CROMATOGRAFIA DE CAPA DELGADA Y COLUMNA

Oscar Montoya-1424299-Montoya.oscar@correounivalle.edu.co
Kevin Prez-1425650- Perez.kevin@correounivalle.edu.co
Laboratorio qumica orgnica
Facultad Ciencias Naturales y Exactas
Universidad del Valle
Docente: Rodrigo Abona Gonzlez
Octubre 3 de 2016

1. OBJETIVOS identificacin, bajo ciertas

2
circunstancias . En la prctica se
Identificar las tcnicas
realizaron las tcnicas de
cromatogrficas de capa delgada y
cromatografa de capa delgada
de columna para la separacin de
(CCD) y cromatografa de columna
sustancias.
Diferenciar las distintas tcnicas (CC), en donde la CCD se desarrolla

cromatogrficas para purificar como aplicacin analtica, y se usa

sustancias. comnmente para seguir el

Reconocer la tcnica de desarrollo de una reaccin, para
cromatografa de columna para una analizar el nmero aproximado de
separacin cuantitativa. componentes de una muestra, y por
Reconocer la tcnica de
su valor como criterio de pureza e
cromatografa de capa delgada
identificacin3, y la CC permite
como una forma de seguimiento de
separar secuencialmente cada
reacciones.
componente de la mezcla en estado
2. Introduccin:
La cromatografa puede definirse puro, y espaciado del siguiente
como la separacin de una mezcla componente por una alcuota de
de molculas por distribucin entre solvente puro4.
dos o ms fases, una de las fases
3. Procedimiento
es esencialmente bidimensional
(una superficie) y la fase restante, Cromatografa de capa
delgada
normalmente la principal est en
contacto con ella movindose a 1. Se trazaron dos lneas
horizontales a una placa para
contracorriente1.Esta tcnica se cromatrografa a 5 cm desde la
emplea no solo para separar los parte superior e inferior.
2. Se coloc un punto equivalente a la
componentes de una mezcla, sino mezcla (azul de metileno y
tambin como criterio de pureza e fluorescena) en la parte izquierda y
 otro equivalente al azul de metileno Mezcla 2.6
en la parte derecha.
Azul de 0.25
3. Se agreg etanol en un vaso de 25
mL con una cantidad donde este metileno
estuviera debajo de la lnea trazada
en la placa. Se introdujo la placa Se us como eluyente al etanol, el
cromatogrfica de tal forma que la
lnea que contena los puntos cual tuvo como distancia recorrida
estuviera en la parte inferior. 3.2 Cm. Usando este dato
4. Se calcul el Rf de cada mancha.
Cromatografa de columna Procedemos a calcular el RF de
cada compuesto, usando la
1. Se introdujo un copito de algodn en
la columna. Se agreg de alumina siguiente ecuacin:
de tal forma que estuviera a 4 cm Distancia recorrida compuesto
RF=
del algodn y por ltimo se agreg Distancia recorridadisolvente
otro copito de algodn.
2. Se agreg etanol para humedecer la
columna. Se esper que empezara
R F mezcla=0.8125
el goteo de este.
3. Se aadi la mezcla de tintes. Se R F A . metileno=0.0781
agreg etanol hasta que la mezcla
quede en la fase estacionaria. Tabla 2. Informacin de los tubos de
4. Se recogi la primera fraccin ensayos.
(fluorescena) en un tubo de ensayo.
5. Cuando la solucin se puso incolora, Tubo de Contenido
se dejo caer esta fase intermedia
sobre otro tubo de ensayo. ensayo
6. Se agreg una mezcla 1:1 de cido Numero 1 Etanol
actico y agua. Numero 2 Fluorescena
7. Se colect la segunda fraccin en un Numero 3 Interface
tubo de ensayo. Numero 4 Azul de metileno
8. Se midi el Rf de cada lquido
recogido utilizando otra placa
ubicando un punto de cada uno.
Se utiliz el mismo sistema de la
cromatografa de capa delgada.

4. Datos, clculos y resultados:

Tabla 3. Datos de
Usando la tcnica de CCD se
obtuvieron los siguientes resultados: Compuesto Distancia RF
recorrida
(Cm0.01
)
Fluorescen 2.2 0.8148
Tabla 1. Datos de la CCD a
Azul de 0.35 0.1296
Compuesto Distancia
metileno
recorrida Disolvente 2.7
(Cm0.01) (Etanol)
 grupos ms polares son los
5. Anlisis de resultados
absorbidos ms fuertemente. Si
Las tcnicas de cromatografa de
observamos la molcula de la
capa delga y de columna, tienen
fluorescena, notamos que est
varias variables que determinan la
compuesta por grupos hidroxilos,
movilidad del compuesto a
acido carboxlico, cetona, y un ter,
determinar, entre estas estn el
los cuales son grupos polares,
adsorbente, la estructura del
aunque debido a que existe
compuesto, el solvente de
posibilidad de formar enlaces de
desarrollo, y la temperatura.
Cuando hablamos del adsorbente, hidrogeno intramoleculares, el poder
debemos de observar su actividad, de ser adsorbido disminuye, ya que
es decir su poder adsorbente, en la fuerza del enlace es una unin
este caso se us la slica, para la fuerte mientras que la estructura del
tcnica de capa delgada, la cual se azul de metileno, consta de uniones
clasifica segn el porcentaje de ms dbiles, provocando una mayor
agua incorporada, y para la tcnica unin al adsorbente.
de columna se us la almina, la
cual presenta cinco grados de
actividad segn la fuerza de
atraccin que ejerza sobre los
grupos polares de la muestra. Estos
dos adsorbentes usados son muy
Fig 1. Estructura de la fluorescena
sensibles al contenido de humedad.
Si se encuentra una disminucin del
poder absorbente frente a muestras
orgnicas se debe a que numerosos
sitios activos estn bloqueados por
molculas de agua. Tambin se
debe tener cuidado con posibles
reacciones entre los compuestos y
el adsorbente. Fig 2. Estructura del azul de
Con respecto a la estructura del
metileno
compuesto, se observa la
dependencia de la habilidad para Con respecto a la eleccin del

ser absorbido, es decir su solvente, se debe de tener cuidado,

polarizabilidad y capacidad para ya que este es vital para el xito del

formar puentes de hidrgeno. Los proceso separativo. En la tcnica de

CC se usa una secuencia de columna. En ambas tcnicas se
solventes de elucin con polaridades utilizaron las mismas condiciones,
crecientes, es decir con mayor poder donde el Rf tendra que dar similar
eluyente, como se visualiz en la para ambos casos.
prctica, primero se emple el etanol
Los valores de la constante Rf en la
y posteriormente el cido actico, el
sustancia equivalente a la
cual tiene mayor polaridad que el
fluorescena fueron muy similares,
etanol. La razn de esto, es ya que
con una desviacin de 0.0023. Esta
si se usa un solo solvente muy polar,
pequea desviacin indica una
este ser fuertemente adsorbido por
buena separacin de este lquido
los grnulos de la fase fija y el
por los dos mtodos, sin embargo
desplazamiento o desorcin de los
cabe aclarar que esta desviacin se
componentes adsorbidos ser
debi posiblemente al margen de
inmediato, el resultado de esta
error de la regla que se utiliz para
desorcin indiferenciada ser que la
medir las distancias. En la
mayora de los solutos corrern con
cromatografa de columna se utiliz
el frente del solvente, y no se lograr
etanol para colectar este
separacin. Por consiguiente se
componente, permitiendo que
debe usar primero un solvente de
estuviera diluido. Como se esper
baja polaridad, para luego
un tiempo para separar el azul de
aumentarla lentamente. Otro
metileno, el etanol se evapor lo
aspecto importante, es la velocidad
suficiente para no influir en la
de elucin de una columna, la cual
distancia recogida, sin embargo esta
debe de ser lenta para poder
pequea desviacin pudo ser
alcanzar el equilibrio adsorcin-
posiblemente a una presencia de
desorcin.
este solvente.
Como ultima variable se encuentra
la temperatura, la cual afecta la Los valores de la constante Rf para
volatilidad y solubilidad de las el azul de metileno si fueron
sustancias, por lo tanto se debe diferentes. Este valor utilizando la
mantener constante durante todo el cromatografa de columna fue mayor
proceso. al valor de la cromatografa de capa
En esta prctica se separaron dos
delgada, donde esto ocurri porque
componentes de una mezcla (azul
en la primer tcnica mencionada
de metileno y fluorescena) por
para separar el azul de metileno se
medio de dos tcnicas
utiliz una mezcla de cido actico y
cromatogrficas: Capa delgada y
agua, donde el colectado estuvo en
 solucin con este disolvente. No se disolventes pero rotando la placa 90
esper que el cido actico se C obteniendo as dos valores de Rf
evaporara y se utiliz la solucin para determinar una diferencia entre
recin recogida para medir el Rf, los componentes de la mezcla
6.4 En qu consiste la cromatografa
donde este cido influy para la
de CCD preparativa?
distancia recorrida por este
Cuando se tienen menos de 300 mg
componente en la placa y por lo
de muestra y quieren separarse por
tanto a su Rf. Tambin puede influir
cromatografa de adsorcin, se
que no se esper un tiempo la placa
emplea cromatografa en capa
hasta permitir que el cido actico
preparativa. Una vez elegido el
se evaporara y as la mancha del
adsorbente, deber recurrirse a la
azul de metileno se observara mejor.
CCD para la eleccin del solvente
6. Solucin de cuestionario apropiado a emplear a escala
6.1 Explique por qu y cmo se
preparativa. Si cuando se analiz el
separan los compuestos de la
solvente ptimo, la CCD estaba
mezcla de tintes?
suficientemente activada y la
Generalmente los tintes se separan
relacin masa de muestra a masa
gracias a la remocin selectiva de
de adsorbente era correcta, se
los componentes de la mezcla por
puede esperar reproducibilidad en
accin del disolvente. Los
los Rf. Esta realcion es
componentes se separan debido a
aproximadamente es 0.01
sus caractersticas relacionadas con
6.5 Qu es una resina de
el adsorbente, donde lo similar
intercambio aninica? Y una
adsorbe a lo similar y el componente
resina catinica?
de la mezcla que sea ms adsorbido La resina de intercambio aninica es
es el que se separa menos fcil. una sustancias con grupos reactivos
6.2 Qu es la cromatografa de
asociados a iones lbiles los cuales
columna seca? Y cmo se
son capaces de atraer aniones y por
desarrolla?
lo tanto intercambiarse. Estas se
6.3 Cul es el desarrollo multiple y
pueden dividir en fuertemente
el desarrollo bidimensional de la
bsicas o dbilmente bsicas y
CCD?
El desarrollo bidimensional de la ests caractersticas se deben a los
CCD se utiliza cuando los valores de grupos activos de la resina.
Rf son muy cercanos. Esta tcnica
La siguiente reaccin muestra un
consiste en determinar otro valor de ejemplo del intercambio aninico
Rf ya sea cambiando de disolvente o
utilizando el mismo sistema de

+ OH
+Cl

R
+Cl
+OH
R

La resina de intercambio catinica

es una sustancias con grupos
reactivos asociados a iones lbiles
los cuales son capaces de atraer
cationes y por lo tanto
intercambiarse. Estas se pueden
dividir en fuertemente cidas o
dbilmente cidas. Se pueden
utilizar de dos formas: una en forma 7. Conclusiones
de libre de cido (o forma de Las tcnicas cromatogrficas son
hidrgeno) donde atraer cationes y
los iones H+ se liberan en la adecuadas para purificar sustancias,
solucin. Otra consiste en la forma la de capa delgada lo realiza
salina, donde los cationes se
mediante una tcnica cualitativa
adsorben y el metal se libera en la
solucin. mientras que la de columna de

La siguiente reaccin muestra un manera cuantitativa. Por esta razn

ejemplo del intercambio catinico de para purificar sale mejor la segunda
la forma de hidrgeno.
tcnica ya que la fase eluyente va a
+ tener favorabilidad en disolver un
++ H
Na componente de la mezcla y el

+ R adsorbente tambin preferir retener
++ Na
algunos ms que otros y as colectar
H
R un solo componente. Sus impurezas
podran quedarse en el adsorbente
permitiendo as una buena
En la siguiente tabla se pueden
mostrar las caractersticas de las purificacin para luego ser utilizada.
diferentes resinas de intercambio
inicas. Los procedimientos utilizados son
tcnicas adecuadas ya que arrojan
Tabla 4. Caractersticas de resinas
de intercambio valores similares de Rf. Sin embargo
hay que tener cuidado con las fases
eluyentes ya que podran afectar en
6.6 Indique algunas de las
este valor, como en el caso
aplicaciones de la cromatografa
experimental del azul de metileno.
de adsorcin en columna
La tcnica cromatogrfica es muy
adecuada para separar sustancias, ya
que en la cromatografa de capa
delgada se observ en el punto
equivalente a la mezcla que se
separaron dos manchas de distintos
colores y el otro punto equivalente al
azul de metileno tubo una distancia
8. Bibliografa
similar a este mismo componente en
el otro punto. En la cromatografa de
columna se observ una separacin
2. Pasto,
adecuada ya que apareci la interfase
donde muestra el carcter de
adsorcin que tiene la alumina por
cada uno de los componentes de la
mezcla y cada muestra recogida
obtuvo un color caracterstico a cada
componente de la mezcla.
Se deben seleccionar bien los
parmetros requeridos para esta
tcnica, tales como el disolvente, el
adsorbente, la temperatura, entre
otros para que de esta forma se
pueda separar la mezcla de manera
adecuada y para que los valores de
Rf sean significativamente diferentes
y as realizar un mejor procedimiento.
1. Galagovsky L. Qumica orgnica ,
fundamentos tericos prcticos
para el laboratorio, 5ta Ed; Pag
108
D.; Johnson, C.;
Determinacin de estructuras
organicas;1981, Pag 19-20
3. Gua de prcticas de qumica
orgnica en pequea escala.