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6/3/2017 DOFDiarioOficialdelaFederacin

DOF:25/06/2012

NORMAOficialMexicanaNOM245SSA12010,Requisitossanitariosycalidaddelaguaquedebencumplirlasalbercas.

AlmargenunselloconelEscudoNacional,quedice:EstadosUnidosMexicanos.SecretaradeSalud.
MIKELANDONIARRIOLAPEALOSA,ComisionadoFederalparalaProteccincontraRiesgosSanitariosyPresidentedel
ComitConsultivoNacionaldeNormalizacindeRegulacinyFomentoSanitario,confundamentoenlosartculos39delaLey
OrgnicadelaAdministracinPblicaFederal4delaLeyFederaldeProcedimientoAdministrativo3fraccionesXIIIyXXII,17
BisfraccinIII,17Bis2,116,118fraccionesI,IIyVII,119fraccinIIy122delaLeyGeneraldeSalud47fraccinIVdelaLey
FederalsobreMetrologayNormalizacin28delReglamentodelaLeyFederalsobreMetrologayNormalizacin2literalC
fraccinX,36y37delReglamentoInteriordelaSecretaradeSalud2fraccinIincisosa)yc),12fraccionesII,IVyV,227,
1219 y 1220 fraccin IV del Reglamento de la Ley General de Salud en Materia de Control Sanitario de Actividades,
Establecimientos,ProductosyServicios3fraccionesIincisosiyn,II,V,IXyXI10fraccionesIVyVIIIdelReglamentodela
ComisinFederalparalaProteccincontraRiesgosSanitarios,y
CONSIDERANDO
Que en cumplimiento a lo previsto en el artculo 46 fraccin I de la Ley Federal sobre Metrologa y Normalizacin, el
Subcomit de Salud Ambiental present el 20 de agosto de 2009 al Comit Consultivo Nacional de Normalizacin de
RegulacinyFomentoSanitario,elanteproyectodelapresenteNormaOficialMexicana.
Queconfechadel5deabrilde2010,encumplimientodelacuerdodelComitydeloprevistoenelartculo47fraccinIde
laLeyFederalsobreMetrologayNormalizacin,sepublicenelDiarioOficialdelaFederacin el proyecto de la presente
NormaOficialMexicana,aefectodequedentrodelossiguientessesentadasnaturalesposterioresadichapublicacin,los
interesadospresentaransuscomentariosalComitConsultivoNacionaldeNormalizacindeRegulacinyFomentoSanitario.
Queconfechaprevia,fueronpublicadasenelDiarioOficialdelaFederacin,lasrespuestasaloscomentariosrecibidos
porelmencionadoComit,enlostrminosdelartculo47fraccinIIIdelaLeyFederalsobreMetrologayNormalizacin.
Que en atencin a las anteriores consideraciones, contando con la aprobacin del Comit Consultivo Nacional de
NormalizacindeRegulacinyFomentoSanitario,tengoabienordenarlapublicacinenelDiarioOficialdelaFederacinla
siguiente:
NORMAOFICIALMEXICANANOM245SSA12010,REQUISITOSSANITARIOSYCALIDADDELAGUA
QUEDEBENCUMPLIRLASALBERCAS
PREFACIO
Enlaelaboracindeestanormaparticiparonlasunidadesadministrativaseinstitucionessiguientes:
SECRETARIADESALUD
ComisinFederalparalaProteccincontraRiesgosSanitarios.
CentroNacionaldeProgramasPreventivosyControldeEnfermedades.
SECRETARIADEMEDIOAMBIENTEYRECURSOSNATURALES
ComisinNacionaldelAgua.
InstitutoMexicanodeTecnologadelAgua.
SECRETARIADETURISMO
ASOCIACIONMEXICANADEHOTELESYMOTELESA.C.

ASOCIACIONMEXICANADEPARQUESACUATICOSYBALNEARIOS,A.C.
LIONBUSINESS,S.A.DEC.V.
INSTAPURA,S.A.DEC.V.
ASOCIACIONMEXICANADEDESARROLLADORESTURISTICOS,A.C.
INDICE
0.Introduccin
1.Objetivoycampodeaplicacin
2.Referencias
3.Definiciones
4.Abreviaturas
5.DisposicionesEspecficas
6.ControlSanitario
7.Muestreoymtodosdeprueba

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8.Concordanciaconnormasinternacionales
9.Procedimientodeevaluacindelaconformidad
10.Bibliografa
11.ObservanciadelaNorma
12.Vigencia
ApndiceNormativoA.AislamientoeidentificacindeNaegleriasppyAcanthamoebaspp.
ApndiceNormativoB.Determinacindebacteriascoliformesfecales.Mtododelnmeromsprobable(NMP).
0.Introduccin
Conlafinalidaddepreveniryminimizarriesgosalasaludpblicaporenfermedadesgastrointestinales,delapielyotras,
ocasionadasporingestin,contactoeinhalacindemicroorganismospatgenosysustanciasqumicasenelaguadealbercas,
es necesario llevar a cabo el control y vigilancia de las condiciones sanitarias de operacin y mantenimiento de las
instalaciones as como el monitoreo sistematizado de parmetros fisicoqumicos y de microorganismos que determinan la
calidaddelagua.
1.Objetivoycampodeaplicacin
1.1.Estanormaestablecelasespecificacionessanitariasquedebencumplirlasalbercasconelpropsitodeminimizaro
controlarriesgosalasaluddelosusuarios.
1.2. Esta norma es aplicable a todas las albercas de centros vacacionales, clubes deportivos, balnearios, centros de
enseanza,hoteles,moteles,desarrollostursticos,parquesacuticosocualquieraquepresteunserviciopblico.
2.Referencias

2.1.NormaOficialMexicanaNOM008SCFI2002,SistemaGeneraldeUnidadesdeMedida.
3.Definiciones
Paralosefectosdeestanormaseentiendepor:
3.1.Alberca.Estanqueartificialdeaguaconstruidoparafacilitarelnado,larecreacin,elrelajamiento,laenseanza o
entrenamientodeportivo.
3.2.Bitcora.Libro,cuadernooregistrofoliadoatravsdeunsistemaelectrnicoomanual.
3.3.Biopelcula.Crecimientodemicroorganismosenformadecapagelatinosaqueseadhiereaunasuperficie.
3.4.Bromoresiduallibre.Eslacantidadresidualdeioneshipobromitoycidohipobromoso.
3.5.Bromaminas.Eslacantidaddebromocombinadoconnitrgenoamoniacaloconcompuestosnitrogenados.
3.6.Circulacin.Accinmecnicaoaportedeaguaquepermitelamezclayelmovimientodelaguaentodoslossectores
delaalberca,evitandosuestancamiento.
3.7.Clororesiduallibre.Eslacantidadresidualdeioneshipocloritoycidohipocloroso.
3.8.Cloraminas.Eslacantidaddeclorocombinadoconnitrgenoamoniacaloconcompuestosnitrogenados.
3.9. Desinfeccin. Accin de inactivar o destruir microorganismos patgenos por medio de la aplicacin de productos
qumicosoprocesosfsicos.
3.10.Encauce.Obradentrodeunrooarroyoparamodificarsucorrienteconelfindeconstruirunaalberca.
3.11.EquipodemedicindeORP.Dispositivoquemideelintercambiodeelectronespormediodelacorriente elctrica
generadaporlasreaccionesdexidoreduccinyquerepresentalaconcentracinoactividaddeldesinfectanteenelagua,
expresadoenmilivoltios.
3.12.Lmitepermisible.Valormximoointervalodeconcentracindeunparmetro,quenocausaefectosnocivosala
salud.
3.13.Mantenimiento.Sonlostrabajosdeconservacinnecesariosparaprolongarlavidatildeunbienypreservarloen
buenascondicionessanitarias.
3.14.Materiaflotante.Estodoaquelmaterialquetienemenordensidadqueelaguayporelloquedaenlasuperficie.
3.15.Mtodoamperomtrico.Tcnicaelectrolticadondeseaplicaunvoltajeelctricopequeoatravsdedoselectrodos
ymideelcambiodecorrienteresultadodereaccionesqumicas.
3.16.Procedimiento.Documento que contiene las instrucciones necesarias para llevar a cabo de manerareproducible
unaoperacinoactividad,describiendoenformaescritaygrfica,elmtodo,frecuencia,enlaces,participantesyresponsables
necesariosparalarealizacindedichasactividades.
4.Abreviaturas
AdemsdeloespecificadoenlaNormaOficialMexicanaNOM008SCFI2002,SistemaGeneraldeUnidadesdeMedida,
elsignificadodelossmbolosyabreviaturasutilizadosenestaNormaeselsiguiente:

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4.1.DPD.N,Ndietilpdifenildiamina.
4.2.mg/L.Miligramosporlitro.
4.3.mL.Mililitros.
4.4.mm.Milmetro.
4.5.NMP.Nmeromsprobable.
4.6.ORP.Potencialdexidoreduccin.
4.7.pH.Potencialdehidrgeno.
4.8.ppm.Partespormilln.
4.9.UTN.Unidaddeturbideznefelomtrica.
5.Disposicionesespecficas
Los propietarios o responsables de albercas debern observar que las instalaciones de la alberca cumplan con los
requisitossanitariossiguientes,afindeevitarriesgosalasaluddelosusuarios:
5.1.Sedebercontarconprocedimientosdeoperacin,limpiezaymantenimientodelasalbercas.
5.1.1.Registrarenbitcoraslasactividadesdelimpiezaymantenimientodelasalbercasylosresultadosdelosanlisisque
serealicen.
5.2. Contar con un procedimiento de contingencias para dejar la alberca fuera de servicio en caso de accidentes o
condicionespocosalubresdelaguahastalograrqueserestablezcanlascondicionessanitarias.
5.3. Establecer un reglamento de medidas de seguridad y proteccin de saluddelosusuariosycolocarloala vista del
pblico.
5.4.Prohibirelingresodemascotasalaalberca.
5.5.Sedebecontarconserviciossanitariosyregaderasenelreadealbercas.
5.5.1.Serviciossanitariosconinsumoshiginicos(papelsanitarioyjabn).
5.6.Lasparedes,pisosdelaalberca,ascomolosaccesoriosqueestndentrodesta,debenestarlibresdepresenciade
mohoybiopelculayserdeacabadosanitario.
5.7.Laalbercadebetenercirculacindeaguadurantesuoperacinyencasoderecirculacindebercontarconequipo
defiltracin.
5.8.Sedebegarantizarunarenovacinmnimadiariadelaguadel5%encadaalberca.
5.9.Una vez vaciadas las albercas debern recibir mantenimiento exhaustivo mediante el tallado y abrasin del piso y
paredes,ascomolaadicindeunasolucindecloroa100ppmo100mg/L.Incluyendoelresanedegrietasyaplicacinde
pinturaepxicaencasoderequerirlo.
5.10.Elmantenimientodefiltros,equiposyaccesoriosdeberrealizarseenformaperidicasegnrecomendacionesdel
fabricanteycontarconelregistrodeestaactividad.
5.11.Laalbercanodebecontenermsde10unidadesdemateriaflotantepormetrocuadradodeltotaldesusuperficie,
mismaquedebeserretenidaenunamalladeaproximadamente1cmdeabertura.
5.12.Elaguadelaalbercadeberserdesinfectadapreviamenteasuusoycumplirconlosealadoenelcuadro1.

Cuadro1.Lmitespermisiblesdeparmetrosfisicoqumicosymicrobiolgicos,mtododedeteccinyfrecuenciamnimade
muestreodelaguadealberca.

Parmetro LmitePermisible MtododeDeteccin FrecuenciadeMedicin

pH

6.58.5 Potenciomtricoo Cada 4 horas durante el periodo de


colorimtrico operacin, iniciando con la apertura de
servicioalpblico.

Turbidez1

5 UTN o penetracin de Nefelomtricoovisual Una vez al da a mitad del periodo de


luzmayora2mcondisco operacin.
Secchi.

Clororesiduallibre2

1.05.0mg/L Colorimtrico con reactivo Cada 4 horas durante el periodo de


DPD1oamperomtrico operacin, iniciando con la apertura de
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servicio al pblico, para los mtodos
>650milivolts ORP amperomtrico y ORP incluir una medicin
conDPDalinicio.

Cloraminas2

0.00.5mg/L Colorimtrico con reactivo Semanal


DPD3

Bromoresiduallibre3

2.06.0mg/L Colorimtrico con reactivo Cada 4 horas durante el periodo de


DPD1oamperomtrico operacin, iniciando con la apertura de
servicio al pblico, para los mtodos
amperomtrico y ORP incluir una medicin
conDPDalinicio.
>650milivolts ORP

Bromaminas3

0.00.5mg/L Colorimtrico con reactivo Semanal


DPD3

Acidocianricooisocianuratosclorados2

Albercano 100.0mg/L Turbidimtrico con reactivo Semanal


techada para cido cianrico o
colorimtrico
Albercatechada 0.0mg/L

Coliformesfecales5

<40NMP/100mL Ver,ApndiceNormativoB. Bimensual,durantelatemporadadeuso.

Amebasdevidalibre(Naegleriaspp,Acanthamoebaspp)4,5

Ausente Ver,ApndiceNormativoA Bimensual,durantelatemporadadeuso.

Notas:
1 Noaplicaparaaguastermalesqueporsunaturalezaseanopacas.
2 Aplicasloparaalbercasenqueseutilicencompuestosdeclorocomodesinfectante.

3 Aplicasloparaalbercasenqueseutilicebromocomodesinfectante.
4 Aplicaparaalbercascontemperaturadeaguamayora30C.
5 Elmtododepruebaparaelanlisisdeestosmicroorganismos,seincluyeenlosapndices.
5.13.Quedanexentasdedesinfeccinydecumplirlosparmetrosfisicoqumicosdelcuadro1,lasalbercasconstruidaspor
encaucedeunacorrientesuperficialodeunmanantial,cuandopresentenlascaractersticassiguientes:
5.13.1.Lasquetenganrenovacindeaguaporlomenostresvecesaldaduranteelhorariodeservicio,asegurandoporlo
tantoausenciaderemolino.
5.13.2.Elaguadeestasalbercasdebermuestrearseporlomenostresvecesenunmes,antesdeliniciodetemporadade
mayorafluenciadevisitantesparacorroborarquesecumplenloslmitespermisiblesdeColiformesfecalesyAmebasdevida
libreespecficamenteNaegleriasppyAcanthamoebaspp.
6.Controlsanitario
6.1.Laautoridadsanitaria:
6.2.Podrcorroborarencualquiermomentomedianterevisindebitcoraqueelaguaqueseutilizaenlasalbercasse
encuentredentrodeloslmitespermisiblesestablecidos.
6.3.Bajosituacionesdecontingencia,podrestablecerlosagentesbiolgicos,qumicosyfsicos,nocivosalasaludquese
debanevaluarascomosufrecuenciademuestreo.
7.Muestreoymtodosdeprueba
7.1. El muestreo de agua para anlisis microbiolgico y fisicoqumico debe realizarse conforme a los procedimientos
siguientes:
7.1.1.Lospuntosdemuestreodebernubicarseenlaorilladelaalberca,lomsalejadodelossitiosdealimentaciny
salidadeagua,dondelasparedesseanrugosasydondeexistalamenormovilidaddelagua.
7.1.2. Para el anlisis de coliformes fecales, la muestra de agua debe ser colectada de 30 a 45 centmetros bajo la
superficiedelagua,dondelaprofundidadesdeaproximadamente1m,cuandolaalbercatengaunaprofundidadmenora50

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cmlamuestradebertomarseaunaprofundidadmedia,enbolsasorecipientesestrilescontiosulfatodesodio,elvolumen
mnimodelamuestradeaguadebeserde100mLysertrasportadaallaboratorioenrefrigeracinaunatemperaturaentre4y
8Cconuntiempomximodepreservacinde24horasentrelacolectadelamuestrayelanlisisenellaboratorio.Elanlisis
debeserrealizadoporunlaboratorioterceroautorizadoconformealmtododescritoenelApndiceNormativoB.
7.1.3.Paraelanlisisdeamebadevidalibre,elvolumenmnimolamuestradeaguadebeserde500mL,lacualdebeser
colectadalomsalejadoposibledelaentradaosalidadeagua,de10a15centmetrosbajolasuperficiedelagua,enbolsaso
recipientesestrilescontiosulfatodesodio,despusdeunraspadodelasparedesdelaalberca,teniendocuidadodecolectar
elmaterialquesepuedadesprender.Transportarlamuestraallaboratorioenlaoscuridadyatemperaturaambiente,conun
tiempomximodepreservacinde48 horas entre la colecta de muestra y el anlisis. El anlisis debe ser realizado por un
laboratorioterceroautorizadoconformealmtododescritoenelApndiceNormativoA.
7.1.4.Elanlisisdelosparmetrosfisicoqumicosdebeserenelsitio,colectandolamuestradeaguade5a30centmetros
bajolasuperficiedelagua.
8.Concordanciaconnormasinternacionales
EstaNormanoesequivalenteaningunanormainternacional.

9.Procedimientodeevaluacindelaconformidad
Laevaluacindelaconformidadpodrsersolicitadaporelrepresentantelegalolapersonaquetengafacultadesparaello,
antelaautoridadcompetenteolaspersonasacreditadasyaprobadasparatalesefectos.
10.Bibliografa
10.1.ImplementationGuidanceforAmbientWaterQualityCriteriaforBacteria,EPA,2002.
10.2.Guidelinesforsaferecreationalwaterenvironments.Vol.2:Swimmingpoolsandsimilarenvironments.WHO,2006.
10.3. Guas para la Calidad del Agua Potable. Volumen 1. Recomendaciones. Organizacin Panamericanade la Salud.
OrganizacinMundialdelaSalud.1995.
10.4. Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. American Public Health Association. 20th Ed.
WashingtonD.C.2001.EUA.
10.5.Normatcnicasanitariaparaalbercas.SecretaradeSaludPblicadelEstadodeSonora,25deabrildel2003.
11.ObservanciadelaNorma
La vigilancia del cumplimiento de esta norma corresponde a la Secretara de Salud y a los Gobiernos delas Entidades
Federativasensusrespectivosmbitosdecompetencia.
12.Vigencia
Estanormaentrarenvigoralos60dasnaturalesposterioresasupublicacinenelDiarioOficialdelaFederacin.
SufragioEfectivo.NoReeleccin.
Mxico,D.F.,a21demayode2012.ElComisionadoFederalparalaProteccincontraRiesgosSanitariosyPresidentedel
ComitConsultivoNacionaldeNormalizacindeRegulacinyFomentoSanitario,MikelAndoniArriolaPealosa.Rbrica.
ApndiceNormativoA
AislamientoeidentificacindeNaegleriasppyAcanthamoebaspp
A.1.Objetivo
AislareidentificaraamebasdelgneroAcanthamoebasppyNaegleriasppenmuestrasdeaguadeusorecreativo.
A.2.Campodeaplicacin
Estemtodoaplicaamuestrasdeaguaprovenientesdealbercasobalnearios.
A.3.Fundamento
Este mtodo se basa en el aislamiento primario de amebas del gnero Acanthamoeba y Naegleria en cultivos
monoaxnicos,paraposteriormenterealizarunaresiembraenlacualserealizanlaspruebasdeenflagelacin y morfologa
microscpicalascualesnospermitirndiferenciarentreambosgneros,unavezdiferenciadasdeotrasamebasseprocedea
incubarlas a temperatura de 43 1C, si stas continan con sudesarrollo a esta temperatura, se reporta la presencia del
gneropotencialmentepatgeno.
A.4.Materialesyequipo
A.4.1.Recipientesdepolipropilenocontapaderoscadecapacidadde1000mL
A.4.2.Tubosevergreencontapaderoscadecapacidadde50mL
A.4.3.Pipetastransferestriles
A.4.4.Jeringasdesechables
A.4.5.Asasbacteriolgicasestrilesdesechables

A.4.6.CajasdePetri
A.4.7.VarillasdevidrioenformadeL

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A.4.8.Tubosdevidrio13x100mm
A.4.9.Gradillasparatubos13x100mm
A.4.10.Gradillasparatubosevergreen
A.4.11.Recipienterojoparapunzocortantes
A.4.12.Estufadeincubacinparatemperaturade37Cyde431C
A.4.13.Refrigerador
A.4.14.Centrifuga
A.4.15.Campanadeflujolaminar
A.4.16.Microscopioinvertido
A.5.Reactivos
A.5.1.AgarNoNutritivo(agarNN)
A.5.2.Aguadestiladaestril
A.5.3.CultivodeEscherichiacoli(E.coli)desarrolladoencaldonutritivo
A.5.4.HipocloritodeSodio
A.6.Preparacindelmediodecultivo,agarNN/E.coli
CepaEscherichiacoli.(E.coli),tomarunaazadadeE.colientuboconcaldonutritivoeincubaraunatemperaturade37C
de18a24horas.Trascurridoeltiempodeincubacintomarde2a3gotasdelmedioyagregarlasenelcentrodeunacajade
agarNN.
Realizarunadistribucinuniformesobreelagar,paralocualseutilizaunavarilladevidrioestrilenformadeL,unavez
realizadoestopermitirqueelcaldonutritivoconlaE.colisesequesobrelasuperficiedelagarNNenunaatmsferaestril.
A.7.Preparacindelamuestra
Unavezquelamuestraserecibeenlaboratorioycumpleconlascondicionesdeaceptacindemuestras,serefrigeraa
unatemperaturaentre2y8Cporalmenos30minutos.
A.8.Descripcindelmtododeprueba
Despusdetranscurridoeltiemposacarelrecipientedelrefrigerador,seagitaysetomaunaalcuotadeaproximadamente
50mLycentrifugarenuntuboevergreena2500RPMdurante10minutos.Decantarelsobrenadanteencampanadeflujo
laminar,depositarde2a3gotasdelsedimento,enelcentrodeunacajadeagarNN/E.coli, con una pipeta estril transfer,
agitar levemente la placa con movimientos rotatorios sin retirarla de la superficie de la mesa. Las cajas ya inoculadas se
incubanaunatemperaturade37Cduranteunperiododeobservacinde7das,duranteestelapsodetiemposeexaminan
diariamente en el microscopio invertido en bsqueda de trofozotos y quistes caractersticos de los gneros Naegleria y
Acanthamoeba,lostrofozotossonidentificadosdebidoaquetienenunmovimientodecontraccinyexpansinensuvacuola
alimenticia la cual es refringente a la observacin microscpica. Una vez localizados los trofozotos sealar el sitio con un
marcadoryrealizarunaresiembrarecortandouncuadropequeodelmedioconunaasabacteriolgicaestrilypasarloaotra
caja con medio de agar NN/E. coli, el pequeo cuadro de agar recortado se coloca en forma invertida con respecto a la
superficiedelanuevacajadeagarNN/E.coli.
A.8.1.Pruebadeenflagelacin
Laresiembraseexaminaalmicroscopioinvertidoenbsquedadetrofozotosodeunaprobablecontaminacinconhongos
que en caso de presentarse, la caja debe de ser descartada y solicitar nueva muestra. Si la caja presenta desarrollo de
trofozotos,enunacampanadeflujolaminarseagregande2a3mLdeaguadestiladaestril,incubndolaporunperiodode2
horasaunatemperaturade37C.Unaveztranscurridoeltiempodeincubacinlacajaseexaminaenelmicroscopioinvertido
enbsquedadetrofozotosbiflageladoscaractersticosdeNaegleria.
Los trofozotos que sean localizados microscpicamente, observar su forma y si presentan locomocin. Acanthamoeba
presentatrofozotosenformadeestrellaysinmovimientosdelocomocinperceptible,enel
caso de Naegleria presentan movimientos de locomocin rpido tanto en su trofozoto biflagelado como en su forma
ameboidea,esimportanteidentificarslounpardeflagelosenelcasodeNaegleriayaqueexistenotrosgnerosdeamebas
quetienende3a4flagelos.Unavezrealizadasestasobservacionesanotarelgnerodelasamebasidentificadas.
A.8.2.Incubacindelamuestra
Lascajasquesonidentificadasconunooambosgnerosdeamebas(AcanthamoebaoNaegleria),procederaincubarlas
a una temperatura de 43 1C por un periodo de 24 horas, transcurrido este tiempo examinar al microscopio invertido en
bsquedadetrofozotosviablesloscualessonidentificadosmedianteelmovimientodesuvacuolaalimenticia.
A.9.Interpretacinderesultados
Lascajasquepresentandesarrollodetrofozotosenformadeestrellaodeerizosinmovimientodelocomocinperceptible
o lento con una vacuola contrctil, con una prueba de enflagelacin negativa y continen viables en su desarrollo a una
temperaturade431C,sereportanpositivasalgneroAcanthamoebaspp.
Lascajasquepresentandesarrollodetrofozotosenformasemiovaladaconmovimientosdelocomocinrpido,conuna
vacuolacontrctil,conunapruebadeenflagelacinpositivaycontinenviablesensudesarrolloaunatemperaturade43
1CsereportancomopositivasalgneroNaegleriaspp.
Lascajasquenopresentandesarrollodetrofozotosenlos5dasdeincubacina37C,sereportanausente.
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A.10.Glosariodetrminosyabreviaturas
AdemsdeloespecificadoenlaNormaOficialMexicanaNOM008SCFI2002,SistemaGeneraldeUnidadesdeMedida,
elsignificadodelossmbolosyabreviaturasutilizadosenestemtodoeselsiguiente:
A.10.1.AVL=Amebasdevidalibre
A.10.2.ANN=Agarnonutritivo
A.10.3.SNN=Sistemanerviosocentral
A.10.4.RPM=Revolucionesporminuto
A.11.Referenciabibliogrfica
A.11.1.FernandoLares/IsidraT.Ayala/EduardoVerdugoE.AmibasdeVidaLibreaisladasdejacuzzisypiscinasdeuso
recreativoenHermosillo,Sonora.ITSONDIEP,JulioDiciembre,Vol.3,Nmero10.InstitutoTecnolgicodeSonora,Mxico,p.
3947.
A.11.2.Tesisdeamibasdevidalibre,aislamientoeidentificacinenaguadelazonaurbanadeCaborca,Sonora.Briceo
VerdugoMargarita/MeloG.Joaquina,1992.
A.11.3.FiveCasesofPrimaryAmebicMeningoencephalitisinMexicali,Mxico:StudyoftheIsolates.LaresFernandoVillay
colaboradores.JournalofClinicalMicrobiology,Vol.31,No.3Mar.1993,p.685688.
A.11.4.CultivationofPathogenicandOpportunisticFreeLivingAmebas.SchusterFrederick.ClinicalMicrobiologyReviews,
Vol.15,No.3,July2002,p.342354.
ApndiceNormativoB
Determinacindebacteriascoliformesfecales.Mtododelnmeromsprobable(NMP)
B.1.Introduccin
LasbacteriascoliformesdefinidascomobacilosGramnegativos,noesporulados,aerobiosoanaerobiosfacultativos,quea
35C fermentan la lactosa con produccin de gas, son un grupo heterogneo compuesto por varias especies. Existe poca
evidenciaqueindiquequeestasbacteriascoliformespertenezcanaunsolognerotaxonmico.Lafaltadecertezaencuantoa
su filiacin taxonmica y la imprecisa correlacin entre los mtodos recomendados para la deteccin de coliformes han
presentadoproblemas.Elprimero,esqueEscherichiacoliesaceptadacomobacteriacoliforme,laespeciecontienevariantes
quenoproducengasolohacendespusde48horas,porloquenoselesidentificapormediodeestemtodo.Segundo,la
capacidad de fermentar la lactosa est frecuentemente asociada a genes localizados en plsmidos. Estos determinantes
extracromosomales son fcilmente transferidos entre otras bacterias Gram negativas no relacionadas a las coliformes, que
pueden,enconsecuencia,serrecuperadasenlaetapainicialdelanlisis.Noobstanteenlaprctica,latcnicahademostrado
suefectividad.
El mtodo se basa en que las bacterias coliformes, fermentan la lactosa incubadas a 35 1C durante 24a 48 horas,
resultandounaproduccindecidosygaselcualsemanifiestaenlascampanasdefermentacin.
B.2.Smbolosyabreviaturas
AdemsdeloespecificadoenlaNormaOficialMexicanaNOM008SCFI2002,SistemaGeneraldeUnidadesdeMedida,
elsignificadodelossmbolosyabreviaturasutilizadosenestemtodoeselsiguiente:
B.2.1.cmcentmetro
B.2.2.pHpotencialhidrgeno
B.2.3.mmmilmetro
B.2.4.mLmililitro
B.2.5.Nnormal
B.2.6.NMPnmeromsprobable
B.2.7.lb/plg2libraporpulgadacuadrada
B.2.8.hhoras
B.2.9.CgradoCelsius
B.2.10.%porciento
B.2.11. msomenos
B.2.12.<menorque
B.2.13.mmicrmetro
B.3.Medidasdeseguridadycontroldecalidad
Seguirlasindicacionesprecautoriasquesesealanenelapartadodepreparacindemediosdecultivo.
Recomendacionesgeneralespreviasalanlisisdelamuestra:
B.3.1.Homogeneizacindelamuestra.

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Lasmuestrasenrecipientesconunespaciovaco(dealmenos2.5cm),puedenhomogeneizarseporinversinrpida25
veces.Lasmuestrasquetengande2/3a3/4delleno,debernagitarse25movimientosdearribahaciaabajoenunarcode30
cm,paraasegurarunaunidadanalticarepresentativa.
B.3.2.Condicionesdeprueba.
Trabajarencondicionesaspticasenunrealimpiaydescontaminada.
Todoelmaterialqueestencontactoconlamuestradebeestarestril.
Ellaboratoriodebetenerimplementadounsistemadecontroldecalidadparaasegurarlaconfiabilidaddelosresultados.
B.4.Equipo,mediosdecultivoymateriales
Losreactivosqueacontinuacinsemencionandebensergradoanaltico.Cuandoseindiqueaguadebeentendersecomo
aguadestiladaconpHcercanoalaneutralidad.
B.4.1.Equipo
B.4.1.1.Hornoparaesterilizarquealcanceunatemperaturamnimade170C.

B.4.1.2.Incubadoraqueevitevariacionesmayoresa0.5Ccontermmetrocalibradoy/overificado.
B.4.1.3. Incubadora con recirculacin de agua que evite variaciones mayores a 0.5C con termmetro calibrado y/o
verificado.
B.4.1.4.Termmetrodemximasymnimas.
B.4.1.5.Autoclavequealcanceunatemperaturamnimade1211.0C,a15lb/plg.

B.4.1.6.Potencimetroconunaescalamnimade0.1unidadesdepHa25C.
B.4.2.Mediosdecultivo.
B.4.2.1Caldolaurilsulfatotriptosa(mediodeenriquecimientoselectivo).

Ingrediente Mediodeconcentracin1.5 Mediodeconcentracin
Sencilla
Triptosa 30.0g 20.0g
Lactosa 7.5g 5.0g
Fosfatodipotsico 4.125g 2.75g
Fosfatomonopotsico 4.125g 2.75g
Clorurodesodio 7.50g 5.0g
Laurilsulfatodesodio 0.15g 0.1g
Aguadestilada 1.0L 1.0L

Disolverloscomponentesen1Ldeagua,calentandosiesnecesarioocuandoutilicemediodecultivodeshidratadoseguir
lasinstruccionesdelfabricante.
AjustarelpHdetalmaneraquedespusdelaesterilizacinsteseade6.80.2a25C.
Distribuirenvolmenesde10mlelmediodeconcentracinsencillaentuboscondimensionesde16x160mmyde20ml
elmediodeconcentracin1.5entubosde20x200mm,cadatubodebetenercampanadefermentacin(Durham)invertida.
Esterilizarenautoclavepor15minutosa1211.0Ca15lb/plg.

Almacenarenrefrigeracinelmediounavezpreparado.
Lascampanasdefermentacinnodebencontenerburbujasdeaireunavezatemperadasdespusdelaesterilizacin.
AlternativamentealascampanasdeDurham,adicionarprpuradebromocresolaunaconcentracinde0.01g/Lalcaldo
delauriltriptosa,laproduccindecidoseobservarporelviredeesteindicador.
B.4.2.2.CaldoEC

Ingrediente Mediodeconcentracinsencilla
Triptosa 20.0g
Lactosa 5.0g
Fosfatodipotsico 4.0g
Fosfatomonopotsico 1.5g
Clorurodesodio 5.0g
Mezcladesaldebilis 1.5g
Aguadestilada 1.0L

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Disolver los componentes en 1 L de agua, calentando si es necesario. Cuando se utilice medio de cultivodeshidratado
seguirlasinstruccionesdelfabricante.
Distribuir en volmenes de 10 mL en tubos con dimensiones de 16 x 160 mm, cada tubo debe tener campana de
fermentacin(Durham)invertida.
AjustarelpHdetalmaneraquedespusdelaesterilizacinsteseade6.90.2a25C.
Esterilizarenautoclavepor12minutosa1211.0Ca15lb/plg.

Almacenarenrefrigeracinelmediounavezpreparado.
B.4.3.Materiales
B.4.3.1.Pipetasbacteriolgicasde10y1mL(osiesnecesariode11y2mL),contapndealgodn.Laspipetaspueden
sergraduadasenvolmenesigualesaunadcimadesuvolumentotal.
B.4.3.2.Frascosdevidriode250mLcontapnderosca.
B.4.3.3.Tubosdecultivode20x200mmy16x160mmcontaponesmetlicosoderosca.
B.4.3.4.Campanasdefermentacin(tubosdeDurham).
B.4.3.5.Gradillas.
B.4.3.6.Asadeplatinoonicromelde3mmdedimetro.
Todoelmaterialquetengacontactoconlasmuestrasbajoestudiodebeesterilizarsemediante:
Hornodurante2horasaunatemperaturade170a175C1horaa180C.
Autoclavedurante15minutoscomomnimoa1211.0Ca15lb/plg.

El material de vidrio puede sustituirse por material desechable que cumpla con las especificaciones. Nodebe utilizarse
materialdevidriodaadoporesterilizacionesrepetidasystedebeserqumicamenteinerte.
B.5.Procedimiento
B.5.1.Coliformestotales,presuntivo
Inoculacin.Agitarlamuestraytransferirvolmenesde10mLacadaunodelos5tubosdelaprimeraseriecon20mLde
caldolaurilsulfatotriptosadeconcentracin1.5y1.0mLy0.1mLdemuestraacadaunodelostubosdelasegundaytercera
seriede5tubosrespectivamentecon10mldecaldolaurilsulfatotriptosa.
Incubacin.Incubarlostubosa35C,durante242hyobservarsihayformacindegas,encasocontrario,incubarpor48
2h.
B.5.2.Coliformesfecales,confirmativo.
Decadatuboquemuestrehidrlisisdelmediooformacindegas,agitarytomarunaazada,procediendoasembrarenun
nmeroigualdetubosconmedioEC.Incubarenincubadoraconrecirculacindeaguaa44.50.2Cpor242h,observando
queeltiempoentrelainoculacinylacolocacindelostubosenelbaonoexcedade30minutosyqueelaguadeincubacin
cubraporenteroalmediodecultivoenlostubos.
B.6.Expresindelosresultados
Considerar los tubos del procedimiento confirmativo en que se observe formacin de gas despus del periodo de
incubacinrequeridoybuscarelNMPenlaTabla.Nmeromsprobable(NMP)enseriesdecinco(5)tubos.
B.7.Consideracionesgenerales.
Cuandoslounadilucinmuestratrestubospositivos,elegirstaylasdilucionesmayoresposteriores.
Cuandomsdeunadilucinmuestratrestubospositivosylaltimadamenosdetres,elegirestaltimaylasdosdiluciones
anterioresmsbajas.
Cuandoenningunadilucinhaytrestubospositivosystosseencuentranenmsdetresdiluciones,seleccionarlasdos
dilucionesmayorespositivasylasiguiente.
Cuandolostubospositivossloseencuentranenlamuestrasindiluir(10mL)yenlaprimeradilucin(1mL),seleccionar
lastresprimerasdilucionesparaelclculodelnmeromsprobable.
Encadacasoseobtieneunnmerodetrescifras,locualesrepresentadoenlaTabla.Nmeromsprobable(NMP)en
seriesdecinco(5)tubos.EnlacolumnaqueindicaelnmerodetubospositivossebuscaelndicedelNMP.
La tcnica de NMP puede admitir gran cantidad de variaciones. Los resultados obtenidos con esta tcnica deben ser
utilizadosconprecaucin.
Laprecisindelanalistadeberestardentrodeun5%yentreanalistas10%.
B.8.Informedeprueba
NMPCOLIFORMESFECALES/100mL.
B.9.Bibliografa
B.9.1.Edberg.S.C.,M.J.Allen,D.B.Smith&theNationalCollaborativeStudy,1988.Nationalfieldevaluationofadefined
substratemethodforthesimultaneousenumerationoftotalcoliformsandEscherichiacolifromdrinkingwater:Comparisonwith

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thestandardmultipletubefermentationmethod.Appl.Environ.Microbiol.54:1595.
B.9.2.Edberg,S.C.&D.B.Smith,1989.Absenceofassociationbetweentotalheterotrophicandtotalcoliformbacteriafroma
publicwatersupply.Appl.Environ.Microbiol55:380.

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