Reactivo Funcin

Tris 7.8 Mantener el pH en 7.8

Al ser un agente quelante atrapa iones
EDTA divalentes que son necesarios para las
nucleasas, haciendo que estas no
funcionen.
RNAsa (Se coloca en este Siendo una protena pequea (aprox. 20
paso ya que despus se aa.)y al estar desestabilizada la membrana
adiciona lisozima que pueden penetrar fcilmente degradando
degrada protenas y puede RNA.
afectar a la RNAsa)
Lisozima Enzima cuya finalidad es romper la pared
celular bacteriana, especficamente los
enlaces -1,4 del cido N-acetilmurmico y
N-acetilglucosamina.
Dodecil Sulfato de Sodio Solubiliza los lpidos de la membrana
(SDS) haciendo que se pierda sta.
NaCl Permite una fuerza inica suficiente para la
posterior precipitacin del DNA.
Fenol* Ayuda a desproteinizar el DNA
Eliminar lis restos de fenol y para la
Cloroformo-alcohol isoamlico remocin de lpidos.
Modifica su constante dielctrica
Isopropanol Fro permitiendo la precipitacin del DNA.
Etanol 70% Eliminar sales

*Ya que el fenol ayuda a desproteinizar el DNA se realizaron dos extracciones

rescatando la fase acuosa (superior) colocndola en un tubo limpio. Este paso
fue el determinante de la pureza ya que se generan tres fases, la inferior o
fenlica, la intermedia o proteica y la superior o acuosa (la cual contiene el
DNA). Al extraerla se debe tener suma precaucin de no tomar la interfase ya
que estas protenas solo generan un DNA con menor pureza.

Con el Isopropanol fro se efecta una especie de competencia ya que al

estar en medio acuoso, el DNA se encuentra solvatado con molculas de agua
y con el Isopropanol fro se impide la solvatacin interactuando el agua con el
isopropanol y precipitando el DNA. Se centrifug para ayudar a precipitar el
DNA y se elimin el sobrenadante.