Universidad de San Carlos de Guatemala Laboratorio da Mircoles

Facultad de Ciencias Qumicas y Farmacia Auxiliar: Lilia Zea

Escuela de Qumica Biolgica
Departamento de Bioqumica.

Informe De Distribucin De Aminotransferasas En Tejido De Rata

Bioqumica II
(Mircoles 12 y 19 de Octubre de 2011)

200410868 Garry Piedra Santa Domnguez Q.B.

200917882 Johnny Emmanuel Prez de Len Q.B.

OBJETIVOS:
Determinar la actividad enzimtica de la alanina aminotransferasa (ALAT) en distintos
rganos de rata.
Emplear un mtodo colorimtrico de Reitman y Frankel para determinar la actividad de
la alanina aminotransferasa.

PROCEDIMIENTO
Para la formacin de piruvato a partir de la ALAT se homogenizo cada rgano fresco en una solucin
tampn de fosfato utilizando un volumen igual a tras veces el peso del rgano. Se filtro el homogenizado
y centrifugado por 10 min seguidamente se coloco el sobrenadante en una probeta y se agrego el tampn
fosfato para obtener 10 g de cada rgano por cada 100 ml y este se conservo en hielo, se tomo una
alcuota de sobrenadante y se calent por 5 min y a un tubo previamente incubado a 37c se le agrego un
ml del que se calent y se mezclo y permaneci en el bao mara a 37c y a otro tubo se le agrego la
misma cantidad de sobrenadante solo que no se incubo ni permaneci en el bao mara este sera el
control. Despus de 45 min se le agrego a cada tubo alcohol al 95% frio y se mantuvieron los tubos en
hielo hasta que apareci el precipitado luego se centrifugo por 5 min, posteriormente se coloco 2 ml de
cada sobrenadante en tubos separados y se congelaron hasta el otro da de laboratorio.
Para la determinacin por espectrofotometra de la alanina aminotransferasa se realizo una serie de tubos
con 0.1 ml de sobrenadante congelado y 0.9 ml de agua y se preparo la curva de calibracin. Sele agrego
a todos los tubos una solucin de 2,4-dinitrofenilhidrazina y se mezclo por 20 min, seguidamente se le
agrego 2 ml de NaOH y se dejo reposar por 10 min ya finalmente se leyeron los tubos a 546 nm
utilizando el blanco para colocar el cero.

RESULTADOS:
Grafica No. 1: Curva de Calibracin para la determinacin espectrofotomtrica de Alanina-
aminotranseferasa.
Curva de Calibracion
1.2
1
0.8
0.6
Absorv ancia
0.4
0.2
0

0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2

[P] mM

Datos experimentales obtenidos en el laboratorio de bioqumica II edificio T-12 de la USAC

Grafica No. 2: Concentracin de piruvato
Tabla No. 1: Concentracin y
en rganos Absorbencia de Corazn, Hgado y
experimentales y control de
corazn, hgado y Rin experimental y control. Rin.
No. rgano. [P] mM Abs.
1 Corazn E. 0.44 0.284
2 Corazn C. 0.49 0.353
3 Hgado E. 0.45 0.292
4 Hgado C. 0.42 0.249
5 Rin E. 0.44 0.289
6 Rin C. 0.41 0.241

Concentracion de Organos Experimentales

0.4 0.35
0.29
0.29
0.3 0.25
0.24
0.28

0.2
Abs.
Absorv ancia
0.1 Linear (Abs.)

0.4 0.42 0.44 0.46 0.48 0.5

[P] mM

Datos experimentales obtenidos en el laboratorio de bioqumica II edificio T-12 de la USAC.

Grafica No. 3: Concentracin de piruvato en rganos experimentales y control de corazn,

hgado y Rin.
Concentracion de Piruvato en organos
experimentales y control
0.5

0.45

Axis Title [P] mM

0.4

0.35

0 1 2 3 4 5 6 7

Axis Title

Datos experimentales obtenidos en el laboratorio de bioqumica II edificio T-12 de la USAC. (Ver Tabla No. 1)

Tabla No. 2: Concentracin, Absorbancia y mCatales por

gramo de Corazn, Hgado y Rin experimental y
control.
[Piruvato] Abs. (Abs. E. mCatales/g
No. rgano.
mM Abs. C.) rgano.
1 Corazn 0.20 -0.069 1.44x10-6
3 Hgado 0.28 0.043 2.11x10-6
5 Rin 0.28 0.048 1.93x10-6
Datos experimentales obtenidos
en el laboratorio de bioqumica II edificio T-12 de la USAC.

DISCUSIN:
 Una de las maneras mas simples de determinar la tasa de actividad de la Alanina-
aminotransferasa y de su produccin de alanina o glutamato es a travs de la determinacin
espectrofotomtrica de piruvato ya que la reaccin catalizada por esta aminotranseferasa da
como resultado este producto a travs de la reaccin -cetoglutarato + L-alanina Glutamato
+ Piruvato. En el laboratorio se determino la tasa de reaccin de la Alanina-aminotransferasa
midiendo la cantidad de piruvato formado en rganos como Corazn, Hgado y Rin a travs de
espectrofotometra midiendo su concentracin en mili-Moles. Las aminotransferasas son encimas
que catalizan la transferencia de grupos amino entre dos molculas, como en este caso, el -
cetoglutarato y la Alanina para ser dirigidas al ciclo del citrato o para la sntesis de aminocidos a
partir de oxocidos. Como se observa en la Tabla No. 2 el rgano con menor produccin de
piruvato es el Corazn con 0.2 y esto se debe a que hay poca actividad de la aminotransferasa en
el citosol de las clulas del miocardio por lo que la tasa de actividad por segundo es tambin
poca en comparacin con el hgado y Rin. En el Hgado y el Rin, tal como se esperaba y se
observa en las graficas 2 y 3 en relacin a la curva de calibracin (Grafica 1), se puede observar
que existe una similitud en la tasa de actividad de la aminotransferasa y esto se debe a que son
los rganos donde existe la mayor cantidad de sntesis de nuevos aminocidos que se forman a
travs de la transferencia de grupos amino ya que aqu se da el reciclaje, para ser utilizados en el
ciclo del acido ctrico o en la produccin de nuevos aminocidos, y eliminacin de grupos amino
para mantener al cuerpo en los niveles tolerables y evitar la intoxicacin por amoniaco o amonio.
En la Grafica No. 3 se puede observar como el comportamiento en la produccin de piruvato en
el Hgado y el Rin son similares y tienen tendencias similares ya que estos rganos se
encuentras muy ligados al reciclaje y eliminacin de amoniaco en forma de urea ya que cuando
los niveles de carbohidratos son bajos las aminotransferasas de las clulas del Hgado en
conjunto con las glutamato deshidrogenasas y glutaminasa eliminan grupos amonio que son
transportadas al rin donde son desechadas o recicladas segn sea el caso por aminotransferasas
hepticas que se encuentran en el rin por lo que tal como se observa en la tabla No. 2 existe un
ligero aumento en la tasa de actividad en el Hgado en relacin al Rin pero la tasa se encuentra
relacionada entre s.

Conclusiones:
1) La produccin de piruvato en el Corazn es menor que la producida en el Hgado y el
Rin.
2) La tasa de actividad de la Alanina-aminotransferasa del Hgado es de 2.11x10 -6 mCat./g.
de rgano.
3) La tasa de actividad de la Alanina-aminotransferasa del Rin es de 1.93 x10 -6 mCat./g.
de rgano y de 1.8x10-7 mCat./g.Organo menos que el Higado.
4) El hgado tiene mayor actividad de Alanina-Aminotransferasa que el Rion y este mayor
actividad que el del Corazn.
Bibliografa:

1. Caruso L, Trischitta C, Rusello M, Ardita G, Cristaldi R, Tropeano L. Hepatitis C virus

antibodies in different ages of life. Arch Gerontol Geriatr 1991;2:511-4.
2. Rivero RA, Yamaguchi K, Gngora M, Hidalgo Gato R, Almagro D, Hernndez P, et al.
Prevalencia de anticuerpos contra el virus de la hepatitis C en pacientes cubanos. Rev
Cubana Hematol Inmunol Hemoter 1993;2:127-3

3. Devlin, T. (2004). Bioquimica: Libro de texto con aplicaciones clnicas. (4. Ed.).
Editorial Reverte, Barcelona, Espaa. pp. 786-787

4. Fuentes A., X. et. al. (2003). Codex de Ciencias de Laboratorio Clnico. (1. Ed.)
Editorial Elsevier, Barcelona, Espaa. pp. 20-23