Manual Practicas Serie Blancac

Facultad de Bioanlisis, Veracruz Manual de Prcticas de Hematologa
PRACTICA NO.1
OBTENCIN DE LA MUESTRA DE SANGRE
1. INTRODUCCIN
Obtencin De Sangre Capilar

Es el mtodo empleado cuando se necesita tan solo una pequea cantidad de sangre, ya
que los estudios a realizar as lo requieren.
El sitio ms apropiado para obtener sangre capilar es la yema del dedo. En los nios ms
pequeos, es ms conveniente obtenerla del taln del dedo pulgar del pie. Los detalles
relativos a los recipientes y portaobjetos que se utilizan, se indican a continuacin.
VENTAJAS.
Facilidad con que puede obtenerse
Especialmente til en pacientes geritricos y en nios, en particular, recin nacidos.
DESVENTAJAS.
Slo logra obtenerse una pequea cantidad de sangre que puede ser insuficiente.
Es un mtodo por lo general tardado y que tiende a provocar hemlisis de la muestra
En pacientes inmunocomprometidos puede provocar infecciones, excepto cuando se
realiza la puncin despus de 8 a 10 min. de contacto con la piel con un buen
antisptico.
Obtencin De Sangre Venosa .

Es el principal mtodo de extraccin de sangre en el laboratorio de anlisis clnicos, ya que es
relativamente fcil de realizar.
VENTAJAS.
Nos permite hacer mltiples exmenes y en repetidas veces si se desea, con la misma
muestra.
Las alcuotas de plasma y suero pueden congelarse para futura referencia.
DESVENTAJAS
Puede provocar la coagulacin de la sangre si el procedimiento lleva mucho tiempo.
Algunos componentes no son estables en sangre anticoagulada.
Puede dificultarse en nios, pacientes obesos en estado de shock.
Puede ocasionarse hemlisis de las muestras afectando ciertas determinaciones, por las
siguientes causas:
Por forzar el paso de la sangre al tubo
Por agitar el t enrgicamente
Por extraer sangre de un hematoma
1
Anticoagulantes Empleados.
Estas sustancias impiden la formacin de cogulos. El mecanismo por el que se evita la
coagulacin, vara segn el anticoagulante; por ejemplo, EDTA, citrato y oxalato se unen con
el calcio, mientras que la heparina impide la conversin de protrombina en trombina.
Ejemplos de anticoagulantes son EDTA, citrato de sodio, y heparina en forma de sal de litio
,Los tubos deben invertirse varias veces para asegurar la mezcla adecuada despus e la
recoleccin, de acuerdo con las instrucciones del fabricante.
2. PRINCIPIO Y METODOLOGA .
El sitio ms prctico para obtener sangre venosa es la flexura anterior del brazo, de
preferencia justo por arriba de alguna de las ramas venosas que all se encuentran. Las venas
superficiales de la cara anterior del antebrazo son las ms comnes para la venopuncin.
Las tres venas principales que se utilizan son:
1) vena ceflica, ubicada en la parte superior del antebrazo y del lado del pulgar de la
mano; 2) vena baslica, ubicada en la parte inferior del antebrazo y del lado del dedo
meique de la mano; y 3) vena cubital mediana, que conecta las venas baslica y ceflica
en la fosa antecubital ( flexin del codo) y es la vena de eleccin.Si el paciente aprieta el puo
despus de aplicar el torniquete, la vena se tornar ms prominente.
El torniquete facilita la obtencin. En los nios pequeos se pueden utilizar otros sitios; si es
as, es mejor que la sangre la obtenga alguna persona con experiencia. Usar una aguja
puntiaguda, nunca menor de calibre 21 y una jeringa de 5 ml de 10 ml. Tanto la aguja como
la jeringa debern estar limpias, secas y estriles. Con prctica se puede obtener sangre
usando slo una aguja con un tubo de goma por el que se deja correr la sangre hasta los tubos
en los que se recoge la muestra. Para esta tcnica se utilizan agujas de calibre 19.
3. LISTA DE REQUERIMIENTOS
3.1 Materiales de Laboratorio

CANTIDAD DESCRIPCIN
2 Tubos de recogida de muestras con EDTA
1 Aguja de Vacutainer
1 Contenedor de Vacutainer
1 Jeringa
1 Lanceta
1 Torundas de algodn con alcohol isoproplico
1 Ligadura
2
4. PROCEDIMIENTO.
4.1 Puncin Capilar
4.1.1 Indicaciones.
En lactantes, se realiza en la superficie plantar interna externa del taln.En nios de ms

de un ao, en la superficie palmar de la ltima falange del segundo, tercero cuarto dedo de
la mano.La puncin no deber realizarse en una parte edematosa congestionada, donde
la piel se encuentra fra y ciantica.
4.1.2 Identificacin del Paciente
Asegurarse de que el paciente llegue en condiciones ptimas y

tranquilizarlo.
Colocar al paciente adecuadamente.
Checar el material para la extraccin:
4.1.3 Tcnica.
4.1.3.1 Limpiar cuidadosamente la piel en el sitio de puncin y a su alrededor con algodn

mojado en algn desinfectante , como alcohol de 70%.
4.1.3.2 Secar el rea con gasa estril seca.
4.1.3.3 Puncionar con una lanceta estril aguja desechable. El movimiento debe ser
rpido y la puncin suficientemente profunda para asegurar que la sangre fluya
libremente.La salida de la sangre puede facilitarse ejerciendo una suave presin en
la cara lateral del dedo. A corta distancia del sitio de puncin.
4.1.3.4 La sangre deber fluir libremente. Si se ejerce demasiada presin, se diluir con
los lquidos tisulares, lo que la puede hacer inapropiada para estudio.
4.1.3.5 Descartar siempre la primera gota de sangre, limpindola con una gasa seca y
dejar el sitio de puncin limpio y seco.
3
4.3.1.6 Obtener la cantidad requerida de muestra, aspirando la sangre con pipeta

colocndola en un portaobjetos.
4.2 Puncin Venosa
4.2.1 Indicaciones.
Debe indicarse al paciente la posicin correcta, que puede ser sentado recostado,
apoyando bien el brazo en posicin horizontal.
Elegir la vena adecuada, prefirindose la cubital mediana, la vena baslica, la ceflica, las
venas de la mueca, tobillo y mano, ya que resultan fciles de palpar.
4.2.2 Tcnica
1. Desinfectar la piel en el sitio de puncin con algodn mojado en un desinfectante

apropiado como alcohol de 70%.
2. Preparar la jeringa y la aguja, en su defecto la aguja con el contenedor en el caso del
sistema de tubos al vaco, cuidando que la tcnica sea asptica.
3. Aplicar un torniquete en el brazo ( por arriba del sitio de puncin), suficientemente
apretado para que restrinja el flujo de la sangre venosa.
4. Desinfectar nuevamente el sitio de puncin, y secar la piel con algodn gasa limpios,
secos y estriles.
5. Asegurarse de que el mbolo de la jeringa est hasta el fondo , es decir, que la jeringa
no contenga aire. Insertar la aguja de la jeringa en una vena con un movimiento
preciso.
6. Jalar lentamente el mbolo y obtener 2 a 3 ml de sangre.
7. Retirar la jeringa de la aguja y sustituirla por otra jeringa que contenga la solucin
anticoagulante de citrato de sodio. O directamente introducir el tubo del sistema de
vaco.
8. Obtener el volumen de sangre deseado jalando el mbolo muy despacio.
9. Soltar el torniquete y colocar una gasa seca sobre el sitio de la puncin, retirando
despus la aguja con un solo movimiento.
10. Presionar ligeramente la gasa sobre el sitio de puncin durante algunos momentos y
despus pedir al paciente que contine aplicando la presin durante unos minutos.
11. Cuando la sangre se obtiene empleando slo una aguja sin jeringa, se emplea el
mismo procedimiento y cantidad de anticoagulante. Deben usarse tubos graduados
para obtener la proporcin adecuada de anticoagulante y sangre.
5.PROCESAMIENTO Y REPORTE DE RESULTADOS

Se trabajar de manera individual.
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5.1 Reporte de Resultados

Se emitir el reporte de resultados de la prctica realizada. .
Se obtuvo de manera exitosa la muestra de sangre por ambos mtodos, jeringa y tcnica de
vaco (Vacutainer) la muestra fue desechada una vez terminada la prctica, ya que la
finalidad es que el alumno aprendiera a realizar la extraccin por ambos mtodos.
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6.0 CONFIABILIDAD ANALTICA

Se asegurar que la toma de muestra se realice de manera precisa y en base a la
metodologa descrita.
7.GARANTA DE CALIDAD.
Se evaluar la calidad de la toma mediante la gua y la vigilancia del maestro.
8. BIBLIOGRAFIA.
Laboratorio Clnico.Santiago Prieto, Silvia Amich, Mara Luisa Salve.Ed. Panamericana.
Actividades:
- Practicar la toma de sangre capilar.
- Practicar la toma de sangre venosa.
-Realizar esquemas de puncin capilar .
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-Realizar esquemas de puncin venosa y de las principales venas empleadas.
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-Realizar esquema de los diferentes sistemas de extraccin: jeringa y sus partes; sistema
vacutainer y sus partes; tipos de tubos y colores de tapones empleados en el sistema
vacutainer, de acuerdo con el anticoagulante empleado .
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SERIE BLANCA:PRCTICA No. 2

EXTENDIDOS DE SANGRE
1. INTRODUCCIN.
Los extendidos de sangre se realizan dentro del estudio del hemograma completo, bien de
manera aislada .En ellos se pueden estudiar los eritrocitos, los leucocitos y las plaquetas, y el
propsito de ello es determinar las caractersticas morfolgicas de cada tipo celular y evaluar la
frecuencia relativa de los distintos tipos de leucocitos.
Se deben teir con una de las tinciones de Romanowsky las cuales varan en sus propiedades
de tincin, y por lo tanto, es importante seleccionar una y familiarizarse con ella. La coloracin
de Wright es muy confiable y sencilla, pero otras tambin lo son, tales como la de Giemsa.
Leishman May-Grnwald, las cuales son igualmente satisfactorias, aunque puede variar la
tincin de un lote a otro de colorante.
Los frotis de sangre deben confeccionarse con lminas portaobjetos de vidrio que previamente
se hayan lavado y secado de manera conveniente, con la finalidad de eliminar cualquier resto
de grasa que pudiera quedar en ellos y evitar as una mala calidad en la tincin. Los frotis de
sangre son esenciales para el estudio morfolgico y cuantitativo de las clulas sanguneas.
Cuando un frotis se encuentra bien realizado, se podrn distinguir en l tres reas importantes:
8
la cabeza zona de inicio, el cuerpo zona media y la cola rea final del mismo. Un frotis no
deber ser ni grueso ni delgado, pues en ninguno de ellos se podrn apreciar bien las reas
antes mencionadas. En un frotis bien realizado, la tincin ser de mejor calidad.
3.LISTA DE REQUERIMIENTOS
NMER DESCRIPCIN
O
2 Tubos de recogida de muestras
1 Aguja de Vacutainer
1 Contenedor de Vacutainer
1 Jeringa
1 Torundas de algodn con alcohol isoproplico
1 Ligadura 4.
1 Caja de portaobjetos limpios
PROCEDIMIENTO.
Tcnica de los dos Portaobjetos.
1. Colocar a una distancia de 1.5-1.9 cm del extremo derecho de un portaobjetos, una

pequea gota desangre ( del tamao de 3 cabezas de alfiler) obtenida por puncin capilar
del taln, del lbulo de la oreja por extraccin venosa.
2. Si se emplea sangre venosa mezclada con anticoagulante, el frotis deber realizarse lo
ms pronto posible, debido a que el contacto prolongado con ste altera la morfologa
celular.
3. Aproximar el portaobjetos extensor a la gora, dejando que hagan contacto y que por
capilaridad ste se extienda a lo largo del borde.
4. Se desliza el portaobjetos extensor hacia el extremo contrario, para lograr una pelcula
delgada de sangre.
5. Dejar secar y teir.
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Se emitir el reporte de resultados de la prctica realizada.
Se llev a cabo los fritos de manera correcta siguiendo las instrucciones deL maestro, se tuvo que
repetir varias veces el procedimiento para poder obtener un buen frotis y realizar la prctica de
manera exitosa.
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Se asegurar que la tcnica de confeccin de frotis sea la adecuada.
Con la gua del maestro, se evaluar la calidad de la extensin .
8. BIBLIOGRAFIA.
1 .BLOOD CELL MORPHOLOGY. Peripheral Smear Evaluation. Manual 1.Lynn Maedel and
Sandra Sommer.American Society of Clinical Pathologysts.Chicago.
2.BLOOD CELL MORPHOLOGY. Benign or Reactive Changes in WBCs and Plateletes.Manual

Lynn Maedel and Sandra Sommer.American Society of Clinical Pathologysts.Chicago.
ACTIVIDADES:
-Realizar 10 frotis correctamente confeccionados.
-Realizar esquema que muestra las partes de un frotis .
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-Realizar esquema de tres frotis: demasiado grueso, demasiado delgado y correctamente

realizado.
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SERIE BLANCA: PRACTICA NO. 3

TINCIN DE WRIGHT Y REACTIVOS COMUNMENTE
EMPLEADOS EN HEMATOLOGIA
1. INTRODUCCIN
La finalidad de la tincin de Wright es lograr que el alumno se sienta capacitado para preparar
adecuadamente algunos de los reactivos y colorantes ms comnmente empleados en las
reas de hematologa y microbiologa, que como qumico clnico tiene la obligacin de conocer
y dominar.
COLORANTES.
A los colorantes de les puede clasificar en tres grupos:
1) Acidos. Son aquellos constitudos por sales cuya base es incolora y cuyo cido es
coloreado. A este grupo pertenecen las eosinas. Estas soluciones se usan para la coloracin
citoplasmtica coloracin de fondo.
2) Basicos. Son aquellas sales de cido incoloro y base coloreada como el clorhidrato
de azul de metileno. Estos colorantes tien por lo general algunos elementos del ncleo.
3) Neutros. Son aquellas sales con el cido y la base coloreados, por ejemplo, los
eosinatos de azul y azur de metileno , los ms empleados en hematologa. El mtodo de
Romanowsky, que emplea estos colorantes, ha sido la base de las coloraciones panpticas
utilizadas en la actualidad ya que ha tenido un gran xito en la tincin diferencial de la mayora
de las estructuras normales y anormales de la sangre. La mayor parte de estos colorantes
policromos derivados del mtodo de Romanowsky, se disuelven en alcohol metlico,
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combinando as, la fijacin con la tincin. Los ms conocidos de todos ellos, son los de
Giemsa y de Wright.
Tipo de Error Causas Como se Corrige

Tincin demasiado azul Tiempo excesivo de tincin Disminuir el tiempo de tincin
Lavado deficiente Lavar adecuadamente
Ph muy alcalino Acidificar el pH
Tincin demasiado rosa Tiempo insuficiente de tincin Aumentar el tiempo de tincin
Lavado excesivo Lavar adecuadamente
pH muy cido Elevar el pH
Precipitacin de colorante Colorante no filtrado Filtrado de colorante

Secado de la laminilla duranteProcurar que siempre haya un
la tincin. buen menisco de colorante durante la
tincin.
ANTICOAGULANTES.
Los 4 anticoagulantes ms usados son: mezcla de oxalato amnico y de potasio (

simplemente oxalato amnico ), citrato trisdico, sequestrene ( EDTA ), y heparina.
Los 3 primeros impiden la coagulacin sustrayendo el calcio del plasma sanguneo por
precipitacin fijacin en forma no ionizada. La heparina neutraliza la trombina y otras fases de
la activacin de los factores de coagulacin.
El citrato trisdico, el EDTA y la heparina, pueden emplearse para impedir la
coagulacin de la sangre destinada a transfusiones, sin embargo, la mezcla de oxalatos, no,
por ser txica.
Los oxalatos pueden usarse para determinaciones como hemoglobina, hematocrito y
recuentos globulares, aunque para extensiones sanguneas puede usarse tan slo en los
primeros minutos, pues ms tarde pueden desarrollarse alteraciones de las clulas
sanguneas como formas dentadas de los hemates, vacuolizacin en el citoplasma de los
granulocitos, fagocitosis de los cristales de oxalato, artefactos en los ncleos de los linfocitos y
monocitos, etc.Adems no deben emplearse para determinaciones qumicas de nitrgeno y
potasio. Para investigaciones de coagulacin, es muy til el citrato trisdico.
El EDTA sequestrene es tal vez el anticoagulante ms usado para el recuento de
clulas sanguneas. Se le compara con el oxalato para el estudio del hematocrito y
hemoglobina, pero para estudios morfolgicos, es todava mejor, pues con l, no se forman
alteraciones ni artefactos en las clulas sanguneas, an despus de un buen tiempo de estar
hecha la mezcla, si la sangre se refrigera ( 2 horas a 24 horas ).
La heparina tambin puede usarse para determinaciones como hematocrito y
hemoglobina, pero no de ptimos resultados en las extensiones sanguneas, ya que produce
un fondo azul en aqullas que son teidas con el colorante de Wright.
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3.1 Reactivos.
NUM. NOMBRE DEL REACTIVO CANTIDAD
1 Colorante de Wright 0.1 g
2 Metanol 60 ml
3 Na2HPO4 2.56 g
4 KH2PO4 6.66 g
5 EDTA 3g
6 Oxalato de amonio 0.8g
7 Agua destilada 1.5L
3.2 Equipo de Laboratorio
Balanza Granataria
Balanza Analtica

NUM CANTIDAD DESCRIPCIN
1 1 Mortero
2 2 Probetas de 100 ml
3 1 Matraz Volumtrico de 100 ml
4 4 Varillas de vidrio
5 1 Frasco de vidrio color mbar de 1L de capacidad
6 3 Frascos de vidrio color mbar de 150 ml de capacidad
7 1 Jeringa sistema vacutainer para toma de muestra
8 1 Ligadura
9 10 Portaobjetos
3.4 Preparacin de los reactivos
3.4.1Colorante de Wright:
Colorante de Wright: 0.1 g

Metanol: 60 ml
Se tritura el colorante con el alcohol en un mortero; sto se hace poco a poco. Esta
operacin debe durar 30 min. hasta completar disolucin. Se deja reposar dos das y se filtra.
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3.4.2 - Amortiguador Buffer de fosfatos
Na2HPO4 2.56 g
KH2PO4 6.66 g
Agua destilada para aforar a 1L
Mezclar las sales con poca cantidad de agua destilada, e ir agregando poco a poco ms
agua, hasta aforar a 1 L. Guardar en un frasco mbar de 1 L.
3.4.3- EDTA.
EDTA 3g
Agua destilada 100 ml
Mezclar el EDTA poco a poco con el agua destilada.
3.4.4 -Solucin de Oxalato de amonio.
Oxalato de amonio 0.8 g

Mezclar poco a poco el oxalato de amonio con el agua destilada.
En ambos, se utiliza 1 gota de solucin por ml de sangre.
4.PROCEDIMIENTO.
4.1 Tcnica: Tincin de Wright.
4.1.1. Seleccionar un portaobjetos nuevo de 25 X 75 mm para hacer extendidos, que

tenga la orilla relativamente lisa.
4.1.2 Obtener una pequea cantidad de muestra de sangre perifrica.
4.1.3Colocar una pequea gota de sangre a 2 3 mm de la orilla de un portaobjetos
limpio y seco. Colocar el portaobjetos para hacer extendido en un ngulo de 30 a 45 grados
con respecto al portaobjetos que tiene la muestra y hacer contacto cn la gota. Esta debe
extenderse rpidamente a lo largo de la orilla del portaobjetos para hacer los extendidos.
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Deslizar el portaobjetos de extensin sobre la superficie dispersando la muestra de sangre. El

extendido de sangre debe medir aproximadamente 30 mm de largo . El portaobjetos de
extensin no se despegar hasta haber extendido toda la sangre. El grueso del extendido de
sangre puede regularse modificando el ngulo del portaobjetos de extensin, variando el
tamao de la gota de sangre, la presin la velocidad de extensin.
4.1.4 El extendido de sangre se seca con el aire. Una vez seco, se escribe con lpiz el
nombre del paciente en una orilla del portaobjetos.
4.1.5 Fijar el extendido de sangre en alcohol metlico absoluto durante 2 a 3 minutos. El
color del extendido de sangre cambiar de rojo a caf claro. Esta fijacin es recomendable
aunque el colorante que se vaya a emplear se encuentre diludo en alcohol metlico absoluto.
4.1.6 Cubrir el portaobjetos completamente con el colorante. Despus de 3 minutos
aadir un volumen igual de amortiguador. Soplar ligeramente para mezclar uniformemente.
Aparecer un brillo metlico verde.
4.1.7 Despus de 5 minutos enjuagar cuidadosamente con agua de la llave
amortiguador de fosfatos, al principio con chorro delgado y suavemente y despus con el
chorro fuerte para eliminar todo exceso de colorante. Limpiar el reverso del portaobjetos en
posicin erecta. Cuando se haya secado, cubrir el portaobjetos con un cubreobjetos
rectangular y fijarlo con una gota de lquido de montaje. Se puede usar slo aceite de inmersin
en una preparacin temporal.
El alumno deber ensayar tiempos hasta ajustar aquellos que ms convengan para una
ptima coloracin. As, con tres frotis ms deber ensayar: 2 minutos de colorante y 4 de
amortiguador; 6 minutos de colorante y 6 minutos de amortiguador; 6 minutos de colorante y 11
minutos de amortiguador.
4.2 Resultados Esperados.

Los resultados esperados en la tincin sern los siguientes:
Hemates en color rosa.

Ncleos de los leucocitos de azul prpura, con la cromatina y paracromatina netamente
diferenciadas.
Grnulos neutrfilos del citoplasma, lila violeta
Grnulos eosinfilos, rojo tirando a naranja.
Grnulos basfilos, prpura tirando a azul oscuro.
Plaquetas, color lila oscuro.
Citoplasma de los linfocitos, azul claro.
Citoplasma de los monocitos, ligero azul.

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Al comenzar la practica se procede a la extraccion de sangre al paciente bajo la supervision del
catedratico en turno, se realiza el procedimiento adecuado y se extrae la muestra para
proceder a realizar el frotis en portaobjeto, una vez realizado se procede a la tincion de wright,
durante 5 minutos se tie con colorante y otros 3 con amortiguador hasta que la tincion este
completa, esperar y una vez seca la muestra observar los leucositos y eritrocios en el
microscopio.

Se asegurar que los tiempos de la tincin sean precisos.
7.GARANTA DE CALIDAD. Se evaluar la calidad de la extensin y de la tincin.
8. BIBLIOGRAFIA.

3. Lynn Maedel and Sandra Sommer.American Society of Clinical Pathologysts.Chicago.
3.Manual de Tcnicas Bsicas para el Laboratorio de Hematopatologa. Instituto de

Hematopatologa AVL Society.
Actividades:
-Practicar la tincin de Wright con frotis de sangre perifrica.
-Corregir de acuerdo al recuadro , errores encontrados en la tincin.
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EVALUACIN DE SANGRE PERIFRICA
1.INTRODUCCIN.
Una vez que se ha hecho y teido un frotis satisfactorio, ste puede ser evaluado en
bsqueda de anormalidades. Cada examen debera incluir anlisis con bajo poder ( 10X ), con
alto poder ( 40 45 X), e inmersin ( 100X ).Un error comn consiste en comenzar el examen
con el objetivo de inmersin.Ciertos problemas de la muestra y anormalidades morfolgicas
significativas pueden pasarse por alto a menos que todos los objetivos sean empleados.
La presencia de eritrocitos anormales en el frotis de sangre perifrica a menudo brinda

importantes claves en el diagnstico diferencial de las anemias, y puede ser tambin de ayuda
en el diagnstico de otras enfermedades. La morfologa de los eritrocitos puede verse
alterada con cambios en el tamao, en la forma, en las propiedades tintoriales de clulas
individuales por la presencia de ciertos materiales dentro de ellas. Incluso, la presencia de
solo una nica clula con ciertos cambios, puede considerarse significativa; en otros, la
anormalidad se considera importante slo si un nmero significativo de clulas se ven
afectadas.
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Asimismo, en la serie blanca, es importante realizar el recuento diferencial, an cuando

los nuevos contadores electrnicos den un resultado anticipado del mismo, ya que slo puede
confirmarse ste por medio de dicha lectura. Del mismo modo, se buscarn anormalidades en
las clulas blancas y stas se reportarn, as como la presencia de clulas que normalmente
no se ven en sangre perifrica, sino nicamente en mdula sea, a menos que exista alguna
patologa presente.
Lo mismo aplica para las plaquetas, las clulas ms pequeas de sangre perifrica.Se
puede hacer un recuento indirecto de las mismas cuando as se requiera, y buscar
anormalidades en su forma y en su tamao. Algunas anormalidades pueden requerir que se
indique le severidad del cambio. Todas estas determinaciones pueden diferir de observador a
observador, conduciendo a una variacin considerable en el anlisis del mismo frotis de
sangre.
Los laboratorios actualmente tratan de controlar estas inconsistencias desarrollando

criterios para estandarizar la evaluacin de la morfologa. As, muchos laboratorios usan un
mtodo semicuantitativo de evaluacin, consistente en los trminos: leve, moderado severo.
O bien un sistema " por cruces" :1+, 2+, 3+, etc.
Tan importante como el que haya consistencia entre los observadores, es importante
tambin la seleccin de una rea apropiada del frotis para la evaluacin. En un frotis en " cua
", en el rea "aplumada" terminal del frotis, demuestran cambios que pueden considerarse
patolgicos, p.e. macrocitosis, esferocitosis, clulas en "diana ", etc. En el rea gruesa del
frotis, las clulas pueden interpretarse como microcticas en forma equivocada, y la morfologa
puede ser difcil de evaluar. Tambin tendern a formar apilamientos ( rouleaux ) en esta rea.
Por ello, el rea ideal para examinar un frotis, es aquella que contiene aproximadamente 200-
250 clulas por campo a seco fuerte. Esto corresponde a una rea en donde los eritrocitos se
tocan pero no se enciman. En el verdadero Roleaux, los mrgenes individuales de las clulas
son difciles de distinguir y dan una imagen como de pilas de monedas que han sido
empujadas y tiradas, imagen que persiste an en las reas ms delgadas del frotis, aunque
ah exista menor cantidad de clulas. La intensidad de la formacin de "rouleaux" depende de
la concentracin de las protenas plasmticas, especialmente el fibringeno. En enfermedades
inflamatorias, los niveles de fibringeno pueden aumentar. Tambin la elevacin de gama
globulinas, como se observa en el Mieloma mltiple, provoca formacin de "rouleaux".
2.1 Anlisis con bajo poder.

Este objetivo debe utilizarse para evaluar la calidad de la tincin.Las clulas blancas
deberan verse fcilmente con este aumento.Si no es asi, el frotis debe ser nuevamente
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teido.El borde aplumado debe ser examinado para buscar cmulos de plaquetas filamentos
de fibrina, indicando esto que debe realizarse una nueva toma, ya que esta evidencia de
coagulacin podra interferir con muchas pruebas hematolgicas. Los extremos laterales y
aplumado deben evaluarse en bsqueda de un nmero desproporcionado de leucocitos.,Las
clulas ms grandes ( por ejemplo los neutrfilos y los monocitos, tienden a acumularse ms
en estos lugares y si el frotis est mal hecho, se acumularn ms en estas reas, las cuales
estn fuera del rea ideal de observacin.Si la mayora de las clulas se encuentran en el
borde aplumado, el frotis deber descartarse y prepararse uno nuevo.
2.2 Anlisis con alto poder.

Con este objetivo existen dos problemas por resolver. En primer lugar, se debe
seleccionar el rea apropiada para iniciar la cuenta diferencial. Esta debe ser donde los
eritrocitos se tocan pero no se sobreponen, y puede ser un rea en donde se encuentren 200
eritrocitos por campo. Si la cuenta de leucocitos es muy baja, puede ser necesario incluir reas
fuera del rea ideal con el fn de encontrar suficientes clulas blancas.El segundo problema
por resolver con este objetivo, ser estimar la cuenta total de leucocitos. Estando en el rea
ideal, contar el nmero de clulas blancas observadas en cinco a diez campos y determinar el
promedio. El promedio, multiplicado por un factor de correccin que a menudo est entre
2000 y 2,500 ( 2 a 2.5 en miles) representar la cuenta total del leucocitos.
2.3 Anlisis con objetivo de inmersin.

Con este objetivo, la cuenta diferencial de leucocitos debe estimarse, la cuenta de
plaquetas, tambin debe poder estimarse y los tres tipos de clulas ( leucocitos , eritrocitos y
plaquetas ) deben observarse en bsqueda de anormalidades morfolgicas.
La cuenta diferencial consiste en identificar cuando menos 100 leucocitos consecutivos, y
reportar estos valores como un porcentaje. Es importante incluir las clulas de los mrgenes,
as como las del cuerpo del frotis. As, para lograr esto, debe seguirse el patrn de observacin
de la imagen siguiente:
El nmero de plaquetas tambin puede ser estimado con este objetivo. Empleando la
misma rea que para la cuenta diferencial, es decir, donde los eritrocitos se tocan pero no se
sobreponen, deben contarse las plaquetas en al menos diez campos. Este nmero ser
convertido en no. de plaquetas/l de sangre, como se hizo con la cuenta de leucocitos.
21
Deber calcularse el nmero promedio de plaquetas por campo, y dicho nmero se multiplicar
por un factor determinado por el propio laboratorio en base a la combinacin de los objetivos y
oculares empleados en sus microscopios. Por ejemplo, cada plaqueta, observada representa
15,000 plaquetas 20,000 / l. Si se llegaron a observar un promedio de 12 plaquetas por
campo, entonces, la cuenta total de plaquetas sera de 180,000/ l en el primer caso, 240,000
/ l en el segundo caso.
La ltima actividad a realizar con este objetivo, sera evaluar la morfologa celular. Esto
puede irse haciendo a medida que se va realizando la cuenta diferencial. Cualquier
anormalidad inclusin en clulas rojas y blancas, deber reportarse. Tambin es importante
evaluar la forma y el tamao de los eritrocitos en esta misma rea. Las clulas suelen
distorsionarse en reas muy delgadas, demasiado gruesas. Las plaquetas tambin debern
evaluarse en su tamao y forma. Ms de una forma inusualmente grande de plaquetas, en
cada cinco campos debern ser reportadas .
3. LISTA DE REQUERIMIENTOS.
3.1 Equipo de laboratorio.
Microscopio de Luz
CANTIDAD DESCRIPCIN
1 Frotis de sangre perifrica teido con colorante de Wright
4. PROCEDIMIENTO.
4.1 Anlisis con bajo poder.

4.1.1Evaluar la calidad de la tincin.
4.1.2Examen en el borde aplumado del frotis en bsqueda de cmulos de plaquetas
filamentos de fibrina.
4.1.3Evaluar extremos laterales y aplumado en bsqueda de leucocitos
desproporcionados.

4.2.1Seleccionar el rea apropiada para iniciar la cuenta diferencial.
4.2.3Estimar la cuenta total de leucocitos.
22
4.3Anlisis con objetivo de inmersin.

4.3.1Realizar el recuento diferencial, contando cien clulas en total, y diferenciando la
lnea celular a la que pertenecen.
4.3.2Realizar el recuento indirecto de plaquetas.
4.3.3Buscar anormalidades morfolgicas tanto de los leucocitos como de los eritrocitos
y de las plaquetas.

5.1.1 Anlisis con bajo poder.
5.1.2 Calidad de la tincin:_________________________________________________

__________________________________________________________________
5.1.3Examen del borde aplumado del frotis ___________________________________

__________________________________________________________________
5.1.4 Examen de los extremos laterales y aplumado del frotis.____________________

_____________________________________________________________________
5.2.1 Seleccionar el rea apropiada para iniciar la cuenta diferencial.________________

___________________________________________________________________
5.2.2Estimar la cuenta total de leucocitos._____________________________________

______________________________________________________________________
5.3 Anlisis con objetivo de inmersin.
23
5.3.1 Recuento diferencial
Metamielocitos _____
Bandas _____
Segmentados _____
Linfocitos _____
Monocitos _____
Eosinfilos _____
Basfilos _____
100
5.3.2 Busqueda de anormalidades morfolgicas de:
leucocitos ___________________________________________________________

8. BIBLIOGRAFIA.


4.Manual de Tcnicas de Laboratorio en Hematologa.Segunda edicin.Joan Lluis Vives.Josep

Lluis Aguilar.Masson.
24

FORMULA LEUCOCITARIA RECUENTO DIFERENCIAL
1.INTRODUCCIN.
La frmula leucocitaria nos da informacin sobre el porcentaje de leucocitos de cada tipo, en

base a su morfologa y caractersticas tintoriales.
A partir de estos valores y de la cuenta total de glbulos blancos obtenidos en microlitros,
podremos calcular los valores absolutos de cada lnea celular en sangre perifrica, y as
compararlos con los valores normales de cada una de ellas.
2.PRINCIPIO Y METODOLOGA .
Se realizar el recuento diferencial, de acuerdo como se indica en el procedimiento, y se
comparar contra los siguientes valores normales .Se anexan tambin, adems de los valores
normales en %, los valores normales absolutos, que indican el nmero de cada estirpe celular
expresado por microlitro . ( para obtenerlos, ver prctica no.7 )
-VALORES NORMALES.
TIPO CELULAR PORCENTAJE ( % ) LMITES ABSOLUTOS

Metamielocitos 0-2 <10-500
Bandas 0-11 100-800
Segmentados 40-74 2000-6000
Linfocitos 12-46 1000-4200
Monocitos 1-13 100-800
25
Eosinfilos 0-7 <100-200

Basfilos 0-3 <10-20
1. Microscopio de Luz
CANTIDAD DESCRIPCIN
4. PROCEDIMIENTO.
Con el objetivo de inmersin, identificar cuando menos 100 leucocitos consecutivos en un frotis
teido con Wright, y reportar estos valores en por ciento.Se aconseja identificar el rea ideal
para la observacin: el rea del cuerpo del frotis, donde las clulas se tocan pero no se
sobreponen. El recorrido debe hacerse de manera vertical, para no omitir clulas de los
mrgenes y para no salirse del rea ideal para el recuento.

TIPO CELULAR PORCENTAJE ( % ) VALORES

ABSOLUTOS
Metamielocitos
Bandas
Segmentados
Linfocitos
Monocitos
Eosinfilos
Basfilos
26

8. BIBLIOGRAFIA.
2.BLOOD CELL MORPHOLOGY. Benign or Reactive Changes in WBCs and

Plateletes.Manual Lynn Maedel and Sandra Sommer.American Society of Clinical
Pathologysts.Chicago.
3.El Atlas de Hematologa.Dr. Joaqun Carrillo Farga

5.Manual de Tcnicas de Laboratorio en Hematologa.Segunda edicin.Joan Lluis

Vives.Josep Lluis Aguilar.Masson.
ACTIVIDADES.
Investigar en qu casos pueden encontrarse cada una de las lneas celulares reportadas en la
cuenta diferencial, con valores por arriba y por debajo de lo normal.
27

RECUENTO DE GLBULOS BLANCOS
1.INTRODUCCIN.
La evaluacin de los glbulos blancos considera el conteo total de leucocitos y la cuenta

diferencial de cada uno de ellos. La medicin del nmero total de leucocitos sirve en ocasiones
de gua para evaluar la severidad de una enfermedad, siempre que se le asocie a la clnica que
sta presenta.Un aumento de los glbulos blancos por encima de 10,000 /l, se llama
leucocitosis, que con frecuencia es acompaada por incremento de los granulocitos neutrfilos,
aunque no es la nica causa. Es menos frecuente que aumenten todas las lneas celulares, lo
que podra deberse en realidad a una hemoconcentracin. Una disminucin en el recuento de
glbulos blancos por debajo de los valores normales establecidos, se conoce como leucopenia.
Las pipetas empleadas para el recuento manual de glbulos blancos, son similares a las
que se usan para el recuento de glbulos rojos, pero presentan en su capilar superior, la
grabacin 11, y en la inferior, la grabacin 0.5, lo cual indica una dilucin distinta, que es en
este caso de 1:20. Se emplea la misma cmara cuentaglbulos llamada cmara de Neubauer,
nada ms que el conteo y los clculos se realizan de diferente manera.
28
La cmara cuentaglbulos presenta un retculo con una superfcie total de 9mm, de 1

mm cada uno. Los cuadrados de las cuatro esquinas estn subdivididos en 16 cuadrados, y el
cuadrado central, en 25.
Cuadrculas ( L ) para recuento

de glbulos blancos
3.LISTA DE REQUERIMIENTOS.
3.1 Reactivos
NUM NOMBRE DEL REACTIVO CONCENTRACIN CANTIDAD

1 Acido Actico 2% 50 ML

1. Microscopio de Luz
29
3.3Material de Laboratorio
CANTIDAD DESCRIPCIN
1 Cmara de Neubauer
1 Pipeta para recuento de glbulos blancos
1 Tubo de ensaye de 13 X 100
1 Boquilla
3.4 Preparacin del reactivo
3.4.1 Lquido de Turk hemolizante:
-solucin de cido actico al 2%

- Agregar 1 gota de azul de metileno lquido
4.PROCEDIMIENTO.
4.1 Tcnica.
4.1.1 Pipetear sangre hasta la marca de 0.5

4.1.2 Limpiar cuidadosamente con una gasa o papel suave el extremo de la pipeta
y completar con el lquido de dilucin hasta la marca de 11.
4.1.3 Mezclar en el agitador por 2 minutos.
4.1.4 Cargar la cmara con la dilucin bien homogeneizada
4.1.5 Dejar reposar
4.1.6 Contar los leucocitos contenidos en los cuatro retculos de las esquinas.
Estos se encuentran divididos en 16 cuadros cada uno.
4.1.7 Realizar clculos como indica la frmula:
N______x______20______x______10 = N X 50
4
En donde:
N = suma de los leucocitos encontrados en los 4 retculos

20 = Ttulo de la dilucin
30
10 = Correccin de la cmara para llevar a 1 mm

4 = nmero de retculos.
4.2 Valores Normales:

Adultos: 5,000 - 10,000 / mm
Nios hasta 5 aos: 6,000 - 15,000 / mm
Recin nacidos: 10,000 - 15,000/ mm
4.3 Causas de error
4.3.1 Recoleccin de la sangre en condiciones de cianosis. Si se practica la puncin

venosa, evitar la compresin exagerada y prolongada.
4.3.2 Pipetas mal calibradas
4.3.3 Dilucin agitada insuficientemente
4.3.4 Carga de la cmara con la primera gota de la pipeta
4.3.5 Distribucin desigual de la cmara
4.3.6 Incorrecto ajuste del cubreobjetos
4.3.7 Cuenta defectuosa de los elementos celulares
4.3.8 Confundir a los eritroblastos con leucocitos. Para evitar dicho error, se debe
realizar una correccin con la siguiente frmula:
Y = %_eritroblastos_contados X No. De leucocitos contados

100 + % de eritroblastos contados
Numero real de leucocitos= No. De leucocitos contados Y

Ejemplo: No. De leucocitos= 15,000
% de eritroblastos= 35
Y= 35 _ x 15,000
100 + 35
No. Real de leucocitos= 15,000 3,750

No. Real de leucocitos= 11,250


____________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________
31
____________________________________________________________________________
________________________________________________________________________
6. CONFIABILIDAD ANALTICA
Se asegurar que la tcnica del pipeteo y descarga de la cmara sean adecuadas.
7.GARANTA DE CALIDAD. Se evaluar la calidad de la distribucin celular en la cuadrcula

de la cmara..
8. BIBLIOGRAFIA.
1. Hematologa.Fundamentos y Aplicaciones Clnicas. Rodak. Segunda edicin.Editorial

Panamericana.
2..Manual de Tcnicas de Laboratorio en Hematologa.Segunda edicin.Joan Lluis

ACTIVIDADES.
Realizar un esquema de la pipeta empleada para el conteo de Glbulos Blancos.
Enlistar causas de leucocitosis as como de leucopenia.
32

EVALUACIN DE FROTIS DE S.P. CON LEUCOCITOSIS Y
DESVIACIN A LA IZQUIERDA
1.INTRODUCCIN.
Un cambio en sangre perifrica que no est asociado con ningn cambio morfolgico
celular pero que est asociado con enfermedad, es un incremento en las bandas.
Esto puede ser referido como una " desviacin hacia la izquierda ", particularmente si
formas an ms jvenes son encontradas en la circulacin. Normalmente la cuenta de
neutrfilos tambin se encuentra aumentada, ya que si no es as, sto puede indicar un peor
pronstico para el paciente, por lo que algunos autores se refieren a la primera circunstancia
como un " cambio regenerativo hacia la izquierda ", y a la segunda , con cuenta normal baja
de leucocitos, como un " cambio degenerativo hacia la izquierda ".
Ocasionalmente, el aumento en la cuenta total de blancos y la aparicin de formas
neutroflicas jvenes, es tan marcada, que pareciera la sangre perifrica que se analiza en
pacientes con leucemia mieloctica crnica.
Este exceso de salida de estas formas a la circulacin, de hecho s es debido a algn
otro proceso patolgico y debe ser distinguido de leucemia. El trmino " Reaccin Leucemoide
" es el indicado en esta situacin.
En general, una cuenta de glbulos blancos elevada, se conoce como

leucocitosis.Aunque ms frecuentemente se debe a un aumento en los neutrfilos ( neutrofilia
), no siempre es as: puede estar elevada a causa de un incremento en los linfocitos
( linfocitosis), en los eosinfilos ( eosinofilia ), y casi siempre se debe a alguna alteracin .
Se debern buscar tanto en el frotis sanguneo como por medio del recuento de glbulos
blancos en el contador electrnico por el mtodo manual, el nmero aproximado de
leucocitos en una muestra que previamente haya sido analizada y de la cual se haya reportado
leucocitosis y desviacin a la izquierda. El hallazgo de un nmero aumentado de leucocitos y el
de formas jvenes que incluyan principalmente formas en banda y metamielocitos, confirmarn
dicho diagnstico .
33

Microscopio de Luz
CANTIDAD DESCRIPCIN
4. PROCEDIMIENTO.
Observar imgenes en laminillas y/ diapositivas correspondientes con estas alteraciones.


.________________________________________________________________________
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________

8. BIBLIOGRAFIA.

34


EVALUACIN DE FROTIS DE S.P. CON EOSINOFILIA
1.INTRODUCCIN.
Como ya se ha mencionado, la elevacin de los glbulos blancos a partir de neutrfilos, es la
ms comn. Sin embargo, puede haber un incremento en los eosinfilos que lleven a una
leucocitosis. Aun cuando la cuenta de glbulos blancos no estuviera elevada, se podra decir
que puede haber eosinofilia, y sto se determinar en base al clculo de los valores absolutos.
Si los valores absolutos de los eosinfilos se encuentran por arriba de lo normal, se
podra decir que hay eosinofilia. Son dos las causas ms comunes de esta condicin: las
enfermedades y reacciones alrgicas, y ciertas parasitosis, sin embargo, no son las nicas.
Se analizarn muestras en las que exista el hallazgo de eosinofilia, hacindose el recuento

diferencial as como la determinacin de los valores absolutos de los eosinfilos.

Microscopio de Luz
CANTIDAD DESCRIPCIN
4. PROCEDIMIENTO.
Observar imgenes en laminillas y/ diapositivas correspondientes con estas

alteraciones.

35

.________________________________________________________________________
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________

8. BIBLIOGRAFIA.



ACTIVIDADES.
Realizar una lista de enfermedades en las que se encuentren elevados los eosinfilos.
36

EVALUACIN DE FROTIS DE S.P. CON PICNOSIS Y
MICROORGANISMOS INTRACELULARES
1.INTRODUCCIN.
Picnosis.
El ncleo del neutrfilo normalmente es algo picntico, pero pueden distinguirse la
paracromatina y la cromatina.Las clulas muertas las que estn a punto de morir, sin
embargo, tendrn un ncleo obscuro y redondo sin evidencia de estructura nuclear. Los
lbulos pueden estar separados puede haber un nico y redondo ncleo en degeneracin.
Las clulas pueden distinguirse como neutrfilas porque el citoplasma retiene el tiente rosa
habitual. Estas clulas tambin pueden ser identificadas como necrobiticas. En una muestra
fresca, estas clulas son evidencia de que el organismo est " perdiendo la batalla " en un
paciente con infeccin; tambin pueden aparecer en pacientes que reciben quimioterapia.
Estos cambios tambin pueden encontrarse como resultado de una prolongada exposicin al
EDTA.
Organismos intracelulares.
Esta es un tipo de inclusin muy rara de encontrar e indica la presencia del organismo
infectante, ya que una sola clula que presente un microorganismo es significativo. Puede ser o
bien una bacteria, bien una levadura, y puede observarse intra extracelularmente, e indica
una septicemia abrumadora, de mal pronstico aunque podra ser un artificio originado por la
toma de la muestra a travs de algn catter contaminado.
Se analizarn muestras en las que exista el hallazgo de picnosis y microorganismos
intracelulares.

Microscopio de Luz
CANTIDAD DESCRIPCIN
37
1 Frotis de sangre perifrica teido con Wright
4.PROCEDIMIENTO.


.________________________________________________________________________
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________

8. BIBLIOGRAFIA.


38


EVALUACIN DE FROTIS DE S.P. CON CAMBIOS
MORFOLGICO-BENIGNOS: GRANULACIONES TXICAS,
VACUOLIZACIONES, CUERPOS DE DOHLE Y
AGRANULACIN CITOPLSMICA
1.INTRODUCCIN.
Granulaciones Txicas.
Este cambio representa la presencia de grnulos primarios no especficos, los cuales se
tien de color azul-prpura con la tincin de Wright como sucede con los del promielocito.
Pueden deberse al menor nmero de mitosis realizadas durante la maduracin celular. Algunas
clulas pueden contener slo unos pocos grnulos, otras, pueden contener muchos. Las
granulaciones txicas pueden ser vistas en una variedad de desrdenes inflamatorios
txicos, como por ejemplo, en infeccin bacteriana, ataque al corazn, insuficiencia renal, gota,
artritis reumatoide, as como en respuesta a una neoplasia.
Una granulacin aumentada tambin puede ser vista cuando el frotis es teido por mucho
tiempo. Si estos grnulos fueran realmente debidos a un proceso patolgico, no seran vistos
en todas las clulas, y adems aquellas que en verdad presenten granulaciones txicas, lo
harn en variedad de grados. Si todas las clulas se ven afectadas y en el mismo grado de
intensidad, sto debe considerarse como un artificio del frotis.
Vacuolizacin.
Ya que la principal funcin de los neutrfilos es la fagocitosis, si existe actividad fagoctica
aumentada, pueden haber numerosas vacuolas dentro del citoplasma como una evidencia de
sto. Estas son identificadas morfolgicamente como " hoyos " dentro del citoplasma. Sin
embargo, sto tambin puede ser el resultado de una exposicin prolongada al EDTA. Al igual
que en las granulaciones txicas, si todas las clulas se ven afectadas en el mismo grado,
debe sospecharse un artificio del frotis.
La vacuolizacin puede encontrarse frecuentemente cuando el paciente tiene una infeccin
bacteriana, especialmente con las bacterias pigenas . Tambin es frecuente observarlas junto
con las granulaciones txicas.
Cuerpos de Dhle.
Estas inclusiones son a menudo encontradas junto con las granulaciones txicas y/
vacuolizacin, aunque no siempre. A veces pueden ser la nica evidencia de un proceso txico
39
reactivo en un paciente. Los cuerpos de Dhle son pedazos de RNA residual ( retculo
endoplsmico rugoso ) en el citoplasma. Tienen el caracterstico color azul tenue del RNA y se
les encuentra frecuentemente cerca de la membrana citoplasmtica de la clula. En algunas
clulas, pueden ser muy prominentes, y en otras, pequeos y muy tenues, y pueden pasarse
por alto si el observador no tiene suficiente cuidado en la observacin.
En ocasiones pueden observarse los tres tipos de cambios txicos en la misma clula.
Agranulacin citoplsmica.
En ocasiones, la nica evidencia de neutrfilos activados es una rea clara agranular
en la periferia de la clula, que indica la formacin de un pseudpodo. Estas clulas tambin se
distinguen por un borde citoplsmico irregular en contraste con el borde redondo usual del
neutrfilo. Tambin sto puede ser visto junto con las granulaciones txicas, la vacuolizacin, y
los cuerpos de Dhle, aunque cada uno de ellos puede verse individualmente, y a menudo
estos cambios se asocian con aumento en las formas en banda y cuenta elevada de
leucocitos, aunque no siempre.
Se analizarn muestras con alteraciones en las que exista el hallazgo de varios cambios
morfolgico-benignos.

Microscopio de Luz
CANTIDAD DESCRIPCIN
4. PROCEDIMIENTO.
alteraciones.

40

.________________________________________________________________________
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________

8. BIBLIOGRAFIA.



41

EVALUACIN DE FROTIS DE S.P. CON LINFOCITOS
ATPICOS
1.INTRODUCCIN.
El trmino " atpico ", ha sido utilizado para describir cualquier forma que vare del criterio
morfolgico empleado para un linfocito normal. Debido a que varias formas son el resultado de
infeccin viral, el trmino " reactivo" y el ms especfico de " virocito " han sido asociados con
esta respuesta. Puede aplicarse el trmino " linfocitos variantes " ya que no todos los cambios
son " reactivos " asociados con infeccin viral.
La mayora de las formas variantes estn asociadas con infecciones virales,
especialmente con el grupo herpes virus ( por ejemplo, el virus Epstein-Barr-la causa de
mononucleosis infecciosa, citomegalovirus herpes simplex tipos 1 y 2 ), y virus de hepatitis B
y C. Tambin pueden encontrarse en casos de toxoplasmosis, sfilis tuberculosis.
Debido a que ocasionalmente puede encontrarse algn linfocito atpico y considerarse
normal, algunos laboratorios los reportan como un porcentaje separado de leucocitos, por
ejemplo, un porcentaje de linfocitos normales y un porcentaje de formas variantes. Otros
pueden usar un mtodo semicuantitativo, como " 1+, 2+, 3+ " " leve, marcado severo ",
para indicar su frecuencia relativa. Siempre que ms del 10% sean clasificados como
variantes, el hallazgo es considerado clnicamente significativo y debe ser reportado.
Otra de las formas se asemejan muy a menudo a un monocito. Son grandes, con citoplasma
abundante y a menudo vacuolado, el cual puede ser ms gris, comparando con el usual color
azul cielo del linfocito normal. El ncleo puede ser redondo, doblado, indentado lobulado y
tiene una apariencia ms abierta y color ms tenue que lo usual. No presenta nucleolos. A
veces, el citoplasma es predominantemente azul cielo, y contiene reas de un azul ms
intenso, que tienden a irradiar del ncleo a concentrarse en la periferia de la clula,
especialmente en donde hace contacto con las clulas que la rodean. A esta caracterstica se
le conoce como basofilia radial basofilia perifrica, respectivamente.
Estas clulas, como puede verse, pueden ser especialmente difciles de distinguir de los
monocitos. Algunos rasgos tiles para distinguirlos es que los monocitos son clulas que
empujan a otras y tienden a indentarlas cuando estn muy prximas a ellas. En cambio, los
linfocitos ms fcilmente sufren esa indentacin . El ncleo del monocito, tpicamente es ms
doblado lobulado, y el patrn cromatnico es ms delicado y fino. Por otro lado, si se est en
duda, puede seguirse una regla general que menciona que si hay muchos linfocitos en el frotis,
la clula que se sospecha ms seguramente es un linfocito tambin.
42
En un momento dado, hay quien puede confundir estas clulas con formas malignas
blastos. Debe recordarse entonces que en casos de leucemia, las clulas tienden a ser muy
similares morfolgicamente, dando una apariencia montona, homognea, especialmente al
observarse con pocos aumentos.En contraste, las enfermedades asociadas con formas
variantes, demostrarn una apariencia muy heterognea.
Se analizarn muestras en las que exista el hallazgo de linfocitos atpicos.

Microscopio de Luz
CANTIDA DESCRIPCIN
D
4. PROCEDIMIENTO.
alteraciones.


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________________________________________________________________________
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________

43
8. BIBLIOGRAFIA.



44

EVALUACIN DE FROTIS DE S.P. CON LINFOCITOS
PLASMOCITOIDES
1.INTRODUCCIN.
Una de las formas en que se presenta el linfocito atpico, comparte rasgos con la clula
plasmtica, la cual no es encontrada normalmente en sangre perifrica. Ambas tienen un
citoplasma azul muy intenso y pueden medir de 15-20 .Los dos pueden distinguirse por su
patrn de cromatina nuclear. En el linfocito " plasmacitoide ", el ncleo tiene una apariencia
abierta y laxa y tiene un color rojo-prpura ms tenue. Pueden verse tambin nucleolos. Esto
es en contraste con la apariencia amontonada, abultada del ncleo de la clula plasmtica y
su localizacin excntrica dentro de la clula. No hay una rea clara perinuclear en el linfocito
plasmacitoide como la hay en la clula plasmtica.
Los linfocitos plasmocitoides son comnes de encontrar en ciertas enfermedades virales
como el dengue y las enfermedades exantemticas de la infancia.
Se analizarn muestras que tengan el hallazgo de linfocitos plasmocitoides.

Microscopio de Luz
CANTIDAD DESCRIPCIN
4. PROCEDIMIENTO.
alteraciones.
45


.________________________________________________________________________
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________

8. BIBLIOGRAFIA.



46

EVALUACIN DE FROTIS DE S.P. CON
HIPERSEGMENTACIN NUCLEAR EN NEUTRFILOS
1.INTRODUCCIN.
Los ncleos de los neutrfilos normalmente tienen de dos a cinco lbulos

nucleares.La mayora tendrn dos tres. Si existe un aumento en las clulas con
cuatro cinco lbulos, el observador debera buscar cuidadosamente clulas con
ms de cinco lbulos.La presencia de una sola clula con seis distintos lbulos
nucleares, puede tener significancia clnica. Por otro lado, si ms del 5% de los
neutrfilos tienen cinco lbulos si la mayora tienen cuatro, sto tambin puede
ser un hallazgo importante.
Los neutrfilos hipersegmentados son la indicacin ms temprana en sangre
perifrica de anemia megaloblstica ( por deficiencia de vitamina B12 de folatos ),
y es importante que se reporten. Cuando menos deben identificarse seis lbulos
distintos para que la clula sea identificada como hipersegmentada.En casos
severos, pueden encontrarse clulas con nueve lbulos an ms.
Se analizarn muestras que tengan el hallazgo de hipersegmentacin nuclear en neutrfilos

Microscopio de Luz

CANTIDA DESCRIPCIN
D
4. PROCEDIMIENTO.
alteraciones.
47


.________________________________________________________________________
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________

8. BIBLIOGRAFIA.



48

ESTUDIO DE MDULA SEA
1.INTRODUCCIN.
El estudio medular es un procedimiento especializado de gran utilidad clnica. Puede

ser realizado tanto por aspirado (mielograma) como por biopsia percutnea segn las
caractersticas clnicas del paciente y el diagnstico presuntivo. El estudio medular permite
identificar las diferentes series hematopoyticas, estudiar el estroma medular y obtener
material para estudios bacteriolgicos, micolgicos, de citometra de flujo y genticos entre
otros.
La decisin de solicitar un estudio de mdula sea debe basarse en la hiptesis de que los
hallazgos que se esperan del estudio justifiquen someter al paciente al riesgo y la molestia, a
pesar de stos ser mnimos.
Los hallazgos medulares esperados (o inesperados) en parte dependen del cuadro clnico, de
los hallazgos en sangre perifrica y de la informacin que se requiere en algunos casos
especficos. En la actualidad el estudio medular hace parte integral del estudio sistematizado
de un importante nmero de enfermedades hematolgicas, infiltrativas y neoplsicas que estn
bien protocolizadas. Debido a que el aspirado de mdula sea est virtualmente libre de riesgo
(excepto si se hace en el esternn) y que la biopsia medular es un procedimiento invasivo
mnimo, el estudio se recomienda en todos los casos en donde se pueda justificar un probable
beneficio con la informacin obtenida.
Estudio medular .
El tipo de procedimiento utilizado para el estudio de la mdula sea (aspirado, biopsia o
ambos), depende de la sospecha clnica. En trminos generales se plantean cuatro
posibilidades:
Compromiso de precursores hematopoyticos con alteraciones citolgicas, como en las
anemias y leucemias. En estos casos, est mejor indicado el aspirado medular o mielograma.
Compromiso de las estructuras de soporte del tejido hematopoytico o del mismo hueso como
en la mielofibrosis, metstasis o granulomas, o que haya disminucin del tejido hematopoytico
y se requiera determinar con certeza la celularidad, como en la anemia aplstica. En estos
casos est mejor indicada la biopsia medular.
Fiebre de origen desconocido, en donde se debe solicitar un estudio de aspirado y biopsia.
49
Sospecha clnica o se desee estudiar una enfermedad infecciosa por bacterias, micobacterias y
hongos. En estos casos, se debe solicitar estudio de cultivos de material medular obtenido por
aspirado.
Algunos pacientes con coagulopata (especialmente los hemoflicos) requieren terapias de
reemplazo para hacer el procedimiento cuando est indicado hacer el estudio.
Como la mdula sea es un tejido blando, se pueden obtener muestras introduciendo una
aguja adecuada en la mdula y aspirando con jeringa. Los sitios donde se puede obtener
mdula sea en los adultos y nios mayores de un aos son: el esternn, las espinas ilacas
superiores anterior o posterior; la cresta ilaca y las apfisis espinosas de las vrtebras.
La puncin esternal, hasta donde sea posible, no se debe hacer de rutina, debido al riesgo de
lesin cardiovascular.
En nios menores de un ao se puede tomar material medular por aspirado en el tubrculo
tibial. A partir del primer ao de vida se toma similar a la del adulto.
Procedimientos especiales en el material medular

Las muestras de mdula sea son coloreadas con Wright cuando son obtenidas por aspiracin
y con hematoxilina-eosina, cuando es por biopsia; de acuerdo con los resultados obtenidos el
hematlogo apoyado en los hallazgos de sangre perifrica y en el examen fsico, puede recurrir
que tipo de procedimientos especiales estn indicados para confirmar el diagnstico.
2.1 Principio.
Los extendidos de mdula sea se colorean con Wright siguiendo la tcnica usual.
Inicialmente son observados macroscpicamente para determinar la presencia de partculas.
Luego el extendido es examinado en bajo poder (10X) para apreciar la relativa cantidad de
grasa y de contenido celular hematopoytico de acuerdo al cual la mdula se puede clasificar
como: hipocelular, normocelular e hipercelular.
Despus de la observacin en 10X el extendido se examina con objetivo de 100X localizando
los campos donde se hallan las partculas y se procede al anlisis de las clulas sanguneas
que habitan en la mdula sea. Se establece la relacin del nmero de las clulas blancas
frente al nmero de clulas rojas nucleadas. Esta proporcin se denomina relacin mielo -
eritroide (M:E). Para estimar esta relacin es necesario la identificacin y tabulacin de 300 -
500 clulas nucleadas. Se observa aumento en la relacin mielo-eritroide, cuando se aumentan
los precursores mieloides como sucede en los procesos inflamatorios agudos, leucemias o
cuando se disminuyen los precursores eritroides como en la insuficiencia renal crnica. Una
disminucin en la relacin mielo-eritroide se presenta cuando se disminuyen los precursores
mieloides como en la anemia aplstica o cuando aumentan los precursores eritroides como en
las anemias hemolticas y megaloblsticas.
50
En forma simultnea se realiza una valoracin cuidadosa de la morfologa de las diferentes

lneas celulares: serie eritroide, granuloctica, linfoide, monoctica, megacarioctica, clulas
plasmticas y otras clulas.
2.2 Metodologa
Estudio de Mdula Osea
El estudio de mdula sea, comprende los siguientes aspectos:
2.2.1 Seco Dbil 10X.

Celularidad Global, Ausencia Aumento del No. De Clulas grasas y/
megacariocitos.
Celuraridad Hematopoytica
-Normal
-Aumentada: hiperceluraridad
-Disminuda: hipoceluraridad aplasia.
2.2.2 Examen a Gran Aumento 100X.
2.2.2.1 Recuento Global:

Serie Granuloctica con predominio:mielocitos y metamielocitos : 60%.
Serie Eritroctica: Predominio: Policromatfilos y Ortocromticos. 20%.

Serie linfoide, Monoctica y Megacarioctica: 20%.
2.2.2.2 Caractersticas Morfolgicas:

-Aumento de Mieloblastos
-Aumento de Linfocitos clulas plasmticas
-Basofilia, Eosinofilia, aumento de clulas Cebadas de Macrfagos.
-Megacariocitos: hipo hipersegmentacin nuclear; alteraciones de la madurez
citoplsmica, megacariocitos de tamao muy pequeo.
51
-Serie Eritoide con cambios Megaloblsticos diseritropoyesis.

-Presencia de clulas no hematopoyticas: clulas metastsicas.
2.2.3 Reporte del Mielograma y Valores Normales.
LMITES DE NORMALIDAD (%)
Serie Blanca 50.4-70.3

Mieloblastos 0.2-1.5
Promielocitos 2.1-4.1
Mielocitos 8.4-17.0
Metamielocitos 10.0- 26.8
Bandas + segmentados 15.7 -31
Serie Roja
Proeritroblastos 0.2-1.3
Eritroblastos Basfilos 0.5-2.4
Eritroblastos Policromticos 17.9-29.2
Eritroblastos Ortocromticos 0.4-4.6
Linfocitos 11.1-23.1
Basfilos y Clulas Cebadas 0-0.2
Megacariocitos 0-0.4
Monocitos + macrfagos 0-0.8
Plasmocitos 0.4-3,9
Relacin Mieloide-Eritroide 1.5-3.3

1 Microscopio de Luz
52
3.2 Material de Laboratorio

CANTIDAD DESCRIPCIN
1 Laminillas y/ diapositivas con muestra de aspirado de mdula sea
4.PROCEDIMIENTO.
Observar las laminillas diapositivas y reportar el mielograma de acuerdo con el formato
que aparece en el reporte de resultados.


Se emitir el reporte de resultados de la prctica realizada de acuerdo con el siguiente
formato:.
R E P O RT E DE MIELOGRAMA
Serie Blanca
Mieloblastos
Promielocitos
Mielocitos
Metamielocitos
Bandas + segmentados
Serie Roja
Proeritroblastos
Eritroblastos Basfilos
Eritroblastos Policromticos
Eritroblastos Ortocromticos
Linfocitos
Basfilos y Clulas Cebadas
Megacariocitos
Monocitos + macrfagos
Plasmocitos
53
Relacin Mieloide-Eritroide

Se asegurar que la toma de la muestra y los tiempos de la tincin sean precisos.
8. BIBLIOGRAFIA.



54

INTRODUCCIN A LAS LEUCEMIAS Y EVALUACIN DE
FROTIS DE S.P. CON LEUCEMIA GRANULOCTICA
CRNICA
1.INTRODUCCIN.
Las leucemias mieloides son neoplasias malignas del Sistema Hematopoytico.
Como las neoplasias en general, las clulas leucmicas:
Proliferan de manera independiente de sus factores de crecimiento ( producidos por las

clulas estromales de su microambiente)
Tampoco responden a factores que las inhiben pues estn protegidas de la apoptosis.
Esta autonoma en la reproduccin celular se debe a mutaciones en los genes que
codifican para:
- factores de crecimiento
- factores de transcripcin
- protenas fosforiladoras( que meten a la clula en ciclo celular)
- factores inhibidores de la apoptosis
- factores inhibidores del ciclo celular
El trmino LEUCEMIA significa aumento de leucocitos neoplsicos en la sangre, por lo cual

es un trmino inapropiado.
Las LEUCEMIAS son neoplasias clonales que provienen de una sola clula maligna original la
cual tiene una gran capacidad proliferativa, como la CTH las CFC:
Las leucemias pueden ser agudas crnicas
LEUCEMIAS CRNICAS
55
CFCCTH
GEMM CTH
En las Leucemias Crnicas, las clulas neoplsicas maduran terminalmente

No producen la muerte en las etapas iniciales
El nmero de clulas maduras es normal aumentado
Segn el predominio de la lnea celular hacia la cual maduran pueden distinguirse:
Leucemia Granuloctica Crnica

Leucemia Mielomonoctica Crnica
Policitemia Vera
Trombocitemia esencial
Mielofibrosis crnica idioptica con metaplasia mieloide.
LEUCEMIA GRANULOCTICA CRNICA
La mutacin original se produce en una CTH, que madura terminalmente hacia todas las
lneas celulares, pero lo hace de predominantemente hacia la lnea granuloctica, y
frecuentemente hacia la megacarioctica.
2.1 Datos Caractersticos en el Diagnstico:
Leucocitosis generalmente por arriba de 50,000leucocitos totales, y en ms del 70% de

los casos, por arriba de 100,000.
Presencia de granulocitos en todas las etapas de maduracin.
Eosinofilia y sobre todo basofilia absolutas
Presencia de eritroblastos
Anemia moderada ausencia de sta
Plaquetas normales aumentadas
Fosfatasa alcalina en leucocitos disminuda.
Mdula ea con Hiperplasia de clulas granulocticas en todas las etapas de

maduracin y con abundantes megacariocitos.
2.2 Datos Definitivos Para El Diagnstico
Datos Citogenticos :
56
Presencia del Cromosoma Philadelphia: translocacin recproca entre los cromosomas

9 y 22. ( aumento de tirosina kinasa intracelular)
Presencia de translocacin con formacin del gen hbrido BCR/abl

Microscopio de Luz
CANTIDAD DESCRIPCIN
1 Frotis de sangre perifrica teido con Wright y/ diapositivas
1 Aspirado de mdula sea teido con Wright y/ diapositivas
4.PROCEDIMIENTO.


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________________________________________________________________________
________________________________________________________________________

57
8. BIBLIOGRAFIA.
2..Manual de Tcnicas Bsicas para el Laboratorio de Hematopatologa. Instituto de

Vives.Josep Lluis Aguilar.Masson

EVALUACIN DE FROTIS DE S.P. Y M.O. CON
POLICITEMIA VERA Y MIELOFIBROSIS IDIOPTICA CON
METAPLASIA MIELOIDE
1.INTRODUCCIN.
En las leucemias mieloides crnicas, la CTH tienen todava ms capacidad de dividirse que
una CTH normal.
Si la maduracin predomina hacia la lnea de los eritrocitos, se tendr:Policitemia vera.
Cuando la proliferacin es predominantemente hacia la lnea de los megacariocitos, pero stos
se mueren en la etapa de megacariocito maduro, a esta neoplasia se le llama Mielofibrosis
con Metaplasia Mieloide.
1.1 POLICITEMIA VERA
Policitemia ( elevacin de los glbulos rojos masa eritroctica total) de orgen primario
en la que hay que descartar otras causas de policitemia secundaria como son:
Enfermedades con dificultad en la oxigenacin sangunea: tabaquismo crnico,

sndrome de Pickwick.
Fstulas arteriovenosas cardiopatas congnitas.
Hemoglobinas anormales que producen hipoxi tisular.
Tumores productores de eritropoyetina.
1.2 MIELOFIBROSIS CRNICA IDIOPTICA CON METAPLASIA MIELOIDE
58
Se origina tambin en una CTH que madura hacia todas las lneas mieloides pero
predominantemente hacia los megacariocitos
En la Mdula sea existe aumento de todas las lneas, pero predominantemente hacia
los megacariocitos los cuales mueren en la etapa de megacariocitos maduros, liberando los
factores de crecimiento fibroblsticos, lo cual lleva a la mielofibrosis.
Al ocuparse el tejido medular por el tejido fibroso, se origina la hematopoyesis
extramedular.
En sangre perifrica usualmente hay un cuadro leucoeritroblstico.( elevacin del
nmero de granulocitos inmaduros y muchos eritroblastos
2.1 Criterios para el Diagnstico de Policitemia Vera:
Proliferacin de la CTH hacia todas las lineas con predominio hacia la lnea
eritroctica:plaquetas ,eritroblastos ,basofilia , eosinofilia, granulocitosis
con clulas no ms inmaduras que los mielocitos.Sin embargo la Biometra
Hemtica no es definitiva.
Trombocitosis > 400,000/ l
Leucocitosis > 12,000/ l sin fiebre infeccin
Aumento de fosfatasa alcalina leucocitaria sin fiebre infeccin.
Aumento de vitamina B12 srica transcobalamina
Cromosoma Philadelphia negativo.
Estudio de Cortes Histolgicos de Mdula sea en Policitemia Vera
Hiperplasia notable, con aumento de todas las lneas celulares, principalmente

eritroblastos y megacariocitos.
Clulas Grasas disminudas ausentes.
El 30% de pacientes desarrollan mielofibrosis con metaplasia mieloide.
2.2 Criterios para el Diagnstico de Mielofibrosis Idioptica Crnica con Metaplasia

Mieloide.
59
En mdula sea, aumento de todas las lneas, pero predominantemente hacia los
megacariocitos.
Mielofibrosis desde el principio en algunos pacientes, aunque no en todos, que se
demuestra con gruesas fibras de colgena en mdula sea y sustitucin de la
celuraridad normal por tejido fibroso, ocasionada por liberacin de factores de
crecimiento fibroblstico por los megacariocitos malignos.
En sangre perifrica puede haber elevacin o disminucin de plaquetas y
granulocitos .
En sangre perifrica, cuadro leucoeritroblstico ( granulocitos inmaduros y
muchos eritroblastos , anemia y poiquilocitos ( sobre todo dacriocitos ).
Realizar diagnstico diferencial con otras enfermedades que causan mielofibrosis.
( los dems sindromes mieloproliferativos crnicos ).

Microscopio de Luz
CANTIDAD DESCRIPCIN
4.PROCEDIMIENTO. Observar imgenes en laminillas y/ diapositivas correspondientes con

estas alteraciones.


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60
8. BIBLIOGRAFIA.
2..Manual de Tcnicas Bsicas para el Laboratorio de Hematopatologa. Instituto de



EVALUACIN DE FROTIS DE S.P. Y M.O. CON LEUCEMIA
MIELOMONOCTICA CRNICA Y TROMBOCITEMIA
ESENCIAL
1.INTRODUCCIN.
Cuando la maduracin de la CTH es predominantemente hacia los neutrfilos y

monocitos, la leucemia se llama Leucemia Mielomonoctica Crnica.
Cuando la maduracin predomina hacia las plaquetas, se trata de Trombocitemia esencial.
1.1LEUCEMIA MIELOMONOCTICA CRNICA
Leucemia Mielomonoctica Crnica Mielodisplasia Tipo IV.

Cuadro parecido al de la LGC, pero con un incremento en la maduracin hacia la lnea
de los monocitos .
1.2 TROMBOCITEMIA ESENCIAL ( Primaria Hemorrgica )
La clula que sufre la mutacin neoplsica, es la CTH, que madura hacia todas las
lneas, pero con predominio hacia la lnea de megacariocitos-plaquetas.
2.1 Criterios para el Diagnstico de Leucemia Mielomonoctica Crnica.
61
Monocitos displsicos, clulas hbridas entre mielocitos y monocitos.

Menos del 15% de los granulocitos son inmaduros.
Cambios displsicos +++.( apndices nucleares ; ncleos de neutrfilos muy
largos )
Ms de 1000 monocitos /l ( ms del 3% ),
Anemia leve.
En mdula sea los mieloblastos son <20%.
2.2 Criterios para el Diagnstico de Trombocitemia Esencial

Cuenta de Plaquetas por arriba de 600,000/l
Hemoglobina < 13 g/dl
Ausencia de Cromosoma Philadelphia del gen hbrido BCT/abl
Fibrosis medular ausente menos de 1/3 de la biopsia
Ausencia de otra causa de trombocitosis ( trombocitosis secundaria )
Mdula sea con hiperplasia moderada de las lneas eritroblstica y granuloctica y
aumento marcado de megacariocitos.
Descartar otras causas de Trombocitosis Secundaria, como:Deficiencia de
Hierro,Hemorragias crnicas, Procesos inflamatorios infecciosos crnicos,
Neoplasias malignas no hamatopoyticas, Pacientes esplenectomizados.

Microscopio de Luz
CANTIDAD DESCRIPCIN

estas alteraciones.

62

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________________________________________________________________________

8. BIBLIOGRAFIA.


63

EVALUACIN DE FROTIS DE S.P. Y M.O.
CON LEUCEMIA MIELOIDE AGUDA M0
1.INTRODUCCIN.
LEUCEMIAS AGUDAS
En las leucemias agudas, las clulas neoplsicas no maduran teminalmente;

generalmente maduran hasta la etapa de blasto un poco ms all.
Para que se consideren agudas deben tener > 20% de blastos en M.O.
Las clulas blsticas inhiben la proliferacin de las clonas normales.
Los pacientes tienen anemia, plaquetopenia, granulocitopenia.
La muerte sobreviene por hemorragias, por la plaquetopenia e infecciones.
La Leucemia M0, es una leucemia aguda cuya cuenta tpica de Mdula Osea es la siguiente:
96% de Mieloblastos ( 1a)

4% de eritroblastos ( eritroblastos y granulocitos en maduracin: muy
disminudos ). Por lo tanto: 0-3% de los blastos son positivos para tincin citoqumica de
MIELOPEROXIDASA.
64
Criterios para el diagnstico de la Leucemia Aguda M0
Demostrar con anticuerpos anti-mieloperoxidasa, la presencia de esta enzima ( MPO)

en el Retculo Endoplsmico Rugoso en el Aparato de Golgi. Demostrar la
presencia de protenas de membrana CD13 CD33 con anticuerpos monoclonales .
Demostrar la ausencia de esterasas especficas, que son propias de la serie
monoctica, Demostrar la ausencia del marcador monoctico CD14 y que descartan la
Leucemia M5a monoblstica .
Demostrar la ausencia de marcadores megacariocticos como CD41 CD61, que
descartan Leucemia M7 Megacarioblstica.
Demostrar la ausencia de marcadores de linfocitos que descartan leucemia linfoblstica: de
Precursores B: CD10, CD19, y TDT. Y de Precursores T: CD2, CD3, CD5, CD7 y TDT.

Microscopio de Luz
CANTIDA DESCRIPCIN
D
1 Frotis de sangre perifrica teido con Wright y / diapositivas
1 Aspirad de mdula sea teido con Wright y/ diapositivas

estas alteraciones.


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65

8. BIBLIOGRAFIA.


1.INTRODUCCIN.
La cuenta tpica de la leucemia aguda M1 es:
Mieloblastos: 83%
Promielocitos: 3%
Mielocitos: 2%
Eritroblastos: 12%
Los criterios para el diagnstico de la leucemia aguda M1, son:
>3% y < 10% de clulas tienen grnulos MPO positivos bastones de Auer
observables con la tincin citoqumica para MPO son clulas con un poco ms de
maduracin . ( que pueden ser: mieloblastos 1b ( mieloperoxidasa + ) , mieloblastos 2,
promielocitos , mielocitos.
90% de clulas son mieloblastos sin grnulos ( mieloblastos 1 =negativos para
mieloperoxidasa )
Hay anemia, granulocitopenia, trombocitopenia
66

Microscopio de Luz

CANTIDAD DESCRIPCIN

estas alteraciones.


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8. BIBLIOGRAFIA.


67

1.INTRODUCCIN.
La Leucemia mieloide aguda M2, presenta la siguiente cuenta tpica de Mdula Osea:
Mieloblastos: 52%
Promielocitos: 33%
Mielocitos: 7%
Granulocitos ms maduros: 3%
Eritroblastos: 5%
Criterios para el diagnstico de la Leucemia Aguda M2:
Entre 30 y 89% de clulas de mdula sea ( excluyendo eritroblastos ) son

mieloblastos y > 10% de clulas son promielocitos granulocitos ms maduros. ) El rango
puede ser: desde 20% de blastos con 80% de promielocitos clulas ms maduras , hasta
80% de blastos con 20% de promielocitos clulas ms maduras
Las llamadas Leucemias Agudas de Eosinfilos, de Basfilos y de Clulas cebadas, son
similares a la M2, aunque con diferenciacin a cada lnea respectiva
68

Microscopio de Luz
CANTIDAD DESCRIPCIN
1 Aspirado de Mdula sea teido con Wright y/ diapositivas

estas alteraciones.


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8. BIBLIOGRAFIA.
69
2.Manual de Tcnicas Bsicas para el Laboratorio de Hematopatologa. Instituto

de Hematopatologa AVL Society.


MIELOIDE AGUDA M3
1.INTRODUCCIN.
La leucemia M3 es una leucemia aguda, en la cual, la clula neoplsica original es la

CFC GEMM y no la CTH. Y en donde el 90% de las clulas de mdula sea maduran hasta la
etapa de promielocitos. Su complicacin principal y la causa de su gravedad es la CIVD, la
cual se evita con el Acido Transretinoico, , que favorece la diferenciacin de las celulas
malignas.
Criterios para el diagnstico de la leucemia aguda M3.
90% de clulas de Mdula Osea maduran hasta la etapa de PROMIELOCITOS , los

cuales son anormales, y en mayor cantidad que los promielocitos normales; algunas clulas
pueden madurar hasta neutrfilos segmentados y las clulas que maduran ms pueden
presentar anomala de Pseudo-Pelger. Pueden ser de dos variedades:
70
1) Variedad de grnulos grandes, los cuales son observables, y cristalizan formando

bastones de Auer, generalmente en cantidad mltiple, llamados faggots, en el 90%
de las clulas )
2) La Variedad Microgranular, en la que los grnulos pueden no verse claramente,

teniendo estos casos el ncleo plegado, de aspecto monocitoide, por lo que puede
ser confundida con una leucemia M5b ( monoblstica ), por lo cual debe realizarse
para su diagnstico, tinciones de Mieloperoxidasa Y esterasas dobles:
MPO Esterasas
M3 +++ -
M5b + +++

Microscopio de Luz
CANTIDAD DESCRIPCIN

estas alteraciones.

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71

8. BIBLIOGRAFIA.



MIELOIDE AGUDA M4
1.INTRODUCCIN.
En la leucemia M4, la maduracin de la clona neoplsica se dirige hacia dos lneas

de manera simultnea: la de los granulocitos y la de los monocitos, por lo que la morfologa
es compatible tanto con una M2 como con una M5.
Cuenta tpica en Mdula Osea:
Mieloblastos y promielocitos: 45%

Mielocitos: 8%
Monoblastos y promonocitos: 43%
Eritroblastos: 4%
Criterios para el diagnstico de la Leucemia Aguda M4
20% de las clulas son blastos, que inluyen: mieloblastos 1 y 2; monoblastos 1 y 2 y

promonocitos ( ms de 5,000 clulas de estirpe monoltica ).
72
Ms del 20% y < 80% de clulas son blastos, promonocitos y granulocitos ms

maduros.( Los granulocitos y clulas de estirpe monoltica se encuentran en
proporciones muy similares.
Si > 80% de clulas fueran de estirpe monoctica, sera una M5

Microscopio de Luz
CANIDA DESCRIPCIN
D

estas alteraciones.


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73
8. BIBLIOGRAFIA.



EVALUACIN DE FROTIS DE S.P. Y M.O.CON LEUCEMIA
MIELOIDE AGUDA M5
1.INTRODUCCIN.
Se distinguen dos tipos de leucemias Monoblsticas: la M5a poco diferenciada, y la M5b

bien diferenciada. El diagnstico se realiza al encontrar en M.O. > 80% de clulas de estirpe
monoctica: monoblastos, promonocitos y monocitos en una cuenta sin eritroblastos.
Cuenta tpica de la leucemia M5a:
Monoblastos: 90%
Promonocitos y monocitos: 6%
Eritroblastos: 4%
Cuenta tpica de la leucemia M5b:
Monoblastos: 6%
Promonocitos: 85%
Monocitos: 7%
Eritroblastos: 2%
74
2.PRINCIPIO Y METODOLOGA.
Criterios para el diagnstico de la Leucemia M5.
M5a M5b
> 80% de clulas son de estirpe > 80% de clulas son de estirpe
monoctica: monoblastos, promonocitos y monoctica: monoblastos, promonocitos y
monocitos en una cuenta sin eritroblastos. monocitos en una cuenta sin eritroblastos.
>80% de clulas de estirpe monoctica <20% de clulas de estirpe monoctica

son monoblastos son monoblastos
La M5a poco diferenciada ( equivalente a > 80% de las clulas de estirpe

la M0) se forma de monoblastos 1 y monoctica son promonocitos y monocitos;
constituye el 15% de los casos de stos se distinguen por sus grnulos
M5a.Debe distinguirse de la M0 de la azurfilos con Wright
L2:
-usando anticuerpos monoclonales para
CD14
-Demostrando la presencia de esterasas
no especficas en el RER con el
microscopio electrnico, la ausencia de
MPO.
75
La M5a bien diferenciada, se forma de Puede confundirse son la M3 variedad

monoblastos 1b y 2 y ---es positiva para microgranular
esterasas no especficas.
-es positiva para anticuerpos
monoclonales anti CD14, CD36 y CD68.
-MPO negativa, pero ocasionalmente
positiva.

Microscopio de Luz

CANTIDAD DESCRIPCIN

estas alteraciones.


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8. BIBLIOGRAFIA.



MIELOIDE AGUDA M6
1.INTRODUCCIN.
En esta leucemia, tambin llamada eritroleucemia, la CTH maligna madura de manera

simultnea hacia las lneas eritroblstica y granuloctica.
Criterios para el diagnstico de la leucemia M6.
Al menos 50% de clulas de Mdula osea deben ser eritroblastos que

frecuentemente, pero no siempre, tienen anormalidades morfolgicas Y al menos 30%
de clulas de la mdula sea deben ser mieloblastos promielocitos que pueden tener
bastones de Auer.
30% -49% de clulas medulares sean eritroblastos con alteraciones morfolgicas
notables Y que al menos 30% de clulas de Mdula Osea sean mieloblastos
promielocitos
O bien los siguientes criterios reunidos:
Cuadro de leucemia aguda
77
Severa anemia
Otras citopenias
La mayora de las clulas de la Mdula Osea sean eritroblastos muy anormales en
distintas etapas de maduracin con predominio de eritroblastos.
Frecuentemente no ms de 5% de mieloblastos, a lo que antes se llamaba
MIELOSIS ERITRMICA, que por lo general evoluciona hacia una M6 tpica con >
30% de mieloblastos.

Microscopio de Luz
CANTIDAD DESCRIPCION

estas alteraciones.

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8. BIBLIOGRAFIA.
78



MIELOIDE AGUDA M7
1.INTRODUCCIN.
Las clulas proliferantes en las M7 maduran hasta megacarioblastos y en ocasiones
hasta promegacariocitos y megacariocitos.A este tipo de neoplasias , formadas casi
exclusivamente por clulas de aspecto blstico sin diferenciacin morfolgica, y
diagnosticables principalmente a travs de tcnicas inmunocitoqumica, se les
llama leucemias megacarioblsticas M7.
Criterios para el Diagnstico de la leucemia M7.
>30% de blastos en Mdula osea, de los cuales: >50% deben pertenecer a la lnea de
los megacariocitos.
Las clulas son positivas para los anticuerpos anti CD41 y CD61, que ponen en
evidencia las glicoprotenas plaquetarias. ( tcnicas inmunocitoqumicas )
Mieloperoxidasa negativa en los blastos ( megacarioblastos )
79
Esterasas no especficas positivas focalmente en el aparato de Golgi.

De acuerdo con la etapa hasta la cual llegan a madurar las clulas se consideran:
M7a: La clona proliferante madura hasta la etapa de megacarioblasto.
M7b: La clona proliferante madura hasta promegacariocitos e incluso

megacariocitos. Pudiendo presentar plaquetas normales y aumentadas
morfolgicamente anormales ( gigantes y sin grnulos.
En ambas se observa tambin proliferacin de otras lneas celulares,

especialmente de eritroblastos. Con frecuencia presentan fibrosis medular.

Microscopio de Luz
CANTIDAD DESCRIPCIN

estas alteraciones.


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80
Se evaluar la calidad de la extensin y de la tincin.
8. BIBLIOGRAFIA.



EVALUACIN DE FROTIS DE S.P. CON LEUCEMIA
LINFOCTICA CRNICA Y LEUCEMIA DE CLULAS
PELUDAS
1.INTRODUCCIN.
Leucemia Linfoctica Crnica B
Esta es la ms comn de las leucemias linfoides.Cursa con linfocitosis notable. En ella, el resto
de la hematopoyesis se conserva normal.Se presenta con crecimiento ganglionar bilateral.El
Linfoma de Linfocitos bien diferenciados es la manifestacin tisular (ganglionar ) de la
misma enfermedad.Los linfocitos tienen pocas inmunoglobulinas de superficie.
Leucemia de Clulas Peludas

Las tricoleucemias o leucemia de clulas peludas se presenta generalmente con
esplenomegalia, sin linfadenomegalias y con anemia citopenias.Las clulas proliferantes
tienen una morfologa caracterstica que ayuda a su diagnstico.
2.1Criterios para el diagnstico de la leucemia Linfoctica Crnica B.
81
Hallazgo de linfocitosis y linfadenomegalias en pacientes de ms de 50 aos de edad,

sin otra causa de linfocitosis.
Rasgos Morfolgicos: numerosos linfocitos pequeos con escaso citolasma, cromatina
gruesa, segmentada, como rebanadas de pastel.
En su evolucin pueden aparecer prolinfocitos acompaados por citopenias variables.
Inmunofenotpicamente, los linfocitos son positivos a CD19, CD20 y a CD5; ste ltimo
los caracteriza por tener la capacidad de formar autoanticuerpos.
2.2 Criterios para el diagnstico de la Leucemia Linfoctica Crnica T CD8+ de

Linfocitos Grandes Granulares.
Linfocitosis menos notable.

Clulas con grnulos azurfilos citoplsmicos y cromatina gruesa, pero
no segmentada.
Linfocitos con capacidad de inhibir la proliferacin de clulas
hematopoyticas.
El cuadro leucmico se acompaa de neutropenia pancitopenia.
Inmunofenotpicamente son clulas positivas a CD2, CD3 y CD8
2.3 Criterios para el diagnstico de la Leucemia de Clulas Peludas.
Rasgos morfolgicos caractersticos de ayuda al diagnstico por bases morfolgicas:
Clulas pequeas
Citoplasma muy plido y con muchas microvellosidades filiformes
Ncleos pequeos como los de los linfocitos, pero cromatina no tan densa.
Las clulas tienen caractersticamente grnulos con fosfatasa cida resistente al cido
tartrico.
La mdula sea es difcil de aspirar, ya que, como es tpico, tiene fibrosis.
Inmunofenotpicamente son positivas para CD19 y CD20, CD11 y CD25.

Microscopio de Luz

CANTIDAD DESCRIPCIN
82

estas alteraciones.

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________________________________________________________________________

8. BIBLIOGRAFIA.


83

EVALUACIN DE FROTIS DE S.P. CON LEUCEMIA
LINFOBLSTICA
1.INTRODUCCIN.
La clasificacin FAB seala 3 tipos fundamentales: L1, L2, y L3, independientemente de su

inmunofenotipo.
Leucemia L1. Corresponden al tipo ms comn de leucemia aguda infantil y es la que tiene el
mejor pronstico de las 3.
Leucemia L2.Tienen un peor pronstico que las L1
Leucemia L3. Casi todos los casos corresponden a clulas B.Tienen mal pronstico
2.1Criterios para el diagnstico de la Leucemia L1.
blastos muy pequeos, en donde el ncleo ocupa la mayor parte de la superficie y por
lo tanto hay muy escaso citoplasma, el cual carece de vacuolas presenta muy
escasas;
hay homogeneidad en cuanto al tamao celular y densidad cromatnica;
84
la cromatina es fina, aunque no tanto como la de los mieloblastos-

Ocasionalmente, la cromatina es gruesa y pueden confundirse con linfocitos pequeos.
Los linfoblastos ocasionalmente adquieren forma de raqueta de mano.
2.2 Criterios para el diagnstico de la Leucemia L2.
Clulas muy variables en tamao

Las clulas ms grandes tienen cromatina fina y nucleolos bien demarcados, como los
de los mieloblastos; las de tamao intermedio, tienen cromatina ms gruesa, y las ms
pequeas, tienen cromatina condensada.
Con frecuencia, los ncleos tienen mltiples indentaciones cerebriformes ( en cuyo
caso, si se acompaan de grnulos positivos a la fosfatasa cida y a -naftil acetato
esterasa, corresponden a leucemias T y tienen un mal pronstico).
Citoplasma ms abundante que en las L1, generalmente sin grnulos y con pocas
ninguna vacuola.
2.3 Criterios para el diagnstico de la Leucemia L3

Clulas muy caractersticas, con citoplasma basfilo repleto de vacuolas claras, que
contienen lpidos neutros, positivas con rojo oleoso y PAS negativas
Ncleos con cromatina fina granular y enormes nucleolos.
Las clulas son morfolgica e inmunofenotpicamente indistinguibles de las que
proliferan en el linfoma de Burkitt.

Microscopio de Luz
CANTIDA DESCRIPCIN
D
85

estas alteraciones.


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8. BIBLIOGRAFIA.


86

EVALUACIN DE FROTIS DE S.P. Y M.O.CON MIELOMA
MLTIPLE
1.INTRODUCCIN.
Neoplasia hematopoytica, en la que proliferan clulas plasmticas, que han madurado
independientemente de una estimulacin antignica.Cuando llegan a salir las clulas
plasmticas a la circulacin, el diagnstico que se establece en el de Leucemia de clulas
plasmticas.
Dichas clulas forman inmunoglobulinas homogneas, monoclonales, que se reconocen por
electroforesis de protenas.La proliferacin se restringe a la mdula sea, ocasionando zonas
de ostelisis reconocidas por radiografas, y que se manifiestan clnicamente por dolor sea y
fracturas patolgicas y por hipercalcemia.
2.1 Criterios para el diagnstico del Mieloma Mltiple.
87
En el aspirado de mdula sea:
Aumento notable de clulas plsmticas ( lo normal es <3%)

Algunas clulas presentan ncleos irregulares y multilobulados.
Clulas plasmticas con cristales mltiples intracelulares, constitudos por
inmunoglobulinas cristales azurfilos alargados.
Clulas plasmticas con bordes citoplsmicos irregulares y de color rojo ( clulas en
flama).

Microscopio de Luz

CANTIDAD DESCRIPCIN

estas alteraciones.


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88
8. BIBLIOGRAFIA.



TINCIN CITOQUMICA PARA MIELOPEROXIDASA
1.INTRODUCCIN
La citoqumica constituye en la prctica hematolgica un complemento indispensable de la

morfologa ptica convencional.
Su finalidad es estudiar la presencia de ciertos componentes qumicos (enzimas o sustancias
diversas) en el interior de las clulas sanguneas tanto hematopoyticas como circulantes en
sangre perifrica.
A menudo resulta difcil diferenciar los blastos leucmicos de la leucemia linfoblstica aguda de
los de la leucemia mieloblastica (M1), monoblstica aguda (M5A) y la leucemia
megacarioblstica aguda (M7) utilizando solamente extensiones con las coloraciones de May-
Grnwald-Giemsa.
89
Recientemente se ha propuesto estudiar las leucemias agudas basndose en tres niveles

secuenciales de investigacin que son: los mtodos citoqumicos en primer lugar, el
inmunofenotipo intracelular en segundo lugar y por ltimo el inmunofenotipo de membrana.
Diversos procedimientos de tincin citoqumica contribuyen a llevar a cabo esta distincin.
Cuando se utilizan las reacciones citoqumicas adecuadas junto con el aspecto morfolgico de
las extensiones con tincin de Wright-Giemsa, puede establecerse un diagnstico preciso en la
mayora de los casos. Desde el punto de vista tcnico todas las reacciones citoqumicas tienen
en comn 3 etapas fundamentales: fijacin, incubacin y contraste.
Estas tinciones pueden realizarse sobre sangre perifrica, extensiones de medula sea,
preparaciones de ndulos linfticos u otros tejidos.
La mieloperoxidasa se sintetiza en el retculo endoplasmtico rugoso, de donde pasa a las

cisternas del aparato de Golgi quedando localizada fundamentalmente en la granulacin prim
aria o azurfila.
Dicha enzima se combina in vivo con perxido de hidrgeno transformndose en un potente
agente bactericida, viricida y fungicida. As, muestra actividad en todos los estadios del
desarrollo de los neutrfilos y se halla en los grnulos azurfilos. Los eosinfilos muestran una
actividad intensa. Los linfocitos, basfilos y las formas eritroides no se tien.
La tincin citoqumica de mieloperoxidasa es fundamental en el diagnstico diferencial de las
leucemias agudas (positiva en las mieloblsticas y negativa en las linfoblsticas). La actividad
peroxidasa puede faltar en algunos neutrfilos txicos de pacientes con infeccin y leucemia
aguda, y en casos raros de deficiencia congnita de mieloperoxidasa.
La demostracin citoqumica de esta enzima se basa en la accin oxidante de la

peroxidasa sobre el substrato, bencidina, en presencia de perxido de hidrgeno, apareciendo
un precipitado amarillo ocre en el lugar del citoplasma en donde se ha producido la reaccin.
3.LISTA DE REQUERIMIENTOS
3.1 Reactivos.
NU NOMBRE DEL REACTIVO CONCENTRACIN CANTIDAD

M
1 Formol 37% 10ml
2 Etanol absoluto 90ml
3 Dihidrocloruro de bencidina 0.3g
4 ZnSO4.7H2O 3.8% 1ml
5 Acetato de sodio3H20 1g
6 H202 3% 0.7ml
7 NaOH 1.0N 1.5ml
8 Safranina 0.2g
90

Balanza granataria
Balanza analtica
3.3 Material de Laboratorio
CANTIDAD DESCRIPCIN
2 Vasos de precipitados de 100 ml
2 Matraces aforados de 100 ml
1 Pipeta graduada de 10 ml
2 Pipetas graduadas de 5 ml
1 Pipeta graduada de 1 ml
2 Frascos de 250 ml
10 Frotis de sangre perifrica
3.4 Preparacin de los Reactivos
3.4.1 Solucin Fijadora

Formol al 37% 10 ml
Etanol absoluto 90 ml
3.4.2 Solucin Colorante
Modo de Preparacin:
Etanol al 30% ( v/v en agua ) 100 ml

Dihidrocloruro de bencidina 0.3 g
ZnSO4.7H2O al 3.8% 1 ml
Acetato de sodio 3H2O 1 g
H2O2 al 3% 0.7 ml
NaOH 1.0 N 1.5 ml
Safranina 0.2 g
Los reactivos se mezclan en el orden indicado. La bencidina a veces contiene un material

insoluble. Al aadir el sulfato de zinc se forma un precipitado que se disuelve al aadir los
dems reactivos. El pH de la solucin debe ajustarse a 6.00 + 0.05. La solucin se filtra y se
guarda a temperatura ambiente; puede usarse de manera repetida por meses.
91
4.PROCEDIMIENTO.
4.1 Tcnica:
4.1.1. Los frotis se fijan por un minuto con la solucin formol etanol
4.1.2 Lavar con agua de la llave
4.1.3 Secar al aire PERFECTAMENTE
4.1.4 Sumergir en la solucin colorante por 30 segundos.
4.1.6 Contrateir por 30 segundos con solucin acuosa de safranina al 1%
4.1.8 Secar al aire
4.1.9 Sellar con resina sinttica y cubrir con cubreobjetos del #1


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8. BIBLIOGRAFIA.


92

ALFA NAFTIL ACETATO ESTERASA EN LEUCOCITOS
1. INTRODUCCIN.
Las esterasas son un grupo de enzimas capaces de hidrolizar steres en sus
componentes cidos y alcoholes. Existen diferentes variedades segn el substrato
empleado.
Se utilizan 4 substratos: naftol-AS-C-cloroacetato, naftol-AS-D-acetato, -naftil-acetato,
-naftil-butirato, los cuales al ser hidrolizados en presencia de una sal diazoica dan un
precipitado insoluble en el lugar de la reaccin.
Utilizando como substrato el naftol-AS-C-cloroacetato (CAE) se detecta una esterasa
que es especfica de la granulopoyesis neutrfila en la que es positiva a partir del
mieloblasto y se expresa en forma de un precipitado rojo anaranjado muy brillante. Su
utilidad diagnstica se centra bsicamente en el reconocimiento de clulas blsticas
93
mieloides, si bien su aparicin es ms tarda que la de la mieloperoxidasa aunque iguala

a sta en especificidad.
Utilizando como substrato el naftol-AS-D-acetato, se obtiene una intensa positividad en
la serie monoctica que, a diferencia de las restantes clulas hematopoyticas, es
fluoruro sensible. Dada su positividad ms restrictiva es preferente usar el substrato -
naftil-acetato o -naftil-butirato para marcar la serie monoctica y sus precursores,
cuya positividad es intensa y se manifiesta en forma de un precipitado difuso por todo el
citoplasma.
3.1 Reactivos.
NUM NOMBRE DEL REACTIVO CONC. CANTIDAD

1 Na2HPO4 20 mg
2 KH2PO4 100mg
3 Formaldehido 37% 25 ml
4 Acetona 45 ml
5 Na2HPO4 2.366
6 KH2PO4 2.267 g
7 Cloruro de Pararosanilina 250 mg
8 HCl Concentrado 1.25 ml
9 Alfa Naphthyl acetato 50 mg
10 Etiln glicol monometil Eter 2.5 ml
11 Nitrito de sodio 4% 1.5 ml
Balanza granataria
Balanza analtica
CANTIDAD DESCRIPCIN
2 Probetas de 100 ml
2 Probetas de 500 ml
1 Matraz volumtrico de 50 ml
1 Tubo de 13X100 ml
3 Pipetas de 10 ml
4 Pipetas de 5 ml
2 Goteros de 10 ml
94
2 Goteros de 100 ml
2 Frascos de 500 ml
10 Frotis de sangre perifrica
3.4 Preparacin de Reactivos
Soluciones de Fijacin
3.4.1 Solucin A
Na2HPO4 20 mg
KH2PO4 100 mg
3.4.2 Solucin de fijacin pH 6.6
Formaldehdo al 37% 25 ml
Acetona 45 ml
Solucin A ( #1 ) 30 ml
( Esta solucin se guarda a 4C )
3.4.3 Amortiguador de fosfatos 1/15 M pH 7.6
a) Na2HPO4 2.366 g
H2O destilada 250 ml
b) KH2PO4 2.267 g
H2O destilada 250 ml
Preparacin del amortiguador:

Solucion a) 42.5 ml
Solucin b) 7.5 ml
Soluciones de Tincin
3.4.4 Solucin de Pararosanilina
Cloruro de Pararosanilina 250 mg

Agua destilada 5 ml
HCl concentrado 1.25 ml
95
Disolver calentando suavemente y agitando.

Dejar enfriar la solucin y filtrar
( Esta solucin se conserva a temperatura ambiente )
3.4.5 Solucin de Alfa Naphthyl acetato
Alfa Naphthyl acetato 50 mg

Etiln glicol monometil Eter 2.5 ml
( Esta solucin se prepara fresca , en cada ocasin ).
3.4.6 Solucin de Pararosanilina hexazotizada
Solucin de Pararosanilina 1.5 ml

Nitrito de sodio al 4% recin preparado 1.5 ml
( Esta solucin se prepara fresca, en cada ocasin ).
3.4.7 Mezcla de incubacin.
Buffer de Fosfatos 1/15 M, pH 7.6 45 ml

Solucin de Pararosanilina hexazotizada 3 ml
Solucin de Naphthyl acetato 2.5 ml
Ajustar el pH a 6.1+ 0.3 con NaOH 1N y filtrar
( Esta solucin se prepara fresca )
4.PROCEDIMIENTO.
4.1 Tcnica:
4.1.1. Fijar los frotis a 4C por 30 segundos

4.1.2 Lavar los frotis con agua de la llave
4.1.3 Dejar secar a temperatura ambiente
4.1.4 Colocar los fotis en la mezcla de incubacin a temperatura ambiente por 45
minutos en la oscuridad
4.1.6 Contrateir con hematoxilina de Gill por 10 minutos
4.1.8 Secar a temperatura ambiente
4.1.9 Sellar con resina sinttica y cubrir con cubreobjetos del #1

96

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8. BIBLIOGRAFIA.


FACULTAD DE BIOANLISIS
VERACRUZ
MANUAL DE PRCTICAS DE
LABORATORIO DE
HEMATOLOGA:
97
SERIE BLANCA
ELABORADO POR:
Maestro Titular:
Q.C. MARIA ESTHER

DESCHAMPS LAGO
98
99

Manual Practicas Serie Blancac

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Facultad de Bioanlisis, Veracruz Manual de Prcticas de Hematologa

Obtencin De Sangre Capilar

Obtencin De Sangre Venosa .

3.1 Materiales de Laboratorio

4.1 Puncin Capilar

En lactantes, se realiza en la superficie plantar interna externa del taln.En nios de ms

4.1.2 Identificacin del Paciente

Asegurarse de que el paciente llegue en condiciones ptimas y

4.1.3.1 Limpiar cuidadosamente la piel en el sitio de puncin y a su alrededor con algodn

4.3.1.6 Obtener la cantidad requerida de muestra, aspirando la sangre con pipeta

4.2 Puncin Venosa

1. Desinfectar la piel en el sitio de puncin con algodn mojado en un desinfectante

5.PROCESAMIENTO Y REPORTE DE RESULTADOS

5.1 Reporte de Resultados

6.0 CONFIABILIDAD ANALTICA

-Realizar esquemas de puncin capilar .

-Realizar esquemas de puncin venosa y de las principales venas empleadas.

SERIE BLANCA:PRCTICA No. 2

3.1 Materiales de Laboratorio

Tcnica de los dos Portaobjetos.

1. Colocar a una distancia de 1.5-1.9 cm del extremo derecho de un portaobjetos, una

5.PROCESAMIENTO Y REPORTE DE RESULTADOS

Se trabajar de manera individual.

5.1 Reporte de Resultados

6.0 CONFIABILIDAD ANALTICA

2.BLOOD CELL MORPHOLOGY. Benign or Reactive Changes in WBCs and Plateletes.Manual

-Realizar esquema que muestra las partes de un frotis .

-Realizar esquema de tres frotis: demasiado grueso, demasiado delgado y correctamente

SERIE BLANCA: PRACTICA NO. 3

Tipo de Error Causas Como se Corrige

Precipitacin de colorante Colorante no filtrado Filtrado de colorante

Los 4 anticoagulantes ms usados son: mezcla de oxalato amnico y de potasio (

3.2 Equipo de Laboratorio

3.3 Materiales de Laboratorio

3.4 Preparacin de los reactivos

Colorante de Wright: 0.1 g

3.4.2 - Amortiguador Buffer de fosfatos

Mezclar el EDTA poco a poco con el agua destilada.

3.4.4 -Solucin de Oxalato de amonio.

Oxalato de amonio 0.8 g

Mezclar poco a poco el oxalato de amonio con el agua destilada.

En ambos, se utiliza 1 gota de solucin por ml de sangre.

4.1 Tcnica: Tincin de Wright.

4.1.1. Seleccionar un portaobjetos nuevo de 25 X 75 mm para hacer extendidos, que

Deslizar el portaobjetos de extensin sobre la superficie dispersando la muestra de sangre. El

4.2 Resultados Esperados.

Hemates en color rosa.

5.PROCESAMIENTO Y REPORTE DE RESULTADOS

5.1 Reporte de Resultados

Se emitir el reporte de resultados de la prctica realizada.

6.0 CONFIABILIDAD ANALTICA

7.GARANTA DE CALIDAD. Se evaluar la calidad de la extensin y de la tincin.

2.BLOOD CELL MORPHOLOGY. Benign or Reactive Changes in WBCs and Plateletes.Manual

3.Manual de Tcnicas Bsicas para el Laboratorio de Hematopatologa. Instituto de

SERIE BLANCA:PRCTICA No. 4

La presencia de eritrocitos anormales en el frotis de sangre perifrica a menudo brinda

Asimismo, en la serie blanca, es importante realizar el recuento diferencial, an cuando

Los laboratorios actualmente tratan de controlar estas inconsistencias desarrollando

2.1 Anlisis con bajo poder.

2.2 Anlisis con alto poder.

2.3 Anlisis con objetivo de inmersin.

3.1 Equipo de laboratorio.

3.2 Materiales de Laboratorio

4.1 Anlisis con bajo poder.