Universidad Central del Ecuador

Facultad de Ciencias Qumicas

Escuela de Bioqumica y Farmacia

Nombre: Mara Fernanda Bustos Matuhura

Grupo: B6
Fecha: 18 de abril de 2011

CONSULTA
Dispersin de la Luz

Cuando un haz de luz paralelo (colimado) golpea una partcula en suspensin,

parte de la luz es reflejada, parte es diseminada, parte es absorbida y parte es
transmitida. La nefelometra mide la luz dispersada por una solucin de
partculas. La turbidimetra mide la luz dispersada como un decrecimiento de la
luz transmitida a travs de la solucin. Con relacin a la longitud de onda y al
tamao de la partcula pueden existir tres tipos de dispersin.

Los cultivos bacterianos actan como suspensiones coloidales absorbiendo y

reflejando la luz que incide sobre ellos, por ello, una suspensin bacteriana
aparece turbia a simple vista. Dentro de un rango, la luz absorbida o
dispersada por una suspensin bacteriana es directamente proporcional a la
concentracin de clulas en el cultivo. Por ello, un procedimiento rpido, fcil y
preciso de estimar el nmero de bacterias en un cultivo es la medida de
turbidez. El espectrofotmetro es el aparato que se utiliza para medir la
turbidez. Este aparato proporciona luz monocromtica por medio de un filtro
que permite slo el paso de la longitud de onda elegida (normalmente las
longitudes de onda usadas para medir la turbidez bacteriana estn en el rango
540 660 nm).

DENSIDAD PTICA

La cantidad de luz incidente absorbida por una suspensin bacteriana es

medida por una clula fotoelctrica y se expresa como absorbancia o densidad
ptica. As la absorbancia se define como la proporcin de luz incidente
absorbida por una suspensin y se puede calcular como: la luz absorbida / luz
incidente.

TURBIDIMETRIA

La turbidimetra mide la reduccin de la transmisin de luz debido a partculas

de una suspensin y cuantifica la luz residual transmitida.

Estudios tericos y experimentales han mostrado que soluciones diluidas de

diferentes tipos de bacterias, independientemente del tamao celular, tienen
casi la misma absorbancia por unidad de concentracin de peso seco. Esto
quiere decir que, en soluciones diluidas, la absorbancia es directamente
proporcional al peso seco, independientemente del tamao celular del
microorganismo.
Sin embargo, se encuentran absorbancias muy diferentes por partcula o por
UFC (Unidad Formadora de Colonia) cuando los tamaos de las clulas
bacterianas son diferentes. Por esta razn, para estimar el nmero de
microorganismos totales o el nmero de microorganismos viables de una
suspensin bacteriana debe realizarse una "curva de calibracin" con cada tipo
de microorganismo, slo de esta forma es posible relacionar Absorbancia
(Densidad ptica) con el nmero de microorganismos totales o con UFC.

Absorbancia en funcin del Peso Seco

Absorbancia = K x Peso Seco

K: constante que vara con la longitud de onda utilizada y

representa la inversa del peso seco del microorganismo que
produce un aumento de 10 veces en el valor de la absorbancia
(1/W0).

Peso seco: Concentracin celular bacteriana expresada en

unidades de peso seco (g/ml-mg/ml).

VENTAJAS Y DESVENTAJAS

Para el manejo prctico de los cultivos bacterianos en estudios de turbidimetria

es muy til el uso de matraces con brazo lateral, ya que permiten la realizacin
de medidas sin necesidad de abrir los matraces y de tomar muestras del
cultivo, evitando as el riesgo de contaminacin por la manipulacin.

Hay que tener en cuenta que existe un lmite de deteccin en cultivos con
concentraciones inferiores mnimo de deteccin con concentraciones inferiores
a 106 UFC/ml no presentan turbidez detectable

La relacin directa entre la absorbancia y el peso seco slo se aplica para

suspensiones diluidas de bacterias. Estas suspensiones no deben tener una
absorbancia mayor a 0.3, ya que valores mayores producen desviaciones de la
ley de Beer. Sin embargo, el inconveniente de utilizar suspensiones diluidas
puede involucrar un mayor error de pipeteo y menor sensibilidad por el bajo
nivel de absorcin.

Absorbancia en funcin del Peso Seco

Absorbancia en funcin del Nmero de Microorganismos Totales

En estos grficos se puede apreciar que suspensiones diluidas de dos

microorganismos diferentes con igual peso seco tienen la misma absorbancia,
mientras que para el mismo nmero de microorganismos totales la absorbancia
de cada suspensin es distinta.

Mediciones de absorbancia

Si medimos la absorbancia de un cultivo a distintos intervalos de tiempo, la

curva relaciona los parmetros que representa una curva de crecimiento de
poblacin bacteriana con sus distintas fases. La primera fase se denomina fase
de latencia, en la que la bacteria se adapta a las condiciones de cultivo y el
nmero de clulas no aumenta. Tras este perodo las bacterias comienzan una
fase de crecimiento exponencial en la que la velocidad de crecimiento es
mxima y el tiempo de duplicacin constante, por lo que las bacterias en esta
fase son las ms indicadas para estudios enzimticos, estructurales, etc .

Esta fase de crecimiento disminuye por algn factor limitante. Entonces, la

velocidad de crecimiento disminuye y la poblacin comienza un perodo de
equilibrio que se denomina fase estacionaria, en cual se producen fenmenos
tan peculiares como la esporogsis o la produccin de antibiticos. Por ltimo,
si se mantiene el cultivo durante ms tiempo en esta situacin comenzar un
proceso de muerte en el que nmero de clulas viables disminuye: fase de
muerte.

RECUENTO DE MICROORGANISMOS

Una aplicacin directa de la turbidimetra es la realizacin de una curva patrn

en la que se realciona la medida de absorbancia con el nmero de clulas
viables del cultivo. Simultneamente a las medidas de absorbancia se realizan
recuentos en placa. De esta forma, a partir de la absorbancia de un cultivo
podemos extrapolar de la curva patrn el nmero de bacterias viables.

ESCALA DE McFARLAND

Como se ha comentado anteriormente, una aplicacin directa de la

turbidimetra y del recuento de microorganismos por diluciones seriadas es la
realizacin de una curva patrn en la que se relaciona la medida de la
absorbancia con el nmero de clulas viables del cultivo. Sin embargo, una
mayor simplificacin la ofrece la estandarizacin de McFarland, til en anlisis
microbiolgicos sencillos. La escala de McFarland relaciona la turbidez de unos
patrones de sulfato brico (mezcla de cloruro brico al 1% y cido sulfrico al
1%) con el nmero de bacterias presentes en una muestra. As, por ejemplo,
como se muestra en la tabla 1 si la muestra presenta la misma turbidez que el
patrn 1 de la escala McFarland, la carga ser aproximadamente de 3x10 8*
UFC/ml.

Tabla 1 Preparacin e interpretacin de la escala McFarland

Escala BaCl2 al 1% (ml) H2SO4 al 1% UFC/ml (x108)

McFarland (ml)

1 0,1 9,9 3

2 0.2 9,8 6

3 0,3 9,7 9
 4 0,4 9,6 12

5 0,5 9,5 15

6 0,6 9,4 18

7 0,7 9,3 21

8 0,8 9,2 24

9 0,9 9,1 27

10 1,0 9,0 30

Bibliografa:

1. http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioRecuento.htm
2. Manual prctico de Microbiologa, Carlos Gamazo y Eduardo Lpez,
Espaa, 2005, p. 39