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Cuestionario

1. Hacer un esquema del recorrido de la luz a travs de un


microscopio ptico compuesto de campo claro.

2. Consultar el concepto de microscopia electrnica, microscopia


en campo oscuro, microscopia de luz ultra violeta, microscopia
de contraste de fases y microscopia por fluorescencia.
Microscopia electrnica: La microscopia electrnica es una tcnica que requiere
instrumentos de alta complejidad y personal altamente especializado. Se
utilizan la microscopia electrnica de transmisin o convencional y la de
barrido.

Microscopia en campo obscuro: El microscopio de campo oscuro utiliza un


condensador especial con un disco opaco que elimina toda la luz en el centro
del haz. La nica luz que llega a la muestra ndice en ngulo: as, slo la luz
reflejada por la muestra (rayos azules). Contra el fondo negro que se ve con la
microscopia de campo oscuro los bordes de la clula son brillantes, algunas
estructuras internas parecen brillar y la cubierta externa es bastante visible.

Microscopia de luz ultra violeta: Es una tcnica de luz reflejada porque las
muestras absorben la radiacin ultravioleta y la vuelven a emitir.
Es necesario por tanto, que las muestras contengan molculas que puedan
absorber en ultravioleta. No podemos observar la muestra por el ocular, al ser
esta radiacin daina.

Microscopia de contrastes de fases: La microscopia de contraste de fases est


basada en el hecho de que la velocidad de la luz es inversamente proporcional
a los ndices de refraccin de los medios a travs de los cuales se propaga.

Microscopia por fluorescencia: Ciertos compuestos qumicos que absorben la


luz ultravioleta devuelven parte de la energa radiante como luz de longitud de
onda ms larga, situada en la regin visible; este fenmeno se denomina
fluorescencia. Cuando un objeto fluorescente se expone a la luz ultravioleta,
puede ser percibido como un cuerpo brillante coloreado sobre un fondo negro.

3. Mencionar ejemplos de la utilidad de las anteriores


microscopias.
Microscopia electrnica: El lmite de resolucin de un microscopio electrnico
es, en consecuencia, varios rdenes de magnitud inferior que el del
microscopio ptico y permite pues el empleo de aumentos mucho ms
efectivos.

Microscopia en campo obscuro: El microscopio de campo oscuro se utiliza para


examinar microorganismos vivos que no son visibles con microscopio ptico
comn, que no pueden teirse con mtodos estndares o que resultan tan
distorsionados por la tincin que sus caractersticas no pueden identificarse.

Microscopia de luz ultra violeta: Esta tcnica se aplica en el campo de la


deteccin de protenas, cidos nucleicos, etctera.
Microscopia de contrastes de fases: Indicado para muestras transparentes. Por
ejemplo, estudio de los componentes celulares (ncleo, mitocondria, aparato
de Golgi, etctera)
Distintos tipos de clulas vivas, estudios hematolgicos, parasitologa,
etctera.

Microscopia por fluorescencia: Se utiliza para el estudio de microorganismos,


clulas, estudios inmunolgicos, etctera.

4. Describir brevemente los tipos de microscopio electrnico

Microscopio electrnico de transmisin: La microscopia electrnica de


transmisin da imgenes por medio de electrones que atraviesan la muestra
como lo hace la luz en el microscopio ptico.

Microscopio electrnico de barrido: La microscopia electrnica de barrido


produce imgenes con electrones, con radiaciones emitidas o reflejadas por el
espcimen del mismo lado que recibe el haz electrnico , de manera que
generalmente se observa una superficie de un objeto opaco al haz, lo que hace
comparable al microscopio de luz estereoscpico o de diseccin.

5. Consultar dos tcnicas de preparacin de muestras biolgicas


para ser observadas con microscopio electrnico.

Las muestras destinadas al SEM han de cumplir dos condiciones: deben de


estar secas y ser conductoras. El proceso de secado ha de llevarse a cabo
preservando al mximo la estructura original de la muestra. Para ello tenemos
dos alternativas: usar el mtodo clsico de fijacin y deshidratacin qumica o
utilizar el moderno mtodo de fijacin fsica por criofijacin.

En ambos casos la muestra necesita recubrirse despus con un material que la


haga conductora y permita su observacin en el microscopio.

Recubrimiento de muestras en bajo vaco

Con este mtodo se realizan dos tipos de recubrimientos: spputtering de oro


para obtener las mejores condiciones de imagen y, si se requiere microanlisis
por rayo X, el recubrimiento por hilo de carbono.

Recubrimiento de muestras en alto vaco

Sus aplicaciones van ms all de las necesidades de obtener una muestra


conductora para el SEM. Consigue recubrimientos de grano mucho ms fino y
est preparado para realizar spputtering con distintos metales. Tambin
trabaja por el mtodo de evaporacin, con lo que aumenta el rango de posibles
elementos de recubrimiento. Utiliza electrodos de carbono para evapralo y
obtener films que recubren las rejillas destinadas al TEM.

Referencias
Gama Fuentes, Ma. (2004). Biologa 1 (2 ed.) Mxico: Pearson educacin.
Stainer, R. Ingraham, J. Wheelis, M. Paitner, P. (1992). Microbiologa (2 ed.)
Espaa: Reveret.
Tortora, G. Funk, B., Case, C. (2007). Introduccin a la Microbiologa (9 ed.)
Argentina: Mdica Panamericana.