UNIVERSIDADNACIONALAUTNOMADEMXICO

FACULTADDEQUMICA
DEPARTAMENTODEFARMACIA

FarmacologaII
Clavedelamateria1509

GuindePrcticas
2007

JosLuisBalderasLpez
MyrnaDcigaCampos
LianaMedinaCruz
AndrsNavarreteCastro

 FarmacologaII.GuindePrcticas.

Estematerialsedesarrolloconelapoyodel

ProgramadeApoyoaProyectosparalaInnovacinyMejoramientodelaEnseanzaPAPIME
conlaclavePE205306

Proyecto:Desarrollodeprocedimientosparalaenseanzadelafarmacologaexperimental
basadaenelprincipiodelas3Rs:Reduccin,RefinamientoyReemplazodeanimalesde
laboratorio.

ElcontenidodeestematerialfuerevisadoporlosprofesoresdeLaboratoriodeFarmacologaII
delsemestre20081.

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 FarmacologaII.GuindePrcticas.

Tabladecontenido.

PRCTICAS.

1. Marcoconceptualdellaboratoriodefarmacologa
2. Evaluacindelossistemascolinrgicoyadrenrgicoenaortaytrqueade
rata
3. Perfilneurofarmacolgicodeldiacepam.
4. ValoracindelefectoantinociceptivodeAAINEs.
5. Farmacologacardiovascularenunsistemasimulado.
6. Efectodiurticoysuinfluenciasobrelapresinypulsoarterial.
7. Determinacindelefectohipoglucemiantedelaglibenclamida.
8. Determinacindelefectoantidiarreicodelaatropina.


APNDICES.

ApndiceI.InstructivoparaelusodelpolgrafoBiopacSystemMP100.

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1.Marcoconceptualdellaboratoriodefarmacologa.

Lafarmacologaesunacienciaexperimentalporexcelencia.Losmtodosutilizadosparaevaluar
laseguridadylaeficaciadelosfrmacosutilizasistemasbiolgicosquevandesdefragmentos
celularesomacromolculasaisladashastapoblacionesenteras.Enunagranpartedelproceso
de investigacin farmacolgica se utilizan animales de laboratorio ntegros. Sin embargo, la
creciente sensibilidad respecto a la prctica de la experimentacin en animales en la
investigacinyenlaenseanzadelascienciasbiomdicas,ylabsquedadeenfoquesnuevos
enlosaspectosprcticosdelamismasonpartedeundebateactual(JukesyChiuia,2003).

La utilizacin de animales de experimentacin en la enseanza de las prcticas de diferentes
asignaturas de las Ciencias Biomdicas y en especial de la farmacologa, ha venido siendo la
metodologamsempleadaportodoslosprofesoresdeestadisciplina.Graciasalautilizacin
deestosanimales,losestudianteshanpodidoapreciarlosdiferentesefectosfarmacolgicosy
losprincipiosdelaaccinfarmacolgica.Entrelasprcticasclsicasquesehanrealizadoenla
mayoradeloslaboratoriosdefarmacologa,algunasdeellastienenuncomponenteimportante
decrueldadysondepocaaceptacinporalgunosdelosestudiantes.Unadelasprcticasque
nosepuedeaceptaresladeterminacindeladosisletal50(DL50)enratasoratones,parmetro
que est en duda su utilidad como parmetro para estimar la seguridad de los frmacos y
sustanciasnuevas.Esobvioqueelusodeanimaleseraelnicomtododelquedisponanlos
profesoreshacealgunosaosparaensearfarmacologa.Peroenlosltimosaoslascosashan
cambiadoyelavancedelainformtica,delastecnologasdelaimagenyladisposicindelneas
celulareshapermitidoeldesarrollodenumerosasalternativasquenorequierenelusodelos
animalesparalograrlosobjetivosdocentesqueseplanteanenlasprcticasdelaboratoriode
farmacologa(VanderValk,etal.,1998;Vinardell,2003;Ederetal.,2006).

Losmtodosutilizadosenlainvestigacin,paralaevaluacindelaseguridady/otoxicidadyen
laenseanzaestnencontinuoprogresoyaqueloscientficosestnenpermanentebsqueda

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 FarmacologaII.GuindePrcticas.

deposiblesalternativasquemejorenlacalidaddesutrabajo.Elloesdebido,enparte,alalgica
evolucin de los conocimientos cientficos y de sus aplicaciones tecnolgicas, y en parte, a
consideracionesticas,logsticas,econmicas,sociopolticasylegales(SterlingyRispin,2002).
El nmero de animales utilizados en Europa con fines educativos es relativamente pequeo
comparado con el nmero total de animales utilizados en investigacin y se ha venido
reduciendoenlosltimosaos,peroapesardeellotodavasepuedereducirms.EnMxicoel
uso de animales en docencia es alto aunque no se cuentan con datos precisos de cuantos
animales se sacrifican en cada ciclo escolar. Por otro lado la aplicacin de la Norma Oficial
Mexicana(NOM062ZOO1999)hasidolentaenloslaboratoriosdeenseanzadelasciencias
biomdicas. En cambio, en el artculo 25 de la Convencin Europea para la Proteccin de los
Animales Vertebrados utilizados en Experimentacin y otros Fines Cientficos se especifica:
"aquellosprocedimientosllevadosacaboconfineseducativosodeentrenamientosedeben
restringir a los absolutamente necesarios para los fines relativos a la enseanza y el
entrenamiento y se permitirn nicamente si sus objetivos no pueden ser conseguidos por
mtodos audiovisuales u otros que sean suficientemente efectivos". En las legislaciones
relacionadasconlaproteccindelosanimalesdetodoslospasesdelaComunidadEuropease
considerafundamentalaplicarelprincipiodelas3Rs,promulgadoporRussellyBurchen1959
(Russell y Burch, 1959). Este principio nos indica la necesidad de Reemplazar los animales de
experimentacinporotrosmtodos,siemprequeseaposibleyqueelnuevomtodonosaporte
elmismogradodeinformacin,deReducirelnmerodeanimalesdeexperimentacincuando
su uso sea necesario y se presente como el nico mtodo vlido y finalmente, de Refinar las
tcnicasempleadasconlosanimales,conelfindemejorarsueficaciaodisminuireldoloroel
gradodesufrimientoinfligido(vanderValk,etal.,1998;Vinardell,2003).

Enelcasodeladocenciaseplanteaelreemplazodelosanimalesdeexperimentacinporotros
mtodos.Entrelosmtodospropuestossepuedencitar:

a) Modelos,maniquesysimuladoresmecnicos.
b) Pelculasyvdeos.

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 FarmacologaII.GuindePrcticas.

c) Simulacionesdeordenadorysistemasderealidadvirtual.
d) Autoexperimentacinenelpropioindividuo.
e) Experimentosconvegetalesincluyndosehongosyalgas.
f) Usodematerialprocedentedelosrastros.
g) Estudiosinvitroconlneascelulares,organismosinferiorescomobacterias,nematodos,
insectosopecesenetapatemprana.
h) Aprovechamiento de animales muertos de forma natural o utilizados despus de un
procedimientocientfico(VanderValk,etal.,1998;Vinardell,2003).

EnelLaboratoriodeFarmacologaIIseplanteaeldesarrollodeprocedimientosexperimentales
yactividadesenlosquebajoelprincipiodelastreserressereduzca,sereemplaceyserefine
elusodeanimalesdelaboratorioparacubrirlosobjetivosdelaenseanzaexperimentaldela
farmacologa.

Considerando lo anterior, en el laboratorio de farmacologa se realizarn actividades de tres

tipos:

1) Simulaciones. Se realizarn simulaciones en la computadora que permita a los

estudiantes la comprensin de aspectos que sin la necesidad de repetir muchos
experimentos puedan comprender los conceptos y los procedimientos para definir
parmetrosfarmacolgicos.

2) Prcticas. Desarrollo de prcticas sencillas, con lo que se pretende conozca tcnicas y

hbitosdellaboratoriodefarmacologa.

3) Demostraciones. En esta categora se realizan experimentos los cuales debido a las

siguientesrazonesnoesposiblequelarealicenlosestudiantesenformaindividualoen
grupospequeos:

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 FarmacologaII.GuindePrcticas.

a. El experimento requiere de cierta destreza que en una o dos sesiones no es

posiblequelasaprendaelestudiante.
b. Laexistenciadeequipodelaboratorioenunnmeroreducido.
c. Eltiempolimitadoparalasesindelaboratorio.

4) Autoexperimentacin.Sinponerenriesgoenningngradolaintegridadylasaluddelos
estudiantes.

Cualquiera que sea la modalidad del procedimiento que se realice cada uno de ellos debe
comprender las siguientes partes: familiarizacin con el procedimiento, ejecucin del
procedimientoydiscusindelprocedimiento.

Conestosprocedimientossepretende:

Facilitarelaprendizajedelosaspectosfundamentalesdelafarmacologa.
Familiarizaralosestudiantesconelmtodocientficoenexperimentosdefarmacologa.
Enseartcnicasyhbitosdellaboratoriodefarmacologa.
Motivar a los futuros farmacuticos hacia la investigacin y estudio de la farmacologa
comoreadedesarrolloprofesional.

BIBLIOGRAFA.

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3Rsintotissueengineeringresearch.AltexAlternativenZuTierexperimenten.23:1723.
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Lndres.
MeyerB,FerrigniN,PutnamJ,JacobsenL,NicholsD,McLaughlinJ.(1982).BrineShrimp:
Aconvenientgeneralbioassaysforactiveplantconstituents.PlantaMedica.45:3134.

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 FarmacologaII.GuindePrcticas.

RussellW,BurchR.(1959).ThePrinciplesofHumaneExperimentalTechnique.Methuen,
Lndres.
TallaridaR.(2000).Drugsynergismanddoseeffectdataanalysis.Chapman&Hall/CRC.
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Van der Valk J, Dewhurst D, Hughes I, Atkinson J, Balcombe J, Braun H, Gabrielson K,
GruberF,MilesJ,NabJ,NardiJ,VanWilgenburgH,ZinkoUyZurloJ.(1998).Alternatives
totheuseofanimalsinhighereducation.ATLA27:3952
VinardellP.(2003).Alternativasalusodeanimalesdeexperimentacinenlasprcticas
defisiologa.BoletndelaSociedadEspaoladeCienciasFisiolgicas.6(1).

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 FarmacologaII.GuindePrcticas.

2. Evaluacin de los sistemas colinrgico y adrenrgico en

aortaytrqueaderata.

Nmerodesesionessugeridas:2sesiones(ejecucinyanlisis).
TemasrelacionadoconelcursodeteoradeFarmacologaII:Neurotransmisoresdelsistemanerviosoautnomo,
Agonistas y antagonistas colinrgicos del sistema nervioso autnomo. Agonistas y antagonistas de los
adrenorreceptores.

I.INTRODUCCIN

El Sistema Nervioso Autnomo (SNA) se encarga de regular funciones fisiolgicas en el

organismo que escapan de la voluntad del individuo como la respiracin, el movimiento
gastrointestinal, la regulacin de los latidos del corazn y la salivacin, entre otras. El SNA se
divide en simptico y parasimptico, muchos rganos son inervados por ambos sistemas y es
frecuentequelasaccionessimpticasyparasimpticasseopongan.

Elprincipalneurotransmisor(NT)delsistemasimpticoeslanoradrenalina(NA),stealllegara
susrganosefectoresactaenreceptoresdenominadosadrenorreceptores,conocidoscomo
y,decadaunodeellosseconocendostiposprincipales:1,2,1y2.

Porotraparte,elprincipalNTdelsistemaparasimpticoeslaacetilcolina(ACh)quienactaen
receptoresespecficosconocidoscomonicotnicosymuscarnicos.Lapresenciadeunagonista
adrenrgicoocolinrgicoenunmismotejidopuedegenerarefectosfisiolgicosdiferentes.

En esta prctica se analizarn los efectos fisiolgicos (contraccin o dilatacin) que genera la
administracindeunmismoagonistaendostejidosdiferentes.

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 FarmacologaII.GuindePrcticas.

II.OBJETIVOS

Losobjetivosdeestaprcticason:

1. Determinar el efecto farmacolgico de un agonista adrenrgico y de un agonista

colinrgicoenpreparacionesdetejidoaisladodeaortaytrqueaderata.
2. Analizarlasdiferentesaccionesdelosagonistasenlosdiversostejidosdeacuerdoasu
inervacin,tiposysubtiposdereceptoresquepresentan.

III.MATERIAL

a) Materialbiolgico
DosratasWistarhembrade200250gdepeso,conayunode12hylibreaccesoalagua

b) Materiales,cristalerayequipo
Vasodeprecipitadode1L
Pipetasgraduadasde1mL
6matracesaforadosde10mL
Estuchedediseccin
Placadeagitacin
Balanzaanaltica
PolgrafoBiopacSystemacopladoaunacomputadoraconelsoftwareAcqKnowledge
versin3.7

c) Reactivos
DisolucinKrebsHenseleit(KHS).
ComposicinenmM:NaCl118,KCl4.7,MgSO4.7H2O1.2,CaCl22.5,KH2PO41.2,NaHCO3
25,glucosa(C6H12O6)11.

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 FarmacologaII.GuindePrcticas.

Cantidadesdelassalesparapreparar1000mLdedisolucinKrebsHenseleit(KHS)

Dglucosa C6H12O6 1.998g

Sulfatodemagnesioheptahidratado MgSO4y7H2O 0.2956g
Dihidrogenofosfatodepotasio KH2PO4 0.1632g

Clorurodepotasio KCl 0.351g

Clorurodesodio NaCl 6.903g
Hidrgenocarbonatodesodio NaHCO3 2.1g
EDTAdisdicodihidratado C10H14O8N2Na2y2H2O 0.0117g
Clorurodecalciodihidratado CaCl2y2H2O 0.3677g

Se disuelven todas las sales, una por una, en aproximadamente 500 mL de agua
destilada. Disolviendo al ltimo el cloruro de calcio. Una vez disueltas las sales y sin
signosdeprecipitacinsellevaaunvolumende1000mLconaguadestilada.

La disolucin KHS deber tener un pH de 7.4 a 37C y se mantendr con burbujeo
constante de gas carbgeno (95% O2 y 5% CO2). Si presenta precipitacin deber
prepararsenuevamente.

DisolucionesdeCarbacol(1x104,3x105,1x105,3x106y1x106M).
PreparacindeladisolucinStock(1x103M).
Disolver 1.825 mg de Carbacol en agua destilada y aforar a 10 mL en un matraz
volumtrico.

Preparacindelasdisoluciones.
Una vez preparada la disolucin stock deber seguirse la serie de diluciones como se
muestraenelsiguienteesquema,utilizandomatracesaforadosde10mL:

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 FarmacologaII.GuindePrcticas.

1mL 1mL

1mL

1x104 M 1x105 M 1x106 M

0.3mL 1mL

Cadamatraz
debeaforarse a
Disol.Stock
10mL
1x103 M

3x105 M 3x106 M


Disoluciones de () Noradrenalina (1x104, 3x105, 1x105, 3x106 y 1x106 M, 1x107 M,
1x108M).
PreparacindeladisolucinStock(1x103M).
Disolver 3.193 mg de Bitartrato de Noradrenalina hidratada (Arterenol) en agua
destiladayaforara10mLenunmatrazvolumtrico.

Preparacindelasdisoluciones.
Una vez preparada la disolucin stock deber seguirse la serie de diluciones como se
muestraenelsiguienteesquema,utilizandomatracesaforadosde10mL:

1mL 1mL 1mL 1mL

1mL

1x104 M 1x105 M 1x106 M 1x107 M 1x108 M

0.3mL 1mL

Cadamatraz
debeaforarse a
Disol.Stock
10mL
1x103 M

3x105 M 3x106 M

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 FarmacologaII.GuindePrcticas.

Disolucionesde()Isoproterenol(1x104,3x105,1x105,3x106y1x106M).
PreparacindeladisolucinStock(1x103M).
Disolver2.447mgdeclorhidratode()Isoproterenolenaguadestiladayaforara10mL
enunmatrazvolumtrico.

Preparacindelasdisoluciones.
Una vez preparada la disolucin stock deber seguirse la serie de diluciones como se
muestraenelsiguienteesquema,utilizandomatracesaforadosde10mL:

1mL 1mL

1mL

1x104 M 1x105 M 1x106 M

0.3mL 1mL

Cadamatraz
debeaforarse a
Disol.Stock
10mL
1x103 M

3x105 M 3x106 M

IV.PROCEDIMIENTO

a)ManejodelPolgrafoBiopacSystem
Para el manejo adecuado del Polgrafo Biopac System por medio del software
AcqKnowledge,vaseelApndiceIdeestagua.

b)Diseccindelatrqueaderata
1) SacrificarlarataenlacmaradeCO2oporsobredosisdepentobarbital(eviteelusode
ladislocacincervicalporquepuedecausardaoaltejido).
2) Abrirelcuelloyrealizarladiseccindelatrquea.Lalocalizacindelatrqueasemuestra
enelsiguienteesquema.

13
 F
Farmacologa II.GuindePrcticas.

3) Disecarunalo
ongitudapro
oximadade 34cmdettrquea,lavaarlacondiso
olucinKHS..Sies
neecesarioretireeltejidoconjuntivoq
quelerodeaa.
4) Co
ortarsegme
entosdeaproximadamente23mmdelargoyccolocarlosendisolucin
nKHS,
co
onburbujeocontinuodeegascarbggeno.

c)Diseccindelaaortaderrata
1) Saacrificarlaraataenlacm
maradeCO2oporsobrredosisdep
pentobarbitaal(eviteelusode
ladislocacincervicalporrquepuedecausardao
oaltejido).
2) Ab
brirelabdom
menyrealizarladiseccindelaaorrta.Lalocalizzacindelaaortasemu
uestra
en
nelsiguienteesquema.

3) Disecarunalongitudaproximadade23cmde aorta,lavarlacondisolu
ucinKHS.R
Retire
co
ompletamen
nteeltejidoconjuntivoq
quelerodeaa,evitandod
daareltejid
do.

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 FarmacologaII.GuindePrcticas.

4) Cortarsegmentosdeaproximadamente23mmdelargoycolocarlosendisolucinKHS,
conburbujeocontinuodegascarbgeno.

d)Montajedepreparacin.
1) Cada preparacin se suspender en una cmara para rgano aislado con ganchos de
alambredeNicromel.Unodelosextremossefijaalacmarayelotroaltransductorde
fuerzaconectadoalPolgrafoBiopacSystem,deacuerdoalassiguientesfiguras:

Transductor

Hilo
Medio KHS
Anillos de
Nicromel
Gas carbgeno
Tejido

Cmara

2) Cada cmara deber contener 10 mL de solucin KHS con burbujeo constante de gas
carbgenoaunatemperaturade371C.
3) Lostejidossesometenaunatensininicial(aorta4gytrquea1.5grespectivamente)
dejndolosestabilizarpor20minutos,conunlavadointermedioalos10minutos.
4) Para aorta. Realizar 2 estimulaciones con 100 L de Noradrenalina (1x104 M) a
intervalosde20minutos,conunlavadointermedioalos10minutosDespusdecada
estimulacinselavaeltejidoconsolucinKHSdosvecesparaeliminarlaNoradrenalina.
5) Paratrquea.Realizar2estimulacionescon100LdeCarbacol(1x103M)aintervalos
de20minutos,conunlavadointermedioalos10minutosDespusdecadaestimulacin
selavaeltejidoconsolucinKHSdosvecesparaeliminaralCarbacol.
Nota:Laconcentracinrealenlacmaraderganoaisladoes100vecesmenordebidoa
ladilucin(1:100).

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 FarmacologaII.GuindePrcticas.

6) Elcronogramadelospasos2a4paraambostejidoseselsiguiente:

Tiempocorrido(min) Actividad
Inicio
0
(OprimirelbotnStart)
10 LavadoconKHS
Estimulacin1y
20
LavadoconKHS
30 LavadoconKHS
Estimulacin2y
40
LavadoconKHS
50 LavadoconKHS
60 LavadoconKHS
70 Iniciodelasevaluaciones

e)CurvaacumulativaconcentracinrespuestadelCarbacolentrqueaderata.
1) Estandoestableeltejido,seregistraunalneabasaldurante5minutosyseadicionan0.1
mL de Carbacol 1x106 M (disolucin 1). Las siguientes disoluciones se agregarn
sucesivamente en el momento en que la disolucin anterior alcance una meseta de
contraccin.

Disolucin ConcentracindeCarbacol
1 1x106M
2 3x106M
3 1x105M
4 3x105M
5 1x104M

2) DespusdeevaluarselavaeltejidopordosvecescondisolucinKHSdejandoreposar
porperiodosde10minutosentrecadauno.

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 FarmacologaII.GuindePrcticas.

e)CurvaacumulativaconcentracinrespuestadelNoradrenalinaenaortaderata.
1) Estandoestableeltejido,seregistraunalneabasaldurante5minutosyseadicionan0.1
mL de Carbacol 1x106 M (disolucin 1). Las siguientes disoluciones se agregarn
sucesivamente en el momento en que la disolucin anterior alcance una meseta de
contraccin.

Concentracinde
Disolucin
Noradrenalina
1 1x108M
2 1x107M
3 1x106M
4 3x106M
5 1x105M
6 3x105M
7 1x104M

2) DespusdeevaluarselavaeltejidopordosvecescondisolucinKHSdejandoreposar
porperiodosde10minutosentrecadauno.

f)CurvaacumulativaconcentracinrespuestadeCarbacolenaortaderata.
1) Estandoestableeltejido,seregistraunalneabasaldurante5minutosyseadicionan0.1
mL de Noradrenalina 1x104 M. Al alcanzar el mximo de contraccin de la
Noradrenalina,seagregarnsucesivamenteenelmomentoenqueladisolucinanterior
alcanceunamesetadecontraccinlassiguientesdisolucionesdeCarbacol.

Disolucin ConcentracindeCarbacol
1 1x106M
2 3x106M
3 1x105M
4 3x105M
5 1x104M

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 FarmacologaII.GuindePrcticas.

2) DespusdeevaluarselavaeltejidopordosvecescondisolucinKHSdejandoreposar
porperiodosde10minutosentrecadauno.

g)Curvaacumulativaconcentracinrespuestade()Isoproterenolentrqueaderata.
1) Estandoestableeltejido,seregistraunalneabasaldurante5minutosyseadicionan0.1
mLdeCarbacol1x103M.AlalcanzarelmximodecontraccindelaNoradrenalina,se
agregarn sucesivamente en el momento en que la disolucin anterior alcance una
mesetadecontraccinlassiguientesdisolucionesdeCarbacol.

Disolucin ConcentracindeIsoproterenol
1 1x106M
2 3x106M
3 1x105M
4 3x105M
5 1x104M

2) DespusdeevaluarselavaeltejidopordosvecescondisolucinKHSdejandoreposar
porperiodosde10minutosentrecadauno.
3) Se puede comprobar la relajacin de la trquea de rata administrando 100 L de
Aminofilinaaunaconcentracinde1x102M.

V.ANLISISDERESULTADOS

1. ParaanalizarlosdatosesnecesariodescargarelsoftwareAcqKnowledge3.7Demoenla
siguientedireccinelectrnica:
http://www.biopac.com/Demos.asp?did=4&PCDemoResearch=Y
Esnecesarioregistraseparadescargarlo,ydebeinstalarsecomoindicanlasinstrucciones
delsitioweb.

Conayudadelsoftwareydesuprofesordeberllenarelcuadrodedatosanexa.

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 FarmacologaII.GuindePrcticas.

EXPERIMENTO1.CURVACONCENTRACINRESPUESTADECARBACOLENTRQUEA
CONCENTRACIN MUESTRA/CANAL
NM. LOG[CONC(M)]
(M)CARBACOL 1 2 3 4

Basal

EXPERIMENTO2.CURVACONCENTRACINRESPUESTADENOREPINEFRINAENAORTA
CONCENTRACIN MUESTRA/CANAL
NM. LOG[CONC(M)]
(M)CARBACOL 1 2 3 4

Basal

EXPERIMENTO3.CURVACONCENTRACINRESPUESTADECARBACOLENAORTA
CONCENTRACIN MUESTRA/CANAL
NM. LOG[CONC(M)]
(M)CARBACOL 1 2 3 4
Basal

EXPERIMENTO4.CURVACONCENTRACINRESPUESTADEISOPROTERENOLENTRQUEA
CONCENTRACIN MUESTRA/CANAL
NM. LOG[CONC(M)]
(M)CARBACOL 1 2 3 4
Basal

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 FarmacologaII.GuindePrcticas.

2. Conlosdatosobtenidos:

a) Construirlascurvasconcentracinrespuestadelosagonistasenlosdiferentestejidos.
b) Determinarelmodeloalqueseajustanlosdatos.
c) CalcularlasCE50decontraccinparaelCarbacol(entrquea)yNoradrenalina(enaorta),
deacuerdoconmodelodeterminadoenelincisoanterior.
d) CalcularlasCE50derelajacinparaelCarbacol(enaorta)eIsoproterenol(entrquea),
deacuerdoconmodelodeterminadoenelincisoanterior.
e) Explicarclaramenteelporqudelosefectosdelassustanciasencadaunodelostejidos.

VI.BIBLIOGRAFA

Schwinghammer T y Kroboth P. (1988). Basic concepts in pharmacodynamic modeling.

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TallaridaR.(2000).Drugsinergismanddoseeffectdataanalysis.Chapman&Hall/CRC,
EUA.

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 FarmacologaII.GuindePrcticas.

3.Perfilneurofarmacolgicodeldiacepam.

Nmerodesesionessugeridas:2sesiones(ejecucinyanlisis).
TemasrelacionadoconelcursodeteoradeFarmacologaII:Fisiopatologayenfermedadesdelsistemanervioso
central,Frmacosneurolpticos.Frmacosantiepilpticos.

I.INTRODUCCIN

ElSistemaNerviosoCentral(SNC)secaracterizaporestarconformadoporunagrancantidadde
neuronasenelencfaloylamdulaespinal.Estasneuronassemantienenconectadasunascon
otras para generar impulsos elctricos que permiten la liberacin o inhibicin de
neurotransmisores(NT),loscualesparticipanenlahomeostasisdelSNC.DependiendodelNT
que se localice en las neuronas, estas redes neuronales se conocen como adrenrgicas,
serotoninrgicas,gabargicas,dopaminrgicasentreotras.

Cuandounadeestasredesneuronalesseveafectada,semodificalaliberacinoinhibicindel
principalNT.Porejemplo,silaneuronaesgabargicasemodificalaactividaddeGABA,yasea
queaumenteodisminuyasuconcentracin,estotraecomoconsecuenciaqueotrosNTsevean
afectadoscomolaserotonina(5HT)olanoradrenalina(NA)entreotros,generandodesordenes
enelSNC.

Laepilepsiaesundesordenneuronalquesecaracterizaporlapresenciadefocosepilpticos,es
decir, que una zona del cerebro ha tenido una modificacin en su red neuronal.
Particularmente, se observa un fenmeno conocido como convulsin, en donde el individuo
presenta movimientos descontrolados. Dependiendo de los movimientos, las convulsiones se
puedenclasificarenclnicas,tnicasyclnicotnicas.

21
 FarmacologaII.GuindePrcticas.

Para evaluar el efecto anticonvulsivo de los frmacos se utilizan modelos experimentales en

animales, en donde se debe inducir un fenmeno de convulsin. Existen modelos
experimentales qumicos y elctricos para inducir convulsiones; en el primer caso, se utilizan
sustancias qumicas como el pentilentetrazol. El Kidling es una prueba elctrica en donde se
inducenconvulsionesporunchoqueelctrico. Enamboscasosseadministralasustanciaque
tienepropiedadesanticonvulsivasyseobservaelretrasodelaaparicindelasconvulsioneso
bienquestasnosepresenten.

AlgunosfrmacosqueactanenelSNCademsdeejercersusefectosanticonvulsivospueden
generarneurotoxicidad,lacualsemanifiestaporprdidadelacoordinacinmotora.Laprueba
de RotaRod permite determinar la actividad motora de los animales, estos animales se hacen
caminarenuncilindroconmovimiento,losanimalesconcoordinacinmotoranormalpodrn
permanecer ms tiempo en movimiento que aquellos que han disminuido su actividad por la
administracindeunfrmacoqueactaenelSNC.

II.OBJETIVO

Losobjetivosdeestaprcticason:

1. Determinarlaactividaddeldiacepamenlasconvulsionesinducidasporpentilentetrazol
(PTZ)enratones.
2. Determinarlaactividaddeldiacepamsobrelacoordinacinmotoramediantelaprueba
deRotaRodenratones.
3. DeterminarlaactividaddeldiacepamsobrelaactividadexploratoriamedianteelCilindro
deExploracinenratones.

22
 FarmacologaII.GuindePrcticas.

III.MATERIAL

1. Materialbiolgico
30ratonesICRde2530gdepeso,conayunode12hylibreaccesoalagua

2. Materiales,cristalerayequipo
Seisjeringasde1mL
Doscajasdeacrlicotransparente
Rejilladealambre
Balanzagranatariaparaanimales
Cronmetro
Marcadorindelebledepuntagruesa
EquipoRotaRodcon5carriles,UgoBasile
Cilindrodevidriode30cmdealtoy15dedimetrointerno


3. Reactivos
Diacepam(0.0625,0.125,0.25,y0.5mg/mL).
Colocar0.8mLdeValium10(5mg/mL)enunvialyagregar7.2mLdeaguadestiladaya
continuacinserealizanlassiguientesdiluciones.
4mL 4mL 4mL

0.5mg/mL 0.25mg/mL 0.125mg/mL 0.0635mg/mL

Llevaraunvolumende8mLcadavialconaguadestilada


Pentilentetrazol,PTZ(12mg/mL).
Disuelva180mgdepentilentetrazolen15mLdeagua.

SolucinSalina0.9%
Disuelva45mgen5mLdeaguadestilada.

23
 F
Farmacologa II.GuindePrcticas.

III.PROCEDIMIENTO
O.

a) Evvaluacinde
elacoordinaacinmotorra:Pruebad
deRotaRod

EquipoR
RotaRodcon5
5carriles.

1. VeerificarqueelRotaRodeestecalibrad
doaunavelocidadde16
6rpm
2. En
ntrenamientto de los raatones. Colo
ocar a cadaa ratn en el RotaRod
d dejando que el
cilindrogire. Eltiempoquedebenpeermanecerlosratonesssincaeresd
de2min.En
ncaso
dee que caigaan se colocaan nuevameente, hasta que puedan
n mantenersse durante los 2
m
minutos.
3. Dividirlos30ratonesen5gruposdee6individuo
oscadauno.Administrarracadagrup
pode
raatoneslassigguientesdossisdeDiacep
pamporvaintraperiton
neal:

Diacepam
Grup
poderatone
es
Dosiis(mg/kg)
1(control)
1 0(Sol.Salina)
2 0.625
3 1.25
4 2.5
5 5

4. LlevaracabolapruebadeRotaRodacadaratn
ndecadagru
uporegistrandoeltiemp
poen
cu ecen en movimiento co
ual permane onstante sob
bre el cilindrro, hasta un
n mximo dee 180
seegundos.Repetirelproccedimientoccada10minutosacadaratnduran
nte30minuttos.

24
 FarmacologaII.GuindePrcticas.

b) Evaluacindelaactividadexploratoria
11 cm d.i.

30 cm

Cilindroutilizadoenlapruebadeexploracin.

1. Cerciresedequeelcilindrodevidrioestlimpioyseco.
2. Coloqueelcilindrosobreuntrozodepapelmayoraldimetrodelcilindro.
3. Pasados 35 minutos despus de haber administrado el diacepam o la solucin salina
introduzcaalanimalenelcilindrodeexploracin.
4. Pongaafuncionarelcronmetroyregistreelnmerodelevantamientosquerealizael
animalenunperodode5minutos.Slounapersonadebercuantificarestaconducta
paraqueseananalizadosbajoelmismocriterio.
5. Limpie con una franela hmeda con solucin hidroalcohlica el interior del cilindro y
cambieelpapel.
6. Contineconelmismoprocedimientoparalos5animalesrestantes.Noolvidelimpiarel
cilindroentrecadaprueba.
7. Elanimalquerecibilasolucinsalinasetomacomocontrol.

c) Evaluacindelaactividadanticonvulsivante
1. Transcurridos40minutosdespusdelaadministracindeldiacepam,seadministrapor
va intraperitoneal, pentilentetrazol a una dosis de 120 mg/kg. Administre del lado
contrariodelabdomenenelcualadministreldiacepam.
2. Inmediatamente despus de la administracin, active el cronmetro e introduzca el
ratnenunacajadeacrlicoymidaeltiempoenelcualaparecelaprimeraconvulsin
clnicaylaprimeraconvulsintnica.

25
 FarmacologaII.GuindePrcticas.

3. De no presentarse convulsiones por un periodo de 30 minutos despus de la

administracindelpentilentetrazol,seconsideraralratncomoprotegido.

4. Consideracionestcnicas:

1. Nohacerruidonimovimientosbruscosduranteeldesarrollodelexperimento,yaquese
estevaluandounaconductaquepuedeserfcilmentealteradaporfactoresexternos.

V.ANLISISDERESULTADOS

1. Capturelosdatosenloscuadrosquesepresentanacontinuacin.

CAPTURADEDATOSDELEFECTODELDIACEPAMENELSNC.

TiempoAdmon. Tiempocorrido Tiempoen Tiempocorrido Tiempoen Tiempocorrido Tiempoen

Ratn Dosis(mg/kg)
(min) (min) RotaRod(s) (min) RotaRod(s) (min) RotaRod(s)

0
1 0 10 20 30
(sol.Salina)

2 0.625 6 16 26 36

3 1.25 12 22 32 42

4 2.5 18 28 38 48

5 5 24 34 44 54

CAPTURADEDATOSDELEFECTODELDIACEPAMENELSNC.
Tiempode Latenciade Latenciade
Salidadelcilindro Nmerode
Ratn Dosis(mg/kg) introduccinal Admn.PTZ convulciones convulsiones Muerte(s/no)
(min) levantamientos
cilindro(min) clnicas(s) tnicas(s)
0
1 33 38 40
(sol.Salina)

2 0.625 39 44 46

3 1.25 45 50 52

4 2.5 51 56 58

5 5 57 62 64

26
 FarmacologaII.GuindePrcticas.

2. ExperimentodeRotaRod.
a) Grafiqueelcursotemporaldelefectosobrelacoordinacinmotoradecadaunade
lasconcentracionesdelDiacepam.
b) Determine el tiempo y las dosis de Diacepam que estadsticamente tienen efecto
sobrelacoordinacinmotora.
c) Calcule la DE50 del Diacepam sobre la coordinacin motora al tiempo de mximo
efecto.

3. ExperimentodelCilindrodeExploracin.
a) Grafique la curva dosis respuesta del efecto sobre la actividad exploratoria
(sedacin)delDiacepam.
b) CalculelaDE50delDiacepamsobrelainhibicindelaactividadexploratoria.

4. Experimentodeefectoanticonvulsivante.
a) Grafique el tiempo de aparicin de las convulsiones clnicas y tnicas (latencia)
contradosis.
b) CalculelaDE50delDiacepamsobrelainhibicindelaactividadexploratoria.

5. ConcluyasobreelefectodelDiacepamsobreelSistemaNerviosoCentral.

VI.BIBLIOGRAFA

1. JonesByRobertsD.(1968).Thequantiativemeasurementofmotorincoordinationin
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20(4):302304.

2. GonzlezTrujano M, Navarrete A, Reyes B y Hong E. (1998). Some pharmacologycal

effects of the etanol extract of leaves of Annona diversifolia on the central nervous
Systeminmice.PhytotherapyResearch,12:600602.

27
 FarmacologaII.GuindePrcticas.

4.ValoracindelefectoantinociceptivodeAAINEs.

Nmerodesesionessugeridas:2sesiones(ejecucinyanlisis).
TemasrelacionadoconelcursodeteoradeFarmacologaII:Analgsicos,antiinflamatorios.

I.INTRODUCCIN

Eldoloresunasensacinquetodoshemosexperimentado,eslaprincipalcausaporlaquese
acudealmdicoyatravsdesteseidentificanlaspatologasqueaquejanalserhumano.El
doloresunestadosubjetivoyaqueestcondicionadoafactoressocioculturales,ambientalesy
psicolgicos,esporelloquelamismaintensidaddedolorlapercibimosdiferente.

Cuando un estmulo nocivo de naturaleza trmica (quemadura), mecnica (golpe) o qumica
(contacto con sustancias irritantes) se percibe en el cuerpo, se genera un proceso conocido
comonocicepcin.Lanocicepcineselmecanismofisiolgicodeldolor,peroesteprocesonova
acompaadodefactoressocioculturales,ambientalesypsicolgicos.

Cuando se percibe un estmulo nocivo se activan receptores localizados en las terminaciones
nerviosas perifricas, estos receptores se conocen como nociceptores. Al activarse los
nociceptores se liberan neurotransmisores (NT) como las prostaglandinas (PGs), la serotonina
(5HT), la bradicinina (BK), el xido ntrico (NO) y algunos iones (potasio y sodio). Estos NT
adems de participar en el proceso nociceptivo (dolor), participan en la generacin de
inflamacin, es por ello que el dolor puede estar acompaado de un proceso inflamatorio. El
estimulonocivosetraduceapotencialesdeaccinquesetransmitenhacialamdulaespinal
porlosnerviosperifricos.EnlamdulaespinalseliberanmsNTcomolasustanciaP(SP),la5
HT, el NO, las PGs, el glutamato (Glu) y algunos pptidos que participan en la transmisin de
esteestmulohaciaeltlamoylacorteza,endondesegeneralapercepcindeldolor.

28
 FarmacologaII.GuindePrcticas.

Con la finalidad de evaluar el efecto de frmacos que puedan contrarrestar el proceso

nociceptivo se han desarrollado modelos experimentales en animales, en donde se establece
unacondicinnociceptiva.Elmodelodeestiramientoabdominalpermiteevaluarelefectode
frmacosquepuedantenerutilidadeneldolordetipoinflamatorio.

El diclofenaco es un frmaco que pertenece al grupo de los analgsicos antiinflamatorios no

esteroideos (AAINEs). El mecanismo de accin de este frmaco es inhibir a la enzima
ciclooxigenasa(COX),estaenzimaesresponsabledelabiosntesisdelasPGs,quienparticipaen
latransmisindelanocicepcin.

II.OBJETIVO

1. Evaluarelefectoantinociceptivodediclofenacoenlapruebadeestiramientoabdominal
enratn.

2. Comprenderlautilidaddeunapruebaconductualparaevaluarunprocesonociceptivo.

III.MATERIAL

1. Materialbiolgico
30ratonesmachosICRde2530gdepeso,conayunode12hylibreaccesoalagua

2. Materiales,cristalerayequipo
2cajasdeacrlico
Jeringasde1mLconagujadelnmero27
Balanzaparaanimales
Marcadordetintaindeleble

29
 FarmacologaII.GuindePrcticas.

Cronmetro
6frascosvialesde10mL
Vasodeprecipitadode25mL

3. Reactivos
cidoacticoal0.6%.
Adicionar 10 mL de agua destilada al vaso de precipitado de 50 mL, posteriormente
adicionar0.18mLdecidoacticoglacialycompletarcon19.82mLdeaguadestilada.
Cadaequipotomar5mLdeestasolucinenunvial,etiquetndolocomocidoactico
al0.6%.

Diclofenaco(0.1,0.3,1y3mg/mL).
Pese15mgdediclofenaco,colqueloenelvialyadicione5mLdesolucinsalina0.9%,
paraobtenerladisolucinde3mg/mL.Acontinuacinrealicelassiguientesdiluciones
paraobtenerlasdemsconcentraciones.

1mL 0.3mL 0.1mL

3mg/mL

1mg/mL 0.3mg/mL 0.1mg/mL

Llevaraunvolumende3mLcadavial
consolucinsalina

Lassolucionesdebernetiquetarseycolocarseenunlugaradecuadoparaquetodoslos
equipostenganaccesoaellas.

30
 FarmacologaII.GuindePrcticas.

IV.PROCEDIMIENTO.

a) Administracindefrmacos

Eldiclofenacoylasolucinsalinaseadministranenlacavidadabdominalderechadelratn,
15 minutos despus se administra la solucin de cido actico en la cavidad abdominal
izquierdacomosemuestraenlasiguientefigura.

Solucinsalina
odiclofenaco

cidoactico

Sitiodeadministracinintraperitonealdeldiclofenaco,solucinsalinay
delcidoacticoenlapruebadeestiramientoabdominal.

b) Pruebadeestiramientoabdominal

1. Los ratones se dividen en 6 grupos de 5 ratones cada uno. Cada equipo de
laboratoriorecibirungrupoymarcaralosratonesdel1al5.
2. Seadministrasolucin salina(0.9%)porvaintraperitonealalratnnmero1(0.1
mL/10gdepeso),posteriormentesecolocaalanimalenunacajadeacrlicolimpiay
seca. Se deja durante 15 minutos y posteriormente se administra el cido actico
porvaintraperitoneal,inmediatamentesehacefuncionaralcronmetro.
3. Cada 5 minutos durante 20 minutos se registrar el nmero de estiramientos y/o
contorsionesquepresenteelratndurante20minutos.Elnmerodeestiramientos
no es acumulativo, es decir, el nmero de estiramientos y/o contorsiones es
independientecada5minutos.Losdatosseregistranenloscuadrosdedatos.

31
 FarmacologaII.GuindePrcticas.

4. Despusdelaadministracindesolucinsalinaseadministraeldiclofenacoendosis
crecientes 1, 3, 10 y 30 mg/kg a los ratones marcados como 2, 3, 4 y 5
respectivamente.
5. De acuerdo a los lineamientos ticos nacionales e internacionales, al finalizar el
experimento los animales deben ser sacrificados. No se puede conservar a los
animalesyaqueastosselesadministrunestmulonociceptivo(cidoacticoal
0.6%),elcualgeneradolor.

c) Consideracionestcnicas:

2. Nohacerruidoduranteelexperimento,yaqueseestevaluandounaconductaque
puedeserfcilmentealteradaporfactoresexternos.
3. Serecomiendaquealmenosdosotrespersonasobservenalmismotiempoelratn
ya que se est determinando un parmetro subjetivo, el cual depende del
observador.
4. Es muy importante administrar primero al control con solucin salina, con la
finalidad de caracterizar la respuesta que se va a evaluar (estiramientos y/o
contorsiones). Posteriormente administrar las dosis de manera creciente del
diclofenaco.
5. Losanimalesdebenambientarseenlacajaenlacualserealizarlaobservacinde
estiramientosy/ocontorsiones.
6. Es recomendable no colocar un ratn en una caja que previamente haba sido
utilizadaporotroratn.
7. Siustedtiene2cajasdeacrlico,mientrascuentaelnmerodeestiramientosdeun
ratnenlacaja1,puedeirambientandoalsiguienteratnenlacaja2.

V.ANLISISDERESULTADOS

1. Capturelosdatosenloscuadrosquesepresentanacontinuacin.

32
 FarmacologaII.GuindePrcticas.

Nmerodeestiramientosgeneradosenlapruebadeestiramientoabdominalporadministracindecidoactico

Control(solucinsalina)
Nmerodeestiramientos(porequipo)
Tiempo(min) Total Promedio EEM
1 2 3 4 5 6
0
5
10
15
20
Total
Promedio
EEM
Diclofenaco(1mg/kg)
Nmerodeestiramientos(porequipo)
Tiempo(min) Total Promedio EEM
1 2 3 4 5 6
0
5
10
15
20
Total
Promedio
EEM
Diclofenaco(3mg/kg)
Nmerodeestiramientos(porequipo)
Tiempo(min) Total Promedio EEM
1 2 3 4 5 6
0
5
10
15
20
Total
Promedio
EEM
Diclofenaco(10mg/kg)
Nmerodeestiramientos(porequipo)
Tiempo(min) Total Promedio EEM
1 2 3 4 5 6
0
5
10
15
20
Total
Promedio
EEM
Diclofenaco(30mg/kg)
Nmerodeestiramientos(porequipo)
Tiempo(min) Total Promedio EEM
1 2 3 4 5 6
0
5
10
15
20
Total
Promedio
EEM

33
 FarmacologaII.GuindePrcticas.

2. Realizaruncursotemporal(nmerodeestiramientosvstiempo),graficandoelpromedio
de estiramientos realizados en cada tiempo por los 6 ratones evaluados. En la misma
grficadebercolocarelcontroldesolucinsalinaylascuatrodosisdediclofenaco.
3. Realizarunagrficadebarrasendondecoloquelos5gruposevaluadosyenelejeYel
promediodelnmerototaldeestiramientoscorrespondientea6animalesporgrupo.En
estagrficadeberanotarladiferenciaestadsticacorrespondiente.
4. DeterminarlaDE50delaactividadantinociceptivadeldiclofenaco.

VI.BIBLIOGRAFA

1. CrdenasE,CaballeroEyHonoratoJ.(2000)Analgsicosnoopiceoseneltratamiento
delcncer.RevCancer,14(5):184189.
2. Gebhart GF. (2000) J.J. Bonica Lecture2000: Physiology, Pathophysiology, and
PharmacologyofVisceralPain.RegionalAnesthesiaandPainMedicine,25(6):632638.
3. LeBarsD,GozariuMyCaddenS.(2001)AnimalModelsofNociception.PharmacolRev,
53:597652.
4. Mazaro J, Solano R y Herrero J. (2000) El efecto analgsico agudo de los
antiinflamatoriosnoesteroideossedebealbloqueodelaciclooxigenasa1.RevSocEsp
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5. OrtegaA,RocaAyMicJ.(2002)Modelosanimalesdedolor:unavisincrtica.RevSoc
EspDolor,9:447453.
6. Salido M y Absolo L. (2001) Baares A. Revisin de los antiinflamatorios inhibidores
selectivosdelaciclooxigenasa2.InformacinTeraputicadelSistemaNacionaldeSalud,
25:4652

34
 FarmacologaII.GuindePrcticas.

APNDICEI.InstructivoparaelusodelpolgrafoBiopac
SystemMP100.

I.MATERIALESYREACTIVOS.
PolgrafoBiopacSystemMP100ACE
Gascarbgeno(oxigeno95%dixidodecarbono5%).
DisolucinKrebsHenseleit(KHS)

DisolucinKrebsHenseleit(KHS)
Dglucosa C6H12O6 1.998g
Sulfatodemagnesioheptahidratado MgSO4y7H2O 0.2956g
Dihidrogenofosfatodepotasio KH2PO4 0.1632g
Clorurodepotasio KCl 0.351g
Clorurodesodio NaCl 6.903g
Hidrgenocarbonatodesodio NaHCO3 2.1g
EDTAdisdicodihidratado C10H14O8N2Na2y2H2O 0.0117g
Clorurodecalciodihidratado CaCl2y2H2O 0.3677g

Preparacin: Se disuelven todas las sales en aproximadamente 500 mL de agua

destilada.DisolviendoenltimotrminoalClorurodecalcio.Unavezdisueltaslassales
ysinsignosdeprecipitacinsellevaaunvolumende1000mLconaguadestilada.

DisolucindeAcetilcolina3x105M
DisolucindeNorepinefrina1x106M
DisolucindeCarbacol1x104M

35
 F
Farmacologa II.GuindePrcticas.

II.PROCEEDIMIENTO.

A.Calibracin
ndelpolgraafo.
1..Severificaq
quetodoslo
oscanalesesstnfirmementeconecttadosyajusttados.

2..Seenciendelacomputadorayelpolgrafoopriimiendoelb
botnenlap
posicinON..

3..Severifica queelnivelldeaguadeelbaorecirrculadorcub
bralaresisteenciaylabo
omba.
Seeenciendeyydejaestab
bilizarlatem
mperaturaen
n371C.Esstebaopro
oporcionaellflujo
deeaguaquem
mantienelatemperaturadeladisolucinKHSadichatemperatura.

4..Enlapantalladelacom
mputadoraseseleccionaaelicono

36
 FarmacologaII.GuindePrcticas.

para iniciar el programa AcqKnowledge, el cual registra los datos provenientes del
Polgrafo.

5.Alcomenzarelprogramaseabrelaventanaqueseilustraenseguida.

6. Para comenzar la configuracin del polgrafo se selecciona en el men la opcin

MP100,yposteriormentelaopcinSetupChannelsquenosabrirunaventanaemergente.

37
 FarmacologaII.GuindePrcticas.

7. En la ventana emergente Input Channels, se activan los canales que se utilizarn

seleccionandolascasillasAcquire,PlotyValuesconparacadacanalAn.

8.Paralacalibracindecadacanalseseleccionaprimeroelcanal yseoprimeel
botn conelcualaparecerlasiguienteventanaemergente.

9.EnlascasillasScalevaluesecolocan0(cero)y2(dos)yenUnitssecolocag(gramos)
comosemuestraacontinuacin.

38
 FarmacologaII.GuindePrcticas.

10.ConelvalorScalevalue=0,seoprimeelbotn yelprogramaautomticamente
calcularaelvalorInputvoltscorrespondientea0g(cero).ConelvalorScalevalue=2,se

colocaunapesade2gramossobreeltransductoryseoprimeelbotn ,elprograma
entonces, automticamente calcular el valor Input volts correspondiente a 2 g (dos
gramos).AlterminarseoprimeelbotnOK.
Esteprocedimientoserepiteconcadacanalqueseutilizar.

11. Continuando con la calibracin, se selecciona en el men la opcin MP100, y

posteriormentelaopcinSetupAcquisition.

12.AlseleccionarlaopcinSetupAcquisitionseabrirlasiguientepantallaemergente.

39
 FarmacologaII.GuindePrcticas.

13.EnlapantallaemergenteSetupAcquisition,seseleccionarlasopcionesRecordand
SaveoncetoDiskacquisition.PosteriormenteseseleccionarAcquisitionSampleRate
en 0.5 1.0 samples /second, y en Total lengh se seleccionar el mximo en horas,
comosemuestraacontinuacin.

14.ElPolgrafoyaestcalibradoysepuedeseguirconelmontajedeltejido.

B.Montajedeltejido.

1.AntesdemontareltejidoseseleccionaenelsoftwareAcqKnowledgeseseleccionaen
elmenlaopcinMP100,yposteriormentelaopcinShowInputValues.

40
 FarmacologaII.GuindePrcticas.

2.Alseleccionarnosabrirunaventanaemergentequenosmuestralosvaloresquese
registranenelPolgrafo.

En la ventana emergente se oprime el botn n y despus el botn Options. En esta

ltima ventana se seleccionan Channel numbers, Units y Values, y el tamao de letra
adecuadoparasuvisualizacin(serecomiendade1418puntos).Alterminarseoprime
elbotnOK.

41
 FarmacologaII.GuindePrcticas.

3.Serealizaladiseccindeltejidoautilizardeacuerdoaloreportadoenlaliteratura.En
casodeleonotrqueadecobayooaortaderataeltejidosecortarenanillosparasu
montaje.

4.ParaaortaytraqueeltejidoessujetadopormediodeganchosdealambreNicromel
comosemuestraenlafigura.

Hilo
Anillos de
Nicromel

Tejido

Paraleoneltejidoesmontadodeacuerdoalasiguientefigura,insertandoeltejidoen
losganchos:

Hilo
Anillos de
Nicromel

Tejido

5.Losganchosjuntoconeltejidosoncolocadosdentrodelacmaraderganoaislado
previamente llena con KHS y con burbujeo constante de gas carbgeno, como se
muestraacontinuacin.

42
 FarmacologaII.GuindePrcticas.

Transductor

Medio KHS

Gas carbgeno

Cmara

6. Se le da una tensin a cada tejido de cada cmara, por medio del tensor del
transductordeacuerdoconelsiguientecuadro.

Tejido Tensin
Aortaderata 4.0gramos
Trqueadecobayo 1.5gramos
leonderata 1.0gramos

7.SeoprimeelbotnStartparacomenzarelregistrodelexperimento.

43
 FarmacologaII.GuindePrcticas.

8.AloprimirelbotnStart,comenzarelregistrocomosemuestraacontinuacin.

9.Parapersonalizarlasopcionesdevisualizacinserecomiendaconsultarelsiguiente
cuadro.

BOTN NOMBREDELBOTN EFECTO

ScopeMode

(muestratodoslos
canalesjuntos)

ChartMode

(muestracadacanal
porseparado)

44
 FarmacologaII.GuindePrcticas.

Show/HideJournal

(Muestra/ocultala
ventanade
anotacionesenlaparte
inferior)

Show/HideMarkers

(Muestra/ocultala
barrademarcadores
deevento.Para
agregarunmarcadorse
oprimelateclaF9)

Show/HideGrid

(Muestra/ocultala
rejilla)

SetScreenVerticalAxis

Oprimir
(Cambialavisualizacin
sobreeleje
delejeY.Se
Y
recomiendaunScale
Setting=1g)

SetScreenHorizontal
Axis
Oprimir
sobreeleje (Cambialavisualizacin
X delejeX.Se
recomiendaunScale=
15minutes)

45
 FarmacologaII.GuindePrcticas.

C.Estimulacindeltejidoparaelexperimento.

1. Una vez montados los tejidos se proceder a su estimulacin de acuerdo con el

siguientecuadro.

Sustanciapara
Tejido Concentracin
estimulacin
Aortaderata Norepinefrina 1x106M
Traquedecobayo Acetilcolina 3x105M

leonderata Carbacol 1X104M

2.Elcronogramadeestimulacinylavadodelostejidosserealizarcomosigue.

Tiempocorrido
Actividad
(min)
0 Inicio(OprimirelbotnStart)
15 LavadoconKHS
30 Estimulacin1yLavadoconKHS
40 LavadoconKHS
50 Estimulacin2yLavadoconKHS
60 LavadoconKHS
70 LavadoconKHS
80 Iniciodelasevaluaciones

3.Enelminuto80,sepuedeiniciarlaevaluacindelassustanciasdeacuerdoalo
reportadoenlaliteraturayalosobjetivosestablecidos.

46
 FarmacologaII.GuindePrcticas.

III.BIBLIOGRAFA

Estrada S, et al. (1999). Nitric oxide/cGMP mediates the spasmolytic action of 3,4'
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47