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INTRODUCCIN
El DNA es una biomacromolcula que contiene informacin, la cual dirige
el funcionamiento de las clulas y que se transmite a la progenie.
Consiste en una secuencia especfica de bases nitrogenadas.
El DNA est formado por dos cadenas de polinucletidos enrrolladas una
alrededor de la otra para formar una doble hlice. Cada nucletido,
monmero del DNA est formado por una base nitrogenada (prica o
pirimdica), un azcar (desoxirribosa) y fosfato. Los mononucletidos
estn unidos mediante enlaces fosfodister. Estos enlaces unen el grupo
5hidroxilo de la desoxirribosa de un nucletido con el grupo 3 hidroxilo
de otro nucletido mediante un grupo fosfato. La orientacin
antiparalela de las 2 cadenas de polinucletidos permite que se formen
enlaces de hidrgeno entre las bases nitrogenadas que estn orientadas
hacia el interior de la hlice, considerando as 2 clases de apareamiento
de bases en el DNA: adenina (purina) se aparea con la timina
(pirimidina) mediante 2 puentes de hidrgeno, y la guanina (purina) se
aparea con la citosina (pirimidina) mediante 3 puentes de hidrgeno.
El DNA es una molcula relativamente inerte desde el punto de vista
qumico, contribuyendo a la estabilidad de su estructura helicoidal
diversas clases de enlaces no covalentes:
1. Interacciones hidrofbicas El agrupamiento de los componentes
de las bases de los nucletidos dentro de la doble hlice es un
factor estabilizador en la macromolcula tridimensional debido a
que minimiza sus interacciones con el agua.
2. Enlaces de hidrgeno El efecto cremallera acumulativo de los
puentes de hidrgeno formados entre las bases nitrogenadas
mantiene a las cadenas en la orientacin complementaria
correcta.
3. Apilamiento de bases Una vez que las cadenas antiparalelas se
han acercado mediante apareamiento de bases, el apilamiento
paralelo de las bases heterocclicas aproximadamente planas
estabiliza las molculas debido al efecto acumulativo de fuerzas
de Van der Waals.
4. Interacciones eletrostticas La superficie externa del DNA que se
denomina esqueleto azcar fosfato, posee grupos fosfato de carga
negativa. La repulsin entre los grupos fosfato cercanos se
minimiza por los efectos de cationes divalentes y molculas
policatinicas1
En clulas procariticas el DNA est localizado en un nucloide que no
est separado del resto de la clula por una membrana.
El aislamiento de DNA es una tcnica esencial en biologa molecular que
se ha vuelto muy importante con la demanda en incremento de
construccin de genomas, secuenciacin y anlisis PCR en laboratorios
de investigacin. El aislamiento es el primer paso en el estudio de
secuencias especficas de DNA, en el anlisis estructural del genoma y la
expresin de genes. La cantidad, calidad e integridad del DNA afectar
directamente estos resultados.
El propsito de aislar DNA es separarlo del resto de componentes
celulares, resultando en una preparacin homognea que represente la
informacin gentica completa contenida dentro de una clula2.
Para aislar este componente macromolecular de clulas bacterianas se
deben cumplir 3 aspectos generales:
1. Romper de manera eficiente tanto la pared celular, como la
membrana de la bacteria.
2. Trabajar bajo condiciones que inhiban enzimas degradativas como
las nucleasas liberadas durante la ruptura de la clula.
3. Emplear un procedimiento fraccionario que separe el DNA de otros
componentes celulares, en una pureza y rendimiento
3
satisfactorios .
Una vez obtenido el DNA es importante caracterizarlo y determinar el
rendimiento mediante espectrofotometra. Una caracterstica del DNA es
que absorbe luz en el rango ultravioleta a 260 nm y se puede estimar su
concentracin en esta longitud de onda.
Para estimar la pureza del DNA se considera una proporcin de la
absorbancia a 260 nm y 280 nm o 230 nm, que es en donde absorben
luz las protenas y los enlaces peptdicos respectivamente. Esta
proporcin debe ser cercana a 1.8 para que se considere un DNA puro4.
OBJETIVOS
METODOLOGA
As260 nm Dnde:
c
Ae b c = Concentracin (g/mL)
RESULTADOS
1.24
1.19
1.14
1.04
0.99
0.94
65 70 75 80 85
Temperatura C
DISCUSIONES
REFERENCIAS