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Un medio de cultivo es una tcnica de laboratorio sintticos: son los medios que contienen una composicin

(vase microbiologa) que consta de un gel o una solucin que contiene qumica definida cualitativamente y cuantitativamente. Se utilizan
los nutrientes necesarios para permitir, en condiciones favorables para obtener resultados reproducibles.
de pH y temperatura, el crecimiento semisintticos: son los sintticos a los que se les aaden factores
de virus, microorganismos, clulas, tejidos vegetales o incluso de crecimiento bajo una forma de un extracto orgnico complejo,
pequeas plantas. Segn lo que se quiera hacer crecer, el medio como por ejemplo extracto de levadura.
requerir unas u otras condiciones. Generalmente se presentan Segn su formulacin
desecados en forma de polvo fino o granular antes de ser preparados; ya qumicamente definidos: se conoce la cantidad exacta de cada
preparados pueden encontrarse en estado slido, semislido o lquido. El uno de los compuestos que hay en el medio.
objetivo ltimo del cultivo es variado: antibiograma, identificacin, complejos: se realizan a partir de extractos naturales (extracto
multiplicacin. de levadura, sangre, etc.); no se conoce exactamente cul es la
composicin del medio; sin embargo, presenta la ventaja de que ya
Uno de los sistemas ms importantes para la identificacin estn presentes todos o casi todos los elementos que una clula
de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias puede requerir.
alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material
alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo
Segn su uso
y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se han preparado medio general: medio en donde crecen todo tipo de
ms de 10.000 medios de cultivo diferentes. microorganismos, excepto los que necesitan condiciones especiales
(por ejemplo, agar CLED).
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo medio selectivo: permite seleccionar el crecimiento de una
artificial debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, especie o grupo determinado (hongos, bacterias
grado de humedad y presin de oxgeno adecuadas, as como un grado entricas, protozoos...).
correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los medio diferencial: permite identificar una especie con otra, ambas
nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de en el mismo medio. Puede ser por su crecimiento, su
todo microorganismo contaminante. metabolismo,su respiracin, etc. (por ejemplo, medio de McConkey).
medio de enriquecimiento: contiene los nutrientes necesarios
Los virus, por ejemplo, son obligados parsitos intracelulares, por lo que para apoyar el crecimiento de una amplia variedad de
necesitan un medio que contenga clulas vivas. microorganismos, se utiliza para la cosecha de diferentes tipos de
microorganismos en un mismo medio.
medio mnimo: contiene la mnima cantidad de nutrientes posible
Clasificacin que permite el crecimiento de una especie.
medio de transporte: preparado para servir como
Segn sus cualidades fsicas
almacenamiento temporal a especmenes transportados o en
lquidos
transferencia; mantienen su viabilidad y su concentracin.
semislidos simple.
slidos
Segn su origen Conteo bacteriano
naturales: son los preparados a partir de sustancias naturales de Generalmente, tras analizar un cultivo, se realiza un conteo bacteriano,
con el fin de saber cul es la densidad de poblacin microbiana que se
origen animal o vegetal como ser extractos de tejidos o infusiones y
encuentra en el medio.1
cuya composicin qumica no se conoce exactamente.
Vase tambin
medio de crecimiento para cultivo celular
Referencias
1. Volver arriba Medidas de crecimiento. Consultado el 8 de Microbiologa/Medios de cultivo
septiembre de 2011.
MEDIOS DE CULTIVO

Los microorganismos en general pueden vivir y multiplicarse sobre


substratos nutritivos preparados en el laboratorio, denominados medios
de cultivo. Los Medios de Cultivo son preparados estriles que contienen
sustancias necesarias para el desarrollo de los microorganismos.

Todos los microorganismos requieren agua, carbono, nitrgeno,


hidrgeno, calcio, fsforo y hierro como elementos vitales. Los
microorganismos exigentes requieren adems factores de crecimiento
como aminocidos, vitaminas, purinas y otras sustancias que no son
capaces de sintetizar.

CONDICIONES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

1. Contener sustancias nutritivas necesarias para el desarrollo de los


microorganismos (tales como aminocidos, carbohidratos, polialcoholes,
vitaminas, minerales).

2. Tener un pH que permita un desarrollo ptimo, por lo general las


bacterias patgenos necesitan un pH neutro o ligeramente alcalino (7.0
7.4), en cambio las levaduras y hongos requieren un pH cido (5.0).

3. Estar previamente esterilizados o preparados en condiciones


aspticas.

4. Estar protegidos de la contaminacin ambiental por tapones de


algodn card, tapones de goma, tapas metlicas o roscas.

UTILIDAD DE LOS MEDIOS DE CULTIVO


1. Aislamiento de bacterias desde una muestra o material patgeno 3. Medios Semislidos: se utilizan para estudiar la motilidad de las
(secrecin purulenta, orina, rgano, fecas, etc.) o de un alimento (leche, bacterias. Tienen un menor porcentaje de agar, por lo que no solidifican
carne, etc.) totalmente a la temperatura ambiente. - Ejemplo: Agar MIO, Agar SIM.

2. Estudio morfolgico de las colonias. Los medios slidos tienen generalmente agaragar como agente
solidificante, espesante o gelificante. El agar-agar es una sustancia
3. Conservacin de cepas identificadas (coleccin de cepas microbianas hidroflica de carcter coloidal procedente de diversas especies de algas
o cepario). marinas, especialmente del gneroGelidium, que tiene la propiedad de
formar un gel. Qumicamente el agar-agar es un polisacrido de cadena
4. Clasificacin y tipificacin de bacterias por estudio de sus propiedades larga, dependiendo de su tamao el poder gelificante.
bioqumicas en medios diferenciales.
El agar-agar se expende en forma granulada o en polvo, es insoluble en
5. Obtencin de toxinas o investigacin de sus caractersticas. agua fra, se disuelve solamente a temperatura de ebullicin, se
mantiene en forma viscosa a 6080 C y solidifica en forma de un gel
estable a 4045 C. Resiste perfectamente la esterilizacin a 121 C y
6. Cultivo y cosecha de bacterias para la elaboracin de productos
por su capacidad de retener agua no se deshidrata fcilmente, lo que
biolgicos (vacunas, antgenos, bacterinas, toxoides, etc.).
permite almacenar los medios por un largo perodo de tiempo a 5 C.

La gelatina no puede reemplazar al agar en la preparacin de medios


slidos, ya que descompuesta por muchos tipos de bacterias. Se aade
CLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO: a los medios de cultivo para estudiar si las bacterias son capaces de
degradarla (presencia de enzimas gelatinasas).
SEGN SU ESTADO FISICO

1. Medios Lquidos: se utilizan preferentemente para favorecer el SEGN SU UTILIDAD PRACTICA


desarrollo bacteriano de clulas estresadas. En determinadas ocasiones
no se pueden sustituir por los medios slidos, por ejemplo en la sntesis 1. Medios corrientes, comunes o bsicos 2. Medios especiales - Medios
de exotoxinas, pigmentos, enzimas, etc. - Ejemplo: Agua peptonada, mejorados - Medios selectivos o de diagnstico - Medios diferenciales o
Caldo comn, Caldo Cerebro Corazn, Caldo Saboureaud, etc. indicadores

2. Medios Slidos: se utilizan para obtener bacterias aisladas por la 1. MEDIOS CORRIENTES: son aquellos medios apropiados para el
formacin de colonias sobre la superficie del medio de cultivo y para el cultivo y mantencin de la mayora de las bacterias. Sirven de base para
estudio de la morfologa de las colonias, lo que no permiten los medios la preparacin de los medios especiales. - Ejemplo: Caldo comn, Agua
lquidos. Se diferencian porque tienen una sustancia de sostn, que peptonada, Agar nutritivo, etc.
puede ser agar-agar. - Ejemplo: Agar Comn, Agar SS, Agar Cerebro
Corazn, Agar Saboureaud, etc.
2. MEDIOS ESPECIALES: son aquellos medios de cultivo que por su
riqueza nutritiva, sirven para el cultivo de bacterias muy exigentes.
Contienen en su formulacin sustancias inhibidoras para ciertas
bacterias, que permiten el aislamiento y diagnstico precoz de aquellas
bacterias que nos interesan por ser los agentes etiolgicos de las
enfermedades infecciosas. Tambin pertenecen a este grupo aquellos
medios que por adiccin de sustancias qumicas determinadas, facilitan bacterianas, como por ejemplo: produccin de gas, H2S, de cidos, de
el diagnstico por caractersticas bioqumicas de algunas especies sustancias alcalinas, accin proteoltica, accin lipoltica, etc.
microbianas.
Estas sustancias o indicadores permiten diferenciar rpidamente una
especie microbiana de otra semejante; por este motivo se denominan
Los medios especiales se clasifican en: medios indicadores o diferenciales. Ejemplo: Agar Baird Parker, Agar
Rambach, etc.
2.1. Medios Mejorados: se obtienen aadiendo a los medios corrientes
sustancias de mayor valor nutritivo, que tienen el efecto de proporcionar a) El agar Mac Conckey se utiliza para el aislamiento e identificacin de
condiciones favorables para el cultivo de bacterias exigentes (Ej. Escherichiacoli. Es un medio mejorado ya que tiene Cristal Violeta y
Estreptococos, Corynebacterium). Sales Biliares que inhiben el desarrollo bacterias Gram positivas.

Las sustancias aadidas pueden ser: sangre desfibrinada (conejo, b) El Caldo Tripticasa Soya es un medio corriente, ya que permite el
cordero o caballo), suero sanguneo (equino), suero fetal bovino, huevo, desarrollo de una amplia variedad de bacterias. Puede hacerse ms
cerebro, corazn, trozos o extracto de hgado, carne o levadura, etc. selectivo para el desarrollo de Staphylococcusaureus, si se le agrega un
10% de NaCl, lo que no permite el crecimiento de otras bacterias
La mayora de estas sustancias por ser proteicas coagulan con el calor, saprfitas.
lo cual impide que sean esterilizadas en autoclave. Deben por lo tanto
ser esterilizadas por filtracin o ser agregadas a los medios previamente
esterilizados, en condiciones de rigurosa asepsia. Ejemplo: Agar Sangre, SEGN SU ORIGEN
Agar Cerebro Corazn, etc.
1. Origen animal ( Caldo Cerebro Corazn) 2. Origen vegetal ( Caldo
2.2 Medios Selectivos: generalmente el microorganismo patgeno papa, Caldo Levadura ) 3. Sintticos ( Medios deshidratados )
causante del cuadro infeccioso que se desea aislar a partir de la
muestra, no se encuentra puro sino que convive con otras especies sin Los medios de cultivo comerciales deshidratados son productos a los
inters diagnstico. As por ejemplo es frecuente que las fecas, orina, cuales se le ha eliminado el agua y todas las interferencias de tipo
exudados, alimentos, agua, etc. estn altamente contaminadas con qumico, con un pH ajustado, que se han controlado fsica, qumica y
bacterias saprfitas que por su desarrollo exuberante en los medios de bacteriolgicamente. Es decir es un producto estandarizado.
cultivo corrientes, inhiben el crecimiento o enmascaran la presencia del
agente patgeno buscado.
COMPOSICION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
Los medios selectivos se caracterizan por estimular el desarrollo de
ciertas especies bacterianas y a la vez inhibir el desarrollo de otras Segn la finalidad, los medios de cultivo pueden tener en su composicin
especies, lo que permite es aislamiento y diagnstico de las bacterias los siguientes ingredientes:
con facilidad y rapidez. Estas caractersticas se obtienen por la adicin
de sustancias tales como colorantes de anilinas, sales biliares,
1) Aminocidos, hidrolizado de protenas ( peptonas ) 2) Extractos 3)
antibiticos, etc. Ejemplo: Agar Brucella, Caldo Selenito Cistina, etc.
Productos biliados 4) Carbohidratos 5) Productos bioqumicos 6)
Colorantes e indicadores
2.3 Medios Indicadores o Diferenciales: son medios comunes o
1) Productos Bioqumicos A los medios de cultivo se les agrega
mejorados, con adiccin de ciertas sustancias que ponen de manifiesto
generalmente una diversa variedad de sustancias bioqumicas, que
determinadas propiedades bioqumicas, inherentes a algunas especies
pueden tener el efecto de estimular el desarrollo bacteriano o ser
agentes selectivos, como es el caso de los antibiticos.
2) Colorantes e indicadores Estas sustancias se utilizan en los medios
selectivos y diferenciales. Los colorantes actan como agentes
bacteriostticos o como inhibidores del crecimiento. Se utilizan
principalmente: Fucsina bsica, Verde brillante, Verde de Malaquita,
Cristal Violeta, Eosina, Azul de Metileno, Tionina, etc.

Los indicadores son sustancias qumicas que varan de color segn el


pH del medio. Se utilizan en los medios diferenciales y permiten
visualizar, por cambios de color del medio de cultivo o de las colonias, la
ocurrencia de distintas reacciones bioqumicas.

Indicador Acido Neutro Alcalino

Rojo Fenol Amarillo (6.8) Rojo Fucsia (8.4) Rojo Neutro Amarillo (6.8)
Rojo Amarillo (8.0) Rojo de Metilo Rojo fuerte (4.4) Rojo Amarillo (6.0)
Azul Bromotimol Amarillo (6.0) Verde Azul (7.7) Prpura BC Amarillo (5.2)
Azul Prpura (6.8) Fenolftalena Incoloro (8.3) Rosado Fucsia (10)
SEGN SU ESTADO FSICO (CONSISTENCIA). libre de cido pirvico, y- agar pectina, con mucho sulfato y gran
1) Medios lquidos: Son los que se presentan en este estado, cantidad de cenizas. La proporcin de agarosa a agar pectina en el agar
denominndose por esta razn caldos. El medio lquido ms utilizado vara segn el alga de origen. El agar puede utilizarse para diferentes
es el llamado caldo nutritivo, compuesto principalmente de extracto de fines, aunque los ms importantes son: agar comercial para la industria
carne, peptona y agua. Se utiliza fundamentalmente cuando se alimenticia, agar bacteriolgico, agares purificados y agarosa, utilizada
pretende la obtencin de una suspensin bacteriana de una para electroforesis en gel. Aproximadamente la mitad de todo el agar
determinada concentracin. que se produce, se utiliza en trabajo microbiolgico, por lo que es
importante la ausencia de metales txicos.

2) Medios slidos: Se preparan a partir de los medios lquidos,


agregndoles un agente gelificante. Los ms utilizados son la gelatina 3) Medios semislidos: Se preparan a partir de los medios lquidos,
y el agar. Gelatina: Es una protena animal obtenida de los huesos. agregando a stos un agente solidificante en una proporcin menor que
Tiene el inconveniente de que es hidrolizada por muchas bacterias, y para preparar medios slidos. Uno de sus usos es la investigacin de la
adems su uso est muy limitado porque su punto de fusin es bajo movilidad de las bacterias
(lica a temperatura ambiente) razn por la que no puede utilizarse
para cultivos a 37C, que es la tempera ptima de crecimiento para
muchos microorganismos. Agar-agar: Es un polmero de azcares
obtenido de algas marinas. Se trata de una molcula insoluble en agua
pero soluble en agua caliente; una solucin al 1,5% p/v forma un gel
firme entre 32 y 39C y no se funde por debajo de 85C. Funde a 90C
y solidifica una vez fundido alrededor de los 45C. Tiene el
inconveniente de que introduce compuestos orgnicos indefinidos que
pueden falsear los resultados de las necesidades nutritivas de un
microorganismo. Aunque el agar es una mezcla de polisacridos,
Araki, en 1937, los dividi en dos grupos:- agarosa, con poco sulfato,
2) Medios de enriquecimiento: Son aquellos que, adems de las
sustancias nutritivas normales, incorporan una serie de factores
indispensables para el crecimiento de microorganismos exigentes. Este
enriquecimiento se hace por adicin de sangre u otros productos
biolgicos (sangre, suero, leche, huevo, bilis, etc.) que aportan dichos
factores. En ocasiones es posible aadir suplementos artificiales a los
medios para producir un enriquecimiento del mismo (p. ej. Polivitex,
Isovitalex, etc.) El gonococo, por ejemplo, necesita cistina y cistena
para su crecimiento. Estas sustancias son aportadas por la sangre
calentada adicionada al medio de cultivo (agar chocolate).

SEGN SU UTILIZACIN.
1) Medios comunes: Son aquellos que poseen los componentes
mnimos para que pueda producirse el crecimiento de bacterias que no
necesiten requerimientos especiales. El medio ms conocido de este
grupo es el agar nutritivo o agar comn, que resulta de la adicin de
agar al caldo nutritivo. Otros representantes de este grupo son el agar
triplicase de soja, el agar Columbia, etc.

3) Medios selectivos: Son medios utilizados para favorecer el


crecimiento de ciertas bacterias contenidas en una poblacin
polimicrobiana. El fundamento de estos medios consiste en facilitar
nutricionalmente el crecimiento de una poblacin microbiana
especfica. Un ejemplo de medio selectivo es el caldo selenito, que se
utiliza para favorecer el crecimiento de salmonellas y frenar el del
resto de enterobacterias.
5) Medios diferenciales: Se utilizan para poner en evidencia
caractersticas bioqumicas que ayuden a diferenciar gneros o
especies. La adicin de un azcar fermentable o un sustrato
metabolizable se utilizan para este fin. El medio MacConkey es un
medio diferencial porque permite distinguir los grmenes que
fermentan la lactosa de aquellos que no lo hacen. Tambin lo son el
C.L.E.D. (lactosa +/lactosa -), el agar sangre (tipo de hemlisis), el SS
(que es doblemente diferencial), etc.

4) Medios inhibidores: Cuando las sustancias aadidas a un medio


selectivo impiden totalmente el crecimiento de una poblacin
microbiana, se denomina inhibidor. Los medios inhibidores podran
considerarse como una variante ms restrictiva de los medios
selectivos. Los medios inhibidores se consiguen habitualmente por
adicin de sustancias antimicrobianas o de cualquier otra que inhiba
completamente el desarrollo de una poblacin determinada. Un medio
inhibidor es el MacConkey que permite el crecimiento de los grmenes
6) Medios de identificacin: Son los destinados a comprobar alguna
Gram negativos e impide el crecimiento de los Gram positivos.
cualidad especfica que puede servirnos para reconocer la identidad de
un microorganismo. Estos medios han de poseer los elementos
necesarios para asegurar el crecimiento de los microorganismos, el
sustrato especfico que vaya a ser metabolizado y el indicador que nos
muestre el resultado. El agar Kligler, el medio de Simmons y en
general, cualquier medio al que se le haya aadido un elemento
diferencial de un microorganismo, son medios utilizados en
identificacin. Actualmente estn apareciendo en el mercado una gran
cantidad de medios especficos de identificacin para ciertos
microorganismos, con lo cual se consigue simultneamente abaratar el
costo y reducir el tiempo de identificacin. Son ejemplos de estos
ltimos los medios CPS ID3 o Uriline ID (Biomerieux), utilizados para
identificar los grmenes urinarios ms importantes a partir de la placa
de cultivo gracias a la utilizacin de sustratos cromognicos
especficos.
a) haciendo pases peridicos de placa a placa,
b) mediante liofilizacin de una suspensin bacteriana, y
c) congelando las cepas en leche descremada estril al 0,1%.

7) Medios de multiplicacin: Sirven para obtener una gran cantidad


de clulas a partir de un microorganismo ya aislado. Se emplean en la
obtencin de vacunas, en la investigacin y en la industria. Los medios
ms adecuados para la multiplicacin suelen ser lquidos. El caldo-
infusin cerebro-corazn (BHI), es un ejemplo tpico de estos medios.
9) Medios de transporte: Se usan para el transporte de muestras
clnicas que no pueden sembrarse inmediatamente. Su utilizacin debe
hacerse introduciendo la torunda con la que se obtuvo la muestra en el
interior del medio (generalmente en un tubo). Son ejemplos tpicos de
este grupo los medios de Stuart-Amies, Cary-Blair, etc.

8) Medios de conservacin: Se utilizan para conservar una cepa que,


por diversas razones nos interese mantener. Fundamentalmente se
utilizan como controles de calidad de las pruebas y reactivos utilizados
en el Laboratorio de Microbiologa. En el laboratorio se pueden
conservar las cepas de tres formas:
AGAR SANGRE DE CORDERO inmunodeprimidas (hospitales, quirfanos, UVIs, salas de espera).
4 respuestas Tambien es ideal para las confirmaciones de Clostridium perfringens,
Listeria monocytogenes, Bacillus cereus, Legionella pneumophila
AGAR SANGRE DE CORDERO: Agar con base Columbia CONSERVACIN
suplementado con un 5% de sangre desfibrinada de El medio preparado debe conservarse en refrigeracin, entre 4 y 15
C, evitando excesivos choques trmicos y con circulacin de aire en
cordero.
la nevera, para evitar hemolizaciones.
COMPOSICIN: Peptona de casena (10 g); Peptona de carne (5 g);
Extracto de levadura (3 g); Extracto de corazn (3 g); Cloruro sdico (5
La caducidad de los medios suplementados con sangre a partir de la
g); Almidn de maz (1 g); Agar bacteriolgico (15 g); Sangre de
fecha de fabricacin debe respetarse rigurosamente. La fecha de
cordero (50 ml) Frmula (en g/l) pH: 7.2 0.2.
caducidad y el nmero de lote estn rotulados en la base de cada
INTRODUCCIN
placa, individualmente.
El Agar Sangre con base Columbia es un medio
PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO. CODIGO: PPLS01
PRESENTACIN: Dado que la sangre se hemoliza, este medio
completo slo puede existir en placa preparada (Para el medio
deshidratado Base, ver: Columbia Agar Base DMT308)
CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO
Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su
laboratorio siempre que varen las condiciones (ms de 3 meses sin
usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta T, cuando
adquiere aspectos extraos aunque no haya llegado la fecha de
caducidad terica de la etiqueta,)

DESHIDRATADO: Polvo, Beige PREPARADO: Estril, Rojo cereza por


la sangre, mbar antes de aadirla.

de uso general que CONTROL DE CRECIMIENTO CUANTITATIVO 48 horas a 37 C


permite el crecimiento de mayor nmero de microorganismos (tanto aproximadamente:
exigentes como no exigentes) que el agar sangre de base clsica. Este Clostridium sporogenes MKTA* 11437, Correcto, incluso sin aadir
medio permite la visualizacin de las reacciones hemolticas descritas sangre, tras inocular <100 ufc, crecen > 50%.
para cada microorganismo en sangre de cordero. Streptococcus viridans Wild Type * Crecimiento excelente, con sangre
La presencia en el medio de tan variados tipos de peptona lo hacen es Alfa-hemoltico.
muy nutritivo a causa del suministro de nitrgeno orgnico, Listeria monocytogenes MKTA* 7644, Bueno, con sangre es Beta-
particularmente aminocidos y pptidos de cadena ms larga. hemoltico
Enterococcus faecalis MKTA* 29212, Bueno, con sangre es Gamma-
Por ello es el medio de eleccin para aislamiento de microorganismos hemoltico (no produce hemlisis).
en ambientes frecuentados por personas enfermas o
* Las colecciones TIPO prohiben el uso de su referencia por lo que
indicamos la nuestra, directamente trazable a la coleccin TIPO.
Mac Conkey Agar.
SIEMBRA E INTERPRETACIN DE RESULTADOS
Conviene dejar que las placas alcancen la temperatura ambiente y Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fcil
que ofrezcan una superficie hmeda pero no mojada. desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos. Permite diferenciar bacterias
que utilizan o no, lactosa en muestras clnicas, de agua y alimentos. Todas
las especies de la familia Enterobacteriaceae desarrollan en el mismo.
-Para anlisis cualitativos de aires interiores, dejar las placas abiertas
en los puntos crticos entre 10 y 30 minutos. Fundamento
En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes necesarios
-Para anlisis cuantitativos de aires interiores emplear el para el desarrollo bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono
fermentable, y la mezcla de sales biliares y el cristal violeta son los
muestreador Microflow con cabezal para placas Petri de 90 mm, agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la flora Gram
cuidando que el flujo de aire sea perpendicular a la superficie del positiva.
medio y no oblicuo (colocando bien la placa en el cabezal). Analizar Por fermentacin de la lactosa, disminuye el pH alrededor de la colonia.
Esto produce un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro), la
200 l de aire a caudal 0,5 l/seg para mxima recuperacin y
absorcin en las colonias, y la precipitacin de las sales biliares.
multiplicar por 5 los resultados de cada placa para obtener el Los microorganismos no fermentadores de lactosa producen colonias
recuento por metro cbico; si el ambiente es limpio, tomar 5 incoloras.
muestras de 200 l y sumar los resultados para obtener el recuento
por metro cbico. Frmula (en gramos por litro) Instrucciones

-Para anlisis de otras muestras, estriar la muestra diluida y/o Peptona 17.0
enriquecida en la superficie de las placas, por agotamiento, para
obtener colonias aisladas. Dependiendo de los microorganismos a Pluripeptona 3.0
aislar y por lo comn, se recomienda una incubacin de estas placas
en atmsfera aerobia a la temperatura de ptimo crecimiento de los Lactosa 10.0
microorganismos buscados o en su defecto, 37C aprox. Algunos Suspender 50 g del polvo por litro de
Mezcla de sales biliares 1.5 agua destilada. Reposar 5 minutos y
microorganismos como Campylobacter spp. requieren incubacin en mezclar hasta uniformar. Calentar
atmsfera enriquecida con un 5-10% de CO2. suavemente y hervir 1 a 2 minutos
La lectura de las placas debe hacerse entre las 18 y las 48 horas, Cloruro de sodio 5.0 hasta disolver. Esterilizar en autoclave a
121C durante 15 minutos.
aunque las reacciones de hemlisis se visualizan mejor a las 18-24
Agar 13.5
horas. Es muy importante que las reacciones hemolticas, aspecto de
las colonias (umbilicacin en neumococo) y crecimientos se ajusten a
Rojo neutro 0.03
las descripciones tpicas.

Cristal violeta 0.001

pH final: 7.1 0.2


Siembra
- Sembrar en superficie.
- Utilizando la tcnica de Pour Plate: sembrar 1 ml de muestra y agregar
aproximadamente 15 ml de medio de cultivo fundido y enfriado a 45-50
C.

Incubacin
Durante 18-48 horas, a 35-37 C, en atmsfera aerbica

Resultados

Microorganismos Colonias

Escherichia coli ATCC 25922 Rojas con halo turbio

Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Rosadas mucosas

Salmonella typhimurium ATCC 14028 Incoloras, transparentes Agar chocolate: El agar chocolate se obtiene calentando la sangre
antes de adicionarla al medio base. Por esta razn el agar chocolate
contiene hemoglobina, que aporta al medio un importante elemento para
Shigella flexneri ATCC 12022 Incoloras, transparentes el crecimiento: el factor X o hemina termoestable. El agar chocolate es un
medio destinado principalmente al aislamiento de Neisserias (gonococos
Proteus mirabilis ATCC 43071 Incoloras, transparentes ymeningococos) y Haemophilus, pero en l pueden crecer muchos otros
microorganismos exigentes. El agar chocolate puede convertirse quizs en
uno de los medios ms enriquecidos si aadimos una mezcla de factores
Diminutas, incoloras, de crecimiento no contenidas en la sangre. Estas mezclas, denominadas de
Enterococcus faecalis ATCC 29212
opacas forma diferente segn las casas comerciales (Polivitex, Isovitalex, etc.)
contienen ms de una docena de compuestos que confieren a este medio
unas cualidades nutritivas extraordinarias. Por adicin de uno o varios
Caractersticas del medio antibiticos pueden lograrse medios inhibidores o selectivos para el
Medio preparado: rojo prpura crecimiento de determinados microorganismos. Un ejemplo clsico es el
Thayer-Martin, utilizado para el aislamiento del gonococo y que no es otra
Almacenamiento: cosa que un agar chocolate enriquecido al cual se ha aadido unamezcla
Medio deshidratado: a 10-35 C. de tres antibiticos especficos que impedirn el crecimiento del resto de la
Medio preparado: a 2-8 C. flora acompaante. Agar MacConkey: Es un medio utilizado para el
aislamiento e identificacin de enterobacterias. Es un medio inhibidor de
los grmenes Gram positivos por su contenido en cristal violeta y selectivo
para enterobacterias por su contenido en sales biliares. En su composicin
Presentacin lleva un azcar (lactosa) y un indicador (rojo de metilo) que lo convierten
en un medio diferencial. Los grmenes que fermenten la lactosa producen
una acidificacin del medio que hacen aparecer de color rojo fuerte a las
x 100g :Cdigo: B02-114-05 x 500g :Cdigo: B02-114-06
colonias resultantes. Las colonias lactosa negativas sern incoloras,
apareciendo del mismo color que el medio subyacente (naranja).

Chocolate Polyvitex (= Agar chocolate)


Este medio utiliza la misma base que el gar Sangre. Antiguamente se
aadan los hematies a la base fundida y se elevaba la temperatura para
lisarlos parcialmente y que soltasen al medio sus componentes. Esto daba
al medio su habitual color pardo chocolate.
El Agar chocolate es un medio destinado principalmente al aislamiento de
gonococos y meningococos, pero en el que pueden crecer muchos otros
microorganismos exigentes. Con un medio anlogo a ste es con el que
Thayer y Martin han hecho sus primeros asilamientos selectivos de
gonococos, despus de aadir antibiticos.
El Agar chocolate lleva Hemoglobina que aporta al medio un importante
elemento para el crecimiento: el factor X o Hemina termoestable.
Otros factores, en particular el factor V (dicotn-adenina nucletido)
termosensible, que no se encuentran en el Agar chocolate pueden
aportarse en una mezcla qumicamente definida: el PolyViteX.
El Agar chocolate con PolyViteX permite el cultivo de la mayor parte de los
grmenes encontrados en patologa humana o veterinaria.
La siembra de lquidos cefalorraqudeos, pus, resiembra de hemocultivos,
etc., es favorable en este medio, pero est particularmente indicado para
aislamiento de las Neisserias patgenas y de los Haemophilus.
Aislamiento e identificacin de Haemophilus
Los microorganismos del gnero Haemophilus se cultivan en Agar
chocolate con PolyVitex. Como en el caso del gonococo el cultivo es rpido
y abundante sobre todo en atmsfera rica en C02. Estos grmenes
encuentran en este medio los factores X y V necesarios para su
crecimiento. El diagnstico de la serie al respecto puede conducirse de la
manera siguiente:
Si se siembra en cuatro medios diferentes:
- Agar Trypcase-soja que no contenga ni factor V, ni factor X
- Agar Trypcase-soja con PolyViteX (factor V) Agar S.S.:El agar SS es un medio selectivo empleado para el aislamiento
- Agar chocolate (factor X) de Salmonella y Shigella a partir demuestras fecales. El medio contiene
- Agar chocolate con PolyVitex (factores X y V) sales biliares y verde brillante para impedir el crecimiento de coliformes y
El recuadro que se da a continuacin indica los resultados obtenidos en grmenes Gram positivos. La presencia de lactosa y rojo de metilo nos
estas condiciones con los principales Haemophilus: permiten diferenciar las colonias que fermentan la lactosa (rosas o rojas)
H. parainfluenzae crece en Trypcase soja con PolyViteX (V) y en de las que no lo hacen (incoloras).Las especies de Salmonella y Shigella no
fermentan nunca la lactosa por lo que este medio es excelente para
chocolate con PolyViteX (V yX)
descartar todas las colonias que no cumplan este requisito. El agar SS es
H. aphrophilus crece Chocolate (X) y en chocolate con PolyViteX
doblemente diferencial, porque adems de indicarnos el comportamiento
(V yX) de los grmenes con relacin a la lactosa, nos muestra los grmenes que
H. influenzae, H. haemolyticus, H. aegiptius crecen en los 4 son capaces de producir cido sulfhdrico, que se manifiesta como un
medios precipitado de color negro en el centro de la colonia. As, una colonia
otras pruebas que ayudan a diferenciarlos: incolora y con un punto negro central es sospechosa de Salmonella, y ser
H. aegiptius aglutina hematies humanos (prueba en porta), H. exclusivamente a estas colonias a quienes se hagan las pruebas
bioqumicas confirmatorias de esta especie. El agar SS es un medio muy
influenzae no los aglutina
inhibidor que a veces impide incluso el crecimiento de ciertas especies de
H. haemolyticus da hemlisis en Agar con 5% de sangre de
Salmonella y sobre todo de Shigella. Por esta razn debe utilizarse siempre
caballo junto con otro medio menos inhibidor como el Hektoen.
Agar Salmonella-Shigella (SS)
gar altamente selectivo que se
utiliza para el aislamiento
de Salmonella y de alguna
especies de Shigella. AGAR XLD
Se dise para diferenciar Gato. no. G245 Agar XLD con novobiocina, Plato 15x100mm, 18ml
fermentadores de lactosa de los
que no la fermentan, USO
proporcionando buena inhibicin
Hardy Diagnstico Agar XLD se recomienda para su uso como un medio selectivo y
de coliformes sin restringir el diferencial para el aislamiento de patgenos entricos gram-negativas de muestras fecales
crecimiento de otros BGN o de los alimentos y otras muestras.
patgenos.
Salmonella y Shigella (y otros
Este producto no est destinado a ser utilizado para el diagnstico de la enfermedad
humana.
no fermentadores de lactosa)
producen colonias transparentes, translcidas, mientras los pocos
RESUMEN
fermentadores de lactosa que se desarrollan dan colonias mucosas,
rojizas. Xilosa lisina desoxicolato (XLD) Agar fue desarrollado por Taylor para la diferenciacin,
el aislamiento y la identificacin de patgenos entricos, y para apoyar el crecimiento de
Bacteria Crecimiento Color de las colonias
microorganismos entricos ms exigentes. Agar XLD fue especialmente diseado para
(6)

permitir el crecimiento de Shigella especies, y es un medio probado para el aislamiento


Salmonella enteritidis bueno incolora
de este microorganismo. Tambin se ha encontrado que es un medio excelente para el
Shigella flexneri aceptable incolora aislamiento de Salmonella especies.
Proteus mirabilis regular incolora
El agente selectivo en Agar XLD es desoxicolato de sodio, que inhibe el crecimiento de
Enterococcus faecalis escaso incolora organismos gram-positivos. La fuente de carbohidratos es la xilosa que se fermenta por la
Enterobacter aerogenes regular crema/rosa mayora de enterics excepto por Shigella especies, y estas colonias aparecen de color rojo
en este medio como resultado. Un segundo mecanismo diferencial para Salmonella se
emplea mediante la adicin de lisina. Descarboxilacin lisina revierte el pH del medio a
una condicin alcalina. Para evitar este cambio a un Shigella reaccin, lactosa y sacarosa,
se aaden en exceso. La adicin de tiosulfato de sodio y citrato de amonio frrico como
una fuente de azufre y el indicador, respectivamente, permite la formacin de sulfuro de
hidrgeno organismos para producir colonias con el centro negro, bajo condiciones
alcalinas. Los organismos que fermentan la xilosa, son lisina descarboxilasa-negativas, y
no fermentan la lactosa o sacarosa provocan un pH cido en el medio, y forman colonias
amarillas. Ejemplos de tales organismos son Citrobacter spp., Proteus spp.,
Y Escherichia coli.

Agar XLD con novobiocina contiene novobiocina, que se utiliza comnmente para
inhibir el crecimiento de Proteus spp., Y ayuda a reducir el potencial de falsos positivos
de este organismo.

FRMULA
Ingredientes por litro de agua desionizada: * La fecha de expiracin en la etiqueta del producto se aplica al producto en su envase
intacto de la forma indicada.
Lactosa 7.5gm
Consulte el documento de " almacenamiento " en la Hardy Diagnstico Documento
Tcnico sitio web para ms informacin.
sacarosa 7.5gm

PRECAUCIONES
Tiosulfato de sodio 6.8gm
Este producto puede contener componentes de origen animal. conocimientos
L-lisina 5.0gm certificados de origen y / o el estado sanitario de los animales no garantiza la
ausencia de agentes patgenos transmisibles. Por lo tanto, se recomienda que estos
productos ser tratados como potencialmente infecciosos, y manejar la observacin de
Cloruro de sodio 5.0gm las habituales precauciones universales de sangre. No ingerir, inhalar, o permitir que
entre en contacto con la piel.
xilosa 3.75gm
Este producto es para in vitro uso diagnstico. Es para ser utilizado slo por personal
de laboratorio debidamente formados y cualificados. Observar las indicaciones de
Extracto de levadura 3.0gm
seguridad y utilizar tcnicas aspticas. Todas las muestras de laboratorio deben ser
considerados infecciosos y manejados de acuerdo a "precauciones estndar". Las
desoxicolato de sodio 2.5gm "Directrices para las precauciones de aislamiento" est disponible en los Centros para
el Control y la Prevencin de Enfermedades
en www.cdc.gov/ncidod/dhqp/gl_isolation.html .
Citrato de amonio frrico 0,8 g

Para obtener informacin adicional acerca de las precauciones especficas para la


rojo de fenol 0.08gm prevencin de la transmisin de todos los agentes infecciosos de los instrumentos y
materiales de laboratorio, y las recomendaciones para la gestin de la exposicin a
agar 15.0gm las enfermedades infecciosas, consulte CLSI documento M-29: Proteccin de los
trabajadores de laboratorios de origen ocupacional Infecciones : Directriz
Aprobado.
novobiocina 10,0 mg / mL

Esterilizar todo el material biolgico antes de su eliminacin.


El pH final de 7,4 +/- 0,2 a 25C.
Consulte el documento " Precauciones durante el uso de medios " en la Hardy
* Ajustada y / o suplementada para satisfacer los criterios de rendimiento. Diagnstico Documento Tcnico sitio web para ms informacin.

ALMACENAMIENTO Y DURACIN Consulte el documento de SDS bsqueda instrucciones en la pgina web Hardy
diagnsticos para obtener ms informacin.
Almacenamiento: Al recibo de la tienda a 2-8C. lejos de la luz directa. Los medios de
comunicacin no deben usarse si hay cualquier signo de deterioro (contraccin,
agrietamiento, o decoloracin), la contaminacin, o si la fecha de vencimiento haya PROCEDIMIENTO
expirado. El producto es sensible a la luz y la temperatura; protegerlo de la luz, el calor
excesivo, la humedad y la congelacin. Recogida de muestras: Consultar las referencias que figuran para obtener
informacin sobre la recogida de muestras. materiales infecciosos debern
(1-3,5)

presentarse directamente al laboratorio sin demora y protegido del calor y fro


excesivos. Si ha de haber un retraso en el procesamiento, la muestra debe ser La incubacin de ms de 48 horas puede dar lugar a resultados falsos positivos.
inoculadas en un medio de transporte adecuadas y se refrigeran hasta la inoculacin.
Consulte la seccin "documentos limitaciones de los procedimientos y de garanta "
Mtodo de Uso: Permitir que las placas a la temperatura ambiente, y la superficie de en el diagnstico de Hardy Documento Tcnico sitio web para ms informacin.
agar se seque antes de la inoculacin. Inocular y raya la muestra tan pronto como sea
posible despus de la recogida. Si el espcimen a ser cultivada es en un hisopo, rodar
el hisopo sobre una pequea rea de la superficie del agar. Racha para el aislamiento MATERIALES NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS
con un asa estril. Incubar las placas en condiciones aerobias a 35-37C. durante 18-
24 horas. Examinar la morfologa colonial, caractersticas, y las reacciones suministros de anlisis microbiolgico de base, tales como bucles, diapositivas,
hemolticas. equipos de tincin, otros medios de cultivo, microscopios, incineradores, e
incubadoras, etc., as como reagentes bioqumicos, no se proporcionan.
Se recomienda que los caldos de enriquecimiento selectivos, tales como GN Broth o
selenito cistina Broth (Cat. No. K39 o K69, respectivamente), ser utilizados en CONTROL DE CALIDAD
conjuncin con otros medios de placas selectivas, como HE Agar (Cat. No.
G63) . Esta recomendacin se hace con el fin de maximizar la recuperacin de Hardy pruebas de diagnsticos de cada lote de medios fabricados comercialmente
patgenos entricos. utilizando microorganismos de control de calidad apropiados y especificaciones de
calidad como se indica en el Certificado de Anlisis (COFA). Los siguientes
organismos se utilizan habitualmente para los ensayos a Hardy Diagnstico:
INTERPRETACIN DE RESULTADOS
Salmonella spp. aparecen como colonias rojas con el centro negro. Organismos La Incubacin
lisina-positivas aparecen de color rojo. Shigella spp. Tambin aparecen de color
organismos inoculaci
rojo. Otros fermentadores de lisina-negativas, tales como E. resultados
de prueba n Mtodo Temperatur Atmsfer
coli ,Citrobacter y Proteus spp. aparecer amarilla. Consultar las referencias que Hora
* a a
figuran para la identificacin de la morfologa de la colonia y otras pruebas
bioqumicas necesarias para la identificacin.(1-3,5)

Salmonella
Crecimiento; coloni
LIMITACIONES enterica
UN
24
35 C Aerobio as de color rojo con
ATCC 1402 horas
el centro negro
Se recomienda que las pruebas de espectrometra de bioqumicos, inmunolgicos, 8
molecular, o la masa se realiz en colonias del cultivo puro para la identificacin
completa.
Shigella
flexneri 24 Crecimiento; rojo a
Algunas especies de Salmonella pueden formar colonias de color rojo sin un centro UN 35 C Aerobio
ATCC 1202 horas colonias rosas
negro, que se asemejan Shigella colonias. Adems, algunas especies
2
de Shigella fermentan la lactosa, y Salmonella que no logran descarboxilacin de
lisina no seran detectados en este medio.
Enterococcu La inhibicin parcial
retrasos en el procesamiento de ms de 2 a 3 horas de las muestras de heces sin s faecalis 24 a completa; en
segundo 35 C Aerobio
conservantes pone en peligro en gran medida la recuperacin de muchos patgenos ATCC 2921 horas forma de puntos
entricos, ya que estos organismos son muy susceptibles a los cambios que se 2 claros, colonias
producen cidos con una cada de temperatura de las heces.

, Colonias de falsos positivos rojas pueden ocurrir con Proteus y Pseudomonas .


La inhibicin parcial
Escherichia
a
coli 24
segundo 35 C Aerobio completa; amarilla
ATCC 2592 horas
a colonias de color
2
rojo amarillo

* Consulte el documento " Procedimientos para la inoculacin de medios de control


de calidad " en el diagnstico de Hardy Documento Tcnico sitio web para ms
informacin.

CONTROL DE CALIDAD DEL USUARIO

Los usuarios finales de los medios de cultivo preparados comercialmente deben


realizar pruebas de control de calidad de acuerdo con las agencias reguladoras
gubernamentales aplicables, y en cumplimiento de los requisitos de Salmonella enterica (ATCC 14028) colonias que crecen en agar XLD. Incubados
acreditacin. Hardy Diagnstico recomienda a los usuarios finales para detectar aerbicamente durante 24 horas a 35C.
signos de contaminacin y deterioro y, de ser dictada por los procedimientos de
control de calidad de laboratorio o regulacin, cabo pruebas de control de calidad
para demostrar el crecimiento o una reaccin positiva y para demostrar la inhibicin
o una reaccin negativa, en su caso. Hardy Diagnstico pruebas de control de calidad
se documenta en los certificados de anlisis (CofA) disponibles de Hardy
Diagnostics Certificado de Anlisis pgina web. Adems, consulte los siguientes
documentos en el Hardy Diagnstico Documento Tcnico sitio web para ms
informacin sobre control de calidad: " Introduccin al Control de Calidad " y
" Procedimientos de control de calidad del producto terminado ", o ver la referencia
(s) para obtener informacin ms especfica.

APARIENCIA FSICA
Agar XLD debera aparecer de forma clara, y de color rojo, y puede tener un ligero
precipitado.
Shigella flexneri (ATCC 12022) colonias que crecen en agar XLD. Incubados
aerbicamente durante 24 horas a 35C.
Enterococcus faecalis (ATCC 29212) inhibi el crecimiento en Agar XLD. Incubados
aerbicamente durante 24 horas a 35C.
Nutritivo Agar En aerobiosis, a 35-37 C durante 24 horas.

Resultados
Medio de cultivo utilizado para propsitos generales, para el aislamiento de
a-Agar nutritivo:
microorganismos poco exigentes en lo que se refiere a requerimientos
nutritivos.
Su uso est descripto en muchos procedimientos para el anlisis de
alimentos, aguas y otros materiales de importancia sanitaria. Microorganismos Crecimiento

Fundamento
Por las caractersticas de sus componentes es un medio usado para el
P. mirabilis ATCC 43071
cultivo de microorganismos poco exigentes en sus requerimientos Bueno-excelente
nutricionales. No contiene inhibidores del desarrollo bacteriano. La
pluripeptona es la fuente de carbono y nitrgeno para el desarrollo
bacteriano. El agregado de cloruro de sodio permite el enriquecimiento con
sangre de carnero u otras sustancias para facilitar el cultivo de E. coli ATCC 25922 Bueno-excelente
microorganismos exigentes.

S. aureus ATCC 25923 Bueno-excelente


Frmula (en gramos por litro) Instrucciones

B. cereus ATCC 10876 Bueno-excelente


Pluripeptona 5.0

E. faecalis ATCC 29212 Bueno-excelente


Suspender 31 g de polvo por litro de
Extracto de carne 3.0
agua destilada. Mezclar y dejar reposar
5 minutos. Calentar suavemente
agitando y hervir 1 o 2 minutos hasta su P. aeruginosa ATCC 27853 Bueno-excelente
disolucin. Distribuir y esterilizar a
Cloruro de sodio 8.0
121C durante 15 minutos.

b-Agar nutritivo suplementado con 5% de sangre de carnero:


Agar 15.0

Microorganismos Crecimiento Hemlisis


pH final: 7.3 0.2

S. pyogenes ATCC 19615 Abundante Beta


Siembra
En superficie o por la tcnica de pour plate, segn el uso a que se destine.

Incubacin S. pneumoniae ATCC 6305 Abundante Alfa


S. pneumoniae ATCC 49619 Abundante Alfa

Caractersticas del medio


Medio preparado: mbar claro a medio ligeramente opalescente.

Almacenamiento
Medio deshidratado: a 10-35 C.
Medio preparado: a 2-8 C.

Presentacin

x 100g :Cdigo: B02-122-05 x 500g :Cdigo: B02-122-06 6 x 50 ml: B04-122-84


Peptona de soya 3.0
agua destilada. Mezclar y calentar hasta
disolver. Distribuir y esterilizar en
Cloruro de sodio 5.0 autoclave a 118-121C durante 15
minutos.
Fosfato dipotsico 2.5

Glucosa 2.5

pH final: 7.3 0.2

Siembra
Inocular directamente el material en estudio.

Incubacin
Las condiciones de temperatura, tiempo y atmsfera de incubacin, sern
acuerdo al material a estudiar.

Resultados

Microorganismos Crecimiento
Tripteina Soya Caldo (caldo tripticasa S. aureus ATCC 25923 Bueno
soya)
S. epidermidis ATCC 14990 Bueno
Medio adecuado para el desarrollo de microorganismos exigentes.

Fundamento S. pyogenes ATCC 19615 Bueno


La triptena y la peptona de soya aportan nutrientes ricos en pptidos,
aminocidos libres, bases pricas y pirimdicas, minerales y vitaminas. La S. pneumoniae ATCC 6305 Bueno
peptona de soya aporta carbohidratos que estimulan el crecimiento de
muchos microorganismos.
El cloruro de sodio mantiene el balance osmtico. El fosfato dipotsico S. pneumoniae ATCC 49619 Bueno
otorga capacidad buffer y la glucosa es la fuente de energa.
Caractersticas del medio
Frmula (en gramos por litro) Instrucciones Medio preparado: mbar claro.

Triptena 17.0 Suspender 30 g del polvo por litro de Almacenamiento


Medio deshidratado: a 10-35 C.
Medio preparado: a 2-8 C.

Presentacin

x 100g :Cdigo: B02-103-05 x 500g :Cdigo: B02-103-06 6 x 50 ml: B04-103-84


Manitol Salado Agar.
d-Manitol 10.0
Medio de cultivo selectivo y diferencial, utilizado para el aislamiento y
diferenciacin de estafilococos.
Es recomendado para el aislamiento de estafilococos patognicos a partir Cloruro de sodio 75.0
de muestras clnicas, alimentos, productos cosmticos y otros materiales
de importancia sanitaria.
Tambin, este medio puede utilizarse para el cultivo de especies halfilas
de Vibrio, si no se dispone de medios apropiados (TCBS Medio, Medio Agar 15.0
Marino, etc.), aunque algunas especies pueden no desarrollar.

Fundamento
Rojo de fenol 0.025
Se trata de un medio altamente selectivo debido a su alta concentracin
salina. Los estafilococos coagulasa positiva hidrolizan el manitol
acidificando el medio; las colonias aparecen rodeadas de una zona amarilla
brillante. Los estafilococos coagulasa negativos, presentan colonias pH final: 7.4 0.2
rodeadas de una zona roja o prpura. Las colonias sospechosas, se
repicarn en un medio sin exceso de cloruro de sodio para efectuarles,
posteriormente, la prueba de la coagulasa.
En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, constituyen Siembra
la fuente de carbono, nitrgeno, vitaminas y minerales, el manitol es el Sembrar en superficie un inculo denso de la muestra.
hidrato de carbono fermentable, el cloruro de sodio (que se encuentra en
alta concentracin) es el agente selectivo que inhibe el desarrollo de la
flora acompaante, y el rojo fenol es el indicador de pH. Incubacin
Las bacterias que crecen en un medio con alta concentracin de sal y De rutina: durante 18-24 horas a 35-37 C, en aerobiosis.
fermentan el manitol, producen cidos, con lo que se modifica el pH del La American Public Health Association (A.P.H.A) recomienda la incubacin
medio y vira el indicador de pH del color rojo al amarillo. durante 3 das a 32 C, en aerobiosis.
Los estafilococos crecen en altas concentraciones de sal, y pueden o no
fermentar el manitol. Resultados
Los estafilococos coagulasa positiva fermentan el manitol y se visualizan
como colonias amarillas rodeadas de una zona del mismo color.
Los estafilococos que no fermentan el manitol, se visualizan como colonias
rojas, rodeadas de una zona del mismo color o prpura. Caractersticas
Microorganismos Crecimiento
de las colonias

Frmula (en gramos por litro) Instrucciones


Staphylococcus aureus ATCC 25923 Excelente Amarilla

Extracto de carne 1.0 Suspender 111 g de polvo por litro de


agua destilada. Reposar 5 minutos y Staphylococcus epidermidis ATCC
mezclar calentando a ebullicin durante Bueno Roja
14990
1 o 2 minutos. Distribuir y esterilizar en
Pluripeptona 10.0 autoclave a 118-121C durante 15
minutos.
Escherichia coli ATCC 25922 Inhibido Inhibido

Klebsiella pneumoniae ATCC


Inhibido Inhibido
700603

Caractersticas del medio


Medio preparado: rojo

Almacenamiento:
Medio deshidratado: a 10-35 C.
Medio preparado: a 2-8 C.

Presentacin

x 100g :Cdigo: B02-118-05 x 500g :Cdigo: B02-118-06


Mueller Hinton Agar Resultados

Consultar en la seccin prueba de sensibilidad a los antimicrobianos, la


Este medio de cultivo ha sido recomendado universalmente para la prueba metodologa apropiada.
de sensibilidad a los antimicrobianos. Adems es til con el agregado de
sangre para el cultivo y aislamiento de microorganismos nutricionalmente Notas:
exigentes.
1-Los lotes de agar Mueller Hinton Britania cumplen con las normas
Fundamento descriptas en el documento M6 - P del NCCLS: Evaluating production lots
El Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI), ex National of dehydrated Mueller Hinton agar. Esto es muy importante pues algunos
Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS), recomend su uso lotes pueden variar significativamente y si las bacterias no crecen
en forma rutinaria para la realizacin del antibiograma en medio slido, adecuadamente, las zonas de inhibicin en las pruebas de difusin son
debido a una serie de factores que se detallan a continuacin: presenta generalmente ms grandes, quedan fuera de los lmites de control de
buena reproducibilidad lote a lote en las pruebas de sensibilidad, su calidad y pueden dar resultados errneos.
contenido en inhibidores de sulfonamidas, trimetoprima y tetraciclina es
bajo, la mayora de los patgenos crece satisfactoriamente y una gran 2-Los medios que contienen cantidades excesivas de timidina o timina
cantidad de datos han sido evaluados y avalados usando este medio de pueden revertir el efecto inhibitorio de las sulfonamidas y trimetoprima,
cultivo. produciendo as zonas de inhibicin mas pequeas y por lo tanto informes
Cuando se suplementa con sangre de carnero al 5%, es til para realizar de falsa resistencia. Para evaluar el contenido de timidina del lote de agar
las pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos en especies de Mueller Hinton, se prueba la cepa de control de calidad: Enterococcus
estreptococos. faecalis ATCC 29212 frente a discos de TMS. En un medio satisfactorio, se
produce una zona clara de inhibicin de 20 mm o ms.

Frmula (en gramos por litro) Instrucciones 3-Otro aspecto de cuidado en el control de calidad en el agar Mueller
Hinton es que las variaciones en cationes divalentes principalmente calcio
y magnesio pueden afectar los resultados con tetraciclina, polimixina y
Infusin de carne 300.0 Suspender 37 g del medio deshidratado
aminoglucsidos cuando se ensayan cepas de Pseudomonas spp. Por tal
en un litro de agua destilada. Dejar
motivo, se deben cumplir los lmites de control de calidad publicados por el
embeber de 10 a 15 minutos. Calentar
Peptona cida de casena 17.5 NCCLS.
con agitacin frecuente y hervir durante
1 minuto. Esterilizar a 121C durante 15
4-Los resultados deben ser cuidadosamente observados con todos los
Almidn 1.5 minutos. Enfriar a 45-50C y distribuir a
organismos de control para evitar datos aberrantes debido al medio de
cajas de Petri (o agregar los suplementos
cultivo. Para aquellas cepas que fallan de crecer satisfactoriamente sobre
que se desee) hasta un nivel de 4 mm
Agar Mueller Hinton no suplementado, se agrega sangre desfibrinada de
Agar 15.0 sobre una superficie horizontal (25-30 ml
carnero al agar fundido y enfriado, a una concentracin final al 5% (v/v).
en placas de 9 cm de dimetro).
Para el control de precisin y exactitud del agar de Mueller Hinton se usan
pH final: 7.3 0.1 las siguientes cepas control:

S. aureus ATCC 25923


E. coli ATCC 25922
Siembra P. aeruginosa ATCC 27853
Consultar en la seccin prueba de sensibilidad a los antimicrobianos, la E. faecalis ATCC 29212
metodologa apropiada.
Para evaluar el desempeo de inhibidores de beta lactamasa, se utiliza la
cepa control:
Incubacin
Consultar en la seccin prueba de sensibilidad a los antimicrobianos, la E. coli ATCC 35218
metodologa apropiada.
Caractersticas del medio
Medio preparado: mbar.

Sabouraud Glucosado Agar


Almacenamiento
Medio deshidratado: a 10-35 C. Medio utilizado para el aislamiento, identificacin y conservacin de hongos
Medio preparado: a 2-8 C. patgenos y saprfitos. Tambin es til para el cultivo de levaduras.

Presentacin Fundamento
Medio de cultivo recomendado para el aislamiento y desarrollo de hongos,
particularmente los asociados con infecciones cutneas (piel, pelo, etc.).
x 100 g Cdigo: B02- x 500 g Cdigo: B02- En el medio de cultivo, la pluripeptona y la glucosa, son los nutrientes para
137-05 137-06 el desarrollo de microorganismos. El alto contenido de glucosa, la
presencia de cloranfenicol y el pH cido, favorecen el crecimiento de
6 x 50 ml Cdigo: B04- 12 x 100 ml Cdigo: B04-137- hongos por sobre el de bacterias.
137-84 06 Adems, al medio de cultivo, pueden agregarse otros agentes selectivos de
crecimiento.

Frmula (en gramos por litro) Instrucciones

Pluripeptona 10.0 Suspender 65 g del polvo por litro de


agua destilada. Reposar 5 minutos y
mezclar hasta uniformar. Calentar
Glucosa 40.0
agitando frecuentemente y hervir 1
minuto hasta disolver. Distribuir y
Cloranfenicol 0.05 esterilizar 15 minutos a 118-121C.
Mantener en lugar fresco, pues la
exposicin al calor hidroliza los
componentes. Distribuir en placas o
en tubos con cierre hermtico
Agar 15.0

pH final: 5.6 0.2

Siembra
Depende del uso, puede ser tanto en tubo como en placa. Consultar
referencias de mtodos recomendados.

Incubacin
El tiempo de incubacin depender del microorganismo que se est
buscando aislar.

Resultados
Microorganismos Crecimiento

Saccharomyces cerevisiae Bueno

Aspergillus niger Bueno

Candida albicans ATCC 10231 Bueno

Caractersticas del medio


Medio preparado: mbar claro, ligeramente opalescente sin ningn
precipitado.

Almacenamiento
Medio deshidratado: a 10-35 C.
Medio preparado: a 2-8 C.

Presentacin

x 100g :Cdigo: B02- x 500g :Cdigo: B02-


6x50ml: B04-150-84
150-05 150-06

AGAR DEXTROSA
SABOURAUD
Descripcin del Producto
Su pH cido de 5.6 favorece el crecimiento de hongos,
especialmente dermatofitos y ayuda en la inhibicin de flora
contaminante. Georg y Col., recomiendan agregar
aspticamente cicloheximida, penicilina y estreptomicina
antes de usarlo, inhibiendo de esta forma la flora
contaminante.
La adicin de antibiticos de amplio espectro inhibe una
amplia gama de bacterias Gram positivas y Gram negativas.
PREPARACION
Rehidratar 65 g del medio en un litro de agua destilada.
Reposar 10 a 15 minutos. Calentar agitando frecuentemente
hasta el punto de ebullicin durante 1 minuto para disolverlo
Cerebro Corazn Infusin.
Medio lquido adecuado para el enriquecimiento y cultivo de bacterias
por completo. Esterilizar en autoclave a 121C ( 15 lbs de aerobias y anaerobias, de microorganismos exigentes como estreptococos,
presin) durante 15 minutos. Enfriar aproximadamente a neumococos y otros microorganismos de difcil desarrollo.
45C. Vaciar en cajas de Petri estriles. Cuando se requiera el Con el agregado de 20 Ul de Penicilina y 100 g/ml de amicacina, se utiliza
medio en tubo de ensayo, distribuir el volumen requerido este medio para el cultivo de hongos patgenos.
antes de esterilizar y posteriormente enfriar en posicin
inclinada. Conservar en refrigeracin de 2 a 8C. Fundamento
Es un medio muy rico en nutrientes, que proporciona un adecuado
desarrollo microbiano. La infusin de cerebro de ternera, la infusin de
*Presentacin de 500 grs.*Para cultivo y conservacin de
corazn vacuno y la peptona, son la fuente de carbono, nitrgeno, y
hongos patgenos y no patgenos, particularmente vitaminas. La glucosa es el hidrato de carbono fermentable, el cloruro de
dermatofitos, levaduras y microorganismos acidricos a sodio mantiene el balance osmtico y el fosfato disdico otorga capacidad
partir de diversas muestras. *FORMULA EN GRAMOS POR buffer.
LITRO DE AGUA DESTILADA: Agar 15.0, Dextrosa 40.0, Los nutrientes de este caldo son muy apropiados para los hemocultivos, ya
Peptona especial 10.0, pH 5.6 0.2. *CONTROL DE que en esta infusin desarrollan todas las especies de estreptococos
excepto los tiol y piridoxal dependientes.
ACTIVIDAD POR MICROORGANISMO: Candida albicansBueno,
Los estafilococos que crecen en esta infusin suelen dar mejores
Trichophyton mentagrophytesBueno, Trichophyton rubrum reacciones en la prueba de la coagulasa.
Bueno. Con el agregado de 20 Ul de Penicilina y 100 g/ml de amicacina, se inhibe
la flora bacteriana cuando se utiliza este medio para el cultivo de hongos
patgenos.

Frmula (en gramos por litro) Instrucciones

Infusin de cerebro de ternera 200.0 Suspender 37 g del polvo en un litro de


agua destilada. Calentar a ebullicin
hasta disolver completamente. Esterilizar
Infusin corazn vacuno 250.0
en autoclave a 121C durante 15
minutos. Los tubos que no se usen
Peptona 10.0 inmediatamente debern calentarse en
un bao hirviendo para la eliminacin del
oxgeno retenido. Enfriar rpidamente sin
Cloruro de sodio 5.0 agitar.

Glucosa 2.0

Fosfato disdico 2.5

pH final: 7.4 0.2

Siembra
Por inoculacin directa de la muestra o del microorganismo en estudio.
Incubacin
El tiempo, la temperatura y la atmsfera de incubacin, sern las ptimas
y dependern del microorganismo que se est investigando.

Resultados
Examinar los tubos para evaluar el crecimiento por turbiedad. Cuando sea
necesario, subcultivar en medios slidos apropiados y realizar la
identificacin bioqumica.

Microorganismos Crecimiento

Neisseria meningitidis Bueno a excelente

Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 Bueno a excelente

Streptococcus pyogenes ATCC 19615 Bueno a excelente

Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 Bueno a excelente

Control Negativo Resultado

Medio sin inocular Sin cambio

Caractersticas del medio


Medio preparado: mbar claro, sin precipitado.
Stuart Medio de Transporte
Almacenamiento
Medio destinado a la recoleccin, transporte y preservacin de muestras
Medio deshidratado: a 10-35 C.
clnicas aptas para exmenes bacteriolgicos. Es til para mantener la
Medio preparado: a 2-8 C.
viabilidad de gonococos y de otros microorganismos de difcil desarrollo.

Presentacin Fundamento
Medio semislido, no nutritivo.
x 100g :Cdigo: B02-146-05 x 500g :Cdigo: B02-146-06 Contiene tioglicolato de sodio, el cual provee un ambiente reducido y es
til para suprimir cambios oxidativos en el medio de transporte, y azul de
metileno, que es el indicador de oxido reduccin. De esta manera se
favorece la viabilidad de los microorganismos durante su envo al
laboratorio. Cooper encontr que usando hisopos impregnados con carbn
bacteriolgico se recuperan en forma exitosa numerosos patgenos
entricos y respiratorios.
Frmula (en gramos por litro) Instrucciones S. pneumoniae ATCC 6305 +

Tioglicolato de sodio 0.9 H. influenzae tipo B +


Suspender 14,1 g del polvo por litro de
Glicerofosfato de sodio 10.0 agua destilada. Reposar 5 minutos. S. pyogenes ATCC 19615 +
Calentar a ebullicin hasta disolucin
total. Distribuir en tubos con cierre a
Cloruro de calcio 0.1
rosca (para evitar oxidacin) llenndolos
hasta 2/3 del tubo.
Azul de metileno 0.002 Esterilizar 15 minutos a 121C. Control Negativo Resultado
Dejar solidificar en posicin vertical.
Agar 3.0 Medio sin inocular Sin cambio

pH final: 7.4 0.2 Los microorganismos ms resistentes pueden permanecer viables durante
perodos mayores a 72 horas.
Siembra
1-Utilizando un hisopo estril, recolectar la muestra segn la metodologa Caractersticas del medio
apropiada para ensayos microbiolgicos. Medio preparado: ligeramente opalescente con tonalidad azul dependiendo
2-Colocar el hisopo en el tercio superior del medio de cultivo. Si una parte del grado de oxidacin.
de la varilla sobresale, cortarla e inmediatamente tapar el tubo. Rotular, y
enviar lo mas pronto posible al laboratorio para su procesamiento, dentro
de las 8 horas de recolectada la muestra. Almacenamiento
Se recomienda que las muestras transportadas se cultiven sin demora Medio deshidratado: a 10-35 C.
luego de ser recibidas en el laboratorio. Medio preparado: a 2-8 C.

Incubacin Presentacin
Mantener los hisopos a temperatura ambiente durante su envo al
laboratorio.
x 100g :Cdigo: B02-136-05 x 500g :Cdigo: B02-136-06
Resultados

Los tubos con medio de transporte se subcultivan en medios slidos


apropiados segn la muestra y el microorganismo que se quiera aislar.
Luego de la incubacin, debe haber escasa o nula reduccin de la
viabilidad de los microorganismos.
Entre los microorganismos que han sido transportados con escasa o nula
reduccin de la viabilidad en el medio transporte de Stuart dentro de un
perodo de 8 horas figuran:

Microorganismos Crecimiento

N. gonorrhoeae ATCC 49226 +


Trichomonas vaginalis
Streptococcus pyogenes
Streptococcus pneumoniae
Shigella flexneri
Salmonella typhi
Brucella abortus
Enterobacterias Etc.

Algunos microorganismos pueden resistir en el medio durante tres o ms


das, sin embargo, es conveniente que la muestra llegue al laboratorio antes
de las 24 horas.

Se presentan dos variantes: con o sin carbn incluido en el medio. Estriles


por radiacin.

La presencia de carbn en el medio neutraliza inhibidores y toxinas


bacterianas, y mejora el ratio de recuperacin de Neisseria, gonorrhoeae y
Vibrio cholerae.

Catlogo Descripcin

AMIES
DESCRIPCIN RPIDA 01-300281 Aluminio + viscosa

El medio de AMIES es una modificacin del medio de Cary Blair, que a su


01-300281/1 Aluminio + viscosa. Con carbn
vez lo es del de Stuart. Bsicamente, cambia el glicerofosfato por un fosfato
inorgnico y el azul de metileno por carbn vegetal neutro farmacutico.
Adems, aade iones Calcio y Magnesio, que ayudan a conservar la 01-300287 Poliestireno rompible + viscosa
permeabilidad de la clula bacteriana.

Permite la supervivencia de muchos microorganismos, como: 01-300285 Poliestireno rompible + viscosa.


Con carbn

Neisseria sp.
Haemophilus sp.
Corynebacterium sp.
1. Anderson, NL, et al. Cumitech 3B; Sistemas de Calidad en el
Laboratorio de Microbiologa Clnica, Coordinacin ed., AS
Weissfeld. Sociedad Americana de Microbiologa, Washington, DC

2. Tille, P., et al. Bailey y Microbiologa de Scott de diagnstico, CV


Mosby Company, St. Louis, MO.

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7. Control de calidad de preparados comercialmente Microbiolgicos


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REFERENCIAS