena.