Informe de prctica Cromatografa por capa fina y por columna

Por:
Hermes Pineda
Steffany Atehorta

Documentos
98071771245
1017251320

Profesor:
Jilmar Andrs Murillo

Materia:
Qumica Orgnica

UNIVERSIDAD DE ANTIQUIA
MEDELLN
2016
 Informe de prctica cromatografa por capa fina y por columna.
Introduccin:
La cromatografa es un proceso fsico de separacin basado en la diferencia de
reparticin de los componentes de una mezcla entre dos fases inmiscibles, una
mvil y otra estacionaria. Este mtodo funciona gracias a que las molculas de un
soluto de la mezcla son retenidas por la fase estacionaria y arrastradas por la fase
mvil, de manera que si los componentes de la mezcla presentan diferentes
afinidades por alguna de las fases, sus velocidades medias de avance a lo largo
del sistema sern diferentes.
La afinidad viene determinada por distintas fuerzas como la de Vander Waals,
puentes de hidrgeno o transferencia de carga, adems los componentes que son
fuertemente retenidos por la fase estacionaria se movern ms lentamente a lo
largo de dicha fase que aquellos que se unen dbilmente, resultado de esto la
separacin son en bandas discretas que se puede analizar cualitativa o
cuantitativamente mediante el uso de los detectores adecuados.
En la cromatografa en capa fina (TLC) la fase estacionaria se deposita formando
una capa delgada sobre un material de soporte, como placas de vidrio o aluminio;
la fase mvil asciende a lo largo de la fase estacionaria por capilaridad,
producindose la divisin de los componentes de la muestra con base a su
diferente particin entre la fase mvil y la fase estacionaria.
La cromatografa de elucin en columna es una tcnica de separacin que consta
bsicamente, de un slido adsorbente o fase estacionaria que se encuentra
empacada en un tubo y sobre el cual fluye la fase mvil o eluyente.
Se denomina factor de retardo (Rf) a la relacin existente entre la distancia
recorrida por un compuesto y la recorrida por el disolvente en el mismo tiempo.
En el presente informe se presentar el desarrollo de la seccin experimental, al
igual que los resultados de sta, discusin, respuesta a las preguntas del manual y
su metodologa, cuyos objetivos tuvo:
1. Separar una mezcla de compuestos orgnicos en solucin, mediante
cromatografa en capa fina.
2. Ensayar varias mezclas de solventes en diferentes proporciones y escoger
cul de ellas efecta la mejor separacin.
3. Identificar cada uno de los compuestos separados comparndolos con
muestras patrones.
4. Calcular el valor de Rf para cada compuesto en la proporcin de solvente
escogida.
5. Observar cmo se realiza una cromatografa por capa fina al igual que ver
una ya realizada y como queda sta al final.
Metodologa:
Al inicio de la prctica se dio una explicacin breve por parte del profesor sobre el
tema que se va a desarrollar en la seccin experimental, al igual que la forma en
que se iba a progresar la prctica; la monitora tambin particip en sta dando
algunas recomendaciones e instrucciones asimismo mostr como es una
cromatografa por columna ya sta realizada y debidamente ya completada, como
sta ltima parte es demostrativa el maestro enseo y expuso como se ejecuta el
procedimiento; luego se procedi con la parte de cromatografa por capa fina.

A) Cromatografa por columna (demostrativa)

Se debe de dejar un espacio para que el solvente haga presin (si no se

hace ste se demora muchsimo por el mismo efecto de la gravedad).
Primero se registra la cantidad de slica gel, con un poquito de algodn
limpio se ingresa ste por la columna (hay que asegurarse que no pas
slica por ste), se aade a la cantidad tomada el acetato de etilo se mezcla
bien y se agrega por la columna con ayuda de un embudo, permitiendo que
la slica haga presin sobre el algodn para que al principio pase la slica y
llega un momento donde esta se satura y no pasa ms, se sigue agregando
y se lava con el solvente agitando bien para seguir el curso.

B) Cromatografa por capa fina

Antes de separar la muestra problema se debe de elegir el mejor solvente

con una mezcla que se sabe cules componentes tiene (beta- naftol, cido
glico, resorcinol) en una proporcin 6:4 y 8:2. Posteriormente, al
seleccionar el solvente, se toma una placa cromatogrfica sembrando en
ella la mezcla utilizando un capilar ya sellado, introducir esta placa en la
cmara ya escogida, seguidamente de que el eluente haya ascendido hasta
un poco antes de la parte superior, retirarlas y marcarlas hasta donde subi
el solvente finalmente colocarlas dentro de una cmara de yodo y observar
las mancha que aparecen en la placa.

Observaciones y resultados:
La resolucin de capa fina es ms eficiente que por columnas.
En la capa fina se emplean capas cromatogrficas y en columnas se
utilizan columnas de vidrio e incide la presin.
Al cambiar las afinidades cambia la resolucin.
En la parte A ya hecha, se observa un color verde el cual indica que es la
muestra; tiene algodn en la base y en la parte de arriba.
 En la parte B, se prefiri el 6:4 con su debido solvente es la ms
conveniente, hexano acetato de etilo, por la resolucin a la separacin de
los componentes.
La muestra fue la nmero 50.

Para calcular el factor de retardo (Rf)

Mezcla de acido galico, b-naftol, resorcinol 8:2

Distancia_ disolvente: 4,2 cm
mezcla: 1,5 cm
Mezcla de acido galico, b-naftol, resorcinol 6:4
Distancia_ disolvente: 4,2 cm
Mezcla: 2,0 cm; 3,3 cm
Muestra 6:4
Distancia_ disolvente: 4,2 cm
Mezcla: 2,5 cm
Polaridad B-naftol > acido galico,resorcinol (La poliridad fue interpretada por el
componente que tiene mas capacidad de hacer puestes de hidrogenos )
Teniendo en cuenta que el componente mas polar de la mezcla de acido galico,
b-naftol y resorcinol es el que se desplaza a una mayor distancia podemos decir
que el b-naftol recorre los 3,3 cm y el acido galico con el resorcinol recorren los 2
cm, por lo que podriamos concluir que la muestra #50 esta compuesta por acido
galico y/o por resorcinol

Preguntas.

1 Qu tipos de cromatografa se utilizan segn la fase estacionaria?

Cromatografa plana: La fase estacionaria se sita sobre una placa plana

o sobre un papel. Se divide en cromatografa de capa fina y cromatografa
en papel.

Cromatografa en columna: La fase estacionaria encuentra empacada en

el tubo o situada en la columna. Segn el solvente usado en la fase mvil
se puede separar en: cromatografa de gases, de lquidos y cromatografa
de fluidos supercrticos.

2 Para qu se utiliza la cromatografa y en qu se diferencia de la

electroforesis?

La cromatografa es un mtodo fsico utilizado para la separacin de

distintos componentes de una sustancia basndose en sus diferentes
afinidades por las fases inmiscibles, una mvil y otra estacionaria. La
cromatografa se diferencia de la electroforesis en el sentido de que la
electroforesis realiza la separacin de las molculas segn la movilidad de
estas en un campo elctrico, mientras que la cromatografa utiliza como
soporte las distintas afinidades que tienen las sustancias con la fase mvil o
la acuosa.

3 En qu campos es ms til la cromatografa sobre papel?

 sta tcnica es muy utilizada en los laboratorios para realizar anlisis
cualitativos ya que al no ser una tcnica muy potente, no requiere de ningn
tipo de equipamiento. La cromatografa sobre papel es un proceso muy
utilizado en la botnica, por ejemplo, se utiliza en el anlisis de sangre t en
la industria alimentaria, en la bioqumica para separar compuestos como
ribosa, galactosa, sacarosa, entre otros. En la separacin de los
componentes de los vegetales.

4 Mencione cinco solventes que se utilicen en TLC

ter de petrleo, etanol, agua, benceno, acetona

5. Se podra utilizar el agua como solvente en TLC? Explique.

Si se puede utilizar aunque no es recomendable ya que el agua, como
solvente debido a que es un compuesto muy polar no solubiliza gran
cantidad de compuestos orgnicos, a pesar de ser conocido como el
disolvente universal. Sin embargo, podra utilizarse dependiendo de las
sustancias a separar y sus polaridades, seria en pocos casos.

6. Si se tiene como eluente hexano-ter 1:1 y se necesita aumentar la

polaridad de este Cul de los dos componentes necesita aumentar?
Por qu?

Se debe aumentar el componente de ter, debido a que al ser este un

componente polar y el hexano un componente apolar, si se aumenta la
concentracin de ter se aumentar la polaridad del compuesto.

7. A un eluente benceno-cloroformo 1:1 se requiere disminuir la

polaridad, cul de los dos componentes aumentara? por qu?

Se debe aumentar la polaridad del benceno ya que es ms baja que la del

cloroformo, por tanto si se aumentar la del cloroformo, se aumentara la
polaridad y no es lo que se quiere.

8. En qu se diferencian los trminos adsorcin y absorcin?

Cuando se habla de adsorcin, se est haciendo referencia a la propiedad

que poseen ciertos slidos para incrementar la concentracin en su
superficie de otras sustancias sin alterar su volumen mientras que la
absorcin consiste en la retencin de una sustancia por parte de una masa,
tendiendo a formar parte de la mezcla o a reaccionar qumicamente con la
misma, por lo que se considera un fenmeno msico y no superficial como
lo es la adsorcin.

9. Qu efecto tiene sobre la separacin, el largo y ancho de la columna?

 Incide en la pureza, calidad y rendimiento de la mezcla a separar. En
cromatografa de columna, cada soluto debe atravesar la longitud de la
columna, as el tiempo que dura la separacin est determinada por el
tiempo que tarda el componente ms lento en llegar a la llave de
separacin, por lo que el largo de la columna influye en los resultados en
cuanto al tiempo y se puede relacionar con el Rf de los componentes de la
mezcla.
El dimetro y ancho de la columna estn relacionados con la cantidad de la
mezcla a separar, ya que en esto se basa la fcil identificacin de los
componentes. As que, si la columna excede el ancho estipulado
(generalmente la longitud de la columna debe ser 10 veces su ancho), es
ms difcil reconocer y separar los componentes de la muestra sin existir
posibles contaminaciones entre ellos.

10. Cul es la explicacin para que el soporte o fase estacionaria deba

de estar finamente divido?

sta debe estar con poca divicin para que la muestra tenga dificultad de
atravezar la fase estacionaria sin la ayuda de la fase movil. Y los
compuestos de la muestra que tengan mas afinidad con la fase movil se
dezaplazaran a una mayor distancia lo que garantiza la divicion de los
componentes de la muestra.

11. Por qu razn en una cromatografa sobre columna es necesario

eliminar las burbujas de aire?

Se necesita que la fase estacionaria est bien compacta y en forma

regular, sin aire entre medio, porque las molculas de un mismo
compuesto deben tardar lo mismo en eluir, por lo que se recogen en la
misma fraccin eluida. Si hubieran burbujas no se podra obtener una
buena separacin de las componentes.

12. Por qu razn se debe hacer la ccf previo a al cromatografa sobre

columna?

Una de las aplicaciones principales de la cromatografa en capa fina es

seleccionar las condiciones ptimas para llevar a cabo la cromatografa en
columna. Esto se refiere a identificar el solvente o la mejor proporcin de
solventes a utilizar dado que la cromatografa en capa fina es ms prctica,
rapida usa menos cantidad de recursos(materiales)

Conclusiones
 De esta practica podermos tomar en relevancia las siguientes afirmaciones
Uno de los factores ms importantes para llevar a cabo la cromatografa es
el solvente o proporcin de solventes a utilizar. La cantidad de mezcla a
separar determinar qu tan fcil podemos observar las mezclas separadas
en el proceso. Al utilizar menor cantidad de muestra en las placas
cromatogrficas, es mejor ya que se evita al mximo contaminaciones. El
proceso de cromatografa en placa fina se debe hacer con la cmara
cromatogrfica cerrada. Se puede reflejar la separacin de las
componentes en la cmara de yodo para medir bien las distancias
recorridas y obtener Rf ms precisos. De la ccf podemos concluir que la
concentracin de disolventes que mayor resultados da es la de 6:4.

Es necesario realizar varias pruebas de ccf con diferentes concentraciones

de disolventes, para determinar cul es la ms adecuada para llevar a cabo
la separacin e implique bajos costos y gastos. Debe existir una afinidad de
los componentes de la mezcla con la fase mvil y estacionaria para que se
lleve a cabo la separacin de la mezcla.

Bibliografa:
1. Manual de Prcticas de fundamentos de qumica orgnica (desde la pgina
40 hasta la 43). Tercera Edicin.
2. Imagen tomado de, el da 27 agosto de 2016.
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sa=i&rct=j&q=&esrc=s&source=images&cd=&cad=rja&uact=8&ved=0ahUK
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