Biotecnologia PDF

UNIVERSIDAD AUTNOMA DE CIUDAD JUREZ
INSTITUTO DE CIENCIAS BIOMDICAS

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS QUMICO-BIOLGICAS
PROGRAMA DE BIOLOGA
MANUAL DE PRCTICAS
BIOTECNOLOGA
MANUAL DE PRCTICAS DE BIOTECNOLOGA
COMPILADORES:
Principal: M. en C. Rocio Cortes Rodrguez
Colaboradores: M. en C. Rocio Cortes Rodrguez
Revisado por: Academia de Biologia 2011
Ciudad Jurez, Chihuahua

Universidad Autnoma de Ciudad Jurez
2009
p. 81
M. en C. Emilio Clarke Crespo
Coordinador de la Academia de Biologa
D. Ph. Antonio de la Mora Covarrubias

Coordinador del Programa de Biologa
Dr. Alejandro Martnez Martnez

Jefe del Departamento de Ciencias Qumico-Biolgicas
M.C. Hugo Staines Orozco

Director del Instituto de Ciencias Biomdicas
Aprobados por la Academia de Biologa, 2011

LaboratoriodeBiotecnologa

CONTENIDO
Practica 1. Preparacion de las soluciones madre para Medios de Cultivos para

plantas....3
Practica 2. Preparacion de los Agares para cultivo de plantas in vitro.....10
Practica 3. Cutivo in vitro de plantas (semilla)......15
Practica 4: Cultivo in vitr de plantas (organos vegetales)....19
Practica 5: Fermentaciones..23
Practica 6: Glicolisis anaerobica y fermentacin ..26

Practica 7: Fermentacion alcoholica...29
Practica 8. Fermentacion lactica..34
Practica 9: Analisis de tecinicas para deteccion de alimentos OGM

(documental)...37
Practica 10: Extraccion de ADN eucariotico..39

Practica 11: Extraccion de ADN procariotico.43
Practica 12: Electroforesis con geles de Agarosa....46
Practica 13: Reaccion en Cadena de la Polimerasa y sus variantes (PCR)

(Demostrativa y Documental)..50
Practica 14. Secuenciacion de ADN (demostrativa, Documental).53
Practica 15. Prueba diagnosticos (ELISA).55
Practica 16: Bioinformatica y Biotecnologia...58
Practica 17. Biorremediacion (documental)...60
Practica 18. Fitorremediacion......62
Practica 19. Biocombustibles...64
Practica 20. Analisis de contaminacion del agua..67
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Practica 1: Preparacin de soluciones madre para los medios de cultivo
Objetivo:
Que el alumno obtenga un conocimiento prctico sobre los diversos mtodos de

preparacin de medios de cultivo para propagar in vitro.
Introduccin:
Son muchos los componentes de un medio para cultivar material vegetal "in vitro":
por ejemplo, se encuentran las sales minerales que incluyan todos los elementos
esenciales tanto micro como macronutrientes, las vitaminas tales como riboflavina,
tiamina, piridoxina, cido nicotnico, cido pantotnico, biotina, y cido flico.
Aminocidos tales como L-glutamina, asparragina y cistena, los hexitoles como mio-
inositol, hormonas y reguladores del crecimiento, una fuente de carbono y un agente
gelificante.
Un mtodo de hacer menos tedioso el trabajo consiste en preparar lo que se
conoce como "soluciones madre" de algunos de estos componentes. Estas soluciones
tienen una concentracin que suele ser 10, 100 e incluso 1000 veces superior a la
concentracin final del medio. Su ventaja no estriba slo en el hecho de que hay que
pesar menos veces cada vez que se prepara el medio sino tambin la exactitud de la
pesada ya que algunos compuestos estn tan diluidos en la solucin final, que la
pesada que habra que hacer estara por debajo de los lmites de exactitud de las
balanzas de precisin.
Las soluciones madre se conservan en frio y en bote color mbar durante algunos
meses, desechndose ante cualquier seal de precipitacin.
Se suelen preparar soluciones madre de las sales minerales, los aminocidos,
hormonas, vitaminas y hexitoles, mientras que la fuente de carbono y el agente
gelificante se pesan cada vez ya que se necesitan en cantidades muy elevadas y no se
conservan bien en solucin.
En el caso de las hormonas es mejor preparar una solucin madre de cada una de
ellas y medir volmenes determinados y congelarlos.
Materiales:
Botes de cristal o de plstico (preferiblemente de los primeros por su

transparencia), que en algunos casos habrn de ser de color mbar para proteger de la
luz determinados compuestos que son fotosensibles.
Balanza granataria
Balanza analtica
Esptulas de distinto tamao para pesar
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Embudos de pesar
Agitador magntico
Imanes
Vasos de precipitados
Probetas
Matraces aforados
Eppendorf
Compuestos qumicos
Agua destilada
Autoclave
Termoplato
Algodn
Gasas
Tape
Cajas petri estriles
Tubos de ensaye esmerilados con tapa
Procedimiento:
Se establecern 8 equipos de trabajo por cada grupo de prcticas (2 en cada lateral de

una mesa).
Normas generales a la hora de pesar
- Se debe comprobar los clculos. Y tener en cuenta que los valores de las
soluciones madre estn expresados para un litro
- Debe leer las caractersticas del reactivo que se va a pesar. Algunos son
txicos por inhalacin o en contacto con la piel y hay que mantener las debidas
precauciones.
- Para medidas desde 0.01 g se utilizar la balanza granataria. Para valores
inferiores la balanza analtica.
- Antes de pesar hay que tarar el recipiente donde se est haciendo la pesada.
Nunca se debe pesar directamente sobre el platillo de la balanza, favor de
colocar pesa sustancias.
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- Antes de introducir la cucharilla de pesar en un frasco de reactivo hay que
asegurarse de que est limpia y seca. Es una precaucin que evita la
contaminacin de los reactivos.
- Hay que tener la precaucin de tomar del frasco de reactivo muy poca
cantidad de modo que en la medida de lo posible se evite devolver al frasco
parte de lo que se tom.
Normas generales a la hora de preparar las disoluciones
- Si la disolucin se va a remover con un agitador mecnico el mejor recipiente
es un vaso de precipitados. Si la agitacin es manual, suele ser mejor un
erlenmeyer.
- Antes de empezar a aadir los solutos se deber poner un 70% del volumen
total de agua
- Cuando una disolucin incluya ms de un reactivo, estos se aadirn uno a
uno y teniendo la precaucin de no aadir uno hasta que el otro est
totalmente disuelto.
- Para enrasar al volumen final se utiliza un matraz aforado o una probeta,
nunca un vaso de precipitados o un erlenmeyer.
- Una vez preparada se debe guardar en un frasco perfectamente etiquetado en
el que figuren los siguientes datos:
- Tipo de solucin. Ej. Macro de MS, sol A de DKW etc
- Grado de concentracin. Ej 100 X (100 veces ms concentrada que la
solucin final)
- Componentes con frmula y peso en g/l
- Fecha de preparacin
- Nombre de los integrantes del equipo
Equipo 1 Preparar 250 ml de la solucin de macronutrientes del medio MS.

Equipo 2 Preparar 250 ml de la solucin de Calcio MS y 250 ml de la solucin de
Hierro y EDTA MS. En este segundo caso, se deber poner en el recipiente
donde se prepara la disolucin un volumen de agua de aproximadamente un
80% del final y adicionar la solucin de hierro. Cuando se haya disuelto,
adicionar poco a poco y en agitacin las sales de EDTA hasta su total disolucin.
Si es necesario, se puede calentar un poco la disolucin. Guardar en frasco
mbar y colocar en refrigeracin.
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Equipo 3 Preparar 250 ml de la solucin de micronutrientes del medio MS.
Equipo 4 Preparar 250 ml de la solucin de vitaminas del medio MS.
Equipo 5 Preparar 250 ml de de cada una de las siguientes soluciones A, B, C y D
del medio DKW.
Equipo 6 Preparar 250 ml de cada una de las siguientes soluciones: F1, G, H y las
hormonas del medio DKW.
- La solucin H se prepara del siguiente modo: se pone en el recipiente donde
se prepara la disolucin un volumen de agua de aproximadamente un 80% del
final y se adiciona la sal de hierro. Cuando se haya disuelto, se adicionan poco
a poco y en agitacin las sales de EDTA hasta su total disolucin. Si es
necesario, se puede calentar un poco la disolucin. Guardar en frasco mbar
en refrigeracin.
- Hormonas. Se prepararn 10 ml de cada una de las disoluciones.
Para cada una de ellas se proceder del siguiente modo: Se pesar la
hormona en el un tubo aforado. Se le aaden unas gotas de NaOH 1N y se
disuelve. A continuacin se va aadiendo poco a poco y agitando, agua
destilada hasta enrasar los 10 ml. Se agita bien y se reparte en 10 eppendorf.
Se rotulan cada uno de ellos y se guardan en el congelador.
Equipo 7 Preparar 250 ml de la solucin E
Equipo 8 Preparar 250 ml de la solucin F2. Primero se preparan 500 ml de la
solucin de biotina. De estos 500 ml, se toman 250ml y se les aade la cantidad
correspondiente a 250 ml del resto de las vitaminas.
Despus de la explicacin anterior, se prepararan las soluciones madre de las sales,

vitaminas, aminocidos y hormonas necesarias para los medios DKW y MS. Veamos la
composicin de cada uno de ellos:
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Sales mineralesMS (Murashige and Skoog,

Sales minerales DKW modificado
1962)
(g/l)
(g/l)
(NH4)NO3 1.416
(NH4 )NO3 1.650
Ca (NO3)2 3H2O 1.811
KNO3 1.900
(1.960 si es 4 H2O)
CaCl2.2H2O 0.440
CaCl2 2H2O 0.147
MgSO4.7H2O 0.370
MgSO4 7H2O 0.74
KH2PO4 0.170
KH2PO4 0.258
FeSO4.7H2O 0.0278
FeSO4 7H2O 0.00676
Na2EDTA. 2H 2O 0.0372
Na2 EDTA 2H2O 0.0908
MnSO4.H2O 0.0169
K2SO4 1.56
ZnSO4.7H2O 0.0086
Mn SO4 H2O 0.0338
H3BO3 0.0062
Zn SO4 7H 2O 0.0212
KI 0.00083
BO3H3 0.0124
Na2MoO4.2H2O 0.00025
KI 0.00166
CuSO4.5H2O 0.000025
Na2MoO4 2H2O 0.0005
CoCl2.6H2O 0.000025
Cu SO4 5H2O 0.00005
Mioinositol 0.100
Co Cl2 6H2O 0.00005
Tiamina HCl 0.0001
Mioinositol 0.1
Acido nicotnico 0.0005
Tiamina H Cl 0.001
Piridoxina HCl 0.0005
c. nicotnico 0.001
Glicina 0.002
Piridoxina. HCl 0.001
Biotina D(+) 0.00001
Glutamina (base libre ) 0.001
L-Cystena H Cl 0.001
Pantotenato de Ca 0.1
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Lo ms normal es preparar soluciones que contengan varios componentes, de
modo que la preparacin de la solucin final sea ms rpida y tenga menos margen de
error.
Veamos la composicin de cada una de las soluciones madre de ambos medios:
Soluciones madre del medio MS (g/l) Soluciones madre del medio DKW modificado (g/l)
A (10 X)
MACRONUTRIENTES (10 X)
NH4NO3 14.16
NH4NO3 16.5
CaCl2 2 H2O 1.47
KNO3 19
Ca (NO3)2 3 H2O 18.11 ( 19.60 g/l si es 4 H2O )
MgSO4.7H2O 3.7 B (10 X)
KH2PO4 1.7 KH2PO4 2.58
CALCIO, (10 X) C(10 X)
K2SO4 15.6
CaCl2.2H2O 4.4
D (10 X)
MICRONUTRIENTES (100 X)
Mg SO4 7 H2O 7.4
MnSO4.H2O 1.69
E (50 X)
ZnSO4.7H2O 0.86
Mn SO4 7H2O 1.69
H3BO3 0.62 Zn SO4 7H2O 1.06
KI 0.083 BO3H3 0.6.2
KI 0.083
Na2MoO4.2H2O 0.025
Na2MoO4 2H 2O 0.025
CuSO4.5H2O 0.0025
Cu SO4 5 H2O 0.0025
CoCl2.6H2O 0.0025
Co Cl2 6H2O 0.0025
HIERRO Y EDTA (10 X)
F1 (100 X)
FeSO4.7H2O 0.278 Glutamina (base libre ) 0.1
Na2EDTA.2H2O 0.372 L-Cistena HCl 0.1
VITAMINAS (20 X) F2 (100 X)
Biotina D(+) 0.001

Mioinositol 2
Tiamina H Cl 0.1
Tiamina HCl 0.002
c. Nicotnico 0.1
Acido nicotnico 0.01
Piridoxina 0.1
Piridoxina HCl 0.01 Pantotenato de Ca 0.1
Glicina 0.04
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Referencias:
lvarez Tinaut, Carmen y Espinosa Borreguero, Francisco. Guiones de prcticas

de Biotecnologa Vegetal. Universidad de Extremadura (Badajoz)
Driver, J.A., Kuniyuki, A.H. (1984). In vitro propagation of Paradox walnut

rootstock. Hort. Science, 19(4).
Murashige, T. And Skoog, F. (1962). A revised medium for rapid growth and
bioassays with tobacco tissue cultures. Physiologa Plantarum, 15, 473-497.
Revilla Bahillo, ngeles y Ords, Ricardo. Guiones de prcticas de Biotecnologa

Vegetal. Universidad de Oviedo
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Conclusiones:
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Practica 2: Preparacin de los Agares para cultivar in vitro.
Objetivo:
El estudiante tendr conocimiento de la preparacin de los agares para cultivar plantas

in vitro a partir de las soluciones madre (practica 1), para con ello tenga mas claro el
concepto de micro propagacin de plantas para mejora biotecnolgica.
Introduccin:
El trmino cultivo de tejido vegetal implica una amplia gama de tcnicas de cultivo
tanto de rganos, como de tejidos y clulas e incluso plantas completas, entre las que
se encuentra la micro propagacin; la recuperacin de embriones; la regeneracin de
plantas a partir del callo y la suspensin de clulas, as como el cultivo de protoplasma,
anteras y microsporas, que se utilizan sobre todo para la multiplicacin de plantas en
gran escala (Segretin, 2006).
Materiales:
Autoclave Sacarosa
Algodn Agar-Agar
Frascos gerber
Tubos de cultivo
Ligas
Papel aluminio
Matraz de 1000ml
Moscas magneticas
Termoplato
Campana de flujo laminar
Agua destilada
Etanol
Soluciones madre del MS
10

Procedimiento:
Para la preparacin de los Agares para medio de cultivo para plantas:
El medio de cultivo es el Murashige & Skoogque que consta de una amplia cantidad de
nutrientes los cuales se muestra en la siguiente figura:
Para su preparacin en 1000 mL se pesan las cantidades de cada uno de los

compuestos o en su defecto si estos ya se tienen pre-pesados y en un frasco limpio por
separado solo se agrega la cantidad adecuada segn el volumen a preparar.
Agrega el agua destilada al matraz en que se preparara, disolver el medio ya pesado,

agitar muy bien hasta observar cierto grado de solubilizacin. Agregar la sacarosa
Ajustar el pH a 5.8 y agregar el agar-agar.
11

Someter a calentamiento con agitacin sin que llegue a la ebullicin. Proceda a vaciar
el medio en frascos limpios y asegrese de llenarlos con aproximadamente 50 mL, 2/4
del recipiente o segn vea necesario. Meter a la autoclave para su esterilizacin
(250F, 15 lb, 15 min). Pasado este periodo de esterilizacin, se sacan de la autoclave
y se dejan enfriar y se meten a refrigeracin o bien a una alacena limpia.
Resultados:
Pesado y calentado
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Esterilizado
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Vaciado
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Conclusiones:
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Referencias:
Krikoria, A. (1990). Medios de cultivo: generalidades, composicin y preparacin.

Universidad de Nueva York. New York, E.U. 1-19
Mroginski, A. (2008). Establecimiento de cultivos vegetales in vitro. Unidad de

investigacin de Biotecnologa. Cali, Colombia. 1-22
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Practica 3: Cultivo in vitro de plantas (semillas)
Objetivo:
Que el estudiante se familiarice con la siembra de semillas in vitro, que aprenda las
tcnicas para cultivos de tejidos, rganos vegetales y la obtencin de callos a partir de
secciones de zanahoria.
Introduccin:
La biotecnologa vegetal es el cultivo in vitro de las plantas, en recipientes de vidrio, y

supone mantener las plantas en laboratorio, fuera de su entorno natural, teniendo como
sustrato un medio de cultivo. En la composicin del dicho medio se encuentran
elementos minerales, agua, hormonas, sustancias orgnicas y vitaminas, siendo su
porcentaje muy variable segn las especies vegetales y pudiendo faltar alguno de estos
componentes. La biotecnologa actual se centra en la obtencin de frmaco y vacunas
y sobre todo en la obtencin de nuevas especies y variedades con capacidad para
soportar ataque de microorganismos o situaciones de estrs (salino, hdrico, etc.). Es
de destacar la obtencin de nuevos hbridos vegetales, por adicin de ADN forneo,
obtenindose los conocidos organismos transgnicos.
Materiales:
Campana de flujo laminar
Estuche de diseccin; bistur, pinzas grandes, pinzas pequeas y tijeras.
Frascos gerber con agar para plantas
Tubos con agar para plantas
Vasos de precipitados (7)
Mecheros
Alcohol
Agua estril
Cloro
Probetas
Cajas petri
15

Procedimiento 1: desinfeccin de semillas
Para nuestra practica con semillas, se dispondrn de diversos tipos de semillas de

cereales y frutos ctricos completos. Las semillas que se extraigan de los frutos ya
estn estriles (luego no hay que desinfectarlas), pero las semillas aisladas si que hay
que esterilizarlas (con dos agentes: cloro y alcohol).
Los pasos a seguir para la desinfeccin son:
1. se deben envolver las semillas en paquetes para poder manipular con las pinzas
y una vez hechos se procede a esterilizarlas.
2. Se sumergen en etanol durante 1 min
3. Se sumergen en solucin de hipoclorito de sodio o cloro al 20% por 15 min.
4. Se enjuagan en tres vasos de precipitados con agua estril, destilada,
desionizada durante un par de minutos por cada vaso (7).
Procedimiento 2: Siembra de semillas (rea estril)
Una vez que se tienen en el 7mo vaso de precipitado de agua estril, las semillas ya
estn listas para su siembra en tubos de ensayo o en frascos gerber, que tiene medio
de cultivo para plantas adecuado. Para sembrar las semillas en los medios de cultivo
se enciende el mechero, se lavan las manos hasta el medio brazo y despus se
remojan en etanol al 10% hasta que se seque inician la manipulacin o bien utilizar
guantes estriles. Despus de eso toman el paquete de material estril y las cajas de
petri de vidrio, que nos servir como mesa de trabajo. Con la ayuda de unas pinzas, se
pone el paquete de semillas sobre una caja de precipitados y se abre, con las pinzas se
toman las semillas para depositarlas en el medio de cultivo.
En el caso de los frutos de ctricos completos se procede a esterilizar el fruto entero

pulverizando con alcohol y luego la flamea. En la campana de flujo laminar se abren los
frutos (limn, naranja o mandarina) y se extraen las semillas con unas pinzas. Tras
hacer una pequea incisin en la cubierta se siembran en tubos o frascos gerber con el
medio de cultivo adecuado.
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Resultados:
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Conclusiones:
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Referencias:
Serrano G.M, Biotecnologa vegetal, Madrid D.L
Pierik, R.L.M. Cultivo in vitro de plantas superiores, Madrid M.P
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Practica 4: Cultivo in vitro de plantas (rganos vegetales)
Objetivo:
El alumno aprender a realizar el montaje de un cultivo de tejidos vegetales a partir de

explantes nodales.
Introduccin:
El trmino genrico cultivo de tejidos vegetales involucra a diferentes tcnicas de

cultivo de material vegetal diverso, incluyendo a los protoplastos (clulas desprovistas
de su pared celular), clulas, tejidos, rganos y plantas completas. Mediante stas y
otras tcnicas de cultivo, es posible obtener plantas libres de microbios en un medio
nutritivo asptico (estril) en condiciones ambientales controladas. Tambin se lo
conoce como cultivo in vitro de plantas por realizarse en recipientes de vidrio (hoy
tambin de otros materiales). Las primeras experiencias relacionadas con el cultivo de
tejidos vegetales se remontan a 1902, pero recin en 1922 se logr el primer
experimento exitoso: la germinacin in vitro de semillas de orqudeas. Luego de la
germinacin, las plntulas obtenidas se transfirieron a un medio de cultivo en
condiciones aspticas, y as se mantuvieron protegidas del ataque de patgenos
(hongos, virus y bacterias).
Materiales:
Microscopio de diseccin
Microscopio compuesto
Muestra de hongo desarrollado en la caja petri
Asa de platino Formol
Porta y cubre objetos Cutex
Azul o rojo colorantes
Fibra de vidrio
Etiquetas adheribles
Procedimiento:
Para la obtencin de explantos nodales, se deben de lavar los tallos seleccionados con
abundante agua. Secar cuidadosamente con papel filtro. A continuacin se pasa a
eliminar las hojas de los tallos, cuidado dejar 2 cm del peciolo unido al tallo. Igualmente
deben eliminarse las espinas (si las hubiera). Acto seguido se separa los entrenudos
(que deben contener al menos una yema axilar) con ayuda de unas tijeras. Debemos
conseguir porciones de tallo de unos 4-5 cm aproximadamente.
19

Para la estilizacin de los explantos nodales, se envuelven en una gasa y se introduce
en un bote que contenga 100 ml de la disolucin desinfectante (hipoclorito de sodio o
cloro al 20%) durante 10 min (agitar espordicamente). Despus se lava 3 veces en
vasos de precipitado con agua estril, ayudndose de unas pinzas largas. Una vez
desinfectado el material vegetal se procede a la siembra en los frascos gerber o en
tubos de ensaye con medio de cultivo.
Para la siembra de los explantos nodales se enciende el mechero (todo en esterilidad)
y se abre el paquete del material estril y las cajas petri que nos servir como mesa de
trabajo. Con ayuda de unas pinzas, se pone el paquete de explantos nodales sobre la
caja petri, se abre y se toman con las pinzas, para depositarlas en el medio de cultivo.
La introduccin del material vegetal en los frasco gerber debe ser muy cerca de la
llama y usando pinzas estriles.
Resultados:
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Conclusiones:
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Referencias:
Pierik, R.L.M. Cultivo in vitro de plantas superiores, Madrid M.P

Mroginski, A. (2008). Establecimiento de cultivos vegetales in vitro. Unidad de
investigacin de Biotecnologa. Cali, Colombia. 1-22
Agrios G.N. 1998. Fitopatologa, 3era Edicin, Mxico, 838 pp.
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Practica 5: Fermentaciones.
Objetivo:
El alumno entienda el concepto de fermentaciones, demostrar la formacin del acido

piruvico durante la fermentacin de la glucosa por levadura e identificarlo. .
Introduccin:
La fermentacin es un tipo de catabolismo parcial, que se caracteriza por ser un

proceso de oxidacin incompleta, tpico de los organismos anaerbicos. Se realiza,
pues, sin la intervencin del oxgeno. Durante la fermentacin, la energa obtenida
procede, igual que en la respiracin aerobia, de las reacciones de oxido-reduccin
habidas durante el catabolismo de la glucosa (gluclisis), pero en la fermentacin las
coenzimas reducidas no ceden sus electrones a una cadena cuyo aceptor final es el
oxgeno, sino que los ceden directamente a un compuesto orgnico que se reduce y es
el producto caracterstico de cada fermentacin (lctica, alcohlica...).
Materiales:
Tubos de ensaye de 13 x 100
Tubos de centrifuga
Tripie, rejilla, anillo, mechero.
Bao mara.
Pipetas de 5 ml. graduadas.
Centrifuga.
Vasos de precipitados de 250 y 600 ml.
Pinzas para tubos de ensaye.
Solucin de glucosa a diversas concentraciones 0.5, 1.0, 2.0%
Suspensin de levadura al 5 % en Na2HPO4 y KH2PO4 (18 hrs de fermentacin antes

de su utilizacin).
cido tricloroactico al 10%
Nitroprusiato de sodio.
23

2,4 dinitrofenil-hidracina.
Hidrxido de amonio concentrado.
Hidrxido de sodio 0.1N
Sulfato de amonio slido.
Nota: un da antes de la prctica llevar su levadura para fermentarla
Procedimiento:
Formacin de Piruvato:
Se deben marcar dos series de tubos de 3 cada una y adicionar 3 ml. de las soluciones
de glucosa a las diferentes concentraciones 0.5, 1.0, 2.0% a ambas series. A una de
las series de tubos adicionarles 3 ml. de suspensin de levadura con fosfatos de
sodio(0.213 g/100 ml) y marcarlos como A; y a la otra serie adicionarle 3 ml. de la
suspensin de levadura con fosfatos de potasio(0.09 g/100 ml) y marcarlos como B.
Posteriormente se colocar todos los tubos en bao mara a 37.C por 30 minutos y
aadir posteriormente a cada tubo 1 ml. de TCA al 10% mezclado vigorosamente y
centrifugar a 2500 r.p.m. por 10 minutos. Separar el sobrenadante y desechar el
precipitado.
Identificacin de Piruvato:
Reaccin con nitroprusiato de sodio
En un tubo de ensaye colocar 1 ml. del sobrenadante obtenido y hervirlo. Se le

adicionan 0.5 gr. de sulfato de amonio slido y agitar. Posteriormente agregar dos
gotas del reactivo y mezclar vigorosamente y dejar deslizar por las paredes del tubo
unas gotas de hidrxido de amonio concentrado, hasta la formacin de dos capas. La
formacin de un anillo verde o azul en la interfase indica afirmativo para la prueba.
Repetir lo anterior para cada uno de los tubos de ambas series.
Reaccin con 2,4 dinitrofenil-hidracina.-
En un tubo de ensaye colocar 1 ml. del sobrenadante obtenido y adicionar 1 ml. del
reactivo, agitar con fuerza y pasar a otro tubo la mitad de la mezcla formada, y
adicionar 1 ml. de NaOH 0.1N. La aparicin de un color rojo indica prueba afirmativa.
Repetir lo anterior para cada uno de los tubos de ambas series. Observar la coloracin
e intensidad de la misma en cada caso.
24

Referencias:
Bamforth W. Charles. 2007. Alimentos, fermentacin y microorganismos. Editorial

Acribia S.A.
Owen P. 1991. Biotecnologia de la fermentacin Principios, procesos y productos.

Editorial Acribia.
Resultados:
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Conclusiones:
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25

Practica 6: Glicolisis anaerobica y Fermentacion

Objetivo:
Observar los efectos en una situacion simulada de la fermentacion anerobia que en la

realidad se efectua en los seres vivos y verificar la inhibicion ocasionada en la ruta
metabolica de la glicolisis por el NaF.
Introduccin:
De todos los organismos vivientes solo unas pocas especies son estrictamente
anaerobicas, esto es, que solamente pueden vivir en ausencia de oxigeno. La mayoria
son microorganismos, en particular aquellas especies propias del amibiente que tiene
poco oxigeno o que carece de el, es decir, en los intesitnos de los animales, en el suelo
profundo, en sedimientos que se encuentran bajo los lagos y oceanos o en pantano
donde el oxigeno esta casi totalmente ausente. Un ejemplo de estas bacterias del suelo
Clostridium perfringens, que causa la gangrena gaseosa en infecciones de heridas.
El producto de la fermentacoin varia de un tipo de celula o microorganismo a otro.

Cuando se requiere concentracion repetida de celulas musculares, el suministro de
oxigeno no tiene capacidad para mantener el paso de las demandas metabolicas de la
celula. En estas condiciones ciertos tipos celulas musculares esqueleticas regeneran
NAD convirtiendo piruvato a lactato (fermentacion del acido lacatico). Las celulas de
levaduras han enfrentado el desafio de la vida anaerobia con una solucion metabolica
diferente, convierten el piruvato a etanol (fermentacion alcoholica).
Materiales:
Tubos de ensayo
Beakers de 300 ml
Bao maria
1 hoja de papel milimetrico
Levadura (fresca 5 a 10%)
Glucosa (5 a 10%)
Fluoruro de sodio (5 a 10%)
Agua destilada
26

Procedimiento:
Marcar tres tubos de ensayo y prepararlos de la siguiente manera:
Tubo A:
Llene una tercera parte del tubo con suspesin de levadura y luego agregue agua
destilada hasta llenarlo totalmente.
Tubo B:
Llene una tercera parte del tubo con suspensin de levadura y agrege solucion de
glucosa hasta llenarlo totalmente.
Tubo C:
Llene una tercera parte del tubo con suspensin de levadura, agregue otra tercera
parte con solucion de glucosa y termine de llenarlo con solucion de fluoruro de sodio
(NaF).
Tomar cada tubo y taparlo con un tapon de caucho (tenga cuidado que no quede muy
apretado), invertir suavemente para mezclar. No debe quedar aire en la parte superior
del tubo.
Conectar por medio de la manguera del tapon al tuvo en U que contiene la columna del
liquido a desplazar.
Colocar en bao maria a 37C. Si el procediemitno estubo bien hecho, solo quedara una
columna de aire en la parte superior de la manguera.
Medir la altura del liquido en el tubo en U al conectar.
Examinar los tubos de la siguiente manera (si es posible durante 6 lecturas).
Tubo A: cada tres minuos
Tubo B: cada minuto
Tubbo C: cada 15 minutos
Anotar los resultados en el cuadro
Hacer una grafica con los datos anteriores, coocando en la ordenada el tiempo en
minutos y en la abcisa la produccion de CO2 en mL. Hacer el analisis de la grafica
(anovas).
27

Referencias:
CORN Y STUMPF, Bioqumica Fundamental, Editorial Limusa, 1998
DEVORE G. y Muoz Mena, Qumica Orgnica, Editorial Publicaciones Culturales,

Mxico 1992.
Resultados:
Tubo Contenido Desplazamiento del liquido (mL)

A Levadura y agua
B Levadura y glucosa
C Levadura, glucosa y
NaF
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______________________________________________________________________
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Realizar la grafica en papel milimetrico.
Cuestionario:
1. El ATP da el impulso iicial para inicial al glucolisis, fosforilando la glucosa. cul

es la reaccin?.
2. La fructosa 1-6 difosfato origina dos triosas que pueden convertirse una en otra.
cules son estas?
3. Estas triosas en ultimo termino se convierten en acido pirvico o piruvato.
Represente las reacciones respectivas en esta conversin.
4. Los dos productos de la glucolisis piruvato y NADH, se pueden metabolizar
siguiendo dos vas muy diferentes segn el tipo de clula en la cual se generan.
cules son estas dos vas?
5. Escriba la reaccin de la fermentacin del acido lctico. Y diga dos ejemplos de
clulas que la realizan.
6. Escriba la reaccin de la fermentacin alcohlica y diga dos ejemplos de clulas
que la realizan.
7. Escriba la reaccin general de la respiracin celular u oxidacin aerobia.
28

8. En que lugar u organelo de las clulas procariotas y eucariotas se da la
fermentacin (oxidacin anaerobia del NADH) y la respiracin celular (oxidacin
aerobia) y bajo que condiciones se da cada una.
9. Qu influencia tiene el NaF en el proceso de la fermentacin y por medio de
que mecanismo lo hace.
Practica 7: Fermentacion alcoholica
Objetivo:
El alumno debe utilizar el metabolismo de las levaduras para producir alcohol etlico
(etanol), a partir de un jugo enriquecido con azcares fermentables.
Introduccin:
Para describir la palabra fermentacin se refiri originalmente al metabolismo

anaerbico de los compuestos orgnicos mediante microorganismos o sus enzimas
para dar lugar a productos ms simples que la materia prima. La definicin actual es:
Cualquier accin microbiana controlada por el hombre para obtener productos tiles.
Como todos los seres vivos, los microorganismos crecen, se reproducen y segregan
algunos compuestos bioqumicos de importancia para el hombre; estas son las
caractersticas en las que se ha basado el uso de los microorganismos como
productores de fermentacin, la que de una manera esquemtica se puede
representar as:
Microorganismos + Nutrientes + Condiciones Ambientales Adecuadas -------

Microorganismos + CO2(g) + Productos intra y extracelurares.
La fermentacin se puede clasificar de la siguiente manera:
Fermentacin con base al substrato. Protenas, Grasas, Carbohidratos.
Fermentacin con base al producto. Alcohlica. Lctica, Acetonica, etc.
Materiales:
1 Agitador de vidrio 100 grs. Azcar
1 Anillo de Fierro 250 grs. Cscara de Pia
1 Cuchillo 200 ml de Jugo de Pia
1 Coladera grande 250 grs. de Piloncillo o azucar
1 Matraz de destilacin 100 ml de solucin de Hidrxido de Bario al 2%
1 Mechero Bunsen 6 ml de reactivo de Fehling A y B
29

2 Pipetas graduadas de 5 ml 2 lts. De Agua
1 Pipeta graduada de 10 ml
1 Pinzas para tubo de ensayo
3 Pinzas universales
1 Pinzas Hoffman
1 Franela
1 Mortero con pistilo
1 Tela de alambre con asbesto
2 Tapones monohoradados
3 Tubos de ensayo de 16x150mm
1 Termmetro
1 Vaso de precipitado de 250 ml
45 cm de Manguera de ltex de 4mm de dimetro
1 Refrigerante
2 Soportes universales
1 Frasco claro con tapa, de 3 a 5 litros, de boca ancha.
1 Frasco claro sin tapa de 200 a 300 m
Procedimiento:
DESARROLLO DE LA PRACTICA
Nota. Esta prctica se llevara a cabo en 3 sesiones de laboratorio.
Primera Sesin
1. Lavar, pelar y hacer trocitos de 2.5 cm aproximadamente de la cscara y de la pulpa

de la pia.
2. Se comprime la pulpa de la pia hasta obtener un volumen aproximado de 200 ml

de jugo.
3. Lavar perfectamente 1 frasco claro de 3.5 lts. de boca ancha.
30

4. Efectuar en el frasco anterior la siguiente mezcla: 200 ml de jugo de pia, toda la
cscara de la pia en cuadritos, 250 grs. de piloncillo, 100 grs. de azcar y 2 litros de
agua.
5. A la tapa del frasco anterior que har las veces de un fermentador se le har un
orificio para adaptar un tramo de 45 cm de manguera de ltex de 4 mm de dimetro a
la cual se le coloca una pinza de Hoffman para evitar que escapen los gases que se
forman.
6. Agitar vigorosamente la mezcla anterior y del sobrenadante se extraen con la pipeta

6 ml, de los cuales se depositan 3 ml en un tubo de ensayo y los otros 3 ml en otro tubo
de ensayo.
7. Al primer tubo de ensayo se introduce una tira de papel ph, con el fin de determinar
el pH de la mezcla. pH= .
8. Al segundo tubo se le agregan 1.5 ml de reactivo de Fehling A y 1.5 ml de reactivo

de Fehling B.
9. Agitar, el segundo tubo.
10. Calentar suavemente con el fin de detectar la presencia de azucares reductores

(precipitado de color rojo ladrillo). Reportar positivo o negativo.
11. Tapar el frasco y cerrar la pinza de Hoffman.
12. Dejar fermentar durante 24 hrs.
Segunda Sesin
1. Transcurridas las 24 hrs. Sumergir la manguera de ltex del frasco en 100 ml de

solucin de hidrxido de Bario al 2%, dispuesta en un frasco de 200 a 300 ml de color
claro.
2. Se abre lentamente la pinza de Hoffman, con el objeto de que el gas producido

entre en contacto con la solucin.
3. Anotar observaciones.
4. Se contina la fermentacin durante otros 6 das.
Tercera Sesin
1. Transcurridos los 6 das, se decanta el sobrenadante en un vaso de precipitado.
2. Se filtra el sobrenadante con una franela colocada en la coladera.
31

3. El lquido obtenido contiene de 6.7 a 12 grados de alcohol etlico (tepache).
4. Se efecta nuevamente la determinacin de pH y azucares reductores (repetir los

pasos 7,8,9, y 10 de la primera sesin. PH = ; Azucares Reductores ( + o -)=
5. Para separar el alcohol del jugo fermentado se lleva a cabo una destilacin (con
ayuda de tu maestro armar el dispositivo de destilacin.
6. Desechar las primeras y las ltimas gotas del destilado (cabeza y cola del
destilado).
Nota. El alcohol destila por encima de los 78 grados centgrados.
Referencias:
DEVORE G. y Muoz Mena, Qumica Orgnica, Editorial Publicaciones Culturales,

Mxico 1992.
Resultados:
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Conclusiones:
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Practica 8: Fermentacion lctica

Objetivo:
Obtener el yogur por medio de la fermentacin lctica y observar las bacterias

causantes de dicha fermentacin..
Introduccin:
Las fermentaciones son procesos de respiracin anaerobia realizados por ciertas

bacterias y levaduras. En ellos, el aceptor de H+ y electrones cedidos por una molcula
orgnica no es el oxgeno sino otra molcula. Dependiendo de cul sea esta molcula
se obtendrn distintos productos finales. En el caso de la fermentacin lctica, la
molcula aceptora es el cido pirvico y el producto resultante es el cido lctico. Esta
fermentacin se emplea en la industria alimentaria para obtener derivados lcteos
como el yogur. El yogur es un producto producido por la fermentacin natural de la
leche. A escala industrial se realiza la fermentacin aadiendo a la leche dosis del 3-4
% de una asociacin de dos cepas bacterianas. El Streptococcus thermophilus, poco
productor de cido, pero muy aromtico, y el Lactobacillus bulgaricus, muy acidificante.
En esta preparacin se podrn, por tanto, observar dos morfologas bacterianas
distintas (cocos y bacilos) y un tipo de agrupacin (estreptococos, cocos en cadenas
arrosariadas). Adems, el tamao del lactobacilo (unos 30 ym de longitud) facilita la
observacin aunque no se tenga mucha prctica con el enfoque del microscopio.
Materiales:
Microscopio
Portaobjetos
Asa de platino
Mechero Bunsen
Estufa de cultivo o cuarto de cultivo
Yogurtera
Matraz de 250 mL,
Pipeta de 5 mL,
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Varilla de vidrio
Papel indicador de pH
Xileno
Cristal violeta (o azul de metileno)
Frutos de hueso sanos y enfermos
Procedimiento 1: obtencin del yogur por la fermentacin lctica.
1. Se colocan 100 mL de leche en el matraz y aade 1 mL de yogur.
2. Se deja incubar el matraz en la estufa durante 24 horas a 37 C.
3. Saca el matraz y observa el contenido.
4. Mueve con la varilla para homogeneizarlo e introduce una tipa de papel indicador de
pH.
5. Describe lo observado en el matraz y en el papel indicador.
Para realizar este experimento tambin puedes utilizar un yogurtera domstica.
Procedimiento 2: Observacin de las bacterias causantes de la fermentacin.
1. Con el asa de siembra toma una gota de yogur y depostala sobre un portaobjetos
limpio. Aade una gota de xileno para desengrasar y mzclala con el yogur.
2. Extiende la mezcla y djala secar completamente. Luego pasa el portaobjetos por la

llama del mechero 4 o 5 veces para fijar la preparacin.
3. Aplica el colorante cristal violeta durante 2 minutos.
4. Lava despus con abundante agua destilada hasta que el lquido no salga teido y
deposita sobre ella un cubre cuidando que no se formen burbujas.
5. Observa al microscopio con el objetivo adecuado (utiliza los mayores aumentos)
6. Dibuja lo que has observado.
Referencias:
Murray, R. 1994. BIOQUIMICA DE HARPER. Manual Moreno S.A. de C.V
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Resultados:
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Conclusiones:
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Practica 9. Analisis de tcnicas para deteccin de alimentos genticamente

modificados (practica documental)
Objetivo:
Conocer las diferentes tcnicas para determinar que un alimento ha sido modificado.
Introduccin:
El muestreo y la preparacin de la muestra son pasos cruciales en el proceso de
deteccin de OGM. La inspeccin de una muestra es menos costosa que la inspeccin
de todo un lote; sin embargo, el contenido de una muestra no siempre refleja el
contenido del lote de muestreo. El procedimiento de muestreo determina la
representatividad de un resultado mientras que la cantidad y calidad de los analitos
puede variar dependiendo de la preparacin de la muestra. Una muestra al azar es
aquella seleccionada en el proceso en la cual cada posible muestra de un lote de
muestreo tiene la misma posibilidad de ser seleccionada. Esto significa que una
muestra al azar produce un estimado imparcial de la medida de inters. En la prctica
una muestra al azar no es siempre fcil de obtener a partir de un lote de muestreo (Asif,
2004).
Material:
Revistas cientficas de alimentos
Revistas cientficas de Biotecnologa
Acceso a internet para accesar a las bases de datos
Procedimiento:
Leer y hacer ensayo de la importancia de realizar anlisis a los alimentos transgnicos,

y dar cuenta del bien o del mal que hacen no solo a la sociedad, sino tambin al
ecosistema.
37

Leer y describir cada uno de los procedimientos biotecnolgicos para la formacin de
un alimento transgnico.
Leer y describir los fundamentos para el anlisis molecular de OGM.
Leer y describir los protocolos para la deteccin molecular de OGM.
Referencias:
Asif M. 2004. Sampling for Detection of GMO. In: NIBGE-FAO Workshop on GMO
Detection. Capacity and Building in Biosafety of Genetically Modified Crops: GMOs
Detection.
Zafar Y. y Asif M. (ed). National Institute for Biotechnology and Genetic Engineering.
Pakistan.
Resultados:
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Practica 10: Extraccin de ADN eucariotico

Objetivo:
Utilizar tcnicas sencillas para poder extraer el ADN de un tejido animal y por el
aspecto que presenta, confirmar su estructura fibrilar y confirmar que en el ncleo el
ADN se encuentra replegado.
Introduccin:
El bioqumico suizo Friedrich Miesches fue el primero en descubrir sustancia, cidos

asociados con las protenas del ncleo celular. Al estudiarlas mejor, Miesches
comprendi que estas sustancias son bastante diferentes de las protenas y de otros
compuestos conocidos. La unidad bsica de un cido nucleico es el nucletido, cada
molcula de cido nucletido se forma como una larga cadena de 4 clases de
nucletidos, a su vez lo nucletidos pueden ser fragmentados en 3 partes; una de esas
partes es siempre un azcar de 5 carbonos y que son la ribosa y la desoxirribosa, los
cidos nucleicos que contienen ribosa se denomina cido ribonucleico o ARN y los
cidos nucleicos que contienen desoxirribosa se denominan cido desoxirribonucleicos
o ADN.
Materiales:
Hgado de pollo
Probeta
Varilla de vidrio
Alcohol de 96
Mortero
Cloruro sdico 2M
Vasos de precipitado
SDS
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Pipeta
Arena
Portaobjeto
Trozo de tela para filtrar
Colorante bsico
Procedimiento:
1. Triturar medio higado de pollo en un mortero. Aadir arena para que al triturar se
puedan romper las membranas de y queden los ncleos sueltos.
2. Aadir al triturado, 50 centmetros cbicos de agua. Remover hasta hacer una

especie de papilla.
3. Filtrar varias veces sobre una tela para separar los restos de tejidos que hayan
quedado por romper.
4. Medir el volumen del filtrado con una probeta.
5. Aadir al filtrado un volumen igual de cloruro sdico 2M. Con esto conseguimos
producir el estallido de los ncleos para que queden libres las fibras de cromatina.
6. A continuacin se aade 1 centmetro cbico de SDS. (Nota: Si no se dispone de

este producto puede sustituirse por un detergente de vajillas. La accin de este
detergente es formar un complejo con las protenas y separarlas del ADN. As nos
quedar el ADN libre de las protenas que tiene asociadas.
7. Aadir mediante una pipeta 50 ml de alcohol de 96. Hay que hacerlo de forma que el
alcohol resbale por las paredes del vaso y se formen dos capas. En la interfase,
precipita el ADN.
8. Introducir una varilla de vidrio e ir removiendo en la misma direccin. Sobre la varilla

se van adhiriendo unas fibras blancas, visibles a simple vista, que son el resultado de la
agrupacin de muchas fibras de ADN.
9. Esta prctica puede completarse con una tincin especfica de ADN.
Tenemos que tomar una muestra de las fibras que se van depositando sobre la varilla
de vidrio y depositarlas sobre un portaobjeto.
10. Teir durante unos minutos con un colorante bsico.
11. Observar al microscopio.
40

Referencias:
Griffith. 2002. Genetica. Mc. Graw-Hill.
Carey, J., Bamshad M., Jorde L. 2010. Gentica medica. Elsevier Espaa S.A.
Resultados:
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Conclusiones:
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Practica 11: Extraccin de ADN procariotico.

Objetivo:
Que el alumno aprenda el fundamento para la obtencin del ADN procariotico de la

tcnica ms sencilla.
Introduccin:
Existen diferentes mtodos para la obtencin de ADN bacteriano que varan en

duracin y complejidad del procedimiento en funcin de la calidad del ADN que
queramos obtener.
Materiales:
MTODO DE HERVIDO
Cultivo bacteriano en placa de agar
Asa de platino
Estufa a 37 C
Eppendorf de 1.5 mL esteriles
Pipetas y puntillas desechables esteriles
Temoplato con capacidad de alcanzar 100 C
Centrifuga
Soluciones
Agua molecular esteril
Procedimiento:
Preparar un eppendorf esteril por cada muestra al que se anaden 100 microlitros de
agua molecular estril
43

Tomar con un asa de platino unas colonias de la placa de agar e introducirlas en el
eppendorf, utilizando posteriormente la pipeta para obtener una suspensin
homognea
Calentar a 100 C durante 15 min.
Anadir 900 microlitros de agua molecular estril a cada eppendorf y homogenizar.
Centrifugar durante 5 min a 12000 rpm
Recoger el sobrenadante en un eppendorf estril.
Referencias:
Tagu D., Moussard C. 2006. Fundamentos de las tcnicas de biologa molecular.

Ediciones Pri.
Griffith. 2002. Genetica. Mc. Graw-Hill.
Resultados:
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Conclusiones:
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Practica 12: Electroforesis en geles de agarosa.

Objetivo:
Que el estudiante se familiarice con la tcnica de electroforesis en geles de agarosa

para la lectura de los cidos nucreicos.
Introduccin:
La electroforesis es el movimiento de partculas cargadas en un campo elctrico. A

diferencia de las protenas, las cuales pueden tener una carga positiva o negativa, los
cidos nucleicos estn cargados de forma negativa debido a su esqueleto de grupos
fosfato. Por lo tanto, en una electroforesis, los cidos nucleicos migrarn hacia el polo
positivo, es decir, el nodo. La concentracin de agarosa tpicamente utilizada para
electroforesis est entre el 0.5 % y el 2%. La concentracin a usar se escoge segn el
tamao del cido nucleico a analizar. Esto porque la concentracin de agarosa define
el tamao de los poros de la matriz, a mayor concentracin, menor el tamao de los
poros y viceversa. Durante la electroforesis, los cidos nucleicos lineales con un alto
peso molecular migrarn al nodo ms lentamente que cidos nucleicos lineales con
un menor peso molecular. La razn de esto es que los cidos nucleicos de alto peso
tardan ms tiempo en atravesar los poros de agarosa. En el caso de cidos nucleicos
no linealizados, como plsmidos circulares en conformacin nativa, la migracin no
solo depender del peso molecular sino tambin de otros aspectos como el grado de
superenrrollamiento que ste poseea. Generalmente en una preparacin de plsmido
se pueden observar distintas conformaciones de la misma molcula, la forma
superenrrollada, la forma semi relajada y una relajada. Dependiendo de las
condiciones externas como pH y salinidad se pueden observar todas las formas o solo
una (s).
Materiales:
Marcador de peso molecular.
Cmara de electroforesis y accesorios requeridos: soporte, peines, tabla niveladora,

burbuja niveladora, etc.
46

Solucin amortiguadora de Tris-Boratos-EDTA (TBE). La solucin se prepara 5X y se
utiliza 0.5X. Para preparar 1 l de una solucin 5X TBE mezclar: 54 g de Tris Base, 27.5
g de cido brico, 4.7 g de EDTA sdico, llevar a 1 l con agua y autoclavar.
Gel de agarosa al 1% en TBE con bromuro de etidio. Precaucin: el bromuro de etidio

es un agente mutagnico, utilice guantes para manipular cualquier material o solucin
que contenga este qumico.
Amortiguador de muestra con azul de bromofenol
Tubos de 1.5 ml
Beaker o erlenmeyer de 125 ml
Micropipeta de 20 l con sus respectivas puntas
Lmpara de UV. Precaucin: la luz ultravioleta puede daar sus ojos. NUNCA observe
un gel bajo la luz ultravioleta sin el uso de anteojos que filtren dicha luz.
Guantes
Procedimiento:
Pesar la cantidad de agarosa requerida para obtener un gel de agarosa al 1%. El
volumen final es de 30 ml.
Disolver la agarosa en 30 ml de amortiguador TBE 0.5x. Calentar en el microondas por

45 s, luego se agita con movimientos circulares hasta que se disuelvan todas las
partculas de agarosa translcidas. Se debe tener precaucin con los recipientes
calientes ya que pueden causar quemaduras.
Incorporar 1.25 l de bromuro de etidio a 10 mg/ml en la solucin caliente de agarosa y

agitando con movimientos circulares. Precaucin: El bromuro de etilo es un
carcingeno y debe manejarse con cuidado. Hay que evitar que se derrame la
disolucin o tener contacto directo con esta. La punta que contiene bromuro de etidio
debe ser descartada en un recipiente especial para descartar material contaminado con
bromuro de etidio.
El soporte para vaciar el gel debe estar limpio y seco, se ajusta en el molde portagel o
tabla niveladora y se colocan los peines que generarn los pozos para aplicar las
muestras.
Cuando la agarosa alcanza los 5060 C aproximadamente se vierte en el centro de la

bandeja para gel evitando la formacin de burbujas.
Se deja reposar, el gel tarda de 2040 minutos para solidificar a temperatura ambiente.
47

Una vez solidificado el gel se quitan los peines, sujetndolo con ambas manos y
jalando cuidadosamente hacia arriba.
Posteriormente se translada el soporte para el gel hasta la cmara de electroforesis,

colocando los pozos mas cercanos al borde hacia el polo negativo (de color negro)
debido a que las muestras migrarn hacia el nodo (de color rojo) durante la
electroforesis. Se agrega TBE hasta sumergir el gel unos 2 a 6 mm.
Para preparar las muestras aada en un tubo de 1.5 ml:
5 l de agua destilada desionizada
5 l de su preparacin de plsmido
2 l de amortiguador de la muestra
Para preparar el marcador del peso molecular, aada en un tubo de 1.5 ml:
7 l de agua destilada desionizada
3 l del marcador de peso molecular (MPM)
2 l de buffer de la muestra
Con una micropipeta de 20 l con punta aspirar la muestra preparada previamente.

Colocar la micropipeta en forma perpendicular al gel de agarosa, e introducirla hasta el
fondo del pozo liberando su contenido mientras se va sacando lentamente la punta del
pozo. Tome nota del orden en que se colocaron las muestras y el marcador de peso
molecular.
Para iniciar la corrida electrofortica, colocar la tapa, asegurndose que los electrodos
estn en contacto y conectados a la fuente de poder. Encienda la fuente de poder. La
Se electroforesis se realiza a 100 V, 50 miliamperios durante 30 minutos
aproximadamente.
Finalizada la electroforesis, apagar la fuente de poder, se destapa la cmara y se retira

el soporte para gel de la cmara, sosteniendo con los dedos los bordes para evitar que
el gel se caiga. Examine el gel bajo la lmpara de luz ultravioleta para determinar la
posicin de las bandas en el gel.
Referencias:
BioRad. Manual de instrucciones de la cmara mini sub cell para electroforesis en

geles de agarosa. Rev A
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Ediciones Pri.
Resultados:
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Practica 13: Reaccin en Cadena de la Polimerasa (demostrativo)
Objetivo:
Que el estudiante comprenda el fundamento y aplique los conceptos tericos en los

cuales se basa la reaccin en cadena de la polimerasa.
Introduccin:
La reaccin en cadena de la polimerasa (PCR por sus siglas en ingls) fue descrita por
primera vez en 1985 por Kary B. Mullis. Esta invencin lo hizo acreedor en 1993 del
Premio Nobel en Qumica, debido al gran impacto que ha tenido esta tcnica en el rea
de la bioqumica. Su objetivo y funcin es la de obtener mediante amplificacin in
vitro cantidades masivas de ADN incluso a partir de muestras de ADN muy pequeas.
Para realizar el PCR ms sencillo, se requiere conocer las secuencias que rodean la
regin a amplificar, luego se producen oligonucletidos complementarios a estas
secuencias mediante sntesis qumica automatizada y estos son utilizados como
cebadores (primers) en una reaccin de polimerizacin cclica catalizada por la ADN
polimerasa.
Material:
Gradilla para tubos de 0.5ml y un tubo de 0.5ml
Muestra que contenga ADN
Micropipetas de 10 l y 100 l con sus respectivas puntas
Mezcla maestra que contenga: amortiguador de reaccin en cadena de la polimerasa,

mezcla de nucletidos (dNTPs), Taq polimerasa y cebadores.
Agua libre de ADNasas
Termociclador
Procedimiento:
50

En un tubo de 0.5 ml, agregue las siguientes cantidades en el orden indicado (volumen
final de reaccin: 50 l):
1. Agua libre de ADNasas: 18.9 l
2. Muestra: 5 l (sobrenadante del lisado de colonias de Escherichia coli, muestras de

ADN obtenido en prcticas anteriores.).
3. Mezcla maestra (Fermentas buffer + primers): 27l
Con la ayuda de su instructor, programe el termociclador segn las condiciones

requeridas.
Cuando la reaccin haya finalizado, analice el producto obtenido mediante

electroforesis en un gel de agarosa al 2%.
Referencias:
Mathews, C.K, Van Holde, K.E y Ahern, K.G. Bioqumica. Pearson Educacin. Tercera
edicin, Espaa, 2003.

Ediciones Pri.
Griffith. 2002. Genetica. McGraw-Hill.
Resultados:
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Conclusiones:
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Practica 14. Secuenciador ADN (documental).
Objetivo:
Describir el uso del secuenciador para fines prcticos de la biotecnologa en la

medicina.
Introduccin:
La secuenciacin de ADN es un conjunto de mtodos y tcnicas bioqumicas cuya
finalidad es la determinacin del orden de los nucletidos (A, C, G y T) en un
oligonucletido de ADN. La secuencia de ADN constituye la informacin gentica
heredable del ncleo celular, los plsmidos, la mitocondria y cloroplastos (En plantas)
que forman la base de los programas de desarrollo de los seres vivos. As pues,
determinar la secuencia de ADN es til en el estudio de la investigacin bsica de los
procesos biolgicos fundamentales, as como en campos aplicados, como la
investigacin forense.
Material:
Acceso a internet
Acceso a bases de datos
Acceso a Journals
Procedimiento:
Describir y desarrollar la utilizacin del secuenciador para anlisis.
Describir y analizar la utilizacin del mismo en la actualidad.
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Referencias:

Ediciones Pri.
Resultados:
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Practica 15. Pruebas diagnostico, ELISAS
Objetivo:
Que el estudiante se familiarice con una tcnica bsica en los estudios de inmunologa
y que con ella se ha dado pauta a los avances biotecnolgicos en la medicina como
ensayo de prueba.
Introduccin:
Los ensayos inmunoenzimaticos, por su especificidad, sensibilidad y sencillez de
manipulacin, son una tcnica muy habitual en los laboratorios de investigacin y de
anlisis clnicos. En este ensayo, el anticuerpo que reconoce al antgeno esta unido a
una enzima con capacidad para catalizar una reaccin que da un producto coloreado.
La tcnica ELISA (enzyme linked immunodsorbent assay) en el ensayo se utiliza,
generalmente una membrana de nitrocelulosa sobre la que se fija el antgeno.
Posteriormente se anade sobre la membrana el anticuerpo que reconoce
especficamente a ese antgeno. Este anticuerpo tiene unida una enzima que al anadir
su sustrato generara un producto coloreado. Este procedimiento se denomina mtodo
directo de deteccin.
Material:
Cajas de elisa. Soporte solido
Anticuerpo anti-albumina bovina
Ovoalbumina
Tampn fosfato salino
Sustrato cromgeno (4-cloro-1-naftol)
55

Cubeta de lavado
Micropipetas
Puntillas
Frasco lavador
Control positivo de albumina bovina
Control negativo de albumina ovina
Muestras m1, m2. M3
Procedimiento:
Tomar la caja de ELISA, aplicaar sobre cada pocillo una muestra de 2 microlitros de
muestra y de control positivo y negativo. Uno por cada divisin. Dejar secar de 5 a 10
min.
Durante ese tiempo se prepara la solucin de bloqueo. Para ello anadir 2.5 gr de
ovoalbmina en 100ml de tampn salino. Aguitar la mezcla hasta conseguir una
dilucin homognea 5%
Una vez pasado el tiempo de la solucin de los pocillos, introducir la solucin de

bloqueo y se deja durante 15 min.
Retirar la solucin de bloqueo y lavar la caja elisa con agua destilada.
Anador sobre cada punto 20 microlitos de anticuerpo anti-albumina bovina conjugando

con peroxidasa, e incubar durante 10 min a temperatura ambiente.
Lavar con agua destilada.
Anadir sobre cada pocillo 10 microlitros del sustrato cromgeno y dejar desarrollar el
color.
Referencias:

Ediciones Pri.
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Resultados:
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Conclusiones:
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Practica 16. Bioinformatica y Biotecnologa.

Objetivo:
Introducir las bases de datos accesibles a travs de Internet de importancia en el rea

biolgica. Comprender la utilidad de las mismas como herramientas de acceso a
informacin y programas de cmputo actualizados.
Introduccin:
En las ltimas dcadas, cientficos alrededor del mundo se han dedicado a obtener las
secuencias tanto protenas como de cidos nucleicos. Aunque en sus inicios estos
esfuerzos fueron aislados, poco a poco la cantidad de datos generada se hizo excesiva
para ser manejada por laboratorios aislados. Adems, con el advenimiento de nuevas
tecnologas de secuenciacin, se generaron proyectos conjuntos entre laboratorios
cuyo objetivo nico era la secuenciacin de un genoma en particular. Se hizo
entonces necesaria la organizacin de bancos de datos donde las secuencias
generadas pudieran ser depositadas. Desde el inicio, la comunidad cientfica estuvo de
acuerdo en que estos bancos de datos deberan tener acceso libre a nivel mundial.
Mucho antes de que el genoma humano se completara en el ao 2003,
(http://www.ornl.gov/sci/techresources/Human_Genome/home.shtml), existan ya
decenas de este tipo de bancos de datos. Actualmente, existen bancos de datos
definidos, sumamente extensos de los cuales se derivan secciones donde se puede
tener acceso a informacin ms especfica.
Materiales:
Acceso a internet
Acceso a las bases de datos geneticos
58

Procedimiento:
Se visitarn diferentes sitios en Internet y su instructor le indicar las principales

caractersticas de los mismos. Dependiendo del tiempo y el acceso a Internet, se
revisarn los siguientes sitios:
Direccin de la pgina web Descripcin
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?DB=pu Base de datos general, no solo

bmed de secuencias de
macromolculas sino tambin
acceso a libros y revistas en el
rea de ciencias de la salud.
Adems, acceso a programas
de cmputo para anlisis de
secuencias de protenas, genes
o genomas.
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/blast/ Programa de cmputo que
encuentra secuencias similares
en protenas y cidos nucleicos
http://www.genome.jp/kegg/ Base de datos de Japn
http://www.ebi.ac.uk/embl/ Base de datos Europeo
http://www.webact.org/WebACT/home Banco de datos de comparacin
de genomas de procariotas, que
permite la visualizacin on
line de hasta cinco genomas de
forma simultnea, utilizando el
herramienta de comparacin
Artemis, desarrollada por el
Instituto Sanger.
http://www.sanger.ac.uk/Software/ACT/ Herramienta de comparacin de
ADN Artemis
Referencias:
Switzer, R. y L. Garrity. Experimental Biochemistry: Theory and exercises in
59

fundamental methods. 3rd edition, Freeman and Company, New York 1999 Romero
C.S. 1968. Hongos fitopatogenos. Universidad Autnoma de Chapingo. 345 pp.
Conclusiones:
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Practica 17. Fundamentos de la Biorremediacion (documental)

Objetivo:
Que el estudiante comprenda las bases teoricas y practicas de la Biorremediacion.

Que el estudiante explore las posibilidades de la biorremediacion, que se familiarize
con los aspectos quimicos y bioquimicos y que escriba y ejecute en manera de las
posibilidades una propuesta basica de biorremedicaion de suelo y agua.
Introduccin:
La biorremediacin es el uso de seres vivos para restaurar ambientes contaminados.

Es un concepto que no se debe de confundir con depuracin. La depuracin es la
eliminacin, ya sea por mtodos fsico/qumicos o biolgicos, de un contaminante antes
de que ste alcance el medio ambiente. Cuando la contaminacin ya se ha producido,
se precisa restaurar el ecosistema contaminado, para lo que se pueden utilizar diversas
estrategias. Una de ellas es la biorremediacin. Se pueden emplear diversos
organismos en los procesos de biorremediacin. Los ms usados son los
microorganismos (tanto bacterias, como algas y hongos) y las plantas (en procesos
llamados fitorremediacin), pero tambin se pueden utilizar otros seres vivos tales
como los nemtodos (vermiremediacin). Entre los microorganismos destacan
especialmente las bacterias, los seres vivos con mayor capacidad metablica del
planeta. Las bacterias pueden degradar prcticamente cualquier sustancia orgnica. Si
la sustancia se degrada completamente se habla de mineralizacin; este es el proceso
ideal, pero no siempre ocurre. Algunas sustancias no son degradadas sino
transformadas en otras (biotransformacin). La biotransformacin puede ser peligrosa,
ya que la nueva sustancia formada puede ser tan nociva o ms que la de partida.
Finalmente hay sustancias que no son degradadas y se las denomina recalcitrantes.
stas se acumulan durante mucho en el medio ambiente, especialmente si adems son
60

resistentes a procesos fsico/qumicos como la radiacin ultravioleta o la oxidacin. Las
bacterias adems pueden eliminar los contaminantes en ambientes donde hay oxgeno
(llamados aerbicos), pero tambin en ambientes sin oxgeno (llamados anaerbicos),
ya que pueden respirar otras sustancias diferentes al oxgeno (aceptores de
electrones), como por ejemplo el nitrato, el sulfato, el hierro (III), el manganeso, el
selenio y un largo etctera.
Materiales:
Arituclos cientificos acerca dela Biorremediacion.

Acceso a las bases de datos.
Acceso a internet.
Trabajo en equipo.
Procedimiento:
La practica se llevara a cabo en equipo de 3 personas, las cuales se organizaran para

la busqueda de informacion y genracion de un miniproyecto.
Se utilizara el uso de las bases de datos donde los estudiantes elegiran 4 articulos
deacuerdo al tema (sin repetir). Se discutiran los articulos en clase y posteriormente
realizaran el proyecto escrito y una presentacion.
Referencias:
Breedveld, G.D and Sparrevik, M. 2001. Nutrientlimited biodegradation of PAH in

various soil strata at a creosote contaminated site. Biodegradation 11: 391399
Garca H D, Sosa A, CR y SnchezYez, 2007. Biorremediacin de agua domestica

contaminada con aceite residual automotriz. Revista Ingeniera Hidrulica de Mxico.
17:208219
SnchezYaez, JM et al., 2008. Biorremediacin (Antologa). Secretara de Difusin

Cultural y Extensin Universitaria. Universidad Michoacana de San Nicols de Hidalgo,
Centro de Investigacin y Desarrollo del Estado de Michoacan, Bionutra, SA de CV.
Morelia, Mich, Mxico. ISBN:9789709542424.
Resultados:
Ensayos de los articulos.
Proyecto escrito.
Presentacion del proyecto.
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Conclusiones:
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Practica 18. Fitorremediacion (documental).

Objetivo:
Que el estudiante comprenda las bases teoricas y practicas de la Fitorremediacion.

Que el estudiante explore las posibilidades de la fitorremediacion, que se familiarize
con los aspectos quimicos y bioquimicos y que escriba y ejecute una propuesta basica
a medida de sus posibilidades.
Introduccin:
La fitorremediacin podra ser definida como el conjunto de mtodos para degradar,

asimilar, metabolizar o detoxificar metales pesados, compuestos orgnicos,
radioactivos y petroderivados por medio de la utilizacin de plantas que tengan la
capacidad fisiolgica y bioqumica para absorber, retener, degradar o transformar
dichas sustancias a formas menos txicas. Asimismo, podra definirsela como la
capacidad de ciertas plantas (terrestres, acuticas, leosas, etc.) y los cultivos in vitro
derivados de ellas con el fin de remover, contener o transformar productos
contaminantes del entorno. Las bases conceptuales de la fitorremediacin provienen
de la identificacin de plantas que hiperacumulan metales. Existen vegetales que
tienen esta capacidad intrnseca pero tambin pueden obtenerse plantas con estas
capacidades por tcnicas propias de la Ingeniera Gentica. Promisoriamente, las
plantas pueden ser utilizadas como bombas extractoras de bajo costo para depurar
suelos y aguas contaminadas, adems, algunos procesos degradativos ocurren en
forma ms rpida con plantas que con microorganismos. Es un mtodo apropiado para
descontaminar superficies grandes o para finalizar la descontaminacin de reas
restringidas en plazos medianamente largos. Sin embargo, es preciso considerar que el
proceso se limita a la profundidad de penetracin de las races o aguas poco
profundas.
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Materiales:
Arituclos cientificos acerca dela Biorremediacion.

Acceso a las bases de datos.
Acceso a internet.
Trabajo en equipo.
Procedimiento:
La practica se llevara a cabo en equipo de 3 personas, las cuales se organizaran para

la busqueda de informacion y genracion de un miniproyecto.
Se utilizara el uso de las bases de datos donde los estudiantes elegiran 4-5 articulos
deacuerdo al tema (sin repetir).
Se discutiran los articulos en clase y posteriormente realizaran el proyecto escrito y una

presentacion.
Referencias:
Garca H D, Sosa A, CR y SnchezYez, 2007. Biorremediacin de agua domestica

contaminada con aceite residual automotriz. Revista Ingeniera Hidrulica de Mxico.
17:208219
SnchezYaez, JM et al., 2008. Biorremediacin (Antologa). Secretara de Difusin

Cultural y Extensin Universitaria. Universidad Michoacana de San Nicols de Hidalgo,
Centro de Investigacin y Desarrollo del Estado de Michoacan, Bionutra, SA de CV.
Morelia, Mich, Mxico. ISBN:9789709542424.
Resultados:
Ensayos de los articulos.
Proyecto escrito.
Presentacion del proyecto.
Conclusiones:
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Practica 19. Biodiesel a partir de aceite nuevo
Objetivo:
Aprender la metodologa general para la obtencion de biodiesel a partir de aceite

vegetal nuevo de cocina.
Introduccin:
El biodisel es un biocombustible que se fabrica a partir de cualquier grasa animal o
aceites vegetales, que pueden ser ya usados o sin usar. Se suele utilizar girasol,
canola, soja o jatropha, los cules, en algunos casos, son cultivados exclusivamente
para producirlo. Se puede usar puro o mezclado con gasoil en cualquier proporcin en
motores disel. El principal productor de biodisel en el mundo es Alemania, que
concentra el 63% de la produccin. Le sigue Francia con el 17%, Estados Unidos con
el 10%, Italia con el 7% y Austria con el 3%.
El sistema ms habitual es la transformacin de estos aceites a travs de un proceso

de transesterificacin. De este modo, a partir de alcohol metlico, hidrxido sdico
(soda custica) y aceite vegetal se obtiene un ster que se puede utilizar directamente
en un motor diesel sin modificar, obtenindose glicerina como subproducto. La glicerina
puede utilizarse para otras aplicaciones.
Material:
Papel filtro
Termometro
Varita
Matraz de 500 ml
Vaso de precipitados
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Probeta
Mechero bunsen
Aceite nuevo de girasol
Hidroxido de sodio
Metanol
Agua destilada
Procedimiento:
1. medimos el numero de litros de aceite con los cuales queremos experimentar

(en este caso 1 litro).
2. Vertimos el aceite vegetal en el vaso de precipitados donde preparamos la
mezcla.
3. Si la temperatura es inferior a 21C o si el aceite vegetal se encentra en estado
solido o espeso, ser necesario calentar los reactivos antes de mezclarlos.
4. Introducimos con mucho cuidado 3.5g de sosa caustica y 0.2 litros de metanol
dentro de un vaso de precipitados.
5. Removemos la mezcla hasta que la sosa haya disuelto en el metanol (se
produce metoxido sdico)
6. Vertimos seguidamente el metoxido de sodio dentro del aceite vegetal.
7. Mezclamos el conjunto de forma vigorosa durante una hora, mantenindolo a
una temperatura constante de aproximadamente unos 4-50C. Para esto lo
colocamos sobre el bunsen siempre controlando la temperatura con un
termmetro.
8. Dejamos que la mezcla repose durante 12 horas.
9. Separamos las dos capas con ayuda de un embudo de decantacin.
10. Dejamos que la glicerina, que aparece como capa oscura y espesa en la parte
inferior del recipiente, se deposite en el fondo durante una semana. Pasado este
tiempo se habr evaporado el resto de metanol y se obtendr un jabon de
gliceria.
11. Luego procedemos al lavado del biodiesel para eliminar cualquier resto de
glicerina u otras impurezas. Aadimos agua y agitamos, dejamos que esta se
asiente en el fondo y desaguamos.
12. Medimos el pH y repetimos el proceso hasta que el pH sea de 6-7.
13. Al final se ha de calentar lentamente para evaporar restos de agua.
Referencias:
65

Aguejas D.L. 1996. Biocombustibles.ministerio de cultura, pesca y alimentacion.
Madrid.
Jarabo F.F.1999. La energia de la biomasa. SAPT Publicaciones tecnicas. Madrid.
Resultados:
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Conclusiones:
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Practica 20. Anlisis de contaminacin de Agua
Objetivo:
Que el estudiante comprenda el concepto microbiologico de indicador de
contaminacion.
Evaluar la calidad sanitaria de muestras de agua o alimentos mediante el recuento de
mesofilos aerobios y la busqueda de microorganismos coliformes totales, coliformes
fecales y E. Coli
Aplicar tecnicas de cuantificacion de microorganismos totales y comparar con las
tecnicas de determinacion de viables.
Introduccin:
La determinacin de la calidad bacteriolgica reviste gran importancia en el mbito de

la salud pblica ya que permite garantizar la inocuidad del agua destinada al consumo
evitando as epidemias gastrointestinales. El agua destinada al consumo humano
puede ser contaminada por las agua residuales o por desechos humanos y animales
que pueden contener microorganismos patgenos (principalmente intestinales) como
son los causantes de la tifoidea (Salmonella typhi), la disentera (Shigella dysenterieae)
o el clera (Vibrio cholerae) entre otros).
Sin embargo, la deteccin de microorganismos patgenos es poco prctica por las
siguientes razones:
a) No siempre estn presentes en la fuente de contaminacin (material fecal), pero
pueden aparecer repentinamente
b) Al diluirse en el agua, pueden quedar en concentraciones no detectables por los
mtodos de laboratorio
c) Sobreviven relativamente poco tiempo en el agua, por lo que pueden desaparecer
antes de ser detectados
d) Los resultados del anlisis bacteriolgico del agua se obtienen despus que sta ha
sido consumida por lo cual si hay patgenos, la poblacin habr estado expuesta a la
infeccin.
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Materiales:
Agua almacenada
Material por equipo
Frasco de boca ancha con tapn esmerilado
Papel Kraft
1 pipeta de 1mL
Solucin de tiosulfato de sodio 10%
Etanol
Algodn
Hielo raspado (sin sabor)
Bolsa de plstico con cierre (ziploc)
1 pipeta de 1mL
Solucin de tiosulfato de sodio 10%
Material por equipo para el anlisis
2 mecheros
Tripi y tela de asbesto
Gradilla
Equipo Millipore estril
Accesorios de equipo Millipore
1 matraz de 250mL con 150mL de Agar Cuenta Estndar.
5 tubos con 10.0mL de caldo lauril sulfato de sodio (CLSS) triple concentracin (3X)
1 caja con Agar Bilis Rojo Violeta
3 tubos con 9mL de solucin salina estril
Pipetas serolgicas de 10, 5 y 1mL estriles
10 cajas petri estriles de vidrio o plstico estriles
Agua de sabor (10mL)
Hielo raspado (600mL)
Procedimiento 1:
a) Preparacin de los frascos

1. Lavar perfectamente el frasco, eliminando todo resto de jabn o detergente
2. Agregar 0.1mL de tiosulfato de sodio al 10% (0.5mL para frascos de 500mL)
3. Colocar una tira de papel kraft de 1 x 5cm entre tapn y cuello (frascos refractarios
con tapn esmerilado)
4. Cubrir el tapn y el cuello del frasco con papel kraftin
5. Esterilizar en autoclave a 121C durante 15 minutos.
b) Toma de la muestra
1. Lavarse las manos y desinfectarlas con etanol al 70%
2. Para grifos lo primero es desinfectar el grifo con algodn y etanol y dejar correr el
agua por 3 minutos.
68

3. Generar zona asptica cuando sea posible hacerlo.
4. Destapar el frasco, llenar hasta 2/3 del recipiente y tapar inmediatamente.
5. Para la recoleccin de agua a partir de depsitos naturales y cuerpos receptores,
retirar la cubierta de papel y sostener el frasco por la base e introducirlo en el agua
30cm.
6. Destapar y llenar contra corriente o movindolo al frente, llenar hasta 2/3 del
recipiente y tapar inmediatamente.
7. En cada caso etiquetar el frasco y elaborar una hoja de registro de datos.
8. Llevar las muestras al laboratorio lo ms pronto posible, para analizarlas antes de
que transcurran 2 horas, o 5 horas si se transportan en hielo.
Procedimiento 2:
a) Toma de la muestra
1. Comprar con un da de anterioridad 3 vasos de hielo raspado (1.5L) o granizado de los

carritos y colocarlo en la bolsa plstica.
2. Cerrar inmediatamente y refrigerar (no congelar).
3. Llevar las muestras al laboratorio lo ms pronto posible, para analizarlas antes de que
transcurran 2 horas, o 5 horas si se transportan en hielo.
Procedimiento para anlisis de las muestras:

a) Determinacin de mesfilos aerbios
1. Homogenizar la muestra de agua de sabor.

2. Realizar 2 diluciones decimales en SSI.
3. Depositar con pipeta 1mL de muestra o dilucin en cada caja de Petri estril.
Realizar cada dilucin por duplicado.
4. Verter en cada caja aproximadamente 20mL del medio agar cuenta estndar,
fundido y enfriado a 45C, homogenizar y dejar solidificar.
5. Etiquetar cada una de las cajas.
6. Verter una en una caja medio de cultivo sin muestra como control.
7. Una vez solidificadas, incubar las placas a 35C durante 24 horas.
8. Contar todas las colonias presentes, en las cajas que contengan de 25 a 250.
b) Prueba presuntiva. Determinacin del NMP de coliformes en agua y hielo potables:
1. A partir de la muestra de agua inocular 20mL en cada uno de 5 tubos con caldo lauril
sulfato de sodio (CLSS) triple concentracin. Rotular.
2. Incubar los tubos a 35 0,5C. Examinar los tubos a las 24 h., observar si hay
formacin de gas (desplazamiento del medio en la campana de Durham); si no se
69

observa produccin de gas, incubar 24 h. ms.
c) Tcnica de filtracin:
1. Etiquetar la caja con Agar Bilis Rojo Violeta.

2. Colocar dos mecheros encendidos y crear entre ellos un rea estril. En condiciones
de asepsia instalar el equipo Millipore estril. Antes de instalar el vaso y las pinzas de
pato, colocar una membrana de 0.45mm estril sobre la base del filtro conector. Las
pinzas de punta roma se esterilizan con alcohol y a la flama antes de tomar la
membrana.
3. Retirar la tapa de aluminio del vaso y transferir el contenido de la muestra lquida
solicitada, si presenta partculas en suspensin filtrar previamente con algodn y gasa.
4. Abrir la llave de vaco y filtrar el medio a travs de la membrana. Una vez que hubo
pasado todo el medio cerrar el vaco.
5. Retirar las pinzas de pato y el vaso.
6. Con ayuda de las pinzas de punta roma, retirar la membrana y colocarla en la caja
de Petri con Agar Bilis Rojo Violeta. Presionar ligeramente la superficie para favorecer
la adherencia de la membrana.
7. Sellar con dos tiras de masking tape la caja de Petri recin inoculada e incubar a
37C durante 24 horas.
8. Transcurrido el tiempo de incubacin revisar los resultados y guardar en
refrigeracin.
Referencias:
Standard Methods for the examination of water and wastewater. 1998. American
Public Health Association. 20th edition. Washington.
Norma Oficial Mexicana NOM-092-SSA1-1994, Bienes y servicios. Mtodo para la

cuenta de bacterias aerobias en placa.
Norma Oficial Mexicana NOM-112-SSA1-1994, Bienes y servicios. Determinacin de

bacterias coliformes. Tcnica del nmero ms probable.
Norma Oficial Mexicana NOM-201-SSA1-2002, Productos y servicios. Agua y hielo

para consumo humano, envasado y a granel. Especificaciones sanitarias
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Resultados:
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Conclusiones:
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Biotecnologia PDF

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UNIVERSIDAD AUTNOMA DE CIUDAD JUREZ

INSTITUTO DE CIENCIAS BIOMDICAS

Ciudad Jurez, Chihuahua

D. Ph. Antonio de la Mora Covarrubias

Dr. Alejandro Martnez Martnez

M.C. Hugo Staines Orozco

Aprobados por la Academia de Biologa, 2011

Practica 1. Preparacion de las soluciones madre para Medios de Cultivos para

Practica 2. Preparacion de los Agares para cultivo de plantas in vitro.....10

Practica 3. Cutivo in vitro de plantas (semilla)......15

Practica 4: Cultivo in vitr de plantas (organos vegetales)....19

Practica 6: Glicolisis anaerobica y fermentacin ..26

Practica 8. Fermentacion lactica..34

Practica 9: Analisis de tecinicas para deteccion de alimentos OGM

Practica 10: Extraccion de ADN eucariotico..39

Practica 13: Reaccion en Cadena de la Polimerasa y sus variantes (PCR)

Practica 14. Secuenciacion de ADN (demostrativa, Documental).53

Practica 15. Prueba diagnosticos (ELISA).55

Practica 16: Bioinformatica y Biotecnologia...58

Practica 17. Biorremediacion (documental)...60

Practica 18. Fitorremediacion......62

Practica 19. Biocombustibles...64

Practica 20. Analisis de contaminacion del agua..67

Que el alumno obtenga un conocimiento prctico sobre los diversos mtodos de

Botes de cristal o de plstico (preferiblemente de los primeros por su

Se establecern 8 equipos de trabajo por cada grupo de prcticas (2 en cada lateral de

Equipo 1 Preparar 250 ml de la solucin de macronutrientes del medio MS.

Despus de la explicacin anterior, se prepararan las soluciones madre de las sales,

Sales mineralesMS (Murashige and Skoog,

Biotina D(+) 0.00001

Glutamina (base libre ) 0.001

KH2PO4 1.7 KH2PO4 2.58

CALCIO, (10 X) C(10 X)

KI 0.083 BO3H3 0.6.2

Na2EDTA.2H2O 0.372 L-Cistena HCl 0.1

VITAMINAS (20 X) F2 (100 X)

Biotina D(+) 0.001

lvarez Tinaut, Carmen y Espinosa Borreguero, Francisco. Guiones de prcticas

Driver, J.A., Kuniyuki, A.H. (1984). In vitro propagation of Paradox walnut

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Agrega el agua destilada al matraz en que se preparara, disolver el medio ya pesado,

Krikoria, A. (1990). Medios de cultivo: generalidades, composicin y preparacin.

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