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CUANTIFICACION DE PROTEINAS POR ESPETROFOTOMERIA

Brayan Mejia 2140312176, Daro Moncayo 2140312184, Deivi Chaves 2140312076


Grupo N 3

UNIVERSIDAD DE NARIO

FACULTAD DE CIENCIAS AGRICOLAS

DEPARTAMENTO DE QUIMICA

RESUMEN

En el laboratorio utilizamos el mtodo de Biuret y el espectrmetro para cuantificar


protenas, el cual consisti en llenar los 10 tubos marcados previamente, con diferentes
concentraciones de protenas, adicionamos agua y reactivo de Biuret el cual dejamos
reposar durante 10 minutos en el termostato a 40 grados centgrados. Lemos la
absorbancia de cada tubo a una longitud de onda de 540 nm.

INTRODUCCION por aminocidos acompaados de


sustancias diversas, y protenas derivadas,
Las protenas son molculas formadas por sustancias formadas por desnaturalizacin
cadenas lineales de aminocidos. Las y desdoblamiento de las anteriores.2
protenas desempean un papel
fundamental para la vida y son las Dos son las propiedades principales que
biomoleculas ms verstiles y diversas. permiten la existencia y aseguran la
Son imprescindibles para el crecimiento del funcin de las protenas son; Estabilidad:
organismo y realizan una enorme cantidad La protena debe ser estable en el medio
de funciones diferentes, entre las que donde desempee su funcin. Para ello, la
destacan; estructural, inmunolgica mayora de protenas acuosas crean un
(anticuerpos) Enzimtica, Contrctil, ncleo hidrofbico empaquetado. Est
Homeosttica: colaboran en el relacionado con su vida media y el
mantenimiento del pH (tampn qumico) recambio proteico. Solubilidad: Es
Transduccin de seales, protectora o necesario solvatar la protena, lo cual se
defensiva. 1 consigue exponiendo residuos de similar
grado de polaridad al medio en la
Por sus propiedades fsico-qumicas, las superficie proteica. Se mantiene siempre y
protenas se pueden clasificar en protenas cuando los enlaces fuertes y dbiles estn
simples (holoproteidos), formadas solo por presentes. Si se aumenta la temperatura y
aminocidos o sus derivados; protenas
conjugadas (heteroproteidos), formadas
el pH se pierde la solubilidad. Existen otra GRAFICA ABSORVANCIA VS CONCENTRACION
serie de propiedades secundarias
asociadas a sus caractersticas qumicas:
Capacidad electroltica. Especificidad: Figura 1. Tubos la protena ms reactivo
Cada protena tiene una funcin especfica Biuret
que est determinada por su estructura
primaria. Amortiguador de pH (conocido
como efecto tampn).
La concentracin de las muestras 8* y 9*
La protena tienen estructuras que facilitan se determin de acuerdo con la ley de
el paso de la luz, pero algunas absorbe Lambert-Beer: A = x c x l, donde l se la
ciertas longitudes de onda. Existen varios desprecia para nuestro caso y tenemos:
mtodos para determinar la concentracin A = x c de donde despejamos la
de protenas de una muestra, tales como la concentracin que es igual: C = A/ .
determinacin de la absorbancia a 280 nm,
o mediante la formacin de derivados La es igual a la pendiente de la ecuacin
coloreados de las protenas. de la grfica absorbancia vs concentracin

Reaccin de Biuret y = 0,3105x + 0,0153

El reactivo de Biuret est formado por una


disolucin de sulfato de cobre en medio
alcalino, este reconoce el enlace peptdico
de las protenas mediante la formacin de
un complejo de coordinacin entre los
iones Cu2+ y los pares de electrones no
compartidos del nitrgeno que forma parte
de los enlaces peptdicos, lo que produce
una coloracin rojo-violeta.3

En el laboratorio realizamos la m=0,3105


cuantificacin de las protenas por el
Para el tubo 8* la absorbancia fue de 0,044
espectro de absorcin de cada una de ella.
de donde su concentracin ser:
concentracin absorbancia
tubo []mg/ml nm
B 0 0
1 0,1 0,068
2 0,3 0,104
3 0,5 0,169
4 0,7 0,219 Como el coeficiente de absorcin molar,
5 0,9 0,312 est dado en moles/Litro es necesario
7 1,5 0,477 hacer su conversin a mg/ml.
8* 0,05 0,044
9* 0,15 0,065 La casena representa cerca del 72% al
82% de las protenas presentes en la
RESULTADOS Y DISCUSION
leche6, entonces sacamos el 72% a los
0,5ml del extracto problema que se supone
que es leche y el 72% corresponde a la
masa de la casena y obtenemos: El porcentaje de concentracin se lo
determina mediante la siguiente ecuacin:
(0,5ml x 72%) / 100 = 0,36 gr de casena

x x x = 0,0507mg/ml
Concentracin terica= 5,0 mg/ml
Para el tubo 8* Para llevar a cabo el anlisis es necesario
realizar una etapa de calibracin, en la que
De la misma manera para calcular la
se mide la absorbancia de varias muestras
concentracin del tubo 9* se realiza:
de concentracin conocida (tubo B) el cual
Absorbancia tubo 9*= 0,065 fue de gran utilidad para comparar y
calcular la concentracin del problema
asignada.5

Las protenas son macromolculas


naturales que se encargan de dar fuerza y
resistencia a todas nuestras clulas. Las
protenas estn formadas por aminocidos,
Luego pasamos las mol/L a mg/ml as:
los cuales estn unidos entre s mediante
(1,0ml x 72%) / 100 = 0,72 gr de casena enlaces peptdicos. Lo que hace la
reaccin de Biuret es identificar dichos
x x x = 0,15mg/ml enlaces para ver si es que, la substancia a
la cual le realizamos ste experimento, es
Para el tubo 9* una protena o no.

En la grfica absorbancia vs concentracin El mtodo de Biuret la absorbancia de una


se puede observar todas las protena se lee a una longitud de 540 nm
concentraciones con su respectiva (para detectar el ion Cu 2+ +) por que el
absorbancia, pero en el tubo 9* se observa color violeta caracterstico se presenta a
un error que pudo ver sido por causa de esa longitud la cual se da por la
algunos errores instrumentales como coordinacin de un tomo de cobre con
tambin errores de precisin a la hora de cuatro tomos de nitrgeno. El complejo se
medir la cantidad de la sustancia problema. basa en la desprotonacin de los grupos
amida para formar el enlace con el cobre
concentracin % de protenas
(II) o por el establecimiento de un enlace
Tubo []mg/ml
coordinado entre el metal y los pares de
B 0 0
1 0,1 2 electrones libres de los tomos de oxgeno
2 0,3 6 y de nitrgeno del pptido. Tcnicas de
7
3 0,5 10 bioqumica y biologa molculas.
4 0,7 14
5 0,9 18 El reactivo de Biuret est hecho de
7 1,5 30 hidrxido de potasio (KOH) y sulfato
8* 0,05 1 cprico (CuSO4), junto con tartrato de
9* 0,15 3 sodio y potasio (KNaC4H4O64H2O).El
reactivo de color azul cambia a violeta en aminocidos (protena verdadera) y por
presencia de protenas y vira a rosa elementos que provienen de otros
cuando se combina con poli pptidos de compuestos que nos son
cadena corta. El hidrxido de potasio no necesariamente aminocidos.
participa en la reaccin, pero proporciona
el medio alcalino necesario para que tenga Mediciones de protena cruda utilizan el
lugar. mtodo de Kjeldahl de anlisis de
nitrgeno. Este mtodo, el estndar
Las ventajas que se observa al analizar los mundial, mide el contenido de
resultados se puede decir que el mtodo nitrgeno de una sustancia al degradar
de Biuret sirve de mucho para la el material hasta que los restos de
cuantificacin de protenas y la desventaja amonaco que contienen nitrgeno. El
es que cuando realizamos el procedimiento contenido de amoniaco resultante
se cometieron algunos errores refleja el nitrgeno total en el material
instrumentales y naturales como la mala de partida. Una vez que se determina
medida de los ml de la solucin de el contenido de nitrgeno, el resultado
protena, por lo cual causa algunos numrico se multiplica por 6,38 para
cambios en los clculos. proporcionar un valor equivalente de
protena para estimar la cantidad de
protena que existe real en la protena
cruda.8
1. Qu diferencia existe entre
protena bruta y protena
verdadera?, Cmo se pueden
determinar? 2. Qu aminocidos se encuentran
en mayor proporcin en la
La denominacin protena bruta incluye casena y la ovoalbmina?
todos los compuestos que contienen
nitrgeno, sean o no aminocidos. El El contenido proteico de la albumina de
95% de la protena bruta de los huevo entero es de un 14% o sea, un
concentrados es protena verdadera, contenido medio de 8 gr por huevo. Las
esto es, aminocidos; debido a que la protenas del huevo se encuentran en
diferencia cuantitativa entre protena cantidad aproximada de 6 gr por unidad
bruta y verdadera es mnima en a capacidad que posee la ovoalbmina
alimentos concentrados, en las de anular las enzimas digestivas y por
raciones de monogstricos no se esta razn sealan que es un
diferencia en la prctica entre protena mecanismo protector contra las
bruta y verdadera. Por el contrario, es bacterias exteriores agresoras al
conveniente estimar el contenido en huevo. Otras protenas del huevo son
NNP de los alimentos fibrosos y de los la conalbmina (13%), ovomucoide
subproductos, ya que en estos (11%), lisozima (3,5%), ovomucina
alimentos el NNP puede representar (1,5%), flavoproteinas (0,8%), avidina
ms del 20% del nitrgeno total del (0,05%) y otras (8%).6
alimento. La protena de los alimentos
(protena bruta) est formada por
elementos que provienen de
De las protenas lcteas hay que destacar
la casena que constituye el 80% de toda la protenas (% 1,3- 5,4-
protena de la leche o alrededor de 26 g*l 3,2-3,5 3,1-4,0
del total lcteo) 1,5 6,0
-1 de la leche.9

casenas (%
del total 44,9 82,5 84,8 81,3
Tabla 1. Contenido proteico y casenico de
proteico)
la leche de algunas especies animales.

especie

componente
huma
bovina ovina caprina
na

2. https://www.emaze.com/@AIOWL
OWO/Biolog%C3%ADa
CONCLUSIONES
3. http://tiempodeexito.com/bioquimi
Efectivamente, aplicando el mtodo
ca/52.html
Biuret se puede determinar la
concentracin de protena en una o 4. http://www.ugr.es/~olopez/estruct
varias muestras problema, que resultan _macromol/UV_V/UV_V.pdf )
al calcular los valores de absorbancia en
una curva patrn originada a partir de 5. http://www.espectrometria.com
concentracin de protena conocida
6. Tcnicas de bioqumica y biologa
- Las curvas de calibracin constituyen molculas. FREIFELDER David.
una herramienta muy til para la Editorial reverte.2003
cuantificacin (e identificacin) de
sustancias a partir de sus espectros de 7. http://www.geocities.ws/quimico69
absorcin. /bioinorg/bioinorg.html

- La eleccin de la longitud de onda 8. http://www.webs.ulpgc.es/nutrani


ptima para la elaboracin de la curva de m/tema3.htm
calibracin es determinante a la hora de
9. https://es.wikipedia.org/wiki/Case
cuantificar una sustancia por el mtodo
%C3%ADna
estudiado en esta prctica, pues es a
esta en donde la relacin entre
Absorbancia y concentracin es ms
marcada (mayor dependencia)

BIBLIOGRAFIA

1. http://www.food- Grafica concentracin vs absorbancia


info.net/es/protein/milk.htm ampliada