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FACULTAD DE INGENIERIA Y ARQUITECTURA

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERIA AMBIENTAL

EVALUACION DE DIFERENTES CONCENTRACIONES (0; 60; 80 y


100) ppm DE HARINA DE SOJA (Glycine max) COMO INDUCTOR DE
PRODUCCIN DE Bacillus thuringiensis CON FINES DE
UTILIZACION COMO BIOINSECTICIDA, DISTRITO DE TARAPOTO,
SAN MARTIN-2016
Problema general.
Cul de las diferentes concentraciones (0; 60; 80 y 100) ppm de harina de soja
(Glycine max) resultar ser el inductor de produccin de Bacillus thuringiensis con
fines de utilizacin como bioinsecticida?.

Problemas especficos.
Facilitar el inductor (harina de soja) en el crecimiento y produccin de Bacillus
thuringiensis con fines de utilizacin como bioinsecticida?.
Cul ser la influencia de las variables como temperatura y pH en la produccin
de Bacillus thuringiensis con fines de utilizacin como bioinsecticida?.
Cul ser el tiempo mnimo para la produccin de Bacillus thuringiensis teniendo
en cuenta la curva de consumo del inductor?.
Cul ser la efectividad del bioinsecticida a base de harina de soja con la que
mejor indujo a la produccin de Bacillus thuringiensis.
Objetivo General.
Evaluar las diferentes concentraciones (0; 60; 80 y 100) ppm de harina de soja
(Glycine max) que resulte ser el inductor de produccin de Bacillus thuringiensis con
fines de utilizacin como bioinsecticida.
Objetivos Especficos.
Evaluar el inductor (harina de soja) en el crecimiento y produccin de Bacillus
thuringiensis con fines de utilizacin como bioinsecticida.
Evaluar la influencia de las variables como temperatura y pH en la produccin de
Bacillus thuringiensis con fines de utilizacin como bioinsecticida.
Determinar el tiempo mnimo para la produccin de Bacillus thuringiensis teniendo
en cuenta la curva de consumo del inductor.
Comprobar la efectividad del bioinsecticida a base de harina de soja con la que
mejor indujo a la produccin de Bacillus thuringiensis.
Hiptesis General.
La mayor concentracin entre (0; 60; 80 y 100)ppm de harina de soja (Glicyne max),
resultar ser el inductor de mayor produccin de Bacillus thuringiensis con fines de
utilizacin como bioinsecticida.
Hiptesis Especficos.
La harina de soja resultar ser el inductor en el crecimiento y produccin de Bacillus
thuringiensis con fines de utilizacin como bioinsecticida.
Las variables como temperatura y pH tienen influencia en la produccin de Bacillus
thuringiensis con fines de utilizacin como bioinsecticida.
Ser la curva de consumo del inductor determinada por tiempo mnimo para la
produccin de Bacillus thuringiensis.
Ser factible comprobar la efectividad del bioinsecticida a base de harina de soja
con la que mejor indujo a la produccin de Bacillus thuringiensis.
Identificacin de Variables.
Variable Independiente.
La harina de soja a diferentes concentraciones (0; 60; 80 y 100) ppm.
Variable Dependiente.
Produccin de Bacillus thuringiensis.
Tabla 1: Operacionalizacin de las variables.

DEFINICIN DEFINICIN
VARIABLE DIMENSIN INDICADOR ESCALA DE MEDICIN
CONCEPTUAL OPERACIONAL
Dependiente: Microorganismos bacterianos, Las utilizaciones de Produccin de Biomasa Se mide por el nmero Discreta: Unidad.
Produccin de Bacillus pertenecientes al grupo de los bacilos instrumentos permitirn (Bacillus thuringiensis) de UFC (Unidad Razn/proporcin:
thuringiensis. en la clasificacin de Gram y en el determinar la Formadora de Colonias). Tamao grande y
orden taxonmico conforma a la familia produccin de Biomasa pequeo.
Bacillaceae. Actan formando (Bacillus thuringiensis).
compuestos proteicos de origen
insecticida (delta endotoxina).

Compuesto capaz de inducir a la Produccin de Bacillus Contenido Proteico Contenido proteico a Razn/proporcin:
produccin de Bacillus thuringiensis, Thuringiensis. (Proteasas). diferentes mg/L
Independiente: por presentar los componentes del concentraciones.
La Harina de Soja a requerimiento nutricional primordial
diferentes para la reproduccin de Bacillus
concentraciones (0, 60, thuringiensis.
80, 100) ppm.

Fuente de crecimiento, inductor de Protena Txica para Catalizadores biolgicos Aceleran y Desaceleran las Continua: ml, mg, etc.
esporulacin y formacin de la delta- insectos plaga (Biocatalizadores) que actan reacciones bioqumicas del Bt.
endotoxina (Sub-unidad A y Sub- (lepidpteros, a nivel intestinal (Sub-unidad Microorganismo.
unidad B). colepteros, dpteros, B) y a nivel neurotrpico
protozoos, etc.). (Sub-unidad A).
Tipo de Investigacin.
Segn la naturaleza de la informacin se considera una investigacin Cuantitativa,
debido a que se evaluar las concentraciones de la Harina de soja para la produccin
de Bacillus thuringiensis. Segn el mtodo de la Investigacin Experimental de Beatriz
Arquero Palomino, Ana Berzosa Alonso, Noelia Garca Muos y Miriam Monja Morales
(2009).
Nivel de la investigacin.
El grado de profundidad con el que se va a realizar el trabajo de investigacin es
descriptiva por que proporciona una respuesta a las preguntas de cmo ocurri algo y
quin estuvo involucrado, Segn la Psic. Martha Patricia Sierra Guzmn (2012).
Explicativa porque se encarga de buscar el porqu de los hechos mediante el
establecimiento de relaciones causa-efecto y predictiva (experimental).
Mtodo de la Investigacin.
El mtodo de la Investigacin es Experimental, Segn Beatriz Arquero Palomino, Ana
Berzosa Alonso, Noelia Garca Muos y Miriam Monja Morales (2009). y se desarrollar
acabo en tres etapas.

Diseo de investigacin.
El tipo de diseo es Experimental, segn Hernndez (2006) la caracterstica o elemento
esencial del proyecto se realiz mediante la Manipulacin de la variable independiente,
esto implica un manejo u operacin deliberada con respecto a la variable independiente.
Las caractersticas correspondientes al tipo de diseo a emplear es la observacin y
medicin, segn aupas (2006).
Poblacin.
Cepa de Bacillus thuringiensis.
Muestra.
Inculo.
Muestreo.
El muestreo se realiz segn el protocolo para obtencin de alcuotas para ensayos en
biorreactores.
Instrumentos:
Tcnicas:
Los instrumentos que se utilizarn son los
Observacin directa del experimento
siguientes:
en el Laboratorio.
Uso del software ArcGis.
Registro de coordenadas (UTM).
pH-metro.
Libreta de campo.
Densmetro.
SPSS.
Termmetro.
Produccin de Bacillus thuringiensis-Primer Ensayo(0 Horas).
Produccin de Bacillus Thuringiensis 25000000
2500000 0
20000000
2000000 0
13750000
(UFC/ml)

1500000 0

1000000 0
3750000
5000000
500 500 500 500
0
PATRON 60 80 100
Concentracin de Harina de Soja (ppm)-Velocidad de Agitacin(RPM)

Grfico 2: Comparacin de produccin de Bacillus thuringiensis-primer ensayo del Patrn (0ppm), 60 ppm, 80 ppm y 100ppm, a las 0 horas.
Fuente: Elaboracin Propia, 2016.

Produccin de Bacillus thuringiensis-Segundo Ensayo(4Horas).


Produccin de Bacillus Thuringiensis

37500000
4000000 0

3000000 0 25500000

2000000 0 16250000
UFC/ml

1000000 0 4750000
500 500 500 500
0
PATRON 60 80 100
Concentracin de Harina de S oja (ppm)-Velocidad de Agitacin (RPM)

Grfico 3: Comparacin de produccin de Bacillus thuringiensis-Segundo ensayo del Patrn (0ppm), 60ppm, 80ppm y 100 ppm a las 4 horas.
Fuente: Elaboracin Propia, 2016.
Produccin de Bacillus thuringiensis-Tercer Ensayo(8 Horas)
43112500
Produccin de Bacillus Thuringiensis
45000000 39382500
40000000
35000000
30000000 23050000
(UFC/ml)

25000000
20000000
15000000
10000000 4487500
5000000 500 500 500 500
0
PATRON 60 80 100

C oncentracin de H arina de Soja (ppm)-Velocidad de Agitacin(RPM )

Grfico 4: Comparacin de produccin de Bacillus thuringiensis-Tercer ensayo del Patrn (0ppm), 60ppm, 80ppm y 100 ppm a las 8 horas.
Fuente: Elaboracin Propia, 2016.
Produccin de Bacillus thuringiensis-Cuarto Ensayo(24 Horas)
Produccin de Bacillus Thuringiensis

60000000 50057500
45000000
50000000
40000000 33000000
(UFC/ml)

30000000
20000000
4912500
10000000 500 500 500 500
0
PATRON 60 80 100
Concentracin de Harina de Soya Residual(ppm)-Velocidad de Agitacin(RPM)
Grfico 5: Comparacin de produccin de Bacillus thuringiensis-Cuarto ensayo del Patrn (0ppm), 60ppm, 80ppm y 100 ppm a 24 horas.
Fuente: Elaboracin Propia, 2016.
Produccin de Bacillus thuringiensis-Promedio
38917500
Produccin de Bacillus Thuringiensis 4000000 0
3500000 0
32470625

3000000 0
2500000 0
(UFC/ml)
2000000 0 13255000
1500000 0
1000000 0 4001000
5000000 500 500 500 500
0
PATRON 60 80 100
Concentracin de Harina de S oja (ppm) -Velocidad de Agitacin(RPM)

Grfico 6: Comparacin de produccin de Bacillus thuringiensis-promedio del Patrn (0ppm), 60ppm, 80ppm y 100 ppm.
Fuente: Elaboracin Propia, 2016.

Curva de Crecimiento
Cmara Neubauer
7.8
24
7.6 8
7.4
Log(Recuento)

7.2 4
7
6.8
6.6
0
6.4
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.5
Tiempo de Fermentacin (Horas)

Grfico 7: Curva de Crecimiento de las 4 concentraciones, Patrn (0ppm), 60ppm, 80ppm y 100ppm a las 0,4,8,24 horas del tiempo de recuento y a 4 horas del
tiempo de fermentacin, a 7.69 Log (Recuento).
Fuente: Elaboracin Propia, 2016.
Medida del pH
7.4
0
7.2 4
7 8
6.8
pH

6.6
6.4
6.2 24
6
0 1 2 3 4 5
Tiempo de Fermentacin (Horas)

Grfico 8: Evaluacin del pH; obteniendo 6,18 a las 24 horas de recuento.


Fuente: Elaboracin Propia, 2016.
Discusin.
En los cuatro ensayos realizados de las concentraciones, patrn (0ppm), 60ppm, 80 ppm y
100ppm a las (0, 4, 8 y 24) horas de tiempo de recuento, con una agitacin de 500 RPM se
obtuvo que en las tres ltimas concentraciones (60, 80, 100)ppm produjeron mayor
cantidad de Bacillus thuringiensis en UFC/ml, obteniendo as que a mayor concentracin de
Harina de Soja mayor produccin de este mencionado organismo, con respecto al patrn
(0ppm) tambin existi la presencia de esta bacteria sin existir concentracin alguna de
Harina de Soja, en este slo existi el medio mnimo de Davis, ver grficos 2, 3, 4, 5. La
concentracin que origin mayor produccin de Bacillus thuringiensis fu de 100 ppm,
obteniendo 5,0057500x107 en 24 horas, luego se realizaron posteriores ensayos con
200ppm y 300ppm evidenciando que la presencia de Bacillus thuringiensis es ms notoria,
por lo tanto se puede decir que si se hubiera realizado con 400ppm o 500 ppm existira
mejores resultados, segn Vargas V.F (2010), la Harina de Soja contiene 40% de protenas,
siendo ste el inductor esencial de produccin del Bacillus thuringiensis (ver grfico 1).
Discusin.
En el anlisis promedio de los cuatro diferentes ensayos a las 0, 4, 8 y 24 horas del tiempo
de recuento de produccin de Bacillus thuringiensis se vuelve a demostrar al igual que en el
tem anterior, que a mayor concentracin de Harina de Soja mayor produccin de Bacillus
thuringiensis, obteniendo que a 100 ppm se produjo 3,891500x107 UFC/ml, grfico 6; segn
Vargas V.F (2010), la Harina de Soja contiene 40% de protenas, siendo ste el inductor
esencial de produccin de Bacillus thuringiensis (ver grfico 1).

El pH es un parmetro fsico-qumico importante durante el proceso de produccin. Es por


ello, que iniciando el proceso se debe ajustar el medio a un pH entre 6,8-7,2 que es el
rango de pH ptimo para este microorganismo. Luego, el pH baja despus de 8-12 horas
(Orietta, 2002). Esto concuerda con nuestros resultados que el pH empez a bajar
progresivamente.
Discusin.
La temperatura a la que se tuvo expuesto el Bacillus thuringiensis fue de 30 C, ajustndolo
con un termostato, ello permiti y/o facilit la produccin de este microorganismo a
diferentes concentraciones, segn Dulmage (1981) el rango de temperatura ptimo para la
mayor produccin de Bacillus thuringiensis ocurre de 28-30oC y ello concuerda con el
presente trabajo de investigacin.

El tiempo de recuento para la produccin de Bacillus thuringiensis fu de 0, 4, 8 y 24


horas, si se hubiera realizado con un tiempo de recuento mayor de 24 horas, es decir 48
horas o ms, se hubiera obtenido producciones altas de Bacillus thuringiensis, segn
Tapia (2012) a mayor tiempo de recuento se obtendr mejores resultados de produccin
de este microorganismo y a su vez se podra graficar la curva de crecimiento con mayor
facilidad.
CONCLUSIONES
La concentracin de Harina de Soja que produjo mayor produccin de Bacillus thuringiensis
en los cuatro ensayos fue de 100ppm en los 0, 4, 8 y 24 horas del tiempo de recuento a 500
RPM, a las 24 horas se produjo 5,057500 x 107 UFC/ml y en los anlisis promedio se
obtuvo 3,89175500x107 UFC/ml (ver grfico 2, 3, 4, 5, 6).
El inductor (harina de soja) facilit el crecimiento y produccin de Bacillus
thuringiensis, observando producciones altas de 4,3112500x 107 y 5,0057500x 107 de este
microorganismo a las 8 y 24 horas del tiempo de recuento, comparado con el obtenido con
el medio patrn (Medio Mnimo de Davis) originando la produccin ms baja de Bacillus
thuringiensis en los cuatro diferentes ensayos (ver grfico 2, 3, 4, 5 y 6).
Los resultados del anlisis del diseo experimental, demostraron que la influencia
de las variables de pH y temperatura para la produccin de Bacillus thuringiensis son:
control de pH de 6,18, y la temperatura de 29 C (ver tabla 7).
CONCLUSIONES
El Tiempo mnimo para la produccin de Bacillus thuringiensis fue de T24 horas (ver
grfico 7).
De acuerdo a los resultados obtenidos (Grfico 5) se obtuvo que la produccin
de Bacillus thuringiensis a una concentracin de 100ppm de Harina de Soja es de
5,0057500x107 UFC/ml, se concluye que la harina de soja es un sustrato que induce la
produccin de este microorganismo, de acuerdo a la literatura, la harina de soja
contiene el 40 % de protenas, siendo ste una fuente inductor de produccin del
Bacillus thuringiensis.
La efectividad bioinsecticida a base de harina de soja a 100ppm, 200ppm,
300ppm result ser ptima, obteniendo el 90% de muertes de insectos del orden
dpteros en estado larvario y de orden colepteros un 99.9 % en un periodo de tiempo
de 24 horas.
RECOMENDACIONES
Se recomienda realizar ensayos con concentraciones de 400ppm o 500ppm de Harina de
Soja, para obtener producciones altas de Bacillus thuringiensis.
Se recomienda experimentar con otros medios de cultivo tales como la sanguaza, pur de
tomate, harina de pescado, extracto de levadura y otros, con la finalidad de demostrar si
son inductores de crecimiento y produccin de Bacillus thuringiensis.
Es muy importante el control de la influencia de las variables (pH y temperatura) ya que
estos inciden en la produccin del Bacillus thuringiensis, por ello recomiendo controlar
igualmente la densidad, oxgeno disuelto, cantidad de azcar presente en el medio.
Recomiendo que el tiempo mnimo para la produccin de Bacillus thuringiensis deber de
ser de 48 horas, con el fin de obtener producciones altas de este microorganismo.
Recomiendo que para la agitacin del medio en los Biorreactores se realice con un motor
elctrico de 15 voltios, as se evitar que este se recaliente y no exista el riesgo de anular el
ensayo.
Imagen 1: Elaboracin de los Biorreactores. Imagen 3: Elaboracin de los Bafles para los Biorreactores.
Fuente: Elaboracin Propia, octubre-2015. Fuente: Elaboracin Propia, octubre-2016.

Cmara de
Neubauer
Medio
Mnimo de
Davis

Imagen 5: Biorreactores esterilizados. Imagen 6: Medio mnimo de Davis y Cmara de Neubauer.


Fuente: Elaboracin Propia, 2016. Fuente: Elaboracin Propia, 2016.
Patrn 60ppm 80ppm

Imagen 9: Preparacin de materiales e insumos a utilizar en los Biorreactores. Imagen 11: Ensayos de produccin de Bacillus thuringiensis.
Fuente: Elaboracin Propia, 2016. Fuente: Elaboracin Propia, 2016.

Imagen 12: Observacin en el microscopio del Bacillus thuringiensis. Imagen 15: Toma fotogrfica de ensayo de efectividad de Bioinsecticida.
Fuente: Elaboracin Propia, 2016. Fuente: Elaboracin Propia, 2016.
Imagen 16: Ensayo de la efectividad de Bioinsecticida a base de harina de Imagen 17: Bioinsecticidas elaborados a base de harina de soja
soja en insectos de orden colepteros y dpteros (estado larvario). y melaza de maz.
Fuente: Elaboracin Propia, 2016. Fuente: Elaboracin Propia, 2016.

Imagen 23: Efecto de bioinsecticida a base de harina de soja en


Imagen 21: Efecto de bioinsecticida a base de harina de soja en insectos insectos larvas de dpteros-24 horas.
larvas de dpteros-8 horas. Fuente: Elaboracin Propia, 2016.