Antibiotik baru, leucinostatin, telah diisolasi dari filtrat kultur

Fenicillium lilacinum. lilacinum. Antibiotik diperoleh dalam bentuk prisma putih,

terdekomposisi di 131 ~ 136 C, dan menunjukkan rotasi optik [^] d2 + 644 (c
0,5,metanol). Spektrum serapan ultraviolet menunjukkan hanya infleksi pada
220nm dalam metanol. Antibiotik memberi reaksi positif terhadap biuret dan
negatif untuk ninhidrin. Setelah hidrolisis, antibiotik memberi reaksi positif
terhadap ninhidrin, leusin mendominasi, dan sifat peptida antibiotik. Leucinostatin
ditemukan aktif terhadap beberapa bakteri gram positif
dan berbagai jamur. Hal tersebut sitotoksik untuk kultur sel HeLa
dan menunjukkan beberapa efek penghambatan pada Ehrlich subkutan tumor
padat. LD50 secara injeksi intraperitoneal pada tikus dihitung menjadi 1.6mg / kg.
Antibiotik itu menunjukkan efek hipotensi signifikan pada tekanan darah kelinci
tanpa mempengaruhi respon epinefrin dan asetilkolin.
Selama mencari metabolit sekunder biologis-aktif jamur, filtrat kultur strain
A-267 ditemukan menunjukkan sitotoksisitas ke sel HeLa , aktivitas antitumor
pada Ehrlich karsinoma padat, dan beberapa antibakteri lainnya dan aktivitas
antijamur. Dari hasil penelitian, strain diidentifikasi sebagai Penicillium lilacinum.
Biologis aktif diisolasi dalam bentuk kristal berwarna. Hal itu merupakan
peptida yang sebagian besar terdiri dari leucine dan asam amino tak dikenal.
Antibiotik itu dikenal dengan leucinostatin. Tulisan ini menjelaskan fermentasi,
isolasi, sifat fisikokimia dan kegiatan biologis leucinostatin.
Fermentasi dan Isolasi Leucinostatin
Penicillium lilacinum A-267 dipertahankan pada modifikasi agar Czapek yang
berisi glukosa 1%, bukan 3% sukrosa. Strain dikultur dalam medium Adye yang
digunakan untuk produksi aflatoksin dengan sedikit modifikasi. Medium
mengandung per 1,000ml air suling: sukrosa, 50g; jagung minuman keras curam,
10g; KH2PO4, log; MgSO4-7H2O, 2g; Na2B, O7-10H2O, 0.7mg;
(NHJ6Mo7024.4H20, 0,5 mg; Fe2 (SO4) 3-6H2O, 10mg; CuSCV5H2O, 0.3mg;
MnSO4-H2O, 0.llmg; ZnSO4- 7H2O, 17.6mg. pH harus antara 4,3 dan 4,5.
Sesuaikan, jika perlu, untuk pH 4,3-4,5 dengan 1n NaOH atau 1n HG1.
Produksi maksimum leucinostatin diperoleh setelah 72 jam inkubasi pada
27 C pada rotary shaker atau dalam 100 liter fermentor stainless steel
mengandung 50 liter media yang sama, diaduk 250r.p.m. dan diangin-anginkan
dengan 0.5V / v / menit. Setelah inkubasi, filtrat kultur disesuaikan dengan pH 2.0
dengan 1 N HCl dan dua kali diekstraksi dengan satu-setengah volume etil asetat.
Lapisan pelarut digabungkan dan dipekatkan dalam vakum di bawah 50 C.
Lapisan pelarut terkonsentrasi dicuci dengan 5% NaHCO3 dan terkonsentrasi
untuk pengeringan. Substansi mentah dimuat pada kolom silika gel dan berturut-
turut dikembangkan dengan kloroform dan pelarut campuran kloroform dan
metanol. Fraksi aktif dikembangkan oleh campuran kloroform dan metanol (100:
5) digabungkan, terkonsentrasi dan selanjutnya dikenakan untuk kromatografi
kolom Sephadex LH-20. Bubuk putih diperoleh dari fraksi aktif, dikembangkan
dengan metanol. Bubuk putih ini direkristalisasi beberapa kali dari campuran eter
dan petroleum eter.
SIFAT FISIKOKIMIA
Leucinostatin meleleh pada 131 ~ 136 C dengan dekomposisi. Rotasi optik
[<^] D2 + 644 (c 0,5, metanol). Analisis dasar memberi komposisi sebagai
berikut: G 57,40; H 8.89; N ll.87; O 21,74. Berat molekul yang ditentukan oleh
osmometry tekanan uap 1568. Spektrum penyerapan ultraviolet dalam metanol
yang ditampilkan di gambar 1 hanya 220nm. Spektrum tablek KBr ditunjukkan
oleh gambar 2, 3300, 1655 dan 1540cm "1 sesuai dengan fungsi amida. Larut
dalam alkohol, ester, aseton dan kloroform, sedikit larut dalam eter dan benzena
dan tidak larut dalam n-hexane, sikloheksana, petroleum eter dan air. Antibiotik
memberikan reaksi positif terhadap biuret tetapi negatif untuk ninhidrin.
Kandungan nitrogen, reaksi biuret, dan penyerapan band yang sesuai dengan amida
berkaitan dengan spektrum penyerapan inframerah, sifat peptida dari leucinostatin.
Hidrolisis dalam 6N HC1 pada 105 C selama 48 jam dalam tabung tertutup dan
analisis asam amino mengungkapkan adanya dominasi leusin dan empat asam
amino tak dikenal di leucinostatin.
SIFAT BIOLOGI
in vitro antibakteri dan antijamur spektrum dari leucinostatin ditentukan
dengan menggunakan 14 strain bakteri gram positif dan negatif dan 23 strain
jamur. Hasil ditunjukkan pada tabel 1,2 dan 3 dengan deskripsi media, masa
inkubasi dan suhu. Leucinostatin ini cukup aktif terhadap beberapa bakteri gram
positif. Sarcina lutea dan Bacillus subtilis yang ditemukan paling sensitif terhadap
antibiotik dan mycobacteria yang kurang rentan. antibiotik tidak aktif terhadap
bakteri gram negatif. Leucinostatin cukup aktif di berbagai jamur termasuk kedua
strain patogen dan non-patogen. Di antara 5 strain Candida albicans, saring
YU1200 dihambat pada konsentrasi serendah l.Omcg / ml, sedangkan konsentrasi
hambat minimal untuk C. albicans IFM ketegangan itu, 10mcg / ml. Pada Tabel 4,
leucinostatin stabil dalam keadaan agak panas dan penurunan kegiatan yang hanya
dua kali lipat dengan pemanasan pada suhu 60 C selama 30 menit atau 100
derajat selama 30 menit. Penggabungan hingga 30% bovine serum ke dalam
media juga tidak mempengaruhi aktivitas leucinostatin secara signifikan seperti
ditunjukkan pada Tabel 5. Aktivitas leucinostatin dalam metanol turun menjadi
sekitar satu-setengah dari solusi asli setelah iradiasi 10 menit dari sinar ultraviolet
dan sepersepuluh setelah 30minutes (Tabel 6). Leucinostatin sitotoksik untuk
kultur sel HeLa pada konsentrasi dari 0.05mcg / ml. LD50 tikus dengan
intraperitoneal rute dihitung menjadi 1,6 mg / kg. Whenmice ditanamkan
intraperitoneal, atau subkutan di inguinal kiri daerah, dengan 1 x106 Ehrlich sel
ascites tumor dan pengobatan dimulai intraperitoneal setelah 24 jam, leucinostatin
tidak menunjukkan efek antitumor di formulir ascite tumor. Hingga dosis 0,25 mg
menunjukkan beberapa penghambatan efek pada bentuk padat subkutan tumor
yang sama seperti yang ditunjukkan pada Tabel 7. ketika tekanan darah arteri
karotis kelinci direkam oleh tekanan transduser, pemberian intravena 0.5mg / kg
antibiotik menunjukkan efek hipotensi berkepanjangan tanpa mempengaruhi
respon dari 5mcg / kg epinefrin dan 2 mcg / kg asetilkolin.
DISKUSI
Hasil percobaan ini jelas menunjukkan sifat peptida dari leucinostatin.
Leucinostatin mudah dibedakan dari antibiotik peptida yang dikenal berasal dari
jamur berdasarkan berat molekul, komposisi asam amino yang unik dan
karakteristik fisikokimia dan biologi lainnya. Baru-baru ini, antibiotik peptida,
lilacinin, diisolasi dari filtrat kultur Penicillium lilacinum. Lilacinin adalah peptida
antibiotik leleh yang larut dalam air pada 102 ~ 103 C. berat molekul yang
ditentukan sebagai 748, dan itu jauh lebih aktif terhadap bakteri gram positif
daripada jamur dan juga dibedakan dari leucinostatin.